Sắc ký lớp mỏng dược liệu chứa saponin

Sắc ký lớp mỏng dược liệu chứa saponin

GVHD: Ths Đỗ Văn Mãi

• Pha động bao gồm dung dịch cần phân tích được hòa tan trong

một dung môi thích hợp và được hút lên bản sắc kí bởi mao dẫn, tách

I TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG

 Khi R f = 0 thì chất tan hoàn toàn không di chuyển, còn khi R f = 1 thì chất tan di chuyển bằng tốc độ của dung môi Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến R f nhưng quan trọng là:

 Chất lượng và hoạt tính chất hấp thụ

 Bề dày của lớp mỏng.

 Chất lượng và độ tinh khiết của pha động.

I TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỚP MỎNG

- Một số cải tiến có thể kết hợp phương pháp truyền thống để

tự động hóa một vài bước, làm tăng độ dung giải của sắc kí lớp mỏng và cho số liệu chính xác hơn

 Phương pháp này được gọi là sắc kí lớp mỏng hiệu năng

cao (high performance TLC - HPTLC).

II Các b ước chuẩn bị sắc ký lớp mỏng

- Chọn chất hấp phụ: cũng tư ơng tự như sắc ký cột có thể

dùng các chất hấp phụ là silicagel, nhôm oxit, bột cellulose, tinh bột, sephadex

- Để cho chất hấp phụ bám chắc vào phiến kính, ngư ời ta cho thêm chất dính vào chất hấp phụ Chất dính thư ờng là CaSO4 với tỷ lệ khoảng 10%.

II Các b ước chuẩn bị sắc ký lớp mỏng

- Chuẩn bị phiến kính và lớp mỏng chất hấp phụ trên kính:

•Các phiến kính thư ờng có cỡ 20x5 cm, 20x20 cm, 7,5x2,6 cm Rửa sạch, sấy khô trư ớc khi rải

• Cân 5g bột silicagel cho vào cối nghiền đều với 10ml n ước cất, lượng này có thể rải trên 2 phiến kính cỡ 20x5cm

Sau đó rải ngay lên phiến kính bằng tay hoặc bằng máy

• Để khô ở nhiệt độ phòng sau đó sấy ở 1000C từ 30 - 120 phút tuỳ theo yêu cầu Độ dày chuẩn của lớp mỏng là 0,25 - 0,30 mm.

II Các b ước chuẩn bị sắc ký lớp mỏng

- Chuẩn bị mẫu thử: cũng giống như sắc ký giấy, các mẫu thử

cần có cách chuẩn bị riêng để loại bỏ tạp chất và cô đặc mẫu

- Dùng ống vi quản chấm mẫu cách bờ d ưới phiến kính

khoảng 1-2 cm Vết chấm phải nhỏ, đư ờng kính 2 - 5 mm

cách xa nhau ít nhất 1 cm.

Một số dụng cụ cho SKML

 Bình triển khai

Một số dụng cụ cho SKML

Một số dụng cụ cho SKML

Uv lamps cabinet 365, 254nm Mao quản

III Một vài hệ dung môi dùng để khai triển trên các bản mỏng silicagel-G:

1 Saponin triterpenoid:

a) Chloroform – methanol – nước (65:35:10)

b) Ethyl acetat – acid acetic – nước (8:2:1)

c) n-butanol – ethanol

III Một vài hệ dung môi dùng để khai triển trên các bản mỏng silicagel-G:

III Một vài hệ dung môi dùng để khai triển trên các bản mỏng silicagel-G:

 Dung môi phải là loại tinh khiết, thường dùng hỗn hợp 2-3 các dung môi

Các dung môi xếp theo thứ tự mạnh dần (sức đẩy,

phản hấp phụ): hexan, heptan, cyclohexan, carbon

tetraclorid, benzen, cloroform, butyl acetat, ether, ethyl acetat, pyridin, aceton, ethanol, methanol, nước.

Chấm mẫu thử

 Kẻ một vạch thẳng nằm ngang bằng bút chì, cách mép dưới của bản mỏng 1cm làm vạch xuất phát

 Dùng mao quản hay micropipet chấm các vết dung dịch thử và dung dịch chuẩn lên đó Các vết phải cách nhau và cách mép bản mỏng ít nhất 1 cm

Triển khai SKLM

 Quá trình cho pha động chạy, kéo mẫu phân tích di chuyển trên pha tĩnh

 Đặt bản mỏng vào bình sắc ký đã bão hoà hơi dung môi của pha động, mép phía chấm mẫu được nhúng vào dung môi động nhưng không được cho điểm đã chấm mẫu chạm trực tiếp vào dung môi động

 Sau khi dung môi chạy được nửa hay 2/3 bản mỏng ta lấy ra để khô hay sấy khô

Cách phát hiện

 Các thuốc thử dưới đây dùng cho loại saponin và sapogenin nên sau khi phun cần phải sấy 10 phút ở 1100C rồi quan sát mầu ở ánh sáng thường hoặc ánh sáng tử ngoại (365nm):

 Thuốc thử Carr – Price (dung dịch SbCl3 bão hòa trong chloroform).

 Thuốc thử Liebermann – Burchard.

 Thuốc thử Salkowski, acid phosphomolibic 10% trong ethanol, acid phosphotungstic 20% trong ethanol, dung dịch acid phosphoric 50% trong nước, dung dịch vanillin – sulfuric.

 Các vết saponin sẽ cho các mầu khác nhau, tùy loại thuốc thử saponin

Cách phát hiện

 Saponin nhóm spirostan có thể hiện màu bằng thuốc thử Sannié (dung dịch A: vanillin 1% trong cồn, dung dịch B: anhydrid acetic +

H2SO4 12:1)

 Phun dung dịch rồi sấy 1200 trong 3 phút sau đó phun dung dịch B, vết saponin có mầu vàng

 Đối với nhóm spirostan và nhóm steroid alcaloid có thể dùng thuốc thử Carr – Price để phân biệt các dẫn chất có nối đôi và không

có nối đôi ở vị trí C-5 Các dẫn chất C5 có mầu đỏ ở 200C và tím đỏ sau khi sấy 1050C

V Ứng dụng và công dụng của SKLM

 Định tính.

 Định lượng (phải có chất chuẩn).

 Phát hiện thành phần trong hỗn hợp, định tính điểm chỉ.

 Theo dõi thành phần các chất.

 Phân lập các chất.

V Ứng dụng và công dụng của SKLM

 Xét nghiệm độ tinh khiết của các hóa chất phóng xạ trong dược khoa.

 Xác định các sắc tố trong tế bào thực vật.

 Phát hiện thuốc trừ sâu, thuốc diệt côn trùng trong thức ăn.

 Nhận biết những hóa chất trong một chất cho sẵn.

 Giám sát các phản ứng hữu cơ.

VI Các hiện tượng ngoài ý muốn thường gặp trong

SKLM và cách khắc phục

Nguồn tham khảo

 thong.htm

http://123doc.org/document/1030224-ap-dung-phuong-phap-sac-ky-cot-va-sac-ky-lop-mong-vao-giang-day-hoa-hoc-pho-Thank you