POWERPOINT ĐỊNH TÍNH SHIGELLA TRONG THỰC PHẨM

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH TÍNH SHIGELLA TRONG THỰC PHẨM GVHD: NGUYỄN THỊ MỸ LỆ • TỔNG QUAN VỀ SHIGELLA CHƯƠNG CHƯƠNG CHƯƠNG • QUY TRÌNH PHÂN TÍCH SHIGELLA • ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU CỤ THỂ TỔNG QUAN VỀ SHIGELLA Đặc điểm sinh học Khả chế gây bệnh Miễn dịch Đặc điểm sinh học 1.1 Hình thái Shigella là trực khuẩn mảnh, Gram(-), dài 1-3 µm, ni cấy có dạng cầu khuẩn. Shigella khơng trực có lơng, khơng có vỏ không sinh nha bào Đặc điểm sinh học 1.2 Tính chất ni cấy  Shigella là VK hiếu kỵ khí tùy tiện phát triển tốt điều kiện hiếu khí Trên mơi trường đặc, chúng tạo thành khuẩn lạc tròn, lồi, bờ đều, có đường kính khoảng 2mm sau 24h Trên mơi trường phân lập có lactose, khuẩn lạc không màu Đặc điểm sinh học 1.3 Tính chất sinh hóa • Tất các Shigella đều lên men đường glucose, hầu hết không sinh hơi, không lên men lactose • Các S flexneri, S boydii và S sonnei có khả lên men monnitol; S dysenteriae khơng có khả • Shigella không sinh H2S, không sử dụng citrat môi trường Simmons, không sinh indol Đặc điểm sinh học 1.4 Độc tố • Nội độc tố: có tính độc mạnh, cấu tạo kháng nguyên thân, loại kháng nguyên yếu Chủ yếu gây phản ứng ruột • Ngoại độc tố: độc, mạnh độc tố trực khuẩn uốn ván, có tác dụng đặc hiệu vào hệ thần kinh Đặc điểm sinh học 1.5 Cấu trúc kháng nguyên Tất các Shigella đều có kháng nguyên thân O, số có kháng nguyên K tất khơng có kháng ngun H • Phân loại theo kháng nguyên  S dysenteriae  S flexneri  S boydii  S sonnei S FLEXNERY S.SONNEI Khuẩn lạc sonnei Khuẩn lạc boydii Kết quả: • Kiểm tra dương tính: màu tím đục tới màu tím nhạt (sinh cadaverine - diamin) • Kiểm tra âm tính: màu vàng (chỉ glucose lên men) • Sau thời gian nuôi cấy, môi trường LCD, Shigella phát triển làm đục môi trường chuyển màu môi trường sang màu vàng, phản ứng LCD âm tính Thử nghiệm Urea Cách tiến hành: • Chuẩn bị mơi trường RSU + thị phenol red • Lấy đầy que cấy vòng từ khuẩn lạc mơi trường TSA vào ống chứa 3-5ml môi trường RSU vô trùng • Lắc nhẹ ống để trộn vi khuẩn • Ủ 370C 48 Christensen Urea (MT thạch nghiêng) Urea Broth (Rustigian – Stuart) Kết quả: • Dương tính: mơi trường có màu hồng • Âm tính: mơi trường khơng đổi màu (vàng cam) • Shigella khơng phân giải urea nên không làm thay đổi pH môi trường, phản ứng âm tính, khơng đổi màu mơi trường Thử nghiệm MR –Dương tính: mơi trường chuyển màu đỏ – Âm tính: mơi trường chuyển sang màu vàng 4.Thử nghiệm VP (Voges – Proskauer): Mục đích: • Phát vi sinh vật tạo sản phẩm trung tính (acetoin) q trình lên men glucose • Cở sở sinh hóa: • Acetoin tạo điều kiện yếm khí hồn tồn Cách tiến hành: • Chuần bị môi trường MR-VP Broth + Naphtol + KOH 40% • Hòa vòng que cấy đầy từ khuẩn lạc môi trường TSA vào ống môi trường MR-VP ủ 370C , 24 • Sau thời gian ủ, lấy 0.2ml dịch cấy vào1 ống nghiệm, thêm giọt creatin + giọt dd 1-naphtpl cồn, sau thêm giọt KOH 40%, xuất màu hồng đến màu đỏ tươi 15 phút phản ứng dương tính Kết quả: • Shigella cho phản ứng âm tính với thí nghiệm VP, khơng đổi màu bề mặt môi trường Kết luận Thử nghiệm sinh hóa Kết Thử nghiệm sinh hóa Kết Simmon citrate - saciline - Aarginine - Xylose - Lysine decarboxylase - Cellobiose - Urea - adonitol - Malonate - Dulcitol - MR + Inositol - VP - decarboxylase CHƯƠNG 3: ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU CỤ THỂ XÁC ĐỊNH GEN KHÁNG CEFTRIAXONE Ở VI KHUẨN SHIGELLA SONNE PHÂN LẬP TỪ CÁC MẪU BỆNH PHẨM Mẫu bệnh phẩm(mẫu phân) Sơ đồ định danh Shigella sonnei Cấy môi trường chọn lọc MC, XLD Cấy tăng sinh môi trường SB Chọn khuẩn lạc trong, không màu (không lên men lactose) Thử nghiệm phản ứng sinh hóa Shigelle spp Định danh kit API20E shigella sonnei shigella spp • Ngày 1: mẫu phân lập lấy trực tiếp từ bệnh nhân, giữ lọ vô trùng dùng que cấy lấy mẫu bệnh phẩm lên môi trường chọn lọc MC, XLD, cho khoảng 2g phân tươi vào môi trường tăng sinh SB Ủ vi khuẩn 370C 18 đến 24 • Ngày 2: chọn khuẩn lạc trong, không màu môi trường MC, XLD để tiến hành phản ứng sinh hóa định danh Shigella Song song đó, khuẩn lạc cấy lên môi trường NA để kiểm tra độ Trong đó, bệnh phẩm sau tăng sinh mơi trường SB cấy môi trường MC, XLD để tìm Shigella spp • Ngày 3: đọc kết phản ứng sinh hóa Vi khuẩn xác định Shigella spp có kết sinh hóa sau: phân giải glucose khơng phân giải lactose, không sinh hơi, không sinh H2S, không di động, không sinh indole, không phân giải urea, không phân gải nitrate, có phản ứng đỏ methyl dương tính CÁM ƠN CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE L/O/G/O ... VỀ SHIGELLA CHƯƠNG CHƯƠNG CHƯƠNG • QUY TRÌNH PHÂN TÍCH SHIGELLA • ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU CỤ THỂ TỔNG QUAN VỀ SHIGELLA Đặc điểm sinh học Khả chế gây bệnh Miễn dịch Đặc điểm sinh học 1.1 Hình thái Shigella là... ), ủ 370C, 24-48 → để định tính xác q trình phân tích • Cần cấy thưa để tạo khuẩn lạc riêng biệt Trên môi trường XLD, Shigella tạo khuẩn lạc đỏ, suốt Trên môi trường HE, Shigella tạo khuẩn lạc... Kết quả: • Dương tính: mơi trường có màu hồng • Âm tính: mơi trường khơng đổi màu (vàng cam) • Shigella khơng phân giải urea nên không làm thay đổi pH môi trường, phản ứng âm tính, khơng đổi màu