DƯỢC LIỆU CHỨA CARBOHYDRAT và dược LIỆU CHỨA SAPONIN

BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI ***** Bài DƯỢC LIỆU CHỨA CARBOHYDRAT Tinh bột Gạo ( Amylum Oryzae) - Hình dạng :Bột màu trắng, có kích thước nhỏ - Đặc tính: + Kích thước nhỏ ( 2-12μm) hạt đơn hình đa giác + Thường gặp hạt kép, có kết thành đám nhiều hạt + Tễ chấm nhỏ, vân tăng trưởng không rõ Tinh bột Khoai Mì (Amylum Manihot) - Hình dạng : bột màu trắng - Đặc tính : + Hình cầu đa số bị lẹm đầu lõm trơng giống chng hay hình chng + Kích thước từ 5-30μm + Tễ hình Tinh bột Ý Dĩ ( Amylum Coisis) - Hình dạng : bột màu trắng hay màu trắng ngà - Đặc tính : + Mép đợn sóng + Kích thước hạt trung bình + Tễ phân nhánh hình Tinh bột Đậu Xanh ( Amylum Phaseoli) - Hình dạng: bột màu xanh nhạt - Đặc tính : + Hình trứng hay hình bầu dục + Kích thước 50μm + Tễ dài phân nhánh hình xương cá Bài 5: DƯỢC LIỆU CHỨA GLYCOSID TRỢ TIM Chiết xuất Glycosid tim 5g bột trúc đào + cồn 25% Dịch chiết ( bã chuẩn bị → thí nghiệm lấy 30ml) + 10ml Pb(CH3COO)2 30% Khuấy để yên 10-15 phút lọc qua giấy lọc) Dịch lọc(1) giọt Pb(CH3COO)4 +10ml Na2SO4 15% khuấy đều, để yên phút lọc qua Dịch lọc (2 ) + giọt Na2SO4 Tủa + Na2SO4 15% Không tủa Lắc CHCl3(10ml x lần) / Bình lắng gạn Dịch glycosid lọc lại làm khan Na2SO4 chia làm ống nghiệm 1(bajet) 2(legal) 3(keller-kitani) 5(Liebermann) Khung steroid Sơ đồ quy trình chiết xuất glycosid tim Trúc Đào Các tiến hành định tính glycoside tim 2.1 Cách tiến hành : ❖ Bước : Lấy 5g bột Trúc Đào chiết nóng lần với cồn 25%.Thu dịch chiết cách gạn bột đun qua becher 50 lọc nóng qua bơng ❖ Bước : ▪ Dùng cốc có mỏ lấy 30ml dịch chiết thêm vào dịch chiết 10ml dung dịch Pb(CH3COO)2, khuấy kỹ, để lắng gạn lọc qua giấy lọc Hình minh họa: Lọc dịch chiết qua giấy lọc ▪ Thu dịch lọc Loại tạp dịch lọc cách nhỏ thêm giọt Pb(CH3COO)2, xuất tủa phải cho thêm dung dịch Pb(CH3COO)2 lọc lại ❖ Bước : ▪ Thu dịch lọc khơng tủa, thêm vào dịch lọc 10ml dung dịch Na2SO4 15% , khuấy kỹ, để lắng gạn lọc qua bơng gòn ▪ Thu dịch lọc 2, loại tạp dịch lọc cách cho thêm vào giọt dung dịch Na2SO4 15% Nếu xuất tủa thêm dung dịch Na2SO4 15% lọc lại ❖ Bước 4: ▪ Dịch lọc sau loại hết muối chì thừa lắc với 10ml CHCl3 bình lắng gạn, để yên vài phút hỗn hợp bình lắng gạn tách thành lớp, dùng erlen nút có mài khơ lấy lớp ▪ Tiếp tục lắc lớp với 10ml CHCl3 bình lắng gạn, để yên vài phút hỗn hợp bình lắng gạn tách thành lớp,lấy lớp Sau lần lắc với CHCl3 thu 15ml dịch glycoside ❖ Bước : Làm khan CHCl3 : cho vào erlen chứa 15ml dịch glycoside muỗng nhỏ bột Na2SO4 ( dung mơi có hạt Na2SO4 rời rạc đáy erlen) ❖ Bước 6: Thu dịch CHCl3 : ▪ Gạn (không cần lọc) vào becher 50ml (sạch khô) ▪ Chia cho ống nghiệm (khô sạch) đánh số từ đến ▪ Lấy ống nghiệm 1, 2, 3, đem đun cách thủy ( đun đến nghiêng ống nghiệm khơng xuất giọt nước) 2.2 Định tính : ❖ Phản ứng Baljet (Phản ứng vòng lacton cạnh): • Cho 1ml thuốc thử Baljet (dung dịch đồng lượng Baljet + Baljet ) vào ống nghiệm có chứa cắn glycoside tim lắc kỹ Ký hiệu T • Lấy ống nghiệm khác cho 1ml thuốc thử Baljet Ký hiệu C  Kết : dương tính , dung dịch ống T màu đỏ cam đậm so với ống C ❖ Phản ứng Legal (Phản ứng vòng lacton cạnh) • Cho vào ống nghiệm có chứa cắn glycoside tim giọt cồn 95% hòa tan cắn Sau thêm giọt dung dịch KOH 10% cồn (hoặc pyridine), thêm tiếp giọt dung dịch natri nitroprussiat 0,5% Ký hiệu T • Lấy ống nghiệm khác cho giọt cồn 95% , Sau thêm giọt dung dịch KOH 10% cồn (hoặc pyridine), thêm tiếp giọt dung dịch natri nitroprussiat 0,5% Ký hiệu C  Kết : dương tính, ống T có màu đỏ cam đậm ống C ❖ Phản ứng Keller –Kiliani (Phản ứng phần đường) - Lấy ống nghiệm chứa cắn cho vào ml Keller, sau lấy khoảng ¼ ml cho qua ống nghiệm khác, thêm 1ml Keller thêm 1ml Kiliani  Kết quả: dương tính , mặt ngăn cách lớp thuốc thử xuất vòng màu nâu đỏ có màu xanh khuếch tán dần lên lớp ❖ Phản ứng khung Steroid ( phản ứng Liebermann – Burchard) : - Cho 1ml anhydride acetic vào ống nghiệm khơ có chứa sẵn 1ml dung dịch glycoside tim CHCl3, lắc - Để ống nghiệm nghiêng vào giá cho nhẹ nhàng theo thành ống nghiệm khoảng 2ml acid sulfuric đậm đặc  Kết : dương tính, lớp thuốc thử xuất vòng ngăn cách, sát phía vòng có màu hồng, phía vòng có màu xanh I Bài DƯỢC LIỆU CHỨA SAPONIN Định tính tạo bọt phản ứng phản ứng Liebermann – Burchard 1g dược liệu (CT,BK) +20ml cồn 70o BM phút → lọc qua Dịch chiết ( chén sứ ) BM 5ml dịch chiết 10 giọt Tạo bọt BM Cắn +2ml Anhydric acetic +2ml CHCl3 → khuấy kĩ cho tan → lọc = pipet Dịch lọc(ống nghiệm khô) +2ml H2SO4 Quan sát kết (chụp) Thử nghiệm tính tạo bọt Phút 14 Phút 15 Phút 29 30 phút Phút 59 Phút 60 Sau phút 60  Đánh giá kết : Bồ Kết ( +++) Cam Thảo ( ++ ) Định tính Saponin phản ứng hóa học ❖ Phản ứng Liebermann – Burchard  Phản ứng dương tính : + Bồ Kết : lớp dung dịch phía màu xanh rêu + Cam Thảo : mặt ngăn cách lớp có màu nâu đỏ Định tính sắc ký lớp mỏng 3.1 Chuẩn bị : - Dược liệu : Cam Thảo, Bồ Kết - Hệ dung môi : CHCl3 – MeOH – H2O ( 65 : 35 : 10, lớp ) - Mẫu thử : + Saponin toàn phần Cam Thảo chuẩn Cam Thảo thử hòa tan MeOH + Saponin toàn phần Bồ Kết chuẩn Bồ Kết thử hòa tan MeOH - Bản mỏng silicagel F254 tráng sẵn, cõ 2,5 x 10 cm( Merk ) 3.2 Tiến hành : - Bước : Chuẩn bị mỏng : - Bước : Cho vào bình Sắc Ký ( có hệ dung mơi bão hòa ) - Bước 3: Khai triển → Lấy khỏi bình làm khơ mỏng - Bước : Soi UV AST 254nm 365 nm - Bước : Nhúng với thuốc thử ( nhúng nhanh ) - Bước : Hơ nóng (bếp điện) → Hiện vết ❖ NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ : • Dược liệu vết màu tím (màu saponin) • Rf = Hiện tượng Vết di chuyển khơng hồn tồn Vết hình lửa nhiều đầu Vết trải dài không tách = 0,65cm (cam thảo) Cách khắc phục Loại tạp kĩ trước chấm lên Chấm vết không Chấm kỹ lại trùng bảng mỏng khác Chọn hệ dung môi Thăm dò lại hệ sắc ký chưa tốt dung mơi sắc ký dung môi chọn dung chiết không chuyên môi chiết xuất mẫu biệt chuyên biệt Nguyên nhân Mẫu nhiều tạp phân cực ... phía vòng có màu hồng, phía vòng có màu xanh I Bài DƯỢC LIỆU CHỨA SAPONIN Định tính tạo bọt phản ứng phản ứng Liebermann – Burchard 1g dược liệu (CT,BK) +20ml cồn 70o BM phút → lọc qua Dịch chiết... 3.1 Chuẩn bị : - Dược liệu : Cam Thảo, Bồ Kết - Hệ dung môi : CHCl3 – MeOH – H2O ( 65 : 35 : 10, lớp ) - Mẫu thử : + Saponin toàn phần Cam Thảo chuẩn Cam Thảo thử hòa tan MeOH + Saponin tồn phần... Liebermann – Burchard) : - Cho 1ml anhydride acetic vào ống nghiệm khơ có chứa sẵn 1ml dung dịch glycoside tim CHCl3, lắc - Để ống nghiệm nghiêng vào giá cho nhẹ nhàng theo thành ống nghiệm khoảng