KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU CHỨA FLAVONOID

BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH BUỔI ***** Bài : DƯỢC LIỆU CHỨA FLAVONOID I Chiết xuất - Dược liệu : + Hoa hòe Flos Styphnolobii japonici + Vỏ Bưởi Pericarpium Citri grandi + Diếp cá Herba Houttuyniae + Rễ tranh Rhizhoma Imperatae + Đậu đen Semen Vignae umguiculatae 5g bột dược liệu H: Hoa hòe B: Vỏ bưởi 96% +BM 5’ với 200ml cồn 25% T: Rễ tranh C: Diếp cá Đ: Đậu đen +Lọc nóng qua bơng Dịch chiết Định tính giấy lọc + dd NaOH 1% + dd AlCl3 1% + dd FeCl3 1% II - - - Định tính ống nghiệm + Phản ứng phenol nhân thơm + Phản ứng vòng γ- pyron + Phản ứng nhóm AC dd NaOH 1% dd AlCl3 1% dd FeCl3 1% Định tính Định tính giấy lọc Bước : dùng bút chì kẻ tờ giấy lọc thành bảng gồm hàng x cột.(mỗi hàng gồm ô ghi ô thử, cột gồm ô ghi ô thử tương ứng với loại dược liệu Cột số dùng để ghi tên mẫu, cột số dùng làm mẫu chứng ( có dịch chiết, khơng có thuốc thử) Bước : Trong hàng, dùng pipet Pauter nhỏ thật gọn vào ô giọt dịch chiết loại dược liệu, để khô tự nhiên ( Lập lại lần vậy) Vẽ vòng đánh dấu vết dịch chiết bút chì Bước : Nhỏ riêng biệt lên cột lại loại thuốc thử dung dịch NaOH 1%, dung dịch AlCl3 1%, dung dịch FeCl3 (Chú ý nhỏ dung dịch thuốc thử thành vòng bé, nằm gọn vết dịch chiết) Ánh sáng thường N1/TN1 Chứng NaOH 1% AlCl3 1% FeCl3 1% H Vàng nhạt vàng Vàng đậm Xanh đen B Hồng nhạt Vàng nhạt T Vàng nhạt Cam nhạt Không màu Cam nhạt C Vàng nhạt Vàng Vàng Xanh rêu Đ Tím nhạt Xanh nhạt Khơng màu Xanh nâu Khơng màu Đỏ nhạt  Nhận xét • Trong mơi trường kiềm : + Hoa hòe, Diếp Cá , Bưởi : vàng nhạt sang vàng đậm : có nhóm isoflavonoid + Đậu đen : tím nhạt sang xanh nhạt : có nhóm anthocyanin + Vỏ bưởi : màu vàng cam sang màu hồng nhạt : có nhóm chacon, auron ➢ Nhóm flavonoid co tăng màu • Trong mơi trường AlCl3 + Vỏ bưởi , Đậu đen :mất màu :có chalcon +Hoa hòe, Diếp cá: màu vàng có nhóm isoflavon, isoflavanon • Trong mơi trường FeCl3 + Hoa hòe : có nhiều nhóm OH , có dẫn chất 3’,4’,5’tri -OH + Diếp Cá , Bưởi, Đậu đen: có nhóm OH nên màu nhạt + Flavon chất kết tinh không màu đến vàng nhạt + Flavonol màu vàng nhạt đến vàng + Các dẫn chất flavon có màu vàng nhạt đến không màu + Chalcon auron vàng đậm đến đỏ cam + Các chất thuộc nhóm isoflavon, flavanon, isoflavanon, flavanonol, leucoanthocyanidin, flavan 3-ol khơng có nối đơi liên hiệp vòng B với nhóm carboxyl nên không màu Đèn UV 365nm N1/TN1 Chứng NaOH 1% AlCl3 1% H Vàng nhạt B Xanh nhạt Vàng phát quang Xanh dương phát quang Vàng nhạt phát quang Vàng nhạt phát quang Xanh dương phát quang Vàng đậm phát quang Vàng nhạt phát quang Xanh nhạt phát quang Vàng nhạt phát quang T C Đ Tím nhạt phát quang Đỏ nhạt phát quang Tím nhạt Tím nhạt FeCl3 1% Xanh rêu Xanh rêu nhạt Đỏ nhạt Đỏ nhạt Cam  Giải thích : • Trong mơi trường kiềm : - Đậu đen có dẫn chất nhóm Flavan 3,4-diol khơng màu ánh sáng thường , có tính phát quang UV 365 - Hoa Hòe : Tác dụng kiềm flavon flavonol cho màu vàng sáng Vỏ Bưởi : anthocyanidin màu xanh dương, chalcon auron màu đỏ da cam - flavan 3-ol, flavanon, isoflavon màu không đổi 2 Định tính ống nghiệm a Phản ứng nhóm OH phenol nhân thơm Với dược liệu, lấy ống nghiệm cho vào ống ml dịch chiết để làm phản ứng sau: - Phản ứng tăng màu với dung dịch NaOH 1% - Phản ứng tạo phức với dung dịch AlCl3 1% MeOH - Phản ứng tạo phức với dung dịch FeCl3 1% - Phản ứng tạo phức với dung dịch chì axetat trung tính :  Cách thực hiện: ml dịch chiết + giọt thuốc thử, lắc đều, quan sát màu, tủa so sánh với mẫu chứng (riêng mẫu B, phản ứng với NaOH 1%: quan sát màu ống nghiệm trước sau nhúng vào nồi cách thủy 2-3 phút) - Phản ứng với thuốc thử diazonium + Thực hiện: Cho vào ống nghiệm ml dịch chiết, kiềm hóa vài giọt dung dịch NaOH 10%, thêm 1-2 giọt thuốc thử diazonium lạnh Lắc quan sát màu dung dịch Ghi chú: Có thể thay NaOH 10% Na2CO3 10% Chỉ dùng 1-2 giọt thuốc thử diazonium  Các dẫn chất flavonoid có nhóm OH vị trí phản ứng với muối diazonium để tạo thành chất màu azoic vàng cam đến đỏ Bố trí ống nghiệm : ❖ Kết thí nghiệm : ▪ Theo cột : - Phản ứng tăng màu với dung dịch NaOH 1% : : flavan 3-ol cho màu dễ bị oxy hóa , flavanon dễ bị isomer hóa thành chalcon màu vàng đậm đến đỏ , o Phản ứng tạo phức với dung dịch AlCl3 1% MeOH: o Phản ứng tạo phức với dung dịch FeCl3 1% : định tính nhóm OH phân tử Càng nhiều nhóm OH ( đặc biệt nhóm o-di-OH) màu đậm ( Hoa Hòe > Vỏ Bưởi > Diếp Cá > Rễ Tranh ) o Phản ứng tạo phức với dung dịch chì axetat trung tính: tủa từ vàng nhạt đến sậm , flavonoid có ortho-di-OH phenol  Trong mơi trường màu sắc flavonoid tăng dần ▪ Theo hàng : - Hoa Hòe : Phản ứng tăng màu với dung dịch NaOH 1% ,tạo phức với dung dịch AlCl3 1% MeOH, tạo phức với dung dịch FeCl3 1%,tạo phức với dung dịch chì axetat trung tính, Phản ứng với thuốc thử diazonium - Vỏ Bưởi : Phản ứng tăng màu với dung dịch NaOH 1% ,tạo phức với dung dịch AlCl3 1% MeOH, tạo phức với dung dịch FeCl3 1%,tạo phức với dung dịch chì axetat trung tính, Phản ứng với thuốc thử diazonium - Diếp Cá: Phản ứng tăng màu với dung dịch NaOH 1% ,tạo phức với dung dịch AlCl3 1% MeOH, tạo phức với dung dịch FeCl3 1%,tạo phức với dung dịch chì axetat trung tính, Phản ứng với thuốc thử diazonium - Rễ Tranh: Phản ứng tăng màu với dung dịch NaOH 1% ,tạo phức với dung dịch AlCl3 1% MeOH, tạo phức với dung dịch FeCl3 1%,tạo phức với dung dịch chì axetat trung tính, Phản ứng với thuốc thử diazonium - Đậu Đen: Phản ứng tăng màu với dung dịch NaOH 1% ,tạo phức với dung dịch AlCl3 1% MeOH, tạo phức với dung dịch FeCl3 1%,tạo phức với dung dịch chì axetat trung tính, Phản ứng với thuốc thử diazonium b Phản ứng vòng γ-pyron (Phản ứng Cyanidin) Cho ml dịch chiết mẫu H, B T vào ống nghiệm lớn riêng biệt có sẳn bột Mg kim loại Thêm từ từ theo thành ống nghiệm 0,5-1 ml HCl đậm đặc ( làm giá ống nghiệm đặt tủ hốt Chú ý tránh dịch axit trào khỏi ống nghiệm)  - Màu đỏ cam (Ống B),đỏ tươi( Ống H) với dẫn chất flavon, flavonol, flavanonol, flavanon, chalcon Các anthocyanidi kết hợp với ion kim loại Mg ++ dạng phức cua (chelat) gọi chất metalloanthocyanin - Ống T: màu trắng có Các dẫn chất methoxy flavon âm tính c Phản ứng nhóm anthocyanidin - Cho vào ống nghiệm riêng biệt ống ml dịch chiết đậu đen ( Đ ) + Ống 1: thêm giọt HCl 1%, + Ống : thêm giọt NaOH 1% + Ống : giữ nguyên ➔ Trong môi trường HCl (Ống 1) : phần đường phân tử (thường nối vào OH C-3) bị cắt cho phần aglycon gọi anthocyanidi Anthocyanidi dẫn chất 2-phenyl benzopyrilium ( = flavilium) cation, tạo muối oxonium có màu đỏ - Trong môi trường NaCl (Ống 2) : anion quinoid màu xanh tạo thành vị trí 4’( 2’) có nhóm hydroxyl  ... loại dược liệu Cột số dùng để ghi tên mẫu, cột số dùng làm mẫu chứng ( có dịch chiết, khơng có thuốc thử) Bước : Trong hàng, dùng pipet Pauter nhỏ thật gọn vào ô giọt dịch chiết loại dược liệu, ... flavan 3-ol, flavanon, isoflavon màu khơng đổi 2 Định tính ống nghiệm a Phản ứng nhóm OH phenol nhân thơm Với dược liệu, lấy ống nghiệm cho vào ống ml dịch chiết để làm phản ứng sau: - Phản ứng... B T vào ống nghiệm lớn riêng biệt có sẳn bột Mg kim loại Thêm từ từ theo thành ống nghiệm 0,5-1 ml HCl đậm đặc ( làm giá ống nghiệm đặt tủ hốt Chú ý tránh dịch axit trào khỏi ống nghiệm)  -