Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học một số loài thực vật thuộc chi agrimonia họ hoa hồng (rosaceae)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HOÁ HỌC HỒ ĐẮC HÙNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC MỘT SỐ LOÀI THỰC VẬT THUỘC CHI AGRIMONIA HỌ HOA HỒNG (ROSACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC H N ội nă m ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN VIỆN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HỐ HỌC HỒ ĐẮC HÙNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC MỘT SỐ LỒI THỰC VẬT THUỘC CHI AGRIMONIA HỌ HOA HỒNG (ROSACEAE) Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 27 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Phạm Gia Điền H N ộ i – n ă m LỜI CẢM ƠN Bản luận văn hồn thành phịng Cơng nghệ chất có hoạt tính sinh học-Viện Hóa học-Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Đầu tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS TS Phạm Gia Điền, Trưởng phịng Cơng nghệ chất có hoạt tính sinh học người ủng hộ, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập làm luận văn, người thầy hướng dẫn tơi hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn TS Bùi Kim Anh tận tình bảo, giúp đỡ trình làm luận văn, cảm ơn nhà thực vật học Nguyễn Kim Đào việc thu hái mẫu định tên Xin cảm ơn đồng nghiệp thuộc phịng Cơng nghệ chất có hoạt tính sinh học-Viện Hóa học động viên giúp đỡ tơi nhiều Nhân dịp này, tơi xin bày tỏ kính trọng cảm ơn tới Ban lãnh đạo Viện Hóa học tới thầy giáo Khoa Hóa - Trường Đại học Khoa học Tự nhiên- Đại học Quốc Gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi học tập hồn thành luận văn Hà nội, ngày tháng năm 2013 Hồ Đắc Hùng NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN IR Phổ hồng ngoại EI-MS Phổ khối ion hóa va chạm electron 1H-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton 1C-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Cacbon DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer HMBC Phổ tương quan 1H-13C xa HSQC Phổ tương quan 1H-13C gần sử dụng kỹ thuật đo HSQC s Singlet d Duplet ad Duplet duplet m Multiplet t Triplet J (Hz) Hằng số tương tác tính Hz δ (ppm) Độ chuyển dịch hóa học tính ppm MeOH Metanol EtOH Etanol ppm Phần triệu Hz Hertz IC50 Nồng độ cần thiết hoạt chất ức chế 50% tăng sinh invitro MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN MỤC LỤC Mở đầu Chƣơng I: TỔNG QUAN 1.1 Vài nét thực vật chi Long nha thảo (Agrimonia) 1.2 Một số kết nghiên cứu hóa thực vật chi Agrimo 1.2.1 Các hợp chất flavonoit 1.2.2 Các hợp chất tecpenoit 1.2.3 Các hợp chất khác Một số kết nghiên cứu hoạt tính sinh học chi Agrimonia 2.1 Cơng dụng số lồi thực vật chi Agrimonia đƣợ y học dân tộc Việt Nam: 2.2 Những nghiên cứu nƣớc hoạt tính sinh học thực vật chi Agrimonia : CHƢƠNG ĐỒI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tƣợng, nhiệm vụ nghiên cứu: 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu: 2.2.1 Phương pháp phân lập hợp chất: 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất: 2.2.3 Phương pháp thử hoạt tính sinh học: CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Đặc điểm thực vật Long nha thảo (Agrimonia p Ledeb.) 3.2 Chiết xuất phân lập hợp chất 3.2.1 Thu hái xử lý mẫu thực vật: 3.2.2 Sơ đồ phân lập chiết tách mẫu thực vật 3.3 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất: 3.4 Kết khảo sát hoạt tính sinh học cặn dịch ch Long nha thảo: 3.4.1 Hoạt tính chống oxi hóa (antioxidant activity) 3.4.2 Hoạt tính độc tế bào (Cytotoxic activity) 3.4.3 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định (antimicrobial activity) CHƢƠNG IV: THỰC NGHIỆM 4.1 Dụng cụ thiết bị nghiên cứu: 4.2 Dung mơi hóa chất: 4.3 Ngun liệu thực vật: 4.4 Chiết xuất phân lập: 4.4.1 Xử lý mẫu phương pháp chiết tách: 4.4.2 Phân lập hợp chất: Phân lập chất dịch chiết CH2Cl2 Phân lập chất dịch chiết etylaxetat Phân lập cặn dịch chiết butanol 4.5 Hằng số vật lý liệu phổ chất thu đƣợc: KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC MỞ ĐẦU Thực vật kho tàng vô phong phú hợp chất thiên nhiên, hàng trăm nghìn hợp chất thiên nhiên tìm nghiên cứu để phục vụ cho nhiều lĩnh vực sống, đặc biệt y học Thiên nhiên không nguồn nguyên liệu cung cấp hoạt chất q để tạo biệt dược mà cịn cung cấp chất dẫn đường để tổng hợp loại thuốc Từ tiền chất phân lập từ thiên nhiên, nhà khoa học chuyển hóa chúng thành hợp chất có khả trị bệnh cao Các kết thống kê gần cho thấy hợp chất đăng ký làm thuốc tồn giới 61% hợp chất thiên nhiên chất có liên quan tới chúng Trong có 6% hợp chất thiên nhiên, 27% dẫn xuất hợp chất thiên nhiên, 5% hợp chất tổng hợp có mang nguyên liệu đầu bắt nguồn từ hợp chất thiên nhiên 23% chất tổng hợp thiết kế sở cấu trúc phân tử thu từ hợp chất thiên nhiên (các chất mô hợp chất thiên nhiên) Trong số lĩnh vực trị liệu có đến 78% hoạt chất dùng làm thuốc kháng sinh 74% hoạt chất dùng làm thuốc chữa ung thư hợp chất thiên nhiên có nguồn gốc từ hợp chất thiên nhiên [*] Việt nam nằm khu vực khí hậu nhiệt đới gió mùa vùng có tính đa dạng sinh học cao Riêng thực vật, Việt Nam có khoảng 12000 lồi, có 2300 lồi thực vật sử dụng làm lương thực, thuốc chữa bệnh… Khoảng 25% loại thuốc sử dụng thông thường xuất phát từ loài thực vật dùng y học dân gian Cây Long nha thảo có tên khoa học: Agrimonia pilosa Ledeb thuộc họ Hoa hồng (Rosaceae) loại thảo sống lâu năm có nguồn gốc vùng Hymalaya, bao gồm Trung quốc Ấn độ Việt Nam Trong y học dân gian Long nha thảo sử dụng làm thuốc cầm máu, chữa thổ huyết, khái huyết (ho máu), nục huyết (đổ máu cam), lỵ phân lẫn máu, sốt rét mụn nhọt lở loét da [1] Các nghiên cứu gần cho thấy, Long nha thảo vị thuốc có phổ tác dụng tương đối rộng, từ chống viêm nhiễm, tăng cường khả miễn dịch thể, có tác dụng ức chế khối u đến khả kháng HIV… quan tâm nghiên cứu nhiều nhà khoa học giới, Việt Nam sử dụng theo kinh nghiệm dân gian chưa nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Ngoài ra, Long nha thảo mười thành phần vị thuốc nhóm lương y thuộc phòng nghiên cứu thuốc, thuốc dân tộc thuộc Trung Tâm Cơng nghệ Hóa dược hóa sinh hữu - Viện KH & CNVN sử dụng từ năm 2004 điều trị thành công số bệnh nhân nhiễm HIV chuyển sang AIDS Trên sở thuốc nam chúng tơi chọn Long nha thảo làm đối tượng nghiên cứu luận văn với mục đích tìm hiểu thành phần hóa học tác dụng dược lý với nội dung là: Nghiên cứu phân lập hợp chất có Long nha thảo (Agrimonia pilosa Ledeb.) họ hoa hồng (Rosaceae), thu hái Sapa-Lào Cai Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập Khảo sát hoạt tính sinh học phân đoạn dịch chiết chất phân lập [*] David J Newman, Gordon M Cragg, and Kenneth M Snader (2003), “Natural products as sources of new drugs over the periode 1981-2002” J Nat prod 66, pp1022-1037 Phụ lục 22a: Phổ H-NMR quercitrin 109 Phụ lục 22b: Phổ H-NMR quercitrin 110 Phụ lục 23a: Phổ 13 C-NMR quercitrin 111 Phụ lục 23b: Phổ 13 C-NMR quercitrin 112 Phụ lục 24a: Phổ DEPT quercitrin 113 Phụ lục 24b: Phổ DEPT quercitrin 114 Phụ lục 25a: Phổ H-NMR ß-sitosterol 115 Phụ lục 25b: Phổ H-NMR ß-sitosterol 116 Phụ lục 26a: Phổ H-NMR ß-sitosterol-3-O-ß-D-glucopyranosit 117 Phụ lục 26b: Phổ H-NMR ß-sitosterol-3-O-ß-D-glucopyranosit 118 Phụ lục 26c: Phổ H-NMR ß-sitosterol-3-O-ß-D-glucopyranosit 119 Phụ lục 27a: Phổ 13 C-NMR ß-sitosterol-3-O-ß-D-glucopyranosit 120 Phụ lục 27b: Phổ 13 C-NMR ß-sitosterol-3-O-ß-D-glucopyranosit 121 Phụ lục 28a: Phổ DEPT ß-sitosterol-3-O-ß-D-glucopyranosit 122 Phụ lục 28b: Phổ 13 C-DEPT ß-sitosterol-3-O-ß-D-glucopyranosit 123 ... chưa nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Đã có số cơng trình nghiên cứu nhà khoa học Hàn quốc, Trung quốc số loài thực vật thuộc chi Agrimonia Các nghiên cứu thành phần hóa học từ... ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HOÁ HỌC HỒ ĐẮC HÙNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC MỘT SỐ LOÀI THỰC VẬT THUỘC... Những nghiên cứu nƣớc ngồi hoạt tính sinh học thực vật chi Agrimonia : Đã có số cơng trình nghiên cứu nhà khoa học Hàn quốc, Trung quốc số loài thực vật thuộc chi Agrimonia Các nghiên cứu hoạt tính