Đánh giá hiệu quả của việc áp dụng kỹ thuật “chẩn đoán di truyền tiền làm tổ” (PGD) kết hợp cùng lĩnh vực thụ tinh trong ống nghiệm (IVF) có góp phần can thiệp ngăn chặn các đột biến di truyền xuất hiện ngay từ trong phôi, giúp bệnh nhân có cơ hội sinh con mà không phải chấm dứt thai kì và giảm bớt gánh nặng cho toàn xã hội.
PHỤ KHOA – NỘI TIẾT, VÔ SINH LƯU THỊ MINH TÂM, PHẠM THIẾU QUÂN, HUỲNH GIA BẢO ỨNG DỤNG KỸ THUẬT CHẨN ĐOÁN DI TRUYỀN TIỀN LÀM TỔ TRONG THỤ TINH ỐNG NGHIỆM: HIỆN TRẠNG VÀ XU HƯỚNG Lưu Thị Minh Tâm, Phạm Thiếu Quân, Huỳnh Gia Bảo Bệnh viện Đa khoa Mỹ Đức Tóm tắt Mục tiêu: Đánh giá hiệu việc áp dụng kỹ thuật “chẩn đoán di truyền tiền làm tổ” (PGD) kết hợp lĩnh vực thụ tinh ống nghiệm (IVF) có góp phần can thiệp ngăn chặn đột biến di truyền xuất từ phơi, giúp bệnh nhân có hội sinh mà khơng phải chấm dứt thai kì giảm bớt gánh nặng cho toàn xã hội Đối tượng phương pháp: Từ tháng 5/2016 đến IVFMD, có 32 chu IVF kết hợp PGD; đó, có 24 chu kỳ mang bất thường cấu trúc NST sau karyotype với tiền sẩy thai liên tiếp (nhóm 1) chu kỳ mang đột biến gen lặn liên quan đến bệnh lý thalassemia (nhóm 2) DNA tế bào phơi thu nhận cách sinh thiết 3-5 tế bào nuôi phôi giai đoạn phơi nang sau gửi phân tích di truyền kỹ thuật NGS Phơi đơng lạnh sau sinh thiết Kết quả: Ở nhóm 1, có 93 phơi với tỉ lệ phơi bình thường, bất thường cấu trúc 57% (53/93), 14% (13/93) Ở nhóm 2, có 47 phơi với tỉ lệ phơi bình thường 80,9% (38/47); đó, tỉ lệ phơi khơng mang đột biến, mang đột biến dị hợp tử mang đột biến đồng hợp tử tương ứng 15,8% (6/38); 57,9% (22/38) 26,3% (10/38) Tỉ lệ thai diễn tiến, sẩy thai sinh sống sau chuyển phôi trữ 45,8%, 12,5% 45,8% Kết luận: Sự an tồn sinh thiết phơi nang quy trình đông lạnh phôi với kỹ thuật NGS cho thấy thực IVF kết hợp PGD áp dụng cho quần thể bệnh nhân có nguy cao bệnh di truyền Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 Abstract 150 Tác giả liên hệ (Corresponding author): Huỳnh Gia Bảo, email: bao.hg@myduchospital.vn Ngày nhận (received): 08/06/2018 Ngày phản biện đánh giá báo (revised): 25/06/2018 Ngày báo chấp nhận đăng (accepted): 29/06/2018 APPLICATION PGD TECHNOLOGY IN IVF: CURRENT AND TRENDS Objectives: To evaluate the effectiveness of preimplantation genetic diagnosis (PGD) technique used for couples at risk of conceiving a pregnancy affected with known genetic diseases followed by in vitro fertilization (IVF) treatment Materials & Methods: From Oct 2016, there were 32 IVF cycles Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 “Chẩn đoán di truyền tiền làm tổ” viết tắt PGD Kỹ thuật phát triển từ năm 1980 nhằm giúp phát bất thường di truyền phôi từ cặp vợ chồng có nguy truyền bệnh lý di truyền cho con, giúp họ có hội sinh khơng mắc bệnh mà khơng phải chấm dứt thai kì phát bệnh lý thơng qua chẩn đốn tiền sản cổ điển Trải qua 30 năm nghiên cứu ứng dụng, PGD trở thành kĩ thuật quan trọng lĩnh vực hỗ trợ sinh sản toàn giới, giúp kiểm soát bệnh di truyền Meldel hay chuyển đoạn NST không cân Cùng với tiến kĩ thuật sinh thiết phôi, đông lạnh phơi chẩn đốn phân tử việc ứng dụng PGD IVF dễ dàng Trong báo cáo năm ứng dụng kỹ thuật PGD toàn châu Âu, số liệu tổng hợp từ báo cáo gần Hiệp Hội Sinh Sản Châu Âu (ESHRE) cho thấy có 10000 trẻ đời từ 15 lần thu thập liệu [1] Tại khu vực Đông Nam Á, PGD thực hầu hết nước, có Việt Nam Vào năm 2009-2010, nhóm chuyên gia từ Đại học Y Dược TPHCM, Hội Nội tiết sinh sản Vô sinh TPHCM Trung tâm IVF Vạn Hạnh xây dựng thành công qui trình thực PGD để chẩn đốn bất thường số lượng nhiễm sắc thể phôi người Mục tiêu đề tài nhằm xây dựng qui trình PGD phôi người Việt nam bước đầu đánh giá tỉ lệ lệch bội số nhiễm sắc thể phôi người bất thường Đây đề tài nghiên cứu cấp thành phố Sở Khoa học Công nghệ TPHCM quản lý Tháng 5/2009, trường hợp thực thành công kỹ thuật PGD Việt nam tác giả báo cáo [2] Hiện nay, lĩnh vực IVF kết hợp với kỹ thuật PGD có bước tiến vượt trội vững giúp chẩn đoán tầm soát bệnh di truyền người Lĩnh vực hỗ trợ sinh sản Việt Nam không đơn điều trị vô sinh mà tiến xa hơn, ghi nhận nhiều thành tựu kĩ thuật PGD Nhiều trường hợp định PGD Việt Nam thay phải nước ngồi điều trị với chi phí cao trước định thực số trung tâm lớn nước với kết xác, nhanh chóng tiết kiệm chi phí đáng kể cho cặp vợ chồng Như đối tượng định thực IVF chủ động kết hợp PGD? Hiện giới tập trung định thực IVF kết hợp PGD cho trường hợp bất Tập 14, số 04 Tháng 05-2016 Đặt vấn đề TẠP CHÍ PHỤ SẢN - 16(02), 14(01), 150 XX-XX, - 156, 2016 2018 undergoing PGD technique, in which, 24 cycles having structural chromosomal abnormalities related to recurrent miscarriages (group 1), cycles having single gene disorder as thalassemia (group 2) Approximately 3-5 trophectoderm cells of blastocysts were biopsied and sent to reproductive genetics lab with NGS technique platform Embryos were frozen after the biopsy Results: With 93 embryos in group 1, we detected 57% (53/93) embryos showed normal genetic profiles and 14% (13/93) embryos had structural chromosomal abnormalities In group with 47 embryos, the normal chromosome rate was 80.9% (38/47), in that consisted of 15.8% (6/38) unaffected embryos, 57.9% (22/38) carrier embryos may be available for transfer and 26.3% (10/38) affected embryos (autosomal recessive condition) as shown above Ongoing pregnancy rate, miscarriage rate and live birth rate after frozen embryo transfer were 45.8%, 12.5% and 45.8%, respectively Conclusion: The safety of biopsy and vitrification of blastocysts with these results indicate that IVFPGD procedure could be safely applied for high genetic risk population 151 Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 PHỤ KHOA – NỘI TIẾT, VÔ SINH LƯU THỊ MINH TÂM, PHẠM THIẾU QUÂN, HUỲNH GIA BẢO 152 thường nhiễm sắc thể, rối loạn/đột biến đơn gen NST thường liên kết NST X Cụ thể hơn, bất thường nhiễm sắc thể, bao gồm bất thường số lượng bất thường cấu trúc xuất khoảng 0,5%-5% cặp vợ chồng độ tuổi sinh sản đặc biệt tăng lên đáng kể theo độ tuổi người mẹ Đối với trường hợp bất thường NST PGD phần lớn tập trung vào bất thường cấu trúc tượng chuyển đoạn thuận nghịch chuyển đoạn Robertson Chuyển đoạn thuận nghịch (reciprocal translocations) xảy 1/500 cá thể chuyển đoạn Robertson (Robertsonian translocation) với tỷ lệ 1/1000 cá thể [3] Những cá thể mang bất thường cấu trúc thường có kiểu hình bình thường, lại có khả tạo cân NST trình phân chia giao tử, dẫn đến gia tăng nguy sinh sản như: tạo giao tử bất thường, sẩy thai liên tiếp thất bại làm tổ nhiều lần, kết thúc sớm trình mang thai hay chí đứa trẻ sinh thừa kế bất thường [4], [5] Theo liệu ESHRE thu thập, PGD định phổ biến cho nhóm rối loạn/đột biến di truyền lặn NST thường như: bệnh xơ nang, teo tủy sống hội chứng liên quan đến tế bào máu [6] Đối với rối loạn/đột biến di truyền trội NST thường nhóm bệnh quan tâm nhiều bao gồm: rối loạn dưỡng cơ, u sợi thần kinh bệnh Huntington; rối loạn di truyền liên kết NST X, PGD chủ yếu thực cho chứng loạn dưỡng Duchenne, bệnh rối loạn đông máu (hemophilia) hội chứng NST X dễ gãy Thalassemia nhóm bệnh di truyền đột biến đơn gen, có đặc trưng biểu giảm khơng có chuỗi globin hemoglobin (Hb) ảnh hưởng đến khoảng 4,8% dân số giới với di chứng nặng nề thể nặng tiềm ẩn truyền qua nhiều hệ [7] Bệnh lý di truyền phân bố phổ biến khu vực Địa Trung Hải Đông Nam Á, giới phát hiện, nghiên cứu từ năm 1925 Như biết, phân tử Hb gồm tiểu phần Ở trẻ sơ sinh, phân tử Hb bao gồm chủ yếu hai chuỗi α globin hai chuỗi γ globin Ở người trưởng thành bình thường, 95% phân tử Hb tuần hoàn bao gồm hai chuỗi α globin hai chuỗi β globin, chuỗi chứa nhân heam có nhiệm vụ vận chuyển cung cấp oxy cho mô, quan thể Gen nhiễm sắc thể số 16 chịu trách nhiệm cho tổng hợp tiểu đơn vị α, gen nhiễm sắc thể số 11 kiểm soát sản sinh tiểu đơn vị β Việc thiếu tiểu đơn vị đặc hiệu xác định loại thalassemia (ví dụ thiếu tiểu đơn vị α dẫn đến α-thalassemia) Tuỳ theo số lượng gen đột biến có biểu bệnh khác từ nhẹ đến nặng như: phù thai từ bụng mẹ, thiếu máu nặng trẻ chưa đến tuổi, dễ nhiễm trùng, suy tim, … Đối với trường hợp mang bất thường biểu bệnh tiềm ẩn hệ trước chủ động định thực kỹ thuật sinh thiết phôi thực IVF kết hợp phân tích, chẩn đốn DNA nhằm lựa chọn phơi hồn tồn khơng mang gen bệnh này, đảm bảo cho hệ sau khoẻ mạnh PGD kỹ thuật tiên tiến, thực rộng rãi giới vài trung tâm chuyên ngành Việt Nam Những tiến nhanh chóng di truyền học phân tử khuyến khích thay đổi đáng kể phương thức ngăn ngừa bệnh di truyền thông qua tiến hành PGD Không vậy, kỹ thuật cịn hướng đến chọn phơi cứu tinh tương hợp kháng nguyên bạch cầu người (HLA) với anh/chị em chúng đời mang bệnh, cụ thể sử dụng tế bào gốc máu cuống rốn từ phôi cứu tinh Tuy nhiên, mục đích cịn vấp phải nhiều tranh cãi đạo đức đứa trẻ đời sau xem cơng cụ Mặc dù có nhiều tranh luận, chắn PGD kết hợp HLA chấp nhận rộng rãi với chứng số chu tăng dần năm [8] Một ứng dụng khác PGD hướng tới rối loạn di truyền ty thể, dạng rối loạn khơng theo định luật Mendel, có vài trường hợp báo cáo Bên cạnh đó, lĩnh vực IVF góp phần tạo nên vật liệu di truyền cung cấp cho PGD, tế bào phôi sinh thiết Giai đoạn phôi nang nguồn thu DNA tế bào với ưu điểm như: lấy vài tế bào Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 Tại IVFMD, từ tháng 5/2016 đến nay, có 32 chu kỳ tư vấn điều trị TTTON kết hợp thực kỹ thuật PGD từ 31 cặp vợ chồng thể mang gen bệnh; đó, có 24 cặp vợ chồng mang bất thường cấu trúc NST (chuyển đoạn tương hỗ, chuyển đoạn Robertson, thêm đoạn đảo đoạn) người sau xét nghiệm karyotype với tiền sẩy thai liên tiếp thất bại làm tổ nhiều lần cặp vợ chồng mang đột biến dị hợp tử gen lặn người liên quan đến bệnh lý thalassemia (3 cặp mang đột biến dạng -α; cặp mang đột biến dạng -β), có cặp vợ chồng thực chu kỳ với mục đích tìm phơi khơng mang đột biến dạng -β tương hợp HLA với đầu mắc bệnh β-thalassemia thể nặng Trong quy trình kết hợp IVF PGD, cặp vợ chồng bắt đầu với kích thích buồng trứng, thu nhận nỗn, thụ tinh kỹ thuật tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (ICSI) sau tư vấn tất nguy Nỗn thụ tinh ni cấy đến giai đoạn phơi nang (ngày 5-6), sau đó, DNA tế bào phôi thu nhận cách sinh thiết 3-5 tế bào nuôi phôi (TE) vận chuyển đến cơng ty phân tích di truyền Phơi đông lạnh sau sinh thiết Các vật liệu di truyền từ tế bào phôi tách chiết sau khuếch đại tín hiệu gen (WGA) Ở chu PGD cho chẩn đoán bất thường cấu trúc NST thực kỹ thuật NGS để xác định bất thường; chu PGD cho đột biến thalassemia bước đầu thực sàng lọc loại bỏ phôi mang bất thường lệch bội cấu trúc NST kỹ thuật NGS, sau xác định phôi ngun bội bình thường WGA phơi tiếp tục phân tích tìm vùng đột biến, đột biến điểm α β xác định từ dạng đột biến biết bố mẹ trước cách sử dụng giải trình tự gen STR marker đặc trưng Những phôi thừa kế đột biến bố mẹ không lựa chọn cho chuyển phôi Xét nghiệm di truyền tiến hành nhằm tìm phơi khơng mang gen bệnh, phôi chuyển lại vào tử cung người mẹ Để xác nhận có chu Tập 14, số 04 Tháng 05-2016 Đối tượng phương pháp TẠP CHÍ PHỤ SẢN - 16(02), 14(01), 150 XX-XX, - 156, 2016 2018 TE, tế bào khơng tạo thành thai nhi giảm rủi ro sinh thiết ảnh hưởng đến khả phát triển phôi giai đoạn trước Ngồi ra, có nhiều tế bào giai đoạn nhiều tế bào lấy Xét nghiệm cụm nhỏ tế bào với làm tăng hội phát thể khảm thể mức độ ảnh hưởng đến thai nhi Sinh thiết thực vào ngày thứ 5, đủ thời gian để xét nghiệm trước chuyển phôi vào ngày thứ Ngồi ra, chuyển phơi đơng lạnh, mà kết chu kỳ chuyển phôi trữ thực cải thiện tỷ lệ thành công [9] kết cục lâm sàng [10] Bên cạnh đó, tiến kỹ thuật chẩn đốn di truyền góp phần đưa tiến gần với việc phát bất thường gen Một cách mạng cơng nghệ giải trình tự gen, đóng góp lớn PGD đời kỹ thuật giải trình tự gen hệ (NGS) với số lượng lớn cặp mồi đặc hiệu NST khả giải trình tự tồn bộ gen Yêu cầu lượng DNA để khuếch đại thấp (khoảng 1ng-1 tế bào) giúp giảm số lượng tế bào sinh thiết cần cho phân tích Thời gian thực giảm đáng kể độ xác tăng cao rõ rệt Rõ ràng, nhu cầu từ cặp vợ chồng vô sinh tìm kiếm hội thành cơng cải thiện định điều trị IVF kết hợp sinh thiết phôi cho chẩn đoán di truyền, giảm nguy đứa trẻ đời mang khuyết tật việc chấm dứt thai kỳ giai đoạn muộn qua chẩn đoán tiền sản ảnh hưởng đến sức khoẻ tâm lý cho người mẹ PGD có nhiều đóng góp quan trọng cho lĩnh vực IVF ngược lại, IVF đưa dần can thiệp vào lĩnh vực di truyền với việc phát ngăn chặn đột biến di truyền xuất từ phôi Lĩnh vực PGD kết hợp từ nhóm: nhóm đến từ IVF (các chun viên phơi học) nhóm nghiên cứu gen (các nhà di truyền học) Tại IVFMD, từ năm 2016 bắt đầu triển khai kỹ thuật sinh thiết phơi phối hợp với trung tâm phân tích di truyền, góp phần giảm bớt gánh nặng cho khơng cặp vợ chồng mà cho toàn xã hội 153 PHỤ KHOA – NỘI TIẾT, VÔ SINH LƯU THỊ MINH TÂM, PHẠM THIẾU QUÂN, HUỲNH GIA BẢO kỳ điều trị PGD thành cơng cặp vợ chồng theo dõi thai kỳ chặt chẽ qua giai đoạn tư vấn thực kỹ thuật chẩn đoán tiền sản thường quy IVF kết hợp PGD, có 93 phơi nang thực kỹ thuật PGD chẩn đốn bất thường cấu trúc NST, 47 phơi nang thực kỹ thuật PGD chẩn đoán đột biến thalassemia Kết Bàn luận Tổng số 140 phôi nang từ 32 chu Bảng 1: Đặc điểm thơng tin phơi học nhóm bệnh thực IVF-PGD Bất thường cấu trúc Thalassemia PGD Đặc điểm (n=24) (n=8) (n=32) Tuổi (năm) 33,17±5,05 28,38±2,26 31,97±4,95 Thời gian vô sinh (năm) 4,65±4,25 2,75±1,67 4,17±3,84 Số chu kỳ IVF (%) 75 87,5 78,1 4,2 12,5 6,2 20,8 15,7 Số trứng, n 18,96±13,41 19,62±10,76 19,12±12,64 Số trứng ICSI, n 15,25±11,12 17,12±10,03 15,72±10,73 Tỷ lệ thụ tinh (%) 88,8 95,7 90,5 Tỷ lệ tạo phôi nang (%) 41,5 55,9 45,1 Bảng 2: Kết phân tích di truyền phơi nhóm bệnh mang bất thường cấu trúc NST Kết n=93 Thể nguyên bội (%) 57,0 (53/93) Thể bất thường cấu trúc (%) 14,0 (13/93) Thể lệch bội (%) 23,7 (22/93) - Phức hợp (%) 54,5 (12/22) - Thể tam bội (%) 18,2 (4/22) - Thể đơn bội (%) 27,3 (6/22) Khơng tín hiệu (%) 2,1 (2/93) Thể khảm (%) 3,2 (3/93) Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 Bảng 3: Kết phân tích di truyền phơi nhóm bệnh mang đột biến thalassemia Kết phân tích bất thường số lượng NST n=47 Thể nguyên bội (%) 80,9 (38/47) Thể lệch bội (%) 19,1 (9/47) - Phức hợp (%) 22,2 (2/9) - Thể tam bội (%) 44,5 (4/9) - Cấu trúc (%) 33,3 (3/9) Kết phân tích bất thường đột biến thalassemia n=38 Không đột biến dạng đồng hợp tử trội (%) 15,8 (6/38) Mang đột biến dạng dị hợp tử lặn (%) 57,9 (22/38) Có đột biến dạng đồng hợp tử lặn (%) 26,3 (10/38) 154 Bảng 4: Kết lâm sàng chu kỳ PGD chuyển phôi đông lạnh Bất thường cấu trúc Thalassemia Kết (n=19) (n=5) Số phôi chuyển, n 1,32±0,55 1,00±0,00 Tỷ lệ Beta dương (%) 57,9 (11/19) 60,0 (3/5) Tỷ lệ thai lâm sàng (%) 57,9 (11/19) 60,0 (3/5) Tỷ lệ đa thai (%) 5,3 (1/19) (0/5) Tỷ lệ sẩy thai (%) 15,8 (3/19) (0/5) Tỷ lệ thai diễn tiến (%) 42,1 (8/19) 60,0 (3/5) Tỷ lệ làm tổ (%) 48,0 (12/25) 60,0 (3/5) Tỷ lệ trẻ sinh sống (%) 42,1 (8/19) 60,0 (3/5) PGD (n=24) 1,27±0,51 58,3 (14/24) 58,3 (14/24) 4,2 (1/24) 12,5 (3/24) 45,8 (11/24) 50,0 (15/30) 45,8 (11/24) Đến tại, thách thức lớn kỹ thuật PGD thể khảm allele dropout (ADO) vị trí đột biến với thơng tin tư vấn cho bệnh nhân tất nguy hiệu mà kỹ thuật mang lại Phôi mang thể khảm định nghĩa diện hai nhiều dịng tế bào có kiểu gen khác phôi Thể khảm biết đến phổ biến phôi giai đoạn sớm, cho nguyên nhân mà PGD sử dụng phương pháp FISH khơng đưa chẩn đốn tăng tỷ lệ thành công kỹ thuật IVF kết hợp PGD Tuy nhiên, với kỹ thuật vừa đời PGD cơng cụ lý tưởng để nghiên cứu mức độ khảm thời điểm khác q trình phát triển phơi Nó sử dụng để liệu tế bào cho khảm lệch bội hay nhiều lệch bội Kết cho thấy thể khảm phổ biến suốt giai đoạn phôi ngày thứ thứ 4, ngày thứ tỷ lệ khảm giảm nhiều Lý bao gồm tăng trưởng vượt trội tế bào nguyên bội, phân bổ tế bào nguyên bội ICM, và/hoặc kích hoạt gen mã hóa cho trạm kiểm sốt chu kỳ tế bào phơi cho phép chết theo chương trình tế bào thể lệch bội [11] Việc báo cáo thêm thể khảm phôi làm tăng thách thức việc giải thích kết PGD tư vấn bệnh nhân Trước đây, phơi chẩn đốn nguyên bội lệch bội NST (số lượng cấu trúc) hầu hết trường hợp phôi nguyên bội xem xét để chuyển, phôi mang thể khảm coi kết thứ ba [12] nên chiến lược tư vấn bệnh nhân bắt buộc phải phát triển theo Bệnh nhân cần tư vấn kĩ di truyền nguy tiềm ẩn thai kỳ; đặc biệt chu kì khơng có phơi ngun bội để chuyển Vì số phơi thể khảm có khả Bên cạnh cần phôi mang tối thiểu đột biến di truyền từ bố và/hoặc mẹ không bị allele dropout để làm tảng cho q trình phân tích di truyền liên kết Tóm lại, PGD quy trình tương đối nhiều nghiên cứu liên tục thực để mở rộng, cải thiện tồn tại, thách thức tương lai kỹ thuật Trong tương lai, mối liên hệ di truyền với bệnh thơng thường, ví dụ tiểu đường, cao huyết áp, bệnh tim mạch, lạc nội mạc tử cung, ung thư, … xác định kỹ thuật PGD dùng để sàng lọc bệnh di truyền cho hệ tương lai Gần đây, ngành hỗ trợ sinh sản Việt Nam có bước tiến vượt bậc việc ứng dụng kỹ thuật PGD hầu hết trung tâm nước góp phần nâng cao hiệu điều trị, góp phần đáp ứng nhu cầu xã hội phát triển cơng nghệ y sinh học liên quan TẠP CHÍ PHỤ SẢN - 16(02), 14(01), 150 XX-XX, - 156, 2016 2018 KẾT LUẬN Đây số liệu kết lâm sàng thực IVF kết hợp PGD trung tâm chúng tơi nhóm đối tượng bệnh nhân mang bất thường cấu trúc NST đột biến gen liên quan đến bệnh lý thalassemia Đã có 11 trẻ sinh nay, tất khỏe mạnh, cho thấy độ tin cậy NGS an toàn sinh thiết phơi nang quy trình đơng lạnh phôi Điều cho thấy tương lai việc kết hợp quy trình IVF-PGD-NGS thực khả thi cần thiết áp dụng cho quần thể bệnh nhân có nguy cao bệnh di truyền Việt Nam, chẳng hạn chuyển đoạn Robertson đột biến đơn gen liên quan đến bệnh lý nghiêm trọng truyền cho hệ sau Và vấn đề kiểm soát chất lượng điều trị xây dựng theo tiêu chí hướng dẫn thực hành chuẩn trung tâm IVF kết hợp sinh thiết phơi chẩn đốn di truyền cần quan tâm bước quan trọng trước bắt đầu triển khai kỹ thuật PGD vào lĩnh vực IVF Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 Tập 14, số 04 Tháng 05-2016 cho đời trẻ khoẻ mạnh [13] cần phải tư vấn bệnh nhân phôi tiềm làm tổ thấp tỉ lệ sẩy thai cao nhiều so với phôi nguyên bội [14] Đánh giá tỷ lệ ADO phần quan trọng việc định giá tiền lâm sàng biết đến khó khăn cịn tồn động kỹ thuật di truyền Tỷ lệ ADO nên xác định cách sử dụng tế bào mang đột biến cần quan tâm trước phân tích di truyền liên kết với tế bào mang đột biến dị hợp tử đánh dấu trước Tỷ lệ ADO nên thấp tốt, tốt 10% cần lưu ý tỷ lệ ADO cao bệnh đột biến di truyền gen lặn so với bệnh đột biến di truyền gen trội dị hợp tử kép/phức hợp Tỷ lệ ADO cao quy trình kỹ thuật WGA, nhiên, trường hợp sử dụng số lượng lớn marker liên kết và/hoặc kết hợp sinh thiết nhiều tế bào Đối với phơi có kết giải trình tự khơng mang đột biến đột biến dạng đồng hợp tử, cần phải sử dụng STR marker để xác nhận kết quả, tránh đưa kết sai lệch ADO Trong trường hợp có mẫu tham chiếu (anh/chị biết kiểu gen trước) so sánh STR marker anh/chị biết kiểu gen STR marker bố/mẹ, từ xác định STR marker mà anh/ chị nhận từ bố/mẹ, qua xác định vị trí STR marker bố và/hoặc mẹ gắn với NST mang đột biến ngược lại Trong trường hợp khơng có mẫu tham chiếu từ phơi mà kết giải trình tự cho thấy rõ mang đột biến di truyền từ bố/mẹ dạng di hợp tử, so sánh STR marker phôi biết kiểu gen STR marker bố/mẹ, qua xác định NST bố và/hoặc mẹ gắn với NST mang đột biến ngược lại Do STR marker phân tích STR marker sản phẩm WGA, STR marker mang nguy bị ADO khơng phân tích Từ đó, cần xem xét sử dụng nhiều STR marker cho q trình phân tích di truyền liên kết để đảm q trình phân tích kết xác 155 Tập 16, số 02 Tháng 08-2018 PHỤ KHOA – NỘI TIẾT, VÔ SINH LƯU THỊ MINH TÂM, PHẠM THIẾU QUÂN, HUỲNH GIA BẢO 156 Tài liệu tham khảo M De Rycke, V Goossens, G Kokkali, M Meijer-Hoogeveen, E Coonen, C Moutou (2017) ESHRE PGD Consortium data collection XIV–XV: cycles from January 2011 to December 2012 with pregnancy follow-up to October 2013 Human Reproduction, 1974–1994 Hồ Mạnh Tường, Nguyễn Thị Thu Lan, Bùi Võ Minh Hồng cs (2009b) Kỹ thuật chẩn đốn di truyền tiền làm tổ - Các trường hợp thành công Việt Nam Báo cáo Hội nghị Việt Pháp, Hà Nội, tháng 5/2009 Scriven, P N., & Ogilvie, C M (2014) PGD for sex determination and chromosome rearrangements: FISH and emerging technologies In Preimplantation Genetic Diagnosis in Clinical Practice (pp 65-81) Harton, G L., Harper, J C., Coonen, E., Pehlivan, T., Vesela, K., & Wilton, L (2010) ESHRE PGD consortium best practice guidelines for fluorescence in situ hybridization-based PGD Human Reproduction, 26(1), 25-32 Harton, G L., De Rycke, M., Fiorentino, F., Moutou, C., SenGupta, S., Traeger-Synodinos, J., & Harper, J C (2011) European Society for Human Reproduction and Embryology (ESHRE) PGD Consortium ESHRE PGD consortium best practice guidelines for amplification-based PGD Hum Reprod, 26(1), 33-40 Harper J, Coonen E, De Rycke M, Harton G, Moutou C, Pehlivan T, Traeger-Synodinos J, Van Rij M, Goossens V ESHRE PGD consortium data collection X: Cycles from January to December 2007 with pregnancy follow-up to October 2008 Hum Reprod 2010 Bouljenkov V (1994) Epidemiology of haemoglobinopathies In WHO Regional Working Group on the Prevention and Control of Thalassemia in Asia, Bangkok, Thailand Goossens V, Traeger-Synodinos J, Coonen E et al ESHRE PGD Consortium data collection XI: cycles from January to December 2008 with pregnancy follow-up to October 2009 Hum Reprod 2012; 27: 1887–911 Schoolcraft WB, Katz-Jaffe MG (2013) Comprehensive chromosome screening of trophectoderm with vitrification facilitates elective single-embryo transfer for infertile women with advanced maternal age Fertil Steril, 100(3): 615–619 10 Maheshwar, A, Pandey S, Shetty A, Hamilton M, Bhattacharya S (2012) Obstetric and perinatal outcomes in singleton pregnancies resulting from the transfer of frozen thawed versus fresh embryos generated through in vitro fertilization treatment: a systematic review and meta-analysis Fertil Steril, 98(2): 368–377 11 Alfarawati, S., Fragouli, E., Colls, P., Stevens, J., Gutiérrez-Mateo, C., Schoolcraft, W B., & Wells, D (2011) The relationship between blastocyst morphology, chromosomal abnormality, and embryo gender Fertility and Sterility, 95(2), 520-524 12 Munné, S., Grifo, J., & Wells, D (2016) Mosaicism: “survival of the fittest” versus “no embryo left behind” Fertility and Sterility, 105(5), 1146-1149 13 Greco, E., Minasi, M G., & Fiorentino, F (2015) Healthy babies after intrauterine transfer of mosaic aneuploid blastocysts New England Journal of Medicine, 373(21), 2089-2090 14 Fragouli, E., & Wells, D (2011) Aneuploidy in the human blastocyst Cytogenetic and genome research, 133(2-4), 149-159 ... Tháng 08-2018 ? ?Chẩn đoán di truyền tiền làm tổ? ?? viết tắt PGD Kỹ thuật phát triển từ năm 1980 nhằm giúp phát bất thường di truyền phôi từ cặp vợ chồng có nguy truyền bệnh lý di truyền cho con,... đoạn tư vấn thực kỹ thuật chẩn đoán tiền sản thường quy IVF kết hợp PGD, có 93 phơi nang thực kỹ thuật PGD chẩn đoán bất thường cấu trúc NST, 47 phôi nang thực kỹ thuật PGD chẩn đoán đột biến thalassemia... nặng Trong quy trình kết hợp IVF PGD, cặp vợ chồng bắt đầu với kích thích buồng trứng, thu nhận noãn, thụ tinh kỹ thuật tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (ICSI) sau tư vấn tất nguy Noãn thụ tinh