DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOID VÀ DƯỢC LIỆU CHỨA GYCOSID TIM

BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI ***** Bài 1: ĐỊNH TÍNH ALKALOID BẰNG PHƯƠNG PHÁP HĨA HỌC VÀ SKLM I Chiết xuất, tinh chế (loại tạp) Bột DL Tâm sen (3g) - DM: 20ml cồn 90° + 5ml (H2SO4 5%) - Δ/BM 05', lọc qua bơng Chiết nóng lần Thu dịch chiết acid - Δ/BM Cắn Hòa tan Bouchardat - H2O (10ml x lần), lọc ½ DC Dịch chiết ½ DC Định tính = tt chung - Kiềm hóa = NH4OH đđ (pH ≈ 10) - Chiết với 10ml CHCl3 Mayer Dragendorff Dịch chiết Định tính = SKLM ❖ Các bước thực - Cân xác 3g dược liệu (tâm sen) cho vào bình nón 50ml, thêm vào 20ml cồn 900+ 5ml H2SO4 (5%), đun cách thủy phút sau lọc qua bông, ta thu dịch chiết acid - Đem dịch chiết thu đun cách thủy đến thu cắn - Hòa tan cắn thu với nước đun sơi (10ml X lần), sau đem lọc ta thu dịch chiết - Lấy ½ dịch chiết định tính thuốc thử chung: + TT Bouchardat + TT Mayer + TT Dragendorff Kết thí nghiệm a Thuốc thử Bouchardat Nhỏ giọt thuốc thử Bouchardat cho vào ống nghiệm sau để nghiêng ống khoảng 30 đến 45o cho từ từ giọt thuốc thử Bouchardat chảy dọc theo thành ống nghiệm xuất tủa ngừng ➔ Kết : xuất tủa nâu đáy ống nghiệm, phản ứng xảy chậm, dung dịch bị đục *Kết luận: Dương tính *Đánh giá: ++ b Thuốc thử Mayer : Nhỏ giọt thuốc thử Valse – Mayer vào cho vào ống nghiệm sau để nghiêng ống khoảng 30 đến 45o cho từ từ giọt thuốc thử Mayer chảy dọc theo thành ống nghiệm xuất tủa ngừng ➔ Kết : xuất tủa trắng, phản ứng xảy lập tức, tốc độ phản ứng nhanh, dung dịch bị đục *Kết luận: Dương tính *Đánh giá: ++++ c Thuốc thử Dragendorff : Cho giọt Dragendorff cho vào ống nghiệm sau để nghiêng ống khoảng 30 đến 45o cho từ từ giọt thuốc thử Dragendorff chảy dọc theo thành ống nghiệm xuất tủa ngừng ➔ Kết thí nghiệm: xuất tủa vàng cam, phản ứng xảy lập tức, dung dịch *Kết luận: Dương tính *Đánh giá: +++ Sắc ký lớp mỏng a Chuẩn bị - Bản mỏng silica gel - Mẫu chuẩn - Mẫu thử ( dịch chiết 2) - Dung môi khai triển S2=CHCl3-MeOH-NH4OH(20: 3,6: 0,4) - Tiến hành sắc ký - Kẽ đường thẳng cách mép bảng mỏng từ 1-1,5 cm, chấm điểm: điểm kí hiệu T (bên trái), điểm lại kí hiệu C (bên phải) - Bảng nhỏ sắc kí phương pháp chấm điểm, bảng lớn sắc kí phương pháp chấm vạch - Phát vết b bước thực hiện: - Kiềm hóa dung dịch pH = 10 NH4OH: • Lấy mảnh giấy quỳ chia thành mảnh nhỏ đặt lên mặt kính đồng hồ để định pH dung dịch • Nhỏ vài giọt NH4OH vào phần , dùng đũa thủy tinh chấm vào dung dịch trong phần chấm lên mảnh quỳ tím mặt kính đồng hồ, giấy quỳ màu đỏ tiếp tục nhỏ NH4OH chấm thử lên quỳ tím màu giấy quỳ giống với màu pH = 10 ( màu xanh đen) thang đo pH ngừng • Cho phần vào bình lắng gạn với 10ml dd CHCl3 ,đậy nắp bình lại đem lắc lần ( lưu ý lắc nhẹ nhàng tránh lắc mạnh dễ gây tạo nhũ ) sau đem bình chiết lấy phần dịch chiết để chấm SKLM c Phát vết mỏng máy soi UV: ❖ Ánh sáng thường: *Kết quả:Không phát vết ánh sáng thường ❖ Ánh sáng bước sóng 254nm:  Kết quả: Vết di chuyển xéo, vết có màu tím  Sắc ký đồ : • Cách làm vết thuốc thử Dragendorff: dùng kẹp gắp hai mỏng nhúng vào thuốc thử Dragendorff để khô thấy xuất vết mỏng ❖ Ánh sáng bước sóng 365nm:  Kết quả: Vết di chuyển khơng hồn tồn, khơng nhìn rõ màu vết  Kết Rf: 6,5 Rf2= Rf1 = Biện pháp khắc phục tượng ngoại ý: + Vết di chuyển xéo: Thay mỏng khác thay bình sắc ký khác + Vết di chuyển khơng hồn toàn: Loại tạp kỹ trước chấm lên bảng II Câu hỏi lượng giá Những lưu ý tiến hành định tính alkaloid thuốc thử chung: - Khi thực phản ứng với thuốc thử chung phải cho từ từ giọt thuốc thử ống nghiệm - Không nên cho nhiều thuốc thử vào ống nghiệm số thuốc thử có tủa tủa tan lại lượng thuốc thử thừa Ý nghĩa việc dùng NH4OH hệ dung môi: - Khi cho NH4OH vào pH dung dịch lớn pHa +2, alkaloid chuyển dạng định (alkaloid base), vết sắc ký gọn, đẹp - Khi cho NH4OH mẫu dạng alkaloid base (kém phân cực) cho Rf cao làm độ chín xác cao Nếu vết có Rf thấp sắc kí đồ, hướng giải để có sắc ký đồ tốt hơn: - Thay hệ dung môi - Chấm dung dịch thử với lượng vừa đủ - Trong q trình khai triển, để dung mơi khai triển chạy quãng đường dài tốt mà gần mép mỏng không 0,5 cm - Chuyển dạng alkaloid Bằng sắc kí lớp mỏng kết luận sơ hai chất khác (hoặc đồng nhất) Để kết luận chất X có thành phần hỗn hợp Y cần làm sắc kí sắc kí lớp mỏng • Nếu Rf X với độ dài Rf có thành phần hỗn hợp Y kết luận • Để có độ xác cao làm với nhiều hệ dung mơi khác xử lý chất có Rf sau cho chạy với hệ dung mơi khác Rf kết luận chất X có thành phần hỗn hợp Y Bài 5: Dược Liệu Chứa Glycosid Trợ Tim Chiết xuất tinh chế glycoside tim từ Trúc đào Lấy 5g bột Trúc đào ngâm bình nón 100ml với 30ml ethanol 25% 24 Sau đun nóng 5-10 phút (thỉnh thoảng lắc) bếp cách thủy đun sôi Gạn lấy dịch lọc vào bucher Phần bã lại chiết tiếp bếp cách thủy đun sôi thêm lần nữa, lần với 15ml ethanol 25% Gộp chung cách dịch lọc Thêm vào dịch chiết 10ml dung dịch chì acetat 30%, khuấy kỹ, để lắng gạn lọc qua giấy lọc Kiểm tra việc loại tạp, dung dịch lọc khoảng 20ml, cách nhỏ thêm vào dịch lọc1 giọt dung dịch chì acetat , xuất kết tủa phải cho thêm dung dịch chì acetat lọc lại Thêm vào dung dịch lọc 10ml dung dịch natri sulfat 15%, khuấy kỹ, để lắng gạn lọc qua bơng gòn Kiểm tra việc loại chì acetat, dung dịch lọc khoảng 15ml, giọt dung dịch natri sulfat, xuất kết tủa phải cho thêm dung dịch natri sulfat lọc lại Dịch lọc sau loại hết muối chì thừa lắc với CHCl3 (10ml x lần) bình lắng gạn, lấy lớp (phần dung dịch suốt) Gộp dịchCHCl3 làm khan bột Na2SO4 khan Chia dịch CHCl3 thành phần ống nghiệm Bốc CHCl3 ống nghiệm cách thủy cắn khô Dung dịch ống nghiệm dùng để làm phản ứng Liebermann – Burchard Sơ đồ chiết xuất tinh chế glycoside tim: Bột Trúc đào (5g) Ngâm cồn 25% (24h) BM (5-10 phút Lọc Dịch chiết (30 ml) 10ml Pb(CH3COO)2 30% Khuấy kỹ →Để yên (10-15 phút) → Lọc qua giấy lọc Dịch lọc 1 giọt Pb(CH3COO)2 10ml Na2SO4 15% Khuấy kỹ →Để yên →Lọc qua Dịch lọc giọt Na2SO4 15% Lắc CHCl3 (Bình lắng gạn) (10ml x lần) Dịch glycosid Làm khan = Na2SO4 khan Chia làm ống BM Sử dụng để định tính glycoside tim Định tính glycisod tim 2.1 Phản ứng phần đường Phản ứng Kaller – Kiliani Cho vào phần cắn ống nghiệm 1ml thuốc thử Kelller, khuấy kỹ cho tan Thêm nhẹ nhàng 1ml thuốc thử Kiliani dọc theo thành ống nghiệm Phản ứng dương tính mặt ngăn cách lớp thuốc thử xuất vòng màu đỏ đỏ nâu có màu xanh khuyếch tán dần lớp Phản ứng dương tính 2.2 Phản ứng phần aglycon 2.2.1 Phản ứng khung steroid Phản ứng Liebermann – Burchard (thực tủ hút) Cho 1ml dung dịch anhydrid acetit vào ống nghiệm khơ có chứa sẵn dung dịch glycoside tim CHCl3, lắc Để ống nghiệm nghiêng vào giá vào becher, cho nhẹ nhàng theo thành ống nghiệm khoảng 2ml dung dịch acid sulfuric đậm đặc Phản ứng đương tính lớp thuốc thử xuất thử xuất vòng ngăn cách, sát vòng có màu hồng tím, phía vòng có màu xanh tới chàm Phản ứng dương tính 2.2.1 Phản ứng vòng lacton cạnh a Phản ứng Baljet Cho thuốc thử Baljet ( dung dịch đồng lượng Baljet + Baljet 2) vào ống nghiệm rỗng làm mẫu chứng, ống nghiệm có chứa cắn glycosid tim (mẫu thử) khuấy hay lắc kỹ Phản ứng dương tính dung dịch ống nghiệm có chứa cắn glycosid tim có màu cam đậm so với dung dịch ống chứng Phản ứng dương tính b Phản ứng Legal Cho vào ống nghiệm, ống nghiệm chứa có chứa cắn glycosid tim, ống nghiệm chứng, giọt cồn 90% Thêm vào 1-2 giọt dung dịch KOH 10% cồn (hoặc pyridin), thêm tiếp dung dịch giọt dung dịch natri nitroprussiat 0,5% Phản ứng dương tính dung dung dịch mẫu có chứa cắn glycosid tim có màu đậm so với dung dịch ống chứng Phản ứng dương tính ... dung môi khác Rf kết luận chất X có thành phần hỗn hợp Y Bài 5: Dược Liệu Chứa Glycosid Trợ Tim Chiết xuất tinh chế glycoside tim từ Trúc đào Lấy 5g bột Trúc đào ngâm bình nón 100ml với 30ml... (thực tủ hút) Cho 1ml dung dịch anhydrid acetit vào ống nghiệm khơ có chứa sẵn dung dịch glycoside tim CHCl3, lắc Để ống nghiệm nghiêng vào giá vào becher, cho nhẹ nhàng theo thành ống nghiệm... Baljet + Baljet 2) vào ống nghiệm rỗng làm mẫu chứng, ống nghiệm có chứa cắn glycosid tim (mẫu thử) khuấy hay lắc kỹ Phản ứng dương tính dung dịch ống nghiệm có chứa cắn glycosid tim có màu cam đậm