PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH SHIGELLA TRONG THỰC PHẨM

PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ĐỊNH TÍNH SHIGELLA TRONG THỰC PHẨM Phạm vi áp dụng : – Phương pháp dùng để phát Shigella loại thực phẩm Tiêu chuẩn tham chiếu: – FDA – BAM, 2001, chapter – Shigella, Bacteriological Analytical Manual Online 3 Định nghĩa: • Shigella trực khuẩn Gram âm, hiếu khí kỵ khí tùy nghi, không sinh bào tử không di động, thuộc họ Enterobacteriaceae • Có phản ứng LDC âm tính, không lên men đường Lactose ngày • Lên men Glucose số đường khác sinh acid không sinh • Không có khả sử dụng citrate malonate Nguyên tắc: • Tăng sinh kỵ khí môi trường lỏng chọn lọc lượng mẫu xác định • Cấy phân lập huyền phù tăng sinh sang môi trường rắn chọn lọc • Những khuẩn lạc nghi ngờ thử nghiệm sinh hóa kháng huyết Môi trường thuốc thử: • • • • • • • • Canh Shigella với novobiocin Thạch MacConkey (MC) Canh Glucose Motility test medium (semisolid) Thạch triple sugar iron (TSI) Tryptone Thuốc thử Kovac’s Kháng huyết Shigella: Shigella polyvalent nhóm A, B, C, D • Thiết bị chính: • Tủ ấm 37.0 ± 1.0oC • Bể điều nhiệt 42 ± 0.2 oC 44 ± 0.2 oC • Bình ủ kỵ khí với GasPak Quy trình: 25 gam mẫu + 225g Shigella broth Rót dịch vào bình ủ kỵ khí 42.0oC 20 ± Cấy ria lên môi trường MacConkey Ủ 35oC, 20 ± Đọc kết cấy chuyển lên TSA Ủ 37oC, 20 ± Thử nghiệm sinh hóa kháng huyết 7.4 Thử nghiệm sinh hóa Môi trường thử Biểu Đặc tính Canh Glucose Môi trường chuyển vàng, không sinh Lên men glucose glucose (+) sinh acid, Gas (-) Lysine Decarboxylase (LDC) Môi trường chuyển vàng LDC (-) Thạch thử tính di động (Mortility agar) Vi khuẩn không mọc lan khỏi đường cấy Không di động Canh Tryptone (44oC) Thạch Triple sugar iron (TSI) Không xuất vòng đỏ với Indol (-) thuốc thử Kovac’s Phần nghiêng đỏ, phần đáy vàng, không chuyển màu đen không sinh Lactose(-),sucrose(-) glucose (+), H2S (-), Gas (-) 7.5 Khẳng định kháng huyết Kháng huyết sử dụng thuộc nhóm A, B, C D 7.6 Báo cáo kết Có (hoặc không có) Shigella 25g mẫu Định lượng Pseudomonas aeruginosa phương pháp màng lọc ISO 16266: 2006 ISO 16266:2006 specifies a method for the isolation and enumeration of Pseudomonas aeruginosa in samples of bottled water by a membrane filtration technique This method can also be applied to other types of water with a low background flora, for xample, pool waters and waters intended for human consumption Sơ đồ Water sample filtration Membrane CN agar Reading/ enumeration Reading at λ= 366 nm- UV light Wood lamp Nutrient agar Acetamid broth Oxidase test Nessler reagent King B Reading/ enumeration ammonia producing colonies Raeding at λ= 366 nm- UV light Enumeration fluorescent colonies Pseudomonas agar base/CN-agar Môi trường thạch để phát Pyocyanin Pseudomonas 1.Thành phần môi trường bản: • Gelatin peptone: 16,0 g • Casein hydrolysate: 10,0g 10,0 g • K2HP04 khan: • MgCl2 khan : 10,0g • Agar : • Glycerol: 11-18,0g 10,0 ml • Nước cất: 1000 ml 2.Thành phần CN supplement: • Hecxadecyltrimethyl ammonium bromide(cetrimide)0,2g • Nalidixic acid 0,015g Giải thích kết Tạo NH3 canh acetamide Thử nghiệm Oxidase Phát hùynh quang King’s B Khẳng định P.aeruginosa NT NT NT POS Phát hùynh quang (Không xanh lục hay xanh cây) + NT NT POS Nâu đỏ không phát hùynh quang + + + POS NT NT NT ND Khuẩn lạc CN agar Xanh lục hay xanh Các dạng khác NT: không kiểm tra [...]... phần CN supplement: • Hecxadecyltrimethyl ammonium bromide(cetrimide)0,2g • Nalidixic acid 0,015g Giải thích kết quả Tạo NH3 trên canh acetamide Thử nghiệm Oxidase Phát hùynh quang trên King’s B Khẳng định P.aeruginosa NT NT NT POS Phát hùynh quang (Không xanh lục hay xanh lá cây) + NT NT POS Nâu đỏ không phát hùynh quang + + + POS NT NT NT ND Khuẩn lạc trên CN agar Xanh lục hay xanh lá cây Các dạng ... áp dụng : – Phương pháp dùng để phát Shigella loại thực phẩm Tiêu chuẩn tham chiếu: – FDA – BAM, 2001, chapter – Shigella, Bacteriological Analytical Manual Online 3 Định nghĩa: • Shigella trực... (-), Gas (-) 7.5 Khẳng định kháng huyết Kháng huyết sử dụng thuộc nhóm A, B, C D 7.6 Báo cáo kết Có (hoặc không có) Shigella 25g mẫu Định lượng Pseudomonas aeruginosa phương pháp màng lọc ISO 16266:... huyết Shigella: Shigella polyvalent nhóm A, B, C, D • Thiết bị chính: • Tủ ấm 37.0 ± 1.0oC • Bể điều nhiệt 42 ± 0.2 oC 44 ± 0.2 oC • Bình ủ kỵ khí với GasPak Quy trình: 25 gam mẫu + 225g Shigella