KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU CHỨA COUMARIN VÀ DL CHỨA TANIN

BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI ***** BÀI DƯỢC LIỆU CHỨA COUMARIN I Chiết xuất: Dược liệu : Tiền hồ Phương pháp 1: 1g bột tiền hồ +20 ml cồn 96% (lắc đều) ,BM 5’→Lọc qua Dịch lọc Phản ứng Phản ứng Phản ứng Phản ứng huỳnh quang với dd FeCl3 đóng mở vòng lacton với thuốc thử diazo II SKLM Định tính coumarin phản ứng hóa học: Phản ứng với dung dịch FeCl3: - Bước : Nhỏ vài giọt dịch lọc thu lên giấy lọc có ký hiệu T, nhỏ vài giọt mẫu chuẩn ký hiệu C ( Lưu ý :Chờ cho dung môi khô nhỏ giọt ) - Bước : Nhỏ vào tâm vòng tròn ký hiệu T -2 giọt FeCl3 1% ➔ Kết : dương tính màu xanh( coumarin có -OH tự do) Phản ứng đóng mở vòng lacton: - Bước : chọn ống nghiệm nhau, ống ml dịch lọc Tiền Hồ - Bước : + Ống : Thêm vào 4ml nước cất, lúc dung dịch trở nên đục + Ống : thêm 0,5ml NaOH 10% ➔ Đun cách thủy 2-3 phút, bổ sung nước vào thể tích ống ➔ Kết : ống ống - Tiếp tục acid hóa ống HCL đđ thấy ống có đọ đục gần *Giải thích chế phản ứng: Coumarin có vòng lacton (ester nội) nên bị mở vòng kiềm tạo thành muối tan nước Khi acid hóa, coumarin đóng vòng trở lại Kiềm có tác dụng cắt nhóm acyl dẫn chất acylcoumarin 3 Phản ứng với thuốc thử diazo: - Bước : Cho vào ống nghiêm 2ml dịch lọc,thêm 1ml NaOH 5% → Đun cách thủy phút để nguội - Bước : Thêm từ từ giọt diazo cho đên xuất màu đỏ cam *Giải thích chế phản ứng: Khi môi trường kiềm yếu (NaOH 5%) , thủy phân phân tử coumarin có vị trí ortho – hay para – với nhóm OH phenol trống không bị cản trở lập thể + Điều kiện thực phản ứng với thuốc thử diazo : mơi trường kiềm yếu, + Nếu khơng mở vòng lacton, phản ứng không xảy 4 Sự tăng huỳnh quang môi trường kiềm tác dụng tia UV: - Bước : Lấy 3ml dịch chiết cồn + giọt NaOH 5% → BM 3’ - Bước : Nhỏ giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc (chờ khô lập lại lần nữa) - Bước : Che nửa vết dịch đồng xu Đem soi đèn UV nm 1-2 phút + Lấy miếng kim loại thấy nửa không bị che phát quang sang nửa bị che • Giải thích chế phản ứng :Sau mở vòng lacton kiềm(NaOH 5%) , coumarin tạo thành dẫn chất acid hydroxycinnamic dạng cis (acid coumarinic) Chất tác dụng tia tử ngoại chuyển thành dạng trans ( acid coumaric) có huỳnh quang sáng III Định tính coumarin sắc ký lớp mỏng: • Chuẩn bị: o Bản sắc ký lớp mỏng: chấm điểm, chấm vạch o Chuẩn bị dịch chiết: Ta lấy 3ml dich dược liệu Tiền Hồ o Chuẩn bị hệ dung môi khai triển: pha 22ml hệ dung môi S1: benzene – EtOAc (10:1) → 20ml benzene : 2ml EtOAc Cho dung môi vào bình sắc ký ( lót sẵn giấy lọc) cho lớp dung môi cao khoảng 0,5 cm Đậy nắp bình sắc ký 30 phút • Khai triển: - Bản chấm điểm: + Dùng chì kẻ đường thẳng cách mép từ cm + Chia vạch xuất phát làm phần nhau.Đánh dấu điểm: bên trái kí hiệu T, bên phải kí hiệu C + Dùng mao quản lấy mẫu chuẩn có sẵn chấm điểm cách mép 1cm sau chờ khơ, tiếp tục tiến hành dùng mao quản chấm mẫu thử sau cho mẫu thử nằm bên trái mẫu chuẩn - Bản chấm vạch: + Dùng chì kẻ đường thẳng cách mép từ 1-1,5 cm + Chia vạch xuất phát làm phần : bên trái kí hiệu T, bên phải kí hiệu C + Dùng mao quản lấy mẫu chuẩn có sẵn chấm điểm thành vạch chấm kéo thành vạch cách mép 1cm sau chờ khô, tiếp tục tiến hành dùng mao quản chấm mẫu thử sau cho mẫu thử nằm bên trái mẫu chuẩn ❖ Phát vết tính giá trị Rf 365 nm 254 nm ❖ Tính Rf : Bảng chấm điểm : + Rfv1= 0,02 + Rfv2= 0,07 + Rfv3= 0,2 + Rfv4= 0,4 + Rfv5= 0,5 Bảng chấm vạch : + Rfv1= 0,1 + Rfv2= 0,2 + Rfv3= 0,3 + Rfv4= 0,4 + Rfv5= 0,5 BÀI 10 DƯỢC LIỆU CHỨA TANIN ***** I Định tính tannin Chiết hợp chất tannin từ dược liệu: 1g bột dược liệu 20ml nước sôi → BM ( lắc ) 10’ sau lọc dịch nóng qua bơng Dịch lọc Phản ứng với thuốc thử diazo Định tính phân biệt loại tannin Định tính chung tannin dược liệu: 2.1 Phản ứng với dung dịch protein: - Bước : Lấy 1ml dịch chiết cho vào ống nghiệm ( ống : Ổi, ống : Lá Bàng ) → thêm giọt thuốc thử gelatin muối, lắc nhẹ ➔ Kết : Phản ứng dương tính ống có tủa trắng đục 2.2 Định tính phân biệt loại tannin (lá Bàng Ổi): ❖ Lá bàng : - Ống : ml dịch chiết + giọt thuốc thử FeCl3 1% ➔ Kết : dung dịch có màu xanh rêu - Ống : ml dịch chiết + ml TT Tiasny ( Formol – HCl đậm đặc, : ) → BM 10’ → Kết : tủa vón, đỏ gạch Kết Luận : Lá Bàng có chứa loại tannin pyrocatechic ❖ Lá Ổi - Ống : ml dịch chiết + giọt thuốc thử FeCl3 1% ➔ Kết : Xanh đen - Ống : cho ml dịch chiết + ml TT Tiasny ( Formol – HCl đậm đặc, : ) → BM 10’ ➔ Kết : tủa vón, đỏ gạch Kết luận : Lá Ổi có chứa loại Tanin : Tanin pyrogallic Tannin pyrocatechic  ... Rfv2= 0,2 + Rfv3= 0,3 + Rfv4= 0,4 + Rfv5= 0,5 BÀI 10 DƯỢC LIỆU CHỨA TANIN ***** I Định tính tannin Chiết hợp chất tannin từ dược liệu: 1g bột dược liệu 20ml nước sôi → BM ( lắc ) 10’ sau lọc dịch... Định tính phân biệt loại tannin Định tính chung tannin dược liệu: 2.1 Phản ứng với dung dịch protein: - Bước : Lấy 1ml dịch chiết cho vào ống nghiệm ( ống : Ổi, ống : Lá Bàng ) → thêm giọt thuốc... 5%) , coumarin tạo thành dẫn chất acid hydroxycinnamic dạng cis (acid coumarinic) Chất tác dụng tia tử ngoại chuyển thành dạng trans ( acid coumaric) có huỳnh quang sáng III Định tính coumarin