Sử dụng chỉ thị ssr để phân tích tính đa dạng di truyền của một số giống đậu tương có khả năng bệnh gỉ sắt khác nhau

i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HOÀNG THỊ TRANG SỬ DỤNG CHỈ THỊ SSR ĐỂ PHÂN TÍCH TÍNH ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU TƢƠNG CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG BỆNH GỈ SẮT KHÁC NHAU LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thái Nguyên - 2014 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết trình bày luận văn trung thực, đƣợc đồng ý cán hƣớng dẫn chƣa đƣợc cơng bố Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Tác giả Hoàng Thị Trang Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ iii LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Chu Hoàng Mậu định hƣớng khoa học, tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt suốt q trình tơi tiến hành nghiên cứu hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn TS Vũ Thanh Trà tạo điều kiệ ệm Tơi x Hồng Phú Hiệp thầy, cô Bộ môn Di truyền Sinh học đại, trƣờng Đại học Sƣ phạm – Đại học Th i Nguyên tạo điều kiện cho tơi q trình tiến hành thí nghiệm nghiên cứu phịng thí nghiệm Tơi xin tỏ lịng biết ơn tới thầy cô cán khoa Khoa học sống, trƣờng Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên tận tình dạy dỗ, bảo truyền cho niềm đam mê nghiên cứu khoa học Cuối xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè, đồng nghiệp nhiệt tình động viên cho tơi thêm động lực hồn thành tốt q trình học tập nghiên cứu khoa học Thái Nguyên, tháng 10 năm 2014 Tác giả Hoàng Thị Trang Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ iv MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN iii MỤC LỤC iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤ viii DANH MỤC CÁC HÌNH ix MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 NGUỒN GỐC, PHÂN LOẠI VÀ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CÂY ĐẬU TƢƠNG 1.1.1 Cây đậu tƣơng 1.1.2 Đặc điểm hóa sinh đậu tƣơng 1.2 BỆNH GỈ SẮT VÀ TÍNH KHÁNG BỆNH GỈ SẮT Ở CÂY ĐẬU TƢƠNG 10 1.2.1 Bệnh gỉ sắt đậu tƣơng 10 1.2.2 Tính chống chịu bệnh gỉ sắt đậu tƣơng 12 đậu tƣơng 13 1.2.3 PHÂN TÍCH ĐA DẠNG DI 1.3 TRUYỀN Ở CÂY ĐẬU TƢƠNG 17 1.3.1 Chỉ thị hình thái 17 18 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ v 1.3.3.Chỉ thị phân tử 18 1.3.4 Bản đồ QTL 23 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 VẬT LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 25 2.1.1 Vật liệu 25 2.1.2 Hóa chất 26 2.1.3 Thiết bị địa điểm nghiên cứu 27 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.2.1 Phƣơng pháp thu thập mẫu tách chiết DNA tổng số 27 2.2.2 Tuyển chọn tổng hợp cặp mồi SSR cho phân tích mẫu 28 2.2.3 Phản ứng PCR-SSR 30 2.2.4 Phƣơng pháp điện di DNA gel agarose 31 2.2.5 Phƣơng pháp phân tích xử lý liệu PCR-SSR 31 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 NHÂN BẢN CÁC PHÂN ĐOẠN DNA BẰNG PHẢN ỨNG PCR-SSR 32 3.1.1 Kết tách chiết DNA tổng số từ mầm đậu tƣơng 32 ằng phản ứng PCR- SSR 33 3.1.2 Kết ỀN CỦA CÁC GIỐ TƢƠNG KHÁNG BỆ 41 44 KẾT LUẬ 49 Kết luận 49 Đề nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2-DE Two dimentional electrophoresis - điện di hai chiều ABC ATP - binding cassette AFLP Amplified Fragment Length Polymorphism - Đa dạng chiều dài phân đoạn đƣợc nhân ASM Acibenzolar-S-methyl benzo-(1,2,3)- thiadiazole-7-carboxylic acid S-methyl ester AVRDC Asian Vegetable Research Devlopment Center - Trung tâm phát triển rau màu Châu Á, Đài Loan AUDPC Area Under Disease Progress Curve Bp Base pair cs Cộng CTAB Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide DNA Deoxyribonucleic acid ĐVT Đơn vị tính EDTA Ethylene Diamin Tretraaxetic Acid EtBr Ethidium bromide FAO Food and Agriculture Organisation – Tổ chức Nông Lƣơng giới ISSR Inter - Simple Sequence Repeat kb Kilo base MAS Marker Assisted Selection – Chỉ thị phân tử PCR Polymerase Chain Reaction - Phản ứng chuỗi tr ùng hợp polymerase QTL Quantitative Trait Loci - Bản đồ locus kiểm sốt tính trạng số lƣợng RAPD Random Amplified Polymorphism DNA - DNA đa hình đƣợc nhân ngẫu nhiên RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism - đa hình chiều dài phân đoạn cắt hạn chế Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ vii SDS Sodium Đoecyl Sulphat SNP Single nucleotide polymorphism SSR Simple Sequence Repeats -trình tự lặp lại đơn giản STSs Sequence Tagged Site TAE Tris – Acetate – EDTA Tris Trioxymetylaminometan XK Xuất USDA United State Department of Agriculture - Bộ nông nghiệp Hoa Kỳ UPGMA Phƣơng pháp phân nhóm Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ viii Bảng 1.1 Diện tích thu hoạch đậu tƣơng số nƣớc giới Bảng 1.2 Sản lƣợng sản xuất đậu tƣơng số quốc gia giới Bảng 1.3 Năng suất đậu tƣơng số nƣớc giới Bảng 1.4 Diện tích, suất, tổng sản lƣợng đậu tƣơng nƣớc ta năm 2011, 2012, 2013 dự báo năm 2014 -2015 Bảng 2.1 Ký hiệu, xuất xứ đặc điểm giống đậ 25 Bảng 2.2 Trình tự cặp mồi SSR sử dụng nghiên cứu 30 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng PCR-SSR 31 Bảng 3.1 Số phân đoạn DNA đƣợc nhân phản ứng PCR-SRR từ cặp mồi SSR 39 Bảng 3.2 Tỷ lệ phân đoạn đa hình sử dụng cặp mồi SSR 40 SSR (%) 41 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ix DANH MỤC CÁC HÌNH 1.1 Diện tích trồng sản lƣợng đậu tƣơng Việt Nam (2011-2015) …9 Hình 1.2 gỉ sắt 12 ệ số tách từ mầm đậ 12 giống đậu tƣơng nghiên cứu 32 ới cặp mồi Satt009F/Satt009-R 33 ới cặp mồi Sat_640 –F /Sat_640-R 34 với cặp mồi Sct_187-F /Sct187-R 35 với cặp mồi Satt431-F/ Satt431-R 36 với cặp mồi Satt460-F /Satt460-R 38 12 giống đậu tƣơng có phản ứng khác với bệnh gỉ sắ Số hóa Trung tâm Học liệu 42 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Đậu tƣơng (Glycine max (L.) Merrill) cơng nghiệp ngắn ngày, có giá trị kinh tế cao, mang ý nghĩa cải tạo đất trồng, dễ canh tác, đặc biệt có khả thích nghi với nhiều vùng sinh thái khác Hạt đậu tƣơng chứa 30-55% protein, chứa nhiều loại amino acid không thay thế, 12-25% lipid vitamin cần thiết cho thể Các sản phầm từ đậu tƣơng đƣợc sử dụng rộng rãi cho mục đích khác nhƣ làm thức ăn, dầu ăn, thực phẩm chức năng, nguyên liệu cho y học công nghiệp…Bên cạnh giá trị dinh dƣỡng cao, đậu tƣơng cịn có khả cố định đạm nhờ vi khuẩn R japonicum sống cộng sinh rễ tạo thành nốt sần, giúp cải tạo đất hiệu Do đó, đậu tƣơng đƣợc quan tâm trồng phát triển mạnh nhiều quốc gia giới Ở Việt Nam, đậu tƣơng nhóm trồng đƣợc ƣu tiên khuyến khích phát triển, sản xuất đứng sau lúa, ngơ lạc Việt Nam nƣớc xuất đậu tƣơng vào năm 1980, nhiên nƣớc ta trở thành nƣớc nhập đậu tƣơng với số lƣợng lớn với hàng triệu khô dầu đậu tƣơng đƣợc nhập hàng năm Mặc dù diện tích gieo trồng có tăng hàng năm suất thấp sản lƣợng đạt đƣợc không ổn định, khả chống chịu bệnh stress Sâu bệnh nói chung bệnh gỉ sắt nói riêng nguyên nhân trực tiếp ảnh hƣởng tới diện tích gieo trồng làm giảm suất, chất lƣợng hạt đậu tƣơng, gây tổn thất lớn kinh tế Bệnh gỉ sắt đậu tƣơng loài nấm Phakopsora pachyrhizi gây đƣợc coi mối đe dọa đậu tƣơng gây thiệt hại đáng kể, làm giảm từ 10-80% suất chất lƣợng đậu tƣơng nhiều nƣớc Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 42 Kết bảng 3.3 cho thấy hệ số sai khác di truyền 12 giống đậu tƣơng giao động khoảng 0% đến 8,96% Trong có cặp giống có hệ số sai khác di truyền nhỏ cặp DT4 DT8 với hệ số sai khác 0% Các cặp có hệ số di truyền cao DT4 DT12, DT8 DT12, DT51 DT12, DT4 DT84, DT8 DT84, NR2 DT4, NR2 DT8, NR2 DT51, hệ số sai khác di truyền 8,96% sơ đồ hình đƣợc thiết Từ kết phân tích lập biểu thị m quan hệ di truyền 12 giống đậu tƣơn (Hình 3.7) Nhóm phụ Nhóm Nhánh phụ Nhóm phụ thứ hai Nhánh thứ hai Nhóm Nhánh phụ thứ Nhánh thứ 12 giống đậu tương có phản ứng khác với bệnh gỉ sắ Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 43 Phân tích sơ đồ hình hình 3.7 cho thấy 12 giống đậu tƣơng nghiên cứu đƣợc chia thành hai nhánh chính, nhánh thứ nhấ ống nhiễm bệ , bao gồm giống kháng bệnh giống trung gian giống nhiễm nhẹ bệnh gỉ sắ khoảng cách di truyền hai nhánh 60% (1-0,40) Nhánh thứ hai đƣợc chia làm hai nhánh phụ, nhánh phụ thứ giống đậ khoảng cách di truyền 58% Nhánh phụ thứ hai đƣợc chia làm hai nhóm với khoảng cách di truyền 52% Nhóm gồm DT84, DT51, DT26 , nhóm đƣợc chia làm hai nhóm phụ với khoảng cách di truyền 36% Nhóm phụ gồm giống NR1, DVN14, DT2000, DT96 nhóm phụ gồm giống DT4, DT8, ĐT22 1, ỉ sắt mức độ tốt DT2000 2, 100%, Sơ đồ hình 3.7 cho thấy giống đậu tƣơng khác mặt di truyền phân bố theo khả kháng bệnh gỉ sắt Nhƣ vậy, giống nhƣ thị phân tử khác, kỹ thuật SSR cho phép xác định nhanh mối quan hệ di truyền giống đậu tƣơng tham gia thí nghiệm, điều có ý nghĩa kinh tế việc chọn tạo giống trồng sử dụng cặp mồi SSR đƣợc 12 giống đậu tƣơng có phản ứng khác với Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 44 bệnh gỉ sắt biểu tính đa hình Số đƣợc nhân từ phân đoạn DNA cặp mồi SSR dao động từ đến 10 Trong cặp mồi có cặp mồi cho tính đa hình cao với hệ số đa dạng di truyền cao Phân tích đa dạng di truyền sơ đồ hình cho thấy khoảng cách di truyền hai nhánh 60% Những thông tin sở cho việc tuyển chọn giống đậu tƣơng kháng bệnh gỉ sắt phục vụ sản xuất, đồng thời sở cho việc lựa chọn cặp bố mẹ khác xa mặt di truyền phục vụ công tác lai tạo giống Để khẳng định cách chắn nhận định cần tiến hành số nghiên cứu nhƣ lây nhiễm nhân tạo, thực phép lai cá thể bố mẹ thuộc giống/dịng khác phân tích theo dõi mức độ phân ly phân đoạn DNA đặc trƣng hệ để đánh giá mức độ liên kết thị với tính kháng bệnh gỉ sắt nấm Phakopsora pachyrhizi gây CHUNG Bệnh gỉ sắt đậu tƣơng bệnh hại đậu đỗ gây thiệt hại suất trồng khó phịng trừ tận gốc nguồn bệnh Bệnh gây ảnh hƣởng đến cây, giảm hoạt động quang hợp thực vật, gây rụng lá, chết sớm, suất Mầm bệnh xuất trồng tiêu biến đậu tƣơng chết nông dân thu hoạch đậu tƣơng Loại bệnh xuất Mỹ vào năm 2004, chủ yếu bang miền nam Phun thuốc diệt nấm cách để kiểm sốt bệnh nhà khoa học chƣa lai tạo đƣợc giống đậu tƣơng kháng bệnh Các bào tử gây bệnh gỉ sắt đậu Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 45 tƣơng Châu Á gây mối đe dọa nghiêm trọng đến ngành sản xuất đậu tƣơng Mỹ mầm bệnh lây lan qua gió từ khoảng cách xa Các nhà nghiên cứu trƣờng Đại học Illinois tìm phƣơng pháp giúp xác định xuất bào tử môi trƣờng Các nƣớc giới Việt Nam có nhều cơng trình nghiên cứu bệnh gỉ sắt đậu tƣơng [1], [4], [7], [18], [37], [38], [41], [43] Trong nghiên cứu Vũ Thanh Trà cộng (2006), mƣời giống đậu tƣơng bao gồm giống nhập nội nhƣ DT2000 (có khả kháng bệnh sắt), DT12, VX92 VX93 (có suất cao), giống địa phƣơng nhƣ Cúc Vàng, Vàng Mƣờng Khƣơng CBU8325 (có khả chịu sâu, nấm chịu hạn tốt) giống tạo từ phƣơng pháp đột biến nhƣ DT84, DT95, M103 DT96, lai DT84 DT90 (có khả kháng bệnh kháng bệnh sắt) đƣợc đánh giá khả sắt dựa số tích luỹ bệnh theo thời gian AUDPC kết hợp phân tích phản ứng bệnh, khả tạo bào tử tạo quầng [17] Hiện chƣa tìm đƣợc cách hay thuốc bảo vệ thực vật đặc dụng để trừ bệnh gỉ sắt đậu tƣơng, ngƣời dân trồng đậu tƣơng chọn biện pháp phịng trừ trƣớc trồng sau thu hoạch hạt nhằm hạn chế thiện hại thấp bệnh gỉ sắt gây Các biện pháp phòng trừ chủ yếu nhƣ: Chọn giống chịu bệnh, chống bệnh sản xuất giống bệnh để sử dụng sản xuất, chọn thời vụ trồng; Luân canh với lúa nƣớc hay hòa thảo; Xử lý giống Bayphidan 10 - 100g a.i./1 hạt giống; Có thể phun thuốc hạn chế bệnh loại thuốc trừ gỉ sắt đặc biệt nhƣ: Bayleton 250 g a.i./ha; Baycor 125 - 375 g a.i./ha; phun nƣớc lƣu huỳnh vơi 0,3 – 10 Bơmê Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 46 Bằng phát triển mạnh khoa học kỹ thuật có nhiều cơng trình nghiên cứu bệnh gỉ sắt gen kháng bệnh gỉ sắt đƣợc công bố vào năm gần đây, để xác định gen kháng bệnh gỉ sắt giống đậu tƣơng Mỹ Brazil, sử dụng phƣơng pháp lập đồ liên kết thị phân tử (map-based cloning) nhà khoa học phát có sáu gen liên quan đến tính kháng bệnh gỉ sắt đậu tƣơng bao gồm: Rpp1, Rpp2, Rpp3, Rpp4, Rpp5, Rpp6 số thị SSR liên kết gần với gen từ Rpp1 đến Rpp5: Rpp1và Rpp4 thuộc nhóm liên kết G NST số 18; Rpp3 thuộc nhóm liên kết C2 NST số 6; Rpp3 thuộc nhóm J NST số 16 Rpp5 thuộc nhóm N NST số [4], [14], [15], [17], [21], [26], [31], [40] Hiện nay, có nhiều nghiên cứu bệnh gỉ sắt sử dụng phƣơng nhƣ pháp thị phân tử nhƣ RFLP, RAPD, AFLP, SSR….cho kết cao, khơng tốn thời mà lƣợng mẫu khơng địi hỏi nhiều, lúc phân tích đƣợc nhiều mẫu Chỉ thị SSR đƣợc sử dụng nghiên cứu đa dạng di truyền, chọn giống hay lập đồ liên kết gen, SSR đƣợc áp dụng đối tƣợng động vật thực vật có độ đa hình cao xác Những năm gần có nhiều cơng trình chi thị phân tử SSR hay RAPD nghiên cứu bệnh gi sắt đỗ Việt Nam Ứng dụng kỹ thuật này, Vũ Thanh Trà Trần Thị Phƣơng Liên (2006) đa dạng di truyền số giống đậu tƣơng có phản ứng khác với bệ sắt, nhằm cung cấp thơng tin di truyền, góp phần lƣu giữ trì nguồn gen số giống đậu tƣơng địa phƣơng vùng núi phía bắc nhƣ giống đƣợc trồng đại trà Việt Nam [8], [13], [12], [14], [15], [17], [18] Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 47 Hạt đậu tƣơng chứa hàm lƣợng protien cao, có nhiều nghiên cứu liên quan tới hệ protien đậu tƣơng, nhiều protein đƣợc phát có khả chống chịu hạn, stress, kháng phịng vệ, chữa bệnh…Vũ Thanh Trà (2012) thiết lập đƣợc đồ đồ điện di 2-DE hệ protein đậu tƣơng giống DT2000 kháng bệnh gỉ sắt với 119 điểm protein gel, có 35 protein đƣợc định danh phân loại theo nhóm chức Đặc biệt phát có protein liên quan đến khả kháng bệnh/phòng vệ, chống stress, chịu hạn [17], [20], [24] Qua kết nghiên cứu thu đƣợ (Hình 3.7) ỉ sắt mức độ tố 100% Kết nghiên cứu Vũ Thanh Trà (2012) giống đậu tƣơng DT2000 Ngoài đ bổ sung thêm giố DT8, DT22 có mức kháng trung bình vào phát giống NR1 giống địa phƣơng đƣợc cung cấp Trung tâm giống Na Rì-Bắc Kạn kháng bệnh gỉ sắt cứu phát triển ức cần đƣợc nghiên Nhìn chung, việc phát triển giống đậu tƣơng mang tính kháng bệnh gỉ sắt nƣớc ta chậm chủ yếu dựa vào phƣơng pháp chọn tạo truyền thống nhiều thời gian Việc áp dụng kỹ thuật đại nhƣ chọn tạo nhờ dấu chuẩn phân tử MAS giới hạn nghiên cứu bƣớc đầu Do đó, cần đẩy mạnh tiến hành nghiên cứu sâu toàn diện nhằm phát triển giống đậu tƣơng có suất cao có khả Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 48 kháng bệnh sắt để đáp ứng nhƣ cầu ngày cao sản xuất công nghiệp làm thực phẩm cho ngƣời, lấy dầu làm thức ăn cho chăn ni Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 49 KẾT LUẬN VÀ Kết luận 1.1 Kết nhân phân đoạn DNA phản ứng PCR-SSR với cặp mồi thu đƣợc 40 phân đoạn từ hệ gen 12 giống đậu tƣơng khả kháng bệnh gỉ sắt thị SSR (Satt009, Sat_640, tính đa hình Sct187, Satt431, Satt460 giống đậu tƣơng 1.2 S Khoảng cách di truyền c 60% Hai giống DT2000 DT96 kháng bệnh gỉ sắt tốt hệ số tƣơng đồng d Đ thuộc nhóm kháng bệnh gỉ sắt trung ệ số tƣơng đồ 100% Đề nghị 2.1 2.2 Có thể sử dụng giống đậu tƣơng kháng bệnh gỉ sắt sản xuất làm nguyên liệu lai tạo giống 2.3 Có thể sử dụng thơng tin đa dạng di truyền mức DNA làm sở cho việc lai tạo giống, nhiên cần mở rộng nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật SSR với số lƣợng mồi giống nghiên cứu nhiều Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO T Nguyễn Thị Bình (1990) Nghiên cứu đánh giá khả chống chịu bệnh gỉ sắt (Phakopsora pachyrhizi sydow) tập đoàn đậu tương Miền Bắc Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Hà Nội Nguyễn Duy Bảy, Nguyễn H.T, Bùi Chí Bửu Bùi Bá Bổng (2001), “Chọn giống nhờ Marker Phân tích QTL”, Viện lúa Đồng Bằng Sông Cửu Long, tr 44 – 58 Trần Văn Điền (2007), Giáo trình đậu tương Nxb Nông Nghiệp Vũ Anh Đào, Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Chu Hoàng Mậu (2009), “Đánh giá đa dạng di truyền mức độ phân tử số giống đậu tƣơng (Glycine max (L) Merrill) địa phƣơng”, Tạp chí Khoa học & Công nghệ - Đại học Thái Nguyên Nguyễn Đăng Khôi (1997), "Các đậu ăn hạt Việt Nam", Tạp chí Sinh học,19:5-10 Trần Đình Long (2000), Cây đậu tương, Nxb Nông nghiệp Hà Nội Chu Hoàng Mậu (2001), Sử dụng phương pháp đột biến thực nghiệm để tạo dòng đậu tương đậu xanh thích hợp cho miền núi Đơng Bắc Việt Nam, Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội Chu Hoàng Mậu (2008), Phương pháp phân tích di truyền đại chọn giống trồng Nxb Đại học Thái Nguyên Đinh Thị Ngọc (2008), Nghiên cứu đặc điểm hóa sinh phân lập gen chaperonin liên quan đến tính chịu hạn số giống đậu tương địa phương trồng vùng Tây Nguyên, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trƣờng Đại học Sƣ phạm, Đại học Thái Nguyên Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 51 10 Nguyễn Vũ Thanh Thanh (2008), Nghiên cứu tính đa dạng di truyền phân lập số gen liên quan đến tính chịu hạn đậu xanh (Vignaradiata (L) Wilczek) Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện công nghệ sinh học, Hà Nội 11 Nguyễn Vũ Thanh Thanh (2003), Nghiên cứu thành phần hóa sinh hạt tính đa dạng di truyền số giống đậu xanh có khả chịu hạn khác nhau, Luận văn thạc sĩ Sinh học, Trƣờng Đại học Sƣ Phạm - Đại học Thái Nguyên 12 Bùi Văn Thắng, Đinh Thị Phòng, Lê Thị Muội, Lê Trần Bình, Nguyễn Văn Thắng, Trần Văn Dƣơng (2003),“Đánh giá tính đa dạng số giống lạc tập đoàn giống chống chịu bệnh gỉ sắt kỹ thuật RAPD” Hội nghị cơng nghệ sinh học tồn quốc, tr 805-809 13 Nguyễn Đức Thuận Nguyễn Thị Lang (2006) “Đánh giá đa dạng di truyền đậu tƣơng phƣơng pháp RAPD marker phân tử”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nông thôn, kỳ tháng 3/2006: 65-68, 87 14 Vũ Thanh Trà Trần Thị Phƣơng Liên (2006), “Nghiên cứu đa dạng di truyền số giống đậu tƣơng có phản ứng khác với bệnh gỉ sắt thị SSR”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nông thôn, kỳ tháng 11/2006: 3032, 43 15 Vũ Thanh Trà, Trần Thị chất lƣợng hạt số giống đậu tƣơng Việt Nam có khả kháng bệnh gỉ sắt khác nhau”, Tạp chí Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, kỳ tháng 10/2006: 33-37 16 Khuất Hữu Trung, Nguyễn Thị Phƣơng Đoài, Nguyễn Thúy Điệp, Trần Thị Thúy (2010) “Nghiên cứu xác định thị chép có trình tự đơn giản (Marker SSR) nhận dạng số giống lúa Nếp, lúa Nƣơng địa Việt Nam”, T ông nghiệp P Số hóa Trung tâm Học liệu ơn, số 153, tr 15-21 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 52 17 Vũ Thanh Trà (2012), Nghiên cứu đa dạng di truyền số giống đậu tương có khả kháng bệnh gỉ sắt khác nhau, Luận án tiến sĩ sinh học, Đại học Sƣ Phạm-ĐHTN 18 Lê Thị Ngọc Vi Nguyễn Thị Lang (2006) “Nghiên cứu gen kháng bệnh gỉ sắt đậu tƣơng phƣơng pháp phân tử microsatellite”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn, kỳ 1, tháng 9/2006: 36-39 19 Trƣơng Quang Vinh, Nguyễn Thị Tâm, Đỗ Tiến Phát, Nguyễn Thành Danh (2008), "Đánh giá đa hình DNA số giống khoai tây (Solanumtuberosum L.) kỹ thuật RAPD", Tạp chí nơng nghiệp phát triển nông thôn, số tháng 1/ 2008: 20 -25 T 20 Akkaya M S., Bhagwat A A., & Cregan P B (1992), “Length polymorphism of simple sequence repeat DNA in soybean”, Genetic 132:1131-1139 21 Abe J., Xu H., Suzuki Y., Kanazawa A , & Shimamoto Y (2003), “Soybean germplasm pools in Asia revealed by nuclear SSRs”, Theor Appl Gener 106: 445-453 22 Brown-Guedira, J.A Thompsonb, R.L Nelsoncand M.L Warburton (2000), “Evaluation of Genetic Diversity of Soybean Introductions and North American Ancestors Using RAPD and SSR Markers”, Crop Science 40:815823 23 Bates L S (1973), “Rapid determinatin of tree protein for water-stress studies”, Plant and Soil, 39, pp 205-207 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 53 24 Chen T.H., Murant N (2002), “Enhancement of tolerance of a family of plant dehydrin proteins”, Physiol Plant, pp 795-803 25 Cregan P B., Javik T., Bush A L., Shoemaker R C., Lark K G., Kahler A L., Kaya N., Van Toai T T., Lohnes D G., Chung J.,&Specht J E (1999), “An integrated genetic linkage map of the soybean genome”, Crop Sci.39: 1464-1490 26 Hartman GL, Wang TC & Tschanz AT (1991) “Soybean rust development and the quantitative relationship between rust severity and soybean yield”, Plant Dis 75:596-600 27 Kashi, Y and D G King (2006) “Simple sequence repeats as advantageous mutators in evolutio”, TRENDS in Genetic 22 (5), 253259 28 Litt M., & Luty J A.(1989), “A hypervariable microsatellite revealed by in vitro amplification of a dinucleotide repeat within the cardiae muscle actin gene”, Am J.Hum Genet.44(3): 397 -401 29 Lawson, M J and L Zhang (2006), “Distinct pattern of SSR distribution in the Arabidopsis thaliana and rice genome”, Genome Biology (2): R14 30 Morgante, M., M Hanafey, W Powell (2002) “Microsatellites are preferentially asscociated with non repetitive DNA in plant genomes”, Nature Genetic 30, 194-200 31 McCouch, S R., L Teytelman, Y Xu, K B Lobos(2002) “Development and mapping of 2240 new SSR maker for rice (Oryzae sativa L.)”, DNA Research 9, 199-207 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 54 32 Nuntapunt M, Surin P & Achavasmit P (1984), “Evaluation of rate-reducing rust resistance and tolerance in advanced soybean lines”, Journal of Agriculture Research and Extension (Thailand) 2:15-19 33 Garcia A., Calvo E S., Kiihl R A S., Harada A., Hiromoto D , & Vieira L G (2008), “Molecular Mapping of Soybean Rust (Phakopsora pachyrhizi) Resistance Genes: Discovery of a Novel Locus and Alleles”, Biomedical and Life Sciences 117(4): 545- 553 34 Perez, M A, F.J.Gallego, I.Martinez, P Hidalgo (2001) “Detection, distribution and selection ofmicrosatellites (SSRs) in the genome of yeast Saccharomyces cerevisiae as molecular markers”, mApplied microbiology 33, 461-466 35 Tschanz AT & Tsai BY (1982) “Effect of maturity on soybean rust development”, Soybean Rust Newsl 5:38-4 36 Tschanz AT & Tsai MC (1983) “Evidence of tolerance to soybean rust in soy beans”, Soybean Rust Newsl 6:28-31 37 Tschanz AT & Wang TC (1980) “Soybean rust development and apparent infection rates at five locations in Taiwan”, Prot Ecol 2:247-250 38 Tschanz AT, Wang TC, Cheng YH, Montha N & Chen CM (1985) “International screening trials for soybean rust tolerance”, Soybean Rust Newsl 7:22-25 104 39 Sholihin, & Hautea D M (2002), “Molecular mapping of drought resistance in mungbean (Vigna radiata L.): 1.QTL linked to drought resistance, 2.Linkage map in mungbean using AFLP markers”, Jurnal Bioteknologi Pertanian, 7(1-2): 17-61 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 55 40 Silva D C G, Yamanaka N., Brogin R L., Arias C A A., Nepomuceno A L., Mauro A D., Pereira S S., Nogueira L M., Passianotto A L L., & Abdelnoor R V (2008), “Molecula mapping of two loci that confer resistance to Asian rust in soybean.Theor”, Appl Genet 117:57-63 41 Verma D P S., & Shoemaker R C (1996), “Soybean, genetics, molecular biology and biotechnology”, Cab International, pp 37-40 42 Welsh J., & McClelland M (1990), “Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers”, Nucleic Acids Res 18: 7213-7218 43 Wang K J., & Takahata Y (2007), “A preliminary comparative evaluation of genetic diversity between Chinese and Japanese wild soybean (Glycine soja) germplasm pools using SSR markers”, Genetic Resources and Crop Evolution 44 Yorinori J T., Paiva W M., Frederick R D., Costamilan L M , Bertagnoli P F., Hartman G L., Godoy C V., & Nunes J J.(2005), “Epidemics of soybean rust (Phakopsora pachyrhizi) in Brazil and Paraguay from 2001 to 2003”, Plant Dis.89: 675-677 45 Zhou S.,Sauve R., &Thannhauser T W.(2009), “Proteome changes induced by aluminium stress in tomato roots”, JExp Bot.60: 1849- 1857 46 http://soybase.org/ 47 http://www.ca.uky.edu/agcollege/plantpathology/extension/soybean_rust/ pics.html 48 http://www.exetersoft ware.com/cat/ntsyspc/ntsyspc.html 49 https://www.ideals.illinois.edu/bitstream/handle/2142/44233/Fanglin_Lu.pdf ?sequence=1 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 56 50 http://www.alice.cnptia.embrapa.br/bitstream/doc/444627/1/id1291.pdf Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ... đậu tương có khả kháng bệnh gỉ sắt khác nhau? ?? Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá đƣợc mức độ đa dạng di truyền số giống đậu tƣơng kháng bệnh gỉ sắt khác thị SSR Nội dung nghiên cứu - Tách nhân phân. .. giống có khả kháng bệnh mà cịn có ý nghĩa quan trọng cơng tác chọn tạo giống có chất lƣợng cao Xuất phát từ lý lựa chọn thực đề tài: ? ?Sử dụng thị SSR để phân tích tính đa dạng di truyền số giống đậu. .. 1.2.1 Bệnh gỉ sắt đậu tƣơng 10 1.2.2 Tính chống chịu bệnh gỉ sắt đậu tƣơng 12 đậu tƣơng 13 1.2.3 PHÂN TÍCH ĐA DẠNG DI 1.3 TRUYỀN Ở CÂY ĐẬU TƢƠNG 17 1.3.1 Chỉ thị hình