Mức độ nhiễm vi nấm sinh ochratoxin A trong đất và rễ cây cà phê ở một số vùng trồng cà phê trọng điểm : Luận văn ThS. Sinh học: 60 42 40

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÝ THU HƢƠNG MỨC ĐỘ NHIỄM VI NẤM SINH OCHRATOXIN A TRONG ĐẤT VÀ RỄ CÂY CÀ PHÊ Ở MỘT SỐ VÙNG TRỒNG CÀ PHÊ TRỌNG ĐIỂM LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Hà Nội - 2012 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Lý Thu Hƣơng MỨC ĐỘ NHIỄM VI NẤM SINH OCHRATOXIN A TRONG ĐẤT VÀ RỄ CÂY CÀ PHÊ Ở MỘT SỐ VÙNG TRỒNG CÀ PHÊ TRỌNG ĐIỂM Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60 42 40 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS KIỀU HỮU ẢNH Hà Nội - 2012 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Tính chất hố lý ochratoxins Bảng 1.2: LD50 ochratoxin A số loài động vật [24] Bảng 1.3: Mức độ nhiễm ochratoxin A máu người số nước [24] Bảng 1.4: Mức nhiễm ochratoxin A số đối tượng[25] Bảng 1.5: Thời gian giảm 50% ochratoxin A lúa mỳ điều kiện nhiệt độ khác [24] Bảng 3.1 Mức độ nhiễm nấm mốc Aspergillus niger Penicillium viridicatum có khả sinh ochratoxin A đất trồng cà phê Bảng 3.2 Mức độ nhiễm nấm mốc Aspergillus niger Penicillium viridicatum có khả sinh ochratoxin A rễ cà phê Bảng 3.3 Mức độ nhiễm nấm mốc A.niger P.viridicatum có khả sinh ochratoxin A đất rễ cà phê Đắclắk, Đắc Nông Bảng 3.4: Khả tạo độc tố ochratoxin A 23 chủng Aspergillus niger phân lập phương pháp nuôi cấy chất ngô Bảng 3.5: Khả tạo độc tố ochratoxin A 12 chủng Penicillium viridicatum phân lập phương pháp nuôi cấy chất ngô Bảng 3.6: Đặc điểm hình thái chủng A.niger AN1 sau đến ngày nuôi cấy môi trường PDA 28ºC Bảng 3.7:Đặc điểm hình thái chủng A.niger AN3 sau đến ngày nuôi cấy môi trường PDA 28ºC Bảng 3.8: Đặc điểm hình thái chủng P1 mơi trường PDA DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1: Sắc ký đồ Ochratoxin A chủng AN1, AN8, P.viridicatum P8 (trước phun dung dịch) Hình 3.2: Sắc ký đồ Ochratoxin A chủng AN1, AN8, P.viridicatum P8 (sau phun dung dịch) Hình 3.3: Hình thái chủng A.niger AN1 Hình 3.4: Khuẩn lạc chủng A.niger AN3 Hình 3.5: Bào tử chủng A.niger AN4 Hình 3.6: Khuẩn lạc chủng A.niger AN12 mơi trường PDA Hình 3.7: Khuẩn lạc chủng A.niger AN23 mơi trường PDA Hình 3.8: Bào tử chủng P.viridicatum P1 Hình 3.9: Khuẩn lạc chủng P.viridicatum P5 MỤC LỤC MỞ ĐẦU………………………………………………………………… 1.1 Đặt vấn đề …………………………………………………………… 1.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu…………………………………… 1.2.1 Mục tiêu……………………………………………………………… Chƣơng 1: TỔNG QUAN……………………………………………………… 1.1 Hệ nấm mốc lƣơng thực………………………………………… 1.1.1 Hệ nấm mốc đồng………………………………………… 1.1.2 Hệ nấm mốc bảo quản……………………………………………… 1.2 Đại cƣơng độc tố nấm mốc………………………………… 1.3 Ochratoxin A………………………………………………………… 1.3.1 Các loại độc tố ochratoxin………………………………… 1.3.2 Tính chất hoá lý độc tố ochratoxin A………………………… 1.3.3 Sự tạo độc tố ochratoxin A nấm mốc……………………… 1.3.4 Độc tính ochratoxin A…………………………………… …… 1.3.5 Phƣơng pháp phân tích…………………………………………… 1.3.6 Tình hình nhiễm ochratoxin A cà phê nông sản khác giới Việt Nam……………………………………………………… 3.7 Tình hình nghiên cứu phịng chống ochratoxin A giới Việt Nam ………………………………………………………………… Chƣơng 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU … ……… 2.1 Vật liệu………………………………………………………… 2.1.1 Đối tƣợng………………………………………………………… 2.1.2 Môi trƣờng…………………………………………………………… 2.1.3 Các hố chất dùng cho phân tích độc tố ochratoxin A…………… 2.1.4 Dụng cụ thí nghiệm………………………………………………… 2.1.5 Thiết bị……………………………………………………………… 2.2 Phƣơng pháp…………………………………………………… 2.2.1 Phƣơng pháp lấy mẫu cho phân tích độc tố ochratoxin A……… 2.2.2 Phƣơng pháp phân lập nấm mốc từ đất rễ cà phê………… 2.2.2.1 Phương pháp phân lập nấm mốc từ đất trồng cà phê………….… 1 2 3 3 6 8 10 2.2.2.2 Phương pháp phân lập nấm mốc từ rễ cà phê……………… 2.2.3 Phƣơng pháp làm tiêu soi nấm mốc…………………… 2.2.4 Phƣơng pháp phân loại loài nấm mốc………………………… 2.2.5 Phƣơng pháp phân tích ochratoxin A……………………………… 2.2.5.1 Chiết xuất………………………………………………………… 2.2.5.2 Làm sạch………………………………………………… 22 23 23 23 24 24 11 15 19 19 19 19 20 21 21 21 21 22 22 2.2.5.3 Định tính định lượng ochratoxin A…………………………… 26 2.2.5.4 Thử xác minh ochratoxin A dung dich NH3……… 26 2.2.6 Phƣơng pháp nuôi cấy nấm mốc Aspergillus niger Penicillium để kiểm tra khả sinh ochratoxin A ………………………………… 26 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN……………………………… …… 28 3.1 Mức độ nhiễm nấm mốc Aspergillus niger Penicillium viridicatum có khả sinh ochratoxin A đất rễ cà phê……………… 28 3.2 Xác định khả tạo độc tố ochratoxin A chủng Aspergillus niger Penicillium viridicatum phân lập ………………… 34 3.3 Đặc điểm phân loại chủng nấm mốc Aspergillus niger Penicillium viridicatum có khả sinh ochratoxin A phân lập……………… 38 3.3.1.Đặc điểm hình thái cấu trúc hiển vi số chủng Aspergillus niger đặc trƣng phân lập từ đất rễ cà phê……… 39 3.3.1.1 Chủng A.niger AN 1…………………………………………………… 39 3.3.1.2 Chủng A.niger AN 3…………………………………………………… 40 3.3.1.3 Chủng A.niger AN 4…………………………………………………… 41 3.3.1.4 Chủng A.niger AN 12………………………………………………… 42 3.3.1.5 Chủng A.niger AN 20………………………………………………… 42 3.3.1.6 Chủng A.niger AN 23…………………………………………… 43 3.3.2 Đặc điểm hình thái cấu trúc hiển vi học số chủng Penicillium viridicatum đặc trƣng phân lập…………………………… 43 3.3.2.1 Chủng P.viridicatum P1………………………………………… 43 3.3.2.2 Chủng P.viridicatum P2………………………………………… 45 3.3.2.3 Chủng P.viridicatum P5………………………………………… 45 KẾT LUẬN& KIẾN NGHỊ .…………………………………………… 46 MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Cà phê sản phẩm nơng nghiệp có giá trị kinh tế cao nước ta Cà phê nông sản xuất với số lượng lớn sang nước thuộc khối ASEAN, Nhật Bản, Cộng hoà liên bang Nga số nước Đơng Âu Vì vậy, việc nâng cao chất lượng cà phê nói riêng nơng sản nói chung bao gồm kỹ thuật bảo hiểm nông sản đồng thời chế biến chúng thành sản phẩm có giá trị dinh dưỡng bảo quản giữ gìn giá trị dinh dưỡng, ngăn cản chất độc hại cao ngày quan tâm Nước ta nước nhiệt đới có khí hậu nóng ẩm, thuận lợi cho nấm mốc phát triển Hàng năm, tổn thất lượng chất cà phê nông sản khác nấm mốc gây chiếm phần đáng kể Nguyên nhân nhiễm nấm mốc nông sản nấm mốc đất nhiễm vào rễ từ nhiễm nội sinh vào trồng, tiếp nhiễm vào hạt Nấm mốc phát triển hạt, sử dụng dinh dưỡng hạt protein, hydrocacbon, vitamin,…Đặc biệt, nhiều lồi nấm mốc q trình phát triển tạo độc tố ảnh hưởng nguy hiểm tới sức khỏe người động vật kinh tế Ochratoxin A độc tố phát sau độc tố aflatoxin độc tố nguy hiểm thường nhiễm cà phê Ochratoxin A gây suy giảm hệ miễn dịch, ảnh hưởng đến hệ thần kinh, gây tổn thương cấp mãn tính cho thận, ung thư thận gây quái thai,… Hiện nay, giới, việc nghiên cứu mức nhiễm nấm mốc sinh độc tố lương thực thực phẩm biện pháp phòng chống coi vấn đề quan trọng Tổ chức Y tế giới (WHO) Tổ chức Nông Lương giới (FAO) Bộ Nông nghiệp, Bộ Y Tế nhiều nước đưa chương trình khuyến cáo độc tố nấm mốc xây dựng tiêu chuẩn giới hạn cho phép độc tố nấm mốc lương thực Ở nước ta, vấn đề nghiên cứu mức nhiễm nấm mốc sinh độc tố lương thực thực phẩm biện pháp phòng chống độc tố nấm mốc ngày quan tâm Tuy nhiên, việc nghiên cứu mức nhiễm nấm mốc sinh độc tố ochratoxin A cà phê nơng sản khác cịn mẻ Xuất phát từ đó, chúng tơi tiến hành đề tài: “ Mức độ nhiễm vi nấm sinh ochratoxin A đất rễ cà phê số vùng trọng điểm trồng cà phê ” 1.2 1.2.1 Mục tiêu nội dung nghiên cứu Mục tiêu Xác định mức độ nhiễm nấm mốc sinh ochratoxin A đất rễ cà phê số vùng trọng điểm trồng cà phê Việt Nam 1.2.2 Nội dung nghiên cứu - Khảo sát nhiễm nấm mốc Aspergillus niger Penicillium viridicatum sinh ochratoxin A đất rễ cà phê - Phân lập phân loại chủng nấm mốc A.niger P.viridicatum đất rễ cà phê - Xác định khả sinh ochratoxin A chủng nấm mốc A.niger P.viridicatum nhiễm đất rễ cà phê Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Hệ nấm mốc lƣơng thực 1.1.1 Hệ nấm mốc đồng Các hạt lương thực hay hạt giống trước thu hoạch bị nấm mốc xâm nhiễm Các nấm mốc đồng phân biệt theo loại ngũ cốc, vùng, địa lý cư trú, thời tiết,… Một số loại nấm mốc đồng điển hình Alternaria, Cladosporium, Helminthosporium, Fusarium Tất nấm mốc ngồi đồng sống qua nhiều năm hạt khơ Các nấm mốc ngồi đồng ảnh hưởng tới bề ngồi chất lượng hạt Thông thường, tổn thất gây nên nấm mốc ngồi đồng xảy trước thu hoạch phát phương pháp giám định thông thường khơng tiếp tục tăng lên q trình bảo quản Điều nhận biết rõ bắp, chín khơ ngồi đồng, chưa thu hoạch kịp, gặp mưa có độ ẩm cao, loại nấm mốc có nguồn gốc từ đất cơng vào nơng sản Muốn khắc phục tình trạng cần phải thu hoạch kịp thời, khơng nên để lâu ngồi đồng Sau thu hoạch phải phơi sấy cho khô đến độ ẩm 13% đem bảo quản 1.1.2 Hệ nấm mốc bảo quản Các nấm mốc bảo quản thường thấy nguyên liệu có nguồn gốc hữu vô đa dạng, đặc biệt rau thối rữa, sản phẩm thực phẩm Chúng nhiễm hạt lương thực hạt giống sau thu hoạch Nguyên nhân chủ yếu độ ẩm thức ăn cao (> 14%) đem dự trữ độ ẩm khơng khí kho cao hấp thu trở lại vào nguyên liệu, chênh lệch nhiệt độ ngày đêm làm cho nước ngưng tụ bề mặt lớp thức ăn gây tượng ẩm cục bộ, tạo điều kiện tốt cho nấm phát triển Theo nghiên cứu Christensen [9] hệ nấm mốc bảo quản gồm mười hai lồi Aspergillus, (trong năm loài phổ biến), số loài Penicillium, lồi Sporendonema,… Các lồi nấm mốc bảo quản có khả phát triển hạt lương thực có hàm ẩm cao, từ 70%- 90% Các nấm mốc bảo quản phát triển nhanh hạt khoảng 30º- 32ºC Tốc độ phát triển chúng giảm nhiệt độ giảm Muốn khắc phục tình trạng phải thường xuyên hút ẩm thơng thống kho 1.2 Đại cƣơng độc tố nấm mốc Độc tố nấm mốc (mycotoxin) nhóm hợp chất có cấu trúc đa dạng, có khối lượng phân tử nhỏ, tạo trao đổi thứ cấp nấm mốc gây độc động vật có vú, cá gia cầm [20] Sự sản sinh độc tố nấm mốc kết tác động qua lại kiểu gen điều kiện phát triển chúng Sự sinh trưởng, phát triển độc tố nấm mốc phụ thuộc nhiều vào điều kiện sinh thái vùng, khí hậu, nhiệt độ, độ ẩm chất,… Từ năm 1960, bệnh độc tố nấm mốc bắt đầu nghiên cứu sâu Vào năm 1960, nước Anh người ta phát bệnh X gà tây làm chết hàng vạn gà Nguyên nhân chúng ăn phải lạc bị nhiễm độc tố nấm mốc Nghiên cứu động vật thực nghiệm cho thấy tính độc mycotoxin lớn [7] Nấm mốc phát triển sinh độc tố chất hầu hết sản phẩm thực vật tạo khả nhiễm trực tiếp độc tố vào thực phẩm người Khi ăn thức ăn có nhiễm độc tố, vật nuôi không chịu tác dụng độc trực tiếp mà nguồn mang độc tố vào sữa, thịt, tạo nhiễm độc tố cho người Thường người vật nuôi bị nhiễm độc tố nấm mốc ăn phải lương thực, thực phẩm bị nhiễm độc tố.[2] Hiện có khoảng 300 loại độc tố phát nghiên cứu Tuy nhiên có khoảng 20 loại độc tố có thực phẩm mức độ nghiêm trọng liên quan đến an toàn thực phẩm Được tạo năm chi nấm Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Alternaria Claviceps, chúng bao gồm: Các độc tố Aspergillus: Aflatoxin ( B1, B2, G1, G2, M1, M2 ), ochratoxin A, stermatocystin, axit cyclopianxoic Các độc tố Penicillium: Pautulin, ochratoxin A, citrinin, penitrem A axit cyclopianzoic toxin, fumonisin, moniliformin, diacetocyscirpenon Các độc tố Fusarium: deoxynivalenon, nivalenon, zearalenon, T-2 toxin Sau đặc điểm hình thái cấu trúc hiển vi số chủng Aspergillus niger Penicillium viridicatum đặc trưng đất rễ cà phê phân lập 3.3.1 Đặc điểm hình thái cấu trúc hiển vi số chủng Aspergillus niger đặc trƣng phân lập từ đất rễ cà phê 3.3.1.1.Chủng A.niger AN Khuẩn lạc phát triển tốt sau đến ngày nuôi cấy môi trường Czapek (hoặc môi trường PDA) nhiệt độ 26 - 28ºC Trên môi trường Czapek khuẩn lạc có hình trịn, đường kính cm Khuẩn lạc tạo thành khối xốp Bề mặt khuẩn lạc có hình phóng xạ, tia từ hình trịn Có nếp gấp nơng Hệ sợi khí sinh có màu trắng đục, sợi nấm dày Bào tử mầu đen Mặt sau khuẩn lạc có màu trắng đục, có nếp nhăn Trên mơi trường PDA, khuẩn lạc có màu đen, đường kính cm, mặt sau khuẩn lạc có màu trắng, ánh vàng Sợi nấm màu trắng, sinh bào tử dày Bào tử trần hình cầu gần cầu, đường kính 4.2µm Thể bình - hàng Bọng đỉnh giá hình cầu, đường kính 55µm Cuống sinh bào tử nhẵn, đường kính 16 - 18µm Bảng 3.6: Đặc điểm hình thái chủng A.niger AN1 sau đến ngày nuôi cấy môi trường PDA Czapek 28ºC TT S Đặc điểm phát triển PDA Mơi trƣờng Czapek Hình dạng khuẩn lạc Trịn Trịn Đường kính Màu sắc hệ sợi khí sinh Trắng đục Màu sắc bào tử Đen Đen Dạng sợi nấm Dày Hơi dày Mặt sau khuẩn lạc Trắng, ánh vàng Trắng đục, đen Trắng, vàng Hình 3.3: Hình thái chủng A.niger AN1 3.3.1.2.Chủng A.niger AN Khuẩn lạc phát triển tốt sau đến ngày nuôi cấy môi trường PDA 26 - 28ºC Khuẩn lạc hình trịn, màu đen, đường kính 5,8 cm Bề mặt khuẩn lạc có hình phóng xạ, khơng tạo nếp gấp sâu Mặt trái khuẩn lạc màu trắng, vàng Thể bình 1- hàng Bào tử trần hình cầu, gần cầu, đường kính 4,2-4,5µm Cuống bào tử nhẵn, đường kính 16-19µm Bọng đỉnh giá hình cầu, gần cầu, đường kính 51-55µm Bảng 3.7 Đặc điểm hình thái chủng A.niger AN3 sau đến ngày nuôi cấy môi trường PDA 28ºC TT Đặc điểm phát triển Môi trƣờng PDA Hình dạng khuẩn lạc Đường kính Màu sắc hệ sợi khí sinh Màu sắc bào tử Đen Dạng sợi nấm Hơi dày Mặt sau khuẩn lạc Tròn 5,8 Trắng đục Màu trắng, vàng 3.2.1.3.Chủng A.niger AN Hình 3.4: Hình thái chủng A.niger AN3 3.3.1.4 Chủng A.niger AN4 Khuẩn lạc phát triển tốt sau đến ngày nuôi cấy môi trường PDA 26 - 28ºC Khuẩn lạc hình trịn, màu đen, đường kính 6,2 cm Bề mặt khuẩn lạc có hình phóng xạ, tia từ hình tròn Mặt trái khuẩn lạc màu trắng, vàng Thể bình 12 hàng Bào tử trần hình cầu, gần cầu, đường kính 4,5-4,8µm Cuống bào tử nhẵn, đường kính 17-19µm Bọng đỉnh giá hình cầu, đường kính 53-56µm Hình 3.5: Hình thái bào tử chủng A.niger AN4 3.3.1.4 Chủng A.niger AN 12 Khuẩn lạc phát triển tốt sau đến ngày nuôi cấy môi trường PDA nhiệt độ 26 - 28ºC Khuẩn lạc có màu đen, đường kính 5.9 cm, mặt sau khuẩn lạc có màu trắng, ánh vàng Sợi nấm màu trắng, sinh bào tử dày Bào tử trần hình cầu gần cầu, đường kính 4.2µm Bọng đỉnh giá hình cầu, đường kính 55µm Cuống sinh bào tử nhẵn, đường kính 16 - 18µm Khuẩn lạc A.niger AN12 mơi trƣờng PDA (mặt phải) Khuẩn lạc A.niger AN12 môi trƣờng PDA (mặt trái) Hình 3.6: Khuẩn lạc chủng A.niger AN12 môi trường PDA 3.3.1.5 Chủng A.niger AN 20 Khuẩn lạc phát triển tốt sau đến ngày nuôi cấy môi trường PDA nhiệt độ 26 - 28ºC Khuẩn lạc hình trịn, đường kính 5,9 cm Bề mặt khuẩn lạc hình phóng xạ, mặt sau khuẩn lạc màu trắng, vàng Sợi nấm màu trắng Bào tử màu đen, hình cầu gần cầu, đường kính 4,4 – 4,6 µm 1- hàng thể bình Cuống sinh bào tử nhẵn, đường kính 16 - 19µm 3.3.1.6 Chủng A.niger AN 23 Khuẩn lạc phát triển tốt sau đến ngày nuôi cấy môi trường PDA nhiệt độ 26 - 28ºC Khuẩn lạc màu đen, hình trịn, đường kính 6.1cm Bề mặt khuẩn lạc hình phóng xạ, mặt sau màu trắng, vàng Bào tử màu đen, hình cầu, đường kính 4.5 - 4.µm Bọng đỉnh giá hình cầu, đường kính 53 - 55µm Cuống sinh bào tử nhẵn, đường kính 16 - 19 µm Khuẩn lạc A.niger AN23 Khuẩn lạc A.niger AN23 môi trƣờng PDA môi trƣờng PDA (mặt phải) (mặt trái) Hình 3.7: Khuẩn lạc chủng A.niger AN 23 mơi trường PDA 3.3.2 Đặc điểm hình thái cấu trúc hiển học số chủng Penicillium viridicatum đặc trưng phân lập 3.3.2.1 Chủng P.viridicatum P1 Khuẩn lạc phát triển tốt sau đến 10 ngày nuôi cấy 26 - 28ºC môi trường PDA Khuẩn lạc có hình trịn, màu xanh vàng, đường kính 3.8 cm Sợi nấm màu trắng xanh, sinh bào tử dày Mặt sau khuẩn lạc màu trắng, vàng Bào tử trần hình cầu, gần cầu, đường kính 3.5-4.2µm Cuống sinh bào tử nhẵn, đường kính 3.5-4.5µm Bảng 3.8: Đặc điểm hình thái chủng P1 mơi trường PDA S TT Đặc điểm hình thái P.viridicatum P1 Hình dạng khuẩn lạc Trịn Màu sắc khuẩn lạc Xanh Đường kính khuẩn lạc (cm) 4 Màu sắc hệ sợi khí sinh Trắng xanh Mặt sau khuẩn lạc Trắng, vàng H Hình3.8: Bào tử chủng P.viridicatum P1 3.3.2.2 Chủng P.viridicatum P2 Khuẩn lạc phát triển tốt sau đến 10 ngày nuôi cấy môi trường PDA 26-28ºC Khuẩn lạc màu xanh, đường kính cm Sợi nấm màu trắng xanh, sinh bào tử dày Mặt sau khuẩn lạc màu đỏ Thể bình có đường kính 3.5-3.8µm Cuống sinh bào tử nhẵn, đường kính 4- 4.2µm Bào tử hình gần cầu, elip, đường kính 3- 3.5µm 3.3.2.3 Chủng P.viridicatum P5 Khuẩn lạc phát triển tốt sau đến 10 ngày nuôi cấy môi trường PDA 26- 28ºC Khuẩn lạc màu xanh, hình trịn, đường kính 3.7 cm Sợi nấm màu trắng xanh, sinh bào tử dày Mặt sau khuẩn lạc màu trắng, vàng Bào tử trần hình cầu, gần cầu, đường kính 3.3- 3.5µm Thể bình đường kính 3.1-3.5µm Cuống sinh bào tử nhẵn, đường kính 3.5- 3.8µm Hình 3.9: Khuẩn lạc chủng P.viridicatum P5 KẾT LUẬN Từ kết qủa nghiên cứu trên, rút kết luận: Các mẫu đất rễ cà phê Đắclắk, Đắc Nông nhiễm nấm mốc Aspergillus niger Penicillium viridicatum có khả sinh ochratoxin A Mức độ nhiễm 43.75% (35/80 mẫu phân tích) Mức độ nhiễm nấm mốc Aspergillus niger Penicillium viridicatum có khả sinh ochratoxin A địa phương khác khác Mức độ nhiễm nấm mốc A.niger P.viridicatum có khả sinh ochratoxin A đất rễ cà phê tỉnh Đắclắk, Đắc Nông khoảng từ 11.1% đến 62.5% Mức độ nhiễm A.niger P.viridicatum có khả sinh ochratoxin huyện Empa cưmgar cao (62.5%) Mức độ nhiễm nấm mốc A.niger P.viridicatum có khả sinh ochratoxin A huyện Krơng ana thấp (11.1%) Có 15/23 chủng Aspergillus niger phân lập từ đất rễ cà phê có khả sinh ochratoxin A với hàm lượng dao động từ 0.7- 12ppb Có 8/12 chủng Penicillium viridicatum phân lập từ đất rễ cà phê có khả tạo ochratoxin A với hàm lượng dao động từ 0.5-8ppb KIẾN NGHỊ Kết nghiên cứu cho thấy mức độ nhiễm nấm mốc Aspergillus niger Penicillium viridicatum có khả sinh ochratoxin A đất rễ cà phê Đắclắk, Đắc Nông cao Điều cho thấy cần phải có biện pháp phòng chống ochratoxin A cà phê từ giai đoạn đồng Tài liệu tham khảo Tài liệu Tiếng việt Nguyễn Thuỳ Châu (1996), Nghiên cứu mức độ nhiễm nấm mốc sinh độc tố (mycotoxin) ngơ, gạo Việt Nam biện pháp phịng trừ, Luận án phó tiến sĩ khoa học sinh học, trường Đại học khoa học tự nhiên, tr 21- 34, 60- 61 Nguyễn Lân Dũng (1983), Một số sản phẩm vi nấm, độc tố vi nấm, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tr 85- 86 Đậu Ngọc Hào (1986), “ Nghiên cứu phát độc tố nấm mốc phương pháp sinh vật học ”, Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, tr 9- 14 Đặng Hồng Miên(1980), Nấm mốc độc thực phẩm, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Hà Nội, tr 187- 190 Lương Đức Phẩm Vũ Kim Dũng (1980), “ Vi sinh vật lương thực, thực phẩm ”, Tạp chí Lương thực- thực phẩm Nguyễn Phùng Tiến (1983), Nấm mốc số sản phẩm thực phẩm Luận án phó tiến sĩ y học, Viện Vệ sinh dịch tễ học Hà Nội Tài liệu Tiếng Anh Abouzied MM, Horvath AD, Podlesny PM, (2002) "Ochratoxin A concentrations in food and feed from a region with Balkan Endemic Nephropathy" Food additives and contaminants 19 (8): 755–64 Al-Anati L, Petzinger E (2006) "Immunotoxic activity of ochratoxin A" J Vet Pharmacol Ther 29 (2): 79–90 Aleckovic M (2010) "Glomerular filtration rate in examined population of Bosnian Posavina – region of Balkan Endemic Nephropathy" Bosn J Basic Med Sci 10 (3–4): 256–61 10 AOAC (1990) Official methods of Analysi, Association of official analytical Chemists, Washington 11 Basic-Jukic N (2007) "Renal transplantation in patients with Balkan endemic nephropathy" Transplant Proc 39 (5): 1432–1435 12 Battacone G Nudda A Pulina G (2010) "Effects of Ochratoxin A on Livestock Production" Toxins 2: 1796–1824 13 Belmadani A (1999) "Selective toxicity of ochratoxin A in primary cultures from different brain regions" Arch Toxicol 73 (2): 108–114 14 Bendele AM, (1985) "Ochratoxin A Carcinogenesis in the (C57BL/6J X C3H)F1mouse" J Natl Cancer Inst ;75(4):733-42 15 Blesa J, (2006) "Factors affecting the presence of ochratoxin A in wines" Critical reviews in food science and nutrition 46 (6): 473–8 16 Boonen, Jente; Malysheva, Svetlana V.; Taevernier, Lien; Diana Di Mavungu, José; De Saeger, Sarah; De Spiegeleer, Bart (2012) "Human skin penetration of selected model mycotoxins" Toxicology 301 (1–3): 21–32 17 Castegnaro M (2006) "Balkan endemic nephropathy: role of ochratoxins A through biomarkers" Mol Nutr Food Res 50 (6): 519–29 18 Christensen Clyde, M.Kaufmann Henry (1969), Grain Storage, Mineapolis, University of Minesota Press 19 Clark HA, Snedeker SM (2006) "Ochratoxin A: its cancer risk and potential for exposure" Journal of toxicology and environmental health Part B, Critical reviews (3): 265–96 20 De Stefani (1998) "Meat intake, mate drinking and renal cell cancer in Uruguay: a case-control study" Br J Cancer 78 (9): 1239–1243 21 Djukanovic L (2010) "Investigation of Balkan endemic nephropathy in Serbia: how to proceed?" Srp Arh Celok Lek 138: S68-72 22 Doronia,O.D (1992), Thin-layer chromatography in the analysis of mycotoxin, “ Training activities on food contamination control and monitoring with special reference to mycotoxin”, FAO/UNEP/USSR International Training Course 23 Fink-Gremmels J (2005) "Conclusions from the workshops on Ochratoxin A in Food" Recent developments and significance Organized by ILSI Europe in Baden (Austria), 24 Gary A Boorman "Toxicology and Carcinogenesis studies of Ochratoxin A in F344/N rats" National Toxicology Program , May 1989, NTP TR 358 25 Hope JH, Hope BE (2012) "A Review of the Diagnosis and Treatment of Ochratoxin A Inhalational Exposure Associated with Human Illness and Kidney Disease including Focal Segmental Glomerulosclerosis" Journal of Environmental and Public Health 26 J Niemiec, W Borzemska , The effect of Ochratoxin A on egg quality development of embryos and the level of toxin in egg and tissue of hens and chicks, Journal of Animal and Feed Sciences , , (4) , 309–316, 1994 27 Krogh P (1976) "Experimental porcine nephropathy: changes of renal function and structure peroraly induced by crystalline ochratoxin A" Acta Pathol Microbiol Scand A 84 (5): 429–34 28 Kunio Doi, Koji Uetsuka (2011) "Ochratoxin A induces apoptosis in neuronal cells" International Journal of Molecular Sciences 12: 5213–5327 29 Long DT, Voice TC (2007) "Role of exposure analysis in solving the mystery of Balkan endemic nephropathy" Croat Med J 48 (3): 300–11 30 O'Brien E, Dietrich DR (2005) "Ochratoxin A: the continuing enigma" Crit Rev Toxicol 35 (1): 33–60 31 Palma N, (2007) "Ochratoxin A-Induced Mutagenesis in Mammalian Cells Is Consistent with the Production of Oxidative Stress" Chemical Research in Toxicology 20 (7): 1031–1037 32 Pestka, Steinert, Chu F.S (1981), Enzyme- Linked Immunosorbent Assay for detection of ochratoxin A, App Envir Microbiol, pp 1472- 1474 33 Pfohl-Leszkowicz A, Manderville RA (2007) "Ochratoxin A: An overview on toxicity and carcinogenicity in animals and humans" Mol Nutr Food Res 51 (1): 61– 99 34 Pitt, J.I, Hocking (1985), Methods for Isolation Enumeration and identification Fungi and Food spoilage, Academic press, London, pp 29 - 34 35 Polizzi V.,(2009) "Fungi, mycotoxins and volatile organic compounds in mouldy interiors from water-damaged buildings" Journal of Environmental Monitoring 11 : 1849–1858; 2009 36 Rapper, K Fennel (1965), The genus Aspergillus, Williams and Wilkins, Baltimore, Maryland 37 Rashidkhani B (2005) "Major dietary patterns and risk of Renal Cell Carcinoma in a prospective cohort of Swedish women" J.Nutr 135: 1757–1762 38 Richard JL, (1999.) "The occurrence of ochratoxin A in dust collected from a problem household" Mycopathologia 146 (2): 99–103 39 Sava V., (2006.) "Acute neurotoxic effects of the fungal metabolite ochratoxin A" Neurotoxicology 27 (1): 82–92 40 Shimomura M, Shiguo E (1989), Quantitative method of ochratoxin A in cereals and mixed feeds by high- performance liquid chromatography, Shinyo-KenkyuHokoku, pp 1- 41 Shotwel, Hesseltine, C.W & Goulden (1969), Ochratoxin A- Occurrence as natural contaminant of a corn sample, Appl, Microbal, pp 765- 766 42 Shotwell, Hesseltine, C.W & Goulden, Vandergraft (1970), Survey of corn for aflatoxin, zearalenone and ochratoxin, Cereal Chem 47 43 Sobolev, V.S (1984), Chemical analytic methods of Trichothecenes, FAO/UNEF/USSR International Training Course “ Training activities on food contamination control and monitoring with special reference to mycotoxin ”, Moscow 44 Speijers G A, Egmond H P (1993), Worldwide ochratoxin A levels in foods and feeds Colloque INSERM/John Libbey Eurotext Ltd pp 85- 100 45 Steyn S.P (1993), Mycotoxin of human health concern, Colloque Inserm/John Libbey Eurotext Ltd, pp - 31 46 Xiangnan Zhang, (2009) "Ochratoxin A induces apoptosis in neuronal cells" Genes Nutr 4: 41–48 Trang web 47 Đại cương nấm mốc (Nguyễn Văn Bá dịch,2007) http://www.vocw.edu.vn 48 Guidelines for the prevention of mould formation in coffee ftp://fpt.fao.org 49 Mycotoxin thức ăn chăn nuôi lợn (Nguyễn Văn Hải dịch, 2001) http://www.Thepigsite.com 50 Ochratoxin A (JECFA) evaluation http://www.inchem.org 51 Ochratoxin A http://www.wikipedia.org