BÁO CÁO PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỚP MỎNG

Trang 1

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM ĐÀ NẴNG

BÁO CÁO

PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỚP MỎNG

NHÓM 6

Trang 2

Định nghĩa Sắc ký:

Sắc ký là một phương pháp tách hỗn hợp dựa vào sự phân bố khác nhau của chúng giữa hai pha

Trang 5

SẮC KÝ LỚP MỎNG (Thin layer chromatography)

• Phương pháp sắc ký lớp mỏng đã được 2

nhà bác học Nga Izmailov và Shraiber mô tả

từ năm 1938 nhưng mãi đến 1958 - 1959 sau

khi các công trình của E.Stahl được công bố

thì nó mới được ứng dụng rộng rãi và ngày

càng được cải tiến

Trang 7

Sắc kí bản mỏng là một kỹ thuật sắc ký, trong đó pha tĩnh là chất hấp phụ được trải thành lớp mỏng, mịn và đồng nhất, được cố định trên phiến kính hoặc phiến kim loại, nhựa; pha động là một hệ gồm một dung môi đơn thuần hay hỗn hợp nhiều dung môi phối hợp với nhau theo

tỷ lệ quy định và được hút lên bản sắc

ký bởi mao dẫn , tách dung dịch thí

nghiệm dựa trên tính phân cực của các thành phần trong dung dịch.

Định nghĩa

Trang 8

Nguyên tắc hoạt động

-Sắc ký được tiến hành khi cho pha động di chuyển qua pha tĩnh trên đó đã đặt các chất cần tách

- Giọt dung dịch mẫu được nhỏ trên đường xuất , còn rìa bản

được nhúng vào dung môi thích hợp

- Dưới tác dụng của lực mao quản , dung môi sẽ chuyển động dọc theo lớp hấp phụ và chuyển vận các cấu tử chủa hỗn hợp với các vận tốc khác nhau đưa đến việc tách các cấu tử

- Sự khếch tán các cấu tử trong lớp hấp phụ vừa theo

chiều dọc vừa theo chiều ngang vì vậy có thể xem

quá trình sắc ký thực hiện theo 2 chiều

Trang 9

Nguyên tắc hoạt động

Trang 10

Pha động : thường kết hợp nhiều dung môi để tăng khả năng tách các cấu thử ra khỏi nhau

1

Mẫu chất: thường là hỗn hợp nhiều chất

có độ phân cực khác nhau.

Trang 11

Hệ sắc ký lớp mỏng

Trang 12

Công tác chuẩn bị và cách triển khai

Công tác chuẩn bị

Trong SKLM, bột rải lớp mỏng thường là loại bột rất mịn chất hấp phụ các

chất hấp phụ thường dùng là:

- Silicagel loại hạt qua rây cỡ lỗ 0,07-0,10 mm.

- Nhôm oxyd (alumina)

- Loại bột có thêm bột bó (thạch cao ngậm 1,5 H2O) là chất kết dính, có ký

hiệu chữ G, loại có chỉ thị huỳnh quang có chữ F (ví dụ silicagel GF254).

SKLM thường được tiến hành trên một bản thuỷ tinh hay chất dẻo có rải một lớp mỏng các hạt bột mịn dính chắc trên đó Bản mỏng có thể tự rải lấy,

nhưng ngày nay thường dùng loại bản mỏng tráng sẵn.

- Bản mỏng thường phải sấy 120oC trong 30 phút đê hoạt hoá trước khi dùng.

Chất hấp phụ, bản mỏng sắc ký.

Trang 13

Trang 14

Trang 15

Công tác chuẩn bị và cách tiến hành

Cách tiến hành

Chấm dung dịch lên bản mỏng

- Kẻ một vạch thẳng nằm ngang bằng bút chì, cách mép dưới của bản mỏng 1 cm làm vạch xuất phát Dùng mao quản hay micropipet chấm các vết dung dịch thử và dung dịch chuẩn lên đó Các vết phải cách nhau và cách mép bản mỏng ít nhất 1 cm

Trang 16

Khai triển sắc ký

Là quá trình cho pha động chạy, kéo mẫu phân tích di chuyển trên pha tĩnh Đặt bản mỏng vào bình sắc ký đã bão hoà hơi dung môi của pha động, mép phía chấm mẫu được nhúng vào dung môi động nhưng không được cho điểm đã chấm mẫu chạm trực tiếp vào dung môi động Sau khi dung môi chạy được nửa hay hai phần ba bản mỏng ta lấy ra để khô hay sấy khô

Trang 17

Phát hiện các vết trên bản mỏng:

Có nhiều phương pháp để phát hiện các vết Hai cách phổ biến có thể dùng để phát hiện hầu hết các chất hữu cơ là phun dung dịch iod hay acid sulfuric: sẽ xuất hiện các vết màu tối Có thể phun các thuốc thử đặc hiệu (như ninhydrin cho acid amin) Cũng có thể thêm một chất huỳnh quang vào pha tĩnh: cả bản mỏng sẽ sáng (huỳnh quang) khi soi đèn tử ngoại (ví dụ đèn Hg cho 254 nm) Nơi có chất sẽ tối hoặc có huỳnh quang màu khác với nền sáng của bản mỏng

Trang 18

Phát hiện các vết trên bản mỏng:

Sắc phổ quan sát trong ánh sáng thường và đèn UV

Trang 19

Đọc kết quả

Vị trí của vết là cơ sở để định tính một chất Trong SKLM, vị trí vết được biểu thụ bằng chỉ

số Rf (retention factor-hệ số lưu giữ) Có thể nói, nếu trên sắc đồ có một vết chất chưa biết nằm ngang (có cùng chỉ số Rf) với vết của chất chuẩn thì chất chưa biết đó chính là chất chuẩn

Rf của chất X được tính như sau:

Trong đó: - l là khoảng cách từ tuyến xuất phát tới tâm vệt sắc ký

- lo là khoảng cách từ tuyến xuất phát tới tuyến dung môi

- v là tốc độ di chuyển của chất tan

- vo là tốc độ của dung môi

Trang 20

- Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến Rf nhưng quan trọng là:

+ Chất lượng và hoạt tính chất hấp thụ + Bề dày của lớp mỏng

+ Chất lượng và độ tinh khiết của pha động

Trang 21

Đọc kết quả

Ví dụ:

Trang 22

Ví dụ : Tách chất màu thực vật trong lá xanh làm với các hệ dung môi khác nhau bằng phương pháp sắc kí lớp mỏng

Bình khai triển là bình thủy tinh hình trụ cao 25 cm

đường kính miệng 10 cm, có nắp đậy kín Bão hòa

hơi dung môi trong bình bằng cách lót giấy lọc

xung quanh thành trong của bình, rồi rót một lượng

vừa đủ dung môi vào bình, lắc rồi

để giấy lọc thấm đều dung môi Lượng dung môi sử

dụng sao cho sau khi thấm đều giấy lọc còn lại một

lớp dày khoảng 5 mm đến 10 mm ở đáy bình Ðậy kín

Trang 23

Ví dụ : Tách chất màu thực vật trong lá xanh làm với các hệ dung môi khác nhau bằng phương pháp sắc kí lớp mỏng

Sử dụng ống thuỷ tinh mao quản hoặc micropipet

để đưa mẫu lên bản mỏng Thể tích dung dịch từ

0,001ml đến 0,005ml đối với trường hợp đưa mẫu lên

bản mỏng dưới dạng điểm và từ 0,l - 0,2ml khi đưa

mẫu lên bản mỏng dưới

dạng vạch Ðường xuất phát phải cách mép dưới của

bản mỏng 1,5cm - 2cm và cách bề mặt dung môi từ

0,8 - 1 cm Các vết chấm phải nhỏ, có đường kính 2

-6mm và cách nhau 15mm Các vết ở bìa phải cách bờ

bên của bản mỏng 1cm

Ðặt bản mỏng gần như thẳng đứng với bình triển khai,

các vết chấm phải ở trên bề mặt của lớp dung môi

khai triển Ðậy kín bình và để yên ở nhiệt độ không

đổi Khi dung môi đã triển khai trên bản mỏng được

một đoạn, lấy bản mỏng ra khỏi bình, đánh dấu mức

dung môi, làm bay hơi dung môi còn đọng lại trên bản

mỏng rồi chụp ảnh, đo khoảng di chuyển của dung

môi và các chất cần tách.Tính Rf

Trang 24

"XIN CHÂN THÀNH CẢM

ƠN QUÝ THẦY CÔ ĐÃ

LẮNG NGHE !"

Định dạng
Số trang	24
Dung lượng	3,7 MB