ĐỊNH TÍNH FAECAL STREPTOCOCCUS TRONG THỰC PHẨM

Mơn học: Phân tích vi sinh thực phẩm L/O/G/O ĐỀ TÀI 10 : ĐỊNH TÍNH FAECAL STREPTOCOCCUS TRONG THỰC PHẨM GVHD: Cô NGUYỄN THỊ MỸ LỆ Nội dung đề tài : Faecal Streptococcus Quy trình phân tích Ví dụ Là liên cầu khuẩn có nguồn gốc từ phân Hình cầu hay hình oval kéo dài, gram dương Khơng di động, khơng sinh bào tử, số dòng có tạo vỏ nhầy Hầu hết sống hiều khí tùy ý phát triển tốt điều kiện kỵ khí Tiết bacteriocin trình tăng trưởng - Sức đề kháng tốt, tồn nhiều địa điểm - Phù hợp để lấy mẫu thực phẩm lấy mẫu nước mặt - Hiện diện phân với số lượng thấp so với vi khuẩn - Luôn diện phân người động vật MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG THƯỜNG DÙNG ĐỂ XÉT NGHIỆM S.FAECAL Canh thang Natri azit - 20,0g - 15,0g - 5,0g - 2,7g - 0,4g -15mg - 1l Pepton Đường glucoza NaCl K2HPO4 Natri azit Bromocresol màu tía Nước cất Cách pha: •Cho tất (trừ natri azit) vào nồi đun cho tan, lọc, chỉnh pH Hấp 121OC/15 phút •Natri azit: Pha nước cất, lọc vơ khuẩn, đóng vào bình tối màu để bảo quản 4OC Cho vào canh thang hấp để nguội (khoảng 50OC) tùy theo thể tích để đạt nồng độ cuối 0,04% Thạch TTC Natri azit (Thạch Slanetz & Bartley) - 20,0g Pepton - 5,0g Cao nấm men - 2,0g Đường glucoza - 4,0g K2HPO4 - 0,4g Natri azit - 0,1g Triphenyltetrazoium chlorit(TTC) - 15,0g Agar - 1l Nước cất - 7,2 (pH) Canh thang azit etyl màu tía - 20,0g Pepton - 15,0g Đường glucoza - 5,0g NaCl - 2,7g K2HPO4 - 0,4g Natri azit - 0,00083g Azit etyl màu tía - 1000ml Nước cất Mơi trường Hóa chất Dung dịch Trypton Cồn 900 700 Soya (TSB) Enterococcus agar DD creatine 0,5% BHI Brain DD α – naphtol 5% heartinfusion 6,5% NaCl BHI Brain KOH 40% heartinfusion pH 9,6 Mơi trường hóa chất MT: Trypticase Soy HCL 10% Agar (TSA)   NaOH 10%   Thuốc thử catalase   Que thử oxydase an Enterococcus Faecalis grow on a trypticase soy agar plate Sử dụng hệ số pha loãng tương ứng với hộp petri có từ 25250 khuẩn lạc điển hình để tính kết Dựa vào tỷ lệ phần trăm số khuẩn lạc dương tính, ta suy kết cuối Đếm kết • Đếm tất khuẩn lạc mọc mơi trường • Khuẩn lạc mọc loang tính khuẩn lạc • Chọn đĩa có số khuẩn lạc 25 – 250 để tính kết N A= n1 × V1 × f1 + + ni × Vi ì f i n v l CFU/g hoc CFU/ml Dịch pha loãng 10-1, 10-2, 10-3 … canh Azide Glucose (9 ống) (+): màu MT: tím → vàng có cặn Môi trường dịch thể Rothe Ủ 37 độ C 24 Cấy chuyền sang môi trường dịch thể Litsky Ủ 44-45 độ C nhuộm Gram Tra bảng MPN Mật độ Streptococcus phân (MPN/g hay MPN/ml) (+) Không phân hủy H2O2 chuẩn bị mẫu pha loãng 10-1, 10-2, 10-3 … ( cần ) Ghi nhận số ống nghiệm dương tính độ pha lỗng Kiểm tra tiếp số tính chất vi khuẩn từ ống nghiệm cho kết dương tính Cấy chuyền mẫu sang môi trường dịch thể Lisky Ủ 44- 45 độ C 24 Nếu canh trường ống nghiệm bị đục xuất màu đỏ tía kết kiểm nghiệm dương tính Ví dụ Nguồn khảo sát: Viện tinh khiết Sinh học ứng dụng, Đại học Bahauddin Zakaria Multan (NA, IAB) Trường Khoa học sinh học, Đại học Punjab, New Campus, Lahore (ARS) Tóm tắt  Phân tích vi khuẩn nước bơm tay để xác định chất lượng mức độ ô nhiễm nước từ địa phương khác Multan 100 mẫu máy bơm nước nghiên cứu cho tổng số liên cầu khuẩn (TS) phân liên cầu khuẩn (FS). 80% mẫu dương tính với tổng số liên cầu, 40% số khoảng 3-10, 46% khoảng 10-100,10% khoảng 100-1000,và 4% từ 1000-1500 liên cầu khuẩn/ml Phương pháp lấy mẫu - Mẫu nước thu thập 300ml vô trùng sẽ, dán nhãn.   - Mẫu nước với nhiệt độ tìm thấy khoảng 24-29°C độ pH dao động 7,29-8,69 - Mẫu xử lý vòng tủ lạnh 5-7°C Cách tiến hành Phương pháp MPN • Cho vào ba ống 10ml azide dextrose nước dùng (BBL) thêm 10ml nước mẫu, hai khác, ống chứa nước dùng thêm 5ml với 1ml mẫu nước 0.1ml, tương ứng • Ủ 35 ± 0.5°C (24-48h) • Độ đục ghi nhận lại xử lý bảng MPN • 5ml azide dextrose nước thịt tiêm với ml • Lắc ủ 44,5°C 48h.  • Thử sinh hóa: Đối với thử sinh hóa thu cách phát triển khuẩn lạc màu hồng màu đỏ từ đĩa vào canh trường đậu nành trypticase • Kết quả: Các ống cho thấy tăng trưởng coi dương tính với liên cầu khuẩn phân.  Bảng I Tỷ lệ tổng số liên cầu khuẩn liên cầu khuẩn phân nước từ tầng ngậm nước sâu Thử nghiệm tính nhạy cảm kháng khuẩn Phân liên cầu khuẩn từ môi trường thạch liên cầu KF có sọc thạch dinh dưỡng 24h. Chuẩn bị canh trường ml dung dịch vô trùng 0,1% peptone. Ủ 37 ° C 24 KẾT QUẢ Tổng số liên cầu khuẩn (TS) phân liên cầu khuẩn (FS) - MPN dao động từ -> 2400/ml. Tổng số phân liên cầu khuẩn chiếm 80% 67% tổng số mẫu - Mẫu dương tính 40% có liên cầu khuẩn khoảng 310, 46% phạm vi 10-100, 10% khoảng 100-1000 4% từ 1000-1500 liên cầu khuẩn/ml - Trên tổng số phân liên cầu khuẩn 51% mẫu có loạt 1-10, 40% khoảng 10-100, 7,5% khoảng 100-1000 ml. Chỉ có mẫu cho MPN> 2400 KẾT QUẢ Giá trị MPN tính cho TS FS 81 57, tương ứng. Tỷ lệ FS: TS ước tính 10:14. Do theo chúng tơi điều tra 67% mẫu khơng phải uống chất lượng  Điều có nghĩa nước bị ô nhiễm không thích hợp cho sử dụng Thank Your’s listening! L/O/G/O ... Enterococcus Faecalis grow on a trypticase soy agar plate Xuất sau 24 ủ bệnh (A): Streptococcus agalactiae (Streptococcus nhóm B (GBS) (B) Enterococcus faecalis GBSDA, (C) GBS (D) Enterococcus faecalis... Phù hợp để lấy mẫu thực phẩm lấy mẫu nước mặt - Hiện diện phân với số lượng thấp so với vi khuẩn - Luôn diện phân người động vật MỘT SỐ MÔI TRƯỜNG THƯỜNG DÙNG ĐỂ XÉT NGHIỆM S .FAECAL Canh thang... 25250 khuẩn lạc điển hình để tính kết Dựa vào tỷ lệ phần trăm số khuẩn lạc dương tính, ta suy kết cuối Đếm kết • Đếm tất khuẩn lạc mọc mơi trường • Khuẩn lạc mọc loang tính khuẩn lạc • Chọn đĩa