SẮC KÝ LỚP MỎNG DƯỢC LIỆU CHỨA SAPONIN

Sắc kí lớp mỏng dược liệu chứa Saponin I Giới thiệu chung SKLM: Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography (TLC)) gọi Kỹ thuật sắc ký sử dụng từ nhiều kỷ sắc ký phẳng, kĩ thuật sắc kí dung để tách trước để tách sản phẩm nhuộm từ cỏ Đến chất hỗn hợp Phương pháp SKLM bao gồm pha thập 1930 – 1940, phát tĩnh làkỷ lớp mỏng cácphương chất hấp pháp phụ, thường silica gel, triển nhánhoxide, chóng vớicellulose nhiều kỹđược thuậtphủ khác aluminium Có mặt loại sắctrơ ký:Pha sắcđộng ký giấy nhất, phẳng chất bao(kỹ gồmthuật dung sớm dịch cần phân tích dụng hiệumơi quảthích táchhợp đượcíthòa tan sử mộtvìdung vàthua đượckỹ hút lên bảnSKLM), sắc kí mao dẫn, tách dung thísắc nghiệm dựa thuật SKLM, sắc ký trao đổidịch ion, ký lọc tínhký phân cực thànhhiệu phầnnăng trongcao, dung dịch gel, sắc lực, sắc ký lỏng điện di Sắc kí lớp mỏng sử dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực: • Xét nghiệm độ tinh khiết hóa chất phóng xạ dược khoa • Xác định sắc tố tế bào TV • Phát thuốc trừ sâu, thuốc diệt trùng thức ăn • Nhận biết hóa chất chất cho sẵn sắc hữu ký lớp • Giám sát Bình phản ứng mỏng Một số cải tiến kết hợp PP truyền thơng để tự động hóa vài bước, làm tang đỡ dung giải SKLM cho số liệu xác PP gọi SKLM nâng cao ( high performance TLC – HPTLC) Với chất hấp thu silica gel alumin, hợp chất phân cực di chuyển nhanh hợp chất phân cực di chuyển chậm Saponin gọi saponoid nhóm SAPONIN gì? glycoside lớn, gặp rộng rãi TV Saponin có số ĐV hải sâm, cá sao… Saponin có số tính chất đặc biệt: ❑Làm giảm sức căng bề mặt, tạo nhiều bọt lắc với nước, có tác dụng nhũ hóa tẩy ❑Làm vỡ hồng cầu nồng độ lỗng ❑Kích ứng niêm mạc gây hắt hơi, đỏ mắt, có tác dụng long đờm, lợi tiểu; liều cao gây nơn mửa, lỏng ❑Có thể tạo phức với cholesterol chất 3-bhydroxysteroid Một số dược liệu chứa saponin: Bồ kết Ngưu tất Tam thất Táo nhân Cát cánh Cam thảo Nhân sâm PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ DƯỢC LIỆU CHỨA SAPONIN o Chất hấp phụ: Silica gel pha thuận pha đảo o Mẫu thử thường dùng dịch chiết cồn o Dung môi khai triển: + Saponin: CHC𝒍𝟑 - MeOH-𝑯𝟐 O (65:35:10, lớp dưới) + sapogenin: CHC𝒍𝟑 -MeOH (19:1), CHC𝒍𝟑 -Aceton (9:1), 𝑪𝟔 𝑯𝟔 Etyl acetat (1:1), 𝑪𝟔 𝑯𝟔 -Aceton (9:1), 𝑪𝟔 𝑯𝟔 -MeOH (9:1), nHexanAceton (7:3),… + Phát hiện: VS, 𝑯𝟐 S𝑶𝟒 /cồn, iod… Các bước chuẩn bị: Chuẩn bị mỏng: Dùng tráng sẵn silica gel,dùng bút chì 2B (đầu tròn) kẻ đường thẳng cách mép đến 1,5cm Đánh dấu điểm cần chấm Chuẩn bị bình sắc ký dung mơi: Bình sắc ký rữa để thật khơ.Lót miếng giấy lọc quanh lòng bình sau cho có khoảng trống dọc theo bình để quan sát ban sắc ký bên Cho hệ dung mơi CHCl3-MeOH-H2O (65:35:10; lớp dưới) vào bình sắc ký cho lớp dung mơi bình cao khoảng 0,5cm Đậy nắp bình sắc ký,đặt nơi phẳng, để n 15-30 phút cho bão hòa dung mơi 0,5g bột dược liệu (cam thảo,…….) BM 10p Dd mẫu thử cho SKLM MeOH 5ml methanol Lọc pipet Pastuer bịt Dịch lọc Cô đến cứng (cắn) 3.Đưa mẫu lên bảng mỏng triển khai: Hệ dung môi dùng để triển khai mỏng silicagel-G: Dùng mao quản lấy mẫu, chấm lên mỏng thành Saponin nhóm spirostan: vạch gọna)(cỡ 1mm x– methanol 3mm) cách Chloroform – nướcmép (65:35:10) mép bên 1-1,5 cm– methanol ( phải b) Chloroform (8:2) chắn cá c) n-Butanol bão hòa nước vết thâm cao mức dung mơi bình sắc kí Saponin kiềm: a) Chloroform – ethanol – dd amoniac 1%/nước (2:2:1) b) Ethanol – pyridin – nước (3:1:3) Saponin triterpenoid: a) Chloroform-methanol-nước (65:35:10) b) Ethyl acetat-acid acetic-nước (8:2:1) c) n Butanol – ethanol (10:2) 5 Phát hiện: Chờ cho vết chấm bay hết •MeOH Soi đèn UV ban 254mm 365mm , ghi nhận vết mỏng (nếu có) , đưa mỏng vào bình sắc ký đậy nắp bình • Phun ( hoặcmôi nhúng nhanh mỏng vào khay chứa thuốc thử ) thuốc Khi dung chạy cònbản cách mép thử vanillin – sulfuric(VS) khoảng 0,5 lấy mỏng ra, để nhiệt độ phòng sấy nhẹ • Sau phung/ nhúng , để đứng mỏng khay thật khô khô dung môi thuốc thử sấy nhẹ mỏng, sau tiếp tục hơ nóng mỏng 1050C (trên khay kim loại nóng tủ hốt) vài hút để màu • Quan sát ghi nhận kết 6 Nhận định kết quả: Trong SKLM, Rf chất A định nghĩa tỷ số đoạn đường di chuyển chất A (𝑙𝑎 ) đoạn đường di chuyển dung môi (𝑙0 ) tính từ mức xuất phát mẫu thử: Trị số Rf luôn < 1,00 𝒍𝒂 R𝒇𝒂 = lấy hai số lẻ (vd: 0,08; 0,06; 𝒍𝟎 0,72…) Trong điều kiện sắc ký định, giá trị Rf chất đặc trưng chất hệ dung mơi sử dụng Tuy nhiên, giá trị Rf phụ thuộc vào nhiều yếu tố ( chất, bề dày độ hoạt hóa pha tĩnh, pha động, mức độ bão hòa dung môi, độ ẩm nhiệt độ môi trường….) .. .Sắc kí lớp mỏng dược liệu chứa Saponin I Giới thiệu chung SKLM: Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography (TLC)) gọi Kỹ thuật sắc ký sử dụng từ nhiều kỷ sắc ký phẳng, kĩ thuật sắc kí... bảnSKLM), sắc kí mao dẫn, tách dung th sắc nghiệm dựa thuật SKLM, sắc ký trao đổidịch ion, ký lọc tínhký phân cực thànhhiệu phầnnăng trongcao, dung dịch gel, sắc lực, sắc ký lỏng điện di Sắc kí lớp mỏng. .. cholesterol chất 3-bhydroxysteroid Một số dược liệu chứa saponin: Bồ kết Ngưu tất Tam thất Táo nhân Cát cánh Cam thảo Nhân sâm PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ DƯỢC LIỆU CHỨA SAPONIN o Chất hấp phụ: Silica gel pha