nghiên cứu xây dựng qui trình định lượng đồng thời chất ngọt tổng hợp aspatam và acesulpam trong một số sản phẩm thực phẩm băng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao

ĐẶT VẤN ĐỀ Trong cuộc sống hằng ngày của chúng ta, thường xuyên dùng đến đồ ngọt như các loại: hoa quả, khoai củ, chè, nước ngọt, bánh kẹo Ngoài thịt ngọt có bản chất là protein và các axit amin thì đa phần các vị ngọt khác đều là các loại đường tạo ra. Đường sinh học để dùng cho chuyển hóa tế bào là glucose nhưng trong thực tế cuộc sống chúng ta thường đưa vào cơ thể các dạng đường đơn, đường đa như fructose, mantose, saccharose, tinh bột lấy từ các loại hoa, củ, quả, thân cây mía, củ cải, mật ong vốn có sẵn trong tự nhiên. Còn các loại đường hóa học chỉ tạo vị ngọt chứ không chuyển hóa được, để dùng trong việc điều trị cho những người bệnh thừa cân hay đái tháo đường. Các đường tổng hợp như: saccharin, manitol, acesulfam K, aspartam, isomalt, sorbitol, sucraloza được phép sử dụng trong chế biến thực phẩm với giới hạn tối đa và có quy định của Bộ Y tế.[ ] Đường hóa học (hay là chất ngọt tổng hợp) là chất không có trong tự nhiên, thường có vị ngọt rất cao so với đường kính saccharose và tuyệt nhiên không hề có một giá trị dinh dưỡng nào khác. Do đó, nhiều cơ sở sản xuất vì mục đích lợi nhuận nên thường sử dụng các chất ngọt này để thay thế cho đường mía (saccharose), mặc dù biết rõ những điều có hại cho người tiêu dùng khi sử dụng quá mức qui định. Acesulfame K là một acid hữu cơ sinh ra từ acid Acetic.[ ] Chất này không bị cơ thể phân hủy và được ống tiêu hóa bài xuất ra nguyên trạng. và được sử dụng nhiều trong thực phẩm chế biến Aspartam là một este methyl cấu tạo từ 2 acid amin là aspartic acid và phenylalanine, có độ ngọt cao khoảng 180 đến 200 lần ngọt hơn đường mía, và có năng lượng khoảng 4 Kcal/g. Tuy nhiên, một số người nhạy cảm cho rằng đường này để lại trên lưỡi một hậu vị không ngon. Vì vậy, để thể khắc phục thông thường người ta trộn aspartam với các loại đường khác như acesulfame K. Hiện nay, trên thị trường xuất hiện khá nhiều sản phẩm như: nước giải khát, bánh kẹo, nước ngọt, chè, sâm lạnh, sữa đậu nành…và được sử dụng hai hay nhiều các hoạt chất này, do đó gây không ít khó khăn cho việc kiểm tra chất lượng các sản phẩm thực hiện đang lưu thông trên thi trường Thừa Thiên Huế. Để phân tích hàm lượng các thành phần này , theo TCVN chỉ định lượng được hai thành phần này riêng lẻ trong các nguyên liệu bằng phương pháp chuẩn độ trong môi trường khan, hoặc một số phòng kiểm nghiệm thực phẩm trong nước thường dùng các phương pháp chiết với axit axetic băng, sau đó xác định bằng phương pháp chuẩn độ điện thế. Phương pháp này không ổn định, mất thời gian, tốn kém hóa chất, cho độ nhạy kém, hơn nữa nếu trong sản phẩm chứa hai hay nhiều thành phần, thì phường pháp này tỏ ra không hữu hiệu. Chính vì những lý do này mà hiện nay phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao đang được áp dụng thay dần phương pháp nói trên. 1 Từ những yêu cầu thực tế của công tác quản lý vệ sinh an toàn thực phẩm trên thị trường Thừa Thiên Huế, chúng tôi thường xuyên phải phân tích các sản phẩm loại này, đồng thời để có qui trình phân tích đạt yêu cầu về độ chính xác và độ đúng, do đó cần phải tiến hành xây dựng, tối ưu hóa và đánh giá qui trình phân tích đồng thời hai hoạt chất trên trong cùng sản phẩm thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao pha đảo. Để thực hiện vấn đề này chúng tôi tiến hành triển khai đề tài: “Nghiên cứu xây dựng qui trình định lượng đồng thời chất ngọt tổng hợp aspatam và acesulpam trong một số sản phẩm thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao” nhằm giải quyết các mục tiêu sau: - Xây dựng, tối ưu hóa và đánh giá qui trình phân tích đồng thời hai hoạt chất trên phương pháp sắc lỏng hiệu nâng cao. - Nghiên cứu phương pháp xử lý mẫu - Áp dụng quy trình xây dựng được để định lượng một số sản phẩm được gửi tới trung tâm kiểm nghiệm Thuốc - mỹ phẩm - Thực phẩm - Thừa Thiên 2 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Giới thiệu về aspartame và acesulfame-K 1.1.1 Aspartame [1];[9];[7]; [13];[10] - Tên khác và ký hiệu của aspartame: - Tên: Aspartyl phenylamin metyl ester Ký hiệu: APM Tên hóa học : 3-Amino-N-(α carbomethoxy-phenyletyl)-acid succinamic Hay: N-L-α-aspartyl-L-phenyllamin-1-metyl ester - Công thức : C14H18N2O5 - Khối lượng phân tử: 294,31 - Ngoại quan: Tinh thể màu trắng, không mùi có vị ngọt mạnh - Chức năng: chất tạo ngọt - Góc quay cực riêng: [α]20D +14,5o- 16,5o - Tính tan: ít tan trong nước và ethanol - Độ pH: 4,5-6,0 * Tính chất ASPARTAME (E951)[10] - Aspartame là một chất tạo ngọt vốn được sử dụng phổ biến trong các loại nước uống và thực phẩm dành cho người bị bệnh tiểu đường và người muốn ăn kiêng với mục đích giảm lượng đường và năng lượng tiêu thụ. Tuy nhiên, có những lo ngại về tác dụng phụ của nó như có khả năng gây ung thư, gây bệnh động kinh, gây u não…. - Aspartame (tên khác là L-aspartyl-L-phenylalanine methyl ester) là một este methyl cấu tạo từ 2 acid amin là aspartic acid và phenylalanine. Trong tự nhiên, aspartic acid và phenylalanine được tìm thấy trong thực phẩm có chứa protein, như thịt, ngũ cốc và các sản phẩm từ sữa. Este methyl cũng được tìm thấy trong hoa quả và rau. - Aspartame có độ ngọt cao, khoảng 180 đến 200 lần ngọt hơn đường mía. Vị ngọt của aspartame khá giống đường. Vị ngọt này được cảm nhận chậm hơn và kéo dài lâu hơn so với đường. - Aspartame có năng lượng khoảng 4 Kcal/g (17 KJ/g). Tuy nhiên, chỉ cần một lượng rất nhỏ aspartame đã tạo ra độ ngọt cần thiết. Do đó năng lượng chúng ta đưa vào cơ thể khi dùng thực phẩm tạo ngọt bằng aspartame sẽ không đáng kể. - Đa số người tiêu dùng có nhận xét là aspartame không để lại dư vị khó chịu, tuy nhiên một số người nhạy cảm cho rằng đường này để lại trên lưỡi một hậu vị không ngon. Điều này có thể khắc phục bằng cách trộn aspartame với các loại đường khác (như acesulfame K hay saccharine). Aspartame rất được ưa chuộng trong việc sử dụng để thay thế đường trong các sản phẩm thực phẩm dành cho người ăn kiêng. 3 Khi vào cơ thể, bản thân aspartame không hấp thụ vào máu mà tan ra trong ruột thành ba chất: aspartic acid (40%), phenylalanin (50%) và methanol (10%). Đây là cơ sở của nhiều ý kiến về tác động bất lợi cho sức khỏe con người từ aspartame. -Bản thân methanol là một chất có độc tính thấp. Sau khi được đưa vào cơ thể, methanol được ôxy hóa tạo nên formaldehyde, chất này lại tiếp tục được ôxy hóa tạo nên acid formic (hoặc formate, tùy theo độ pH). Acid formic có độc tính rất cao. Chính acid formic là nguyên nhân gây nên tình trạng toan chuyển hóa (nhiễm acid) và mù lòa, những tổn thương đặc trưng của nhiễm độc methanol. - Lo ngại về lượng axit aspartic và phenylalanine khi ăn sản phẩm có chứa aspartame: - Phenylalanine cũng là một chất độc thần kinh. Quá nhiều phenylalanine gây động kinh, thai gây chậm phát triển trí óc, mất ngủ… Chính phenylalanine tạo ra bệnh phenylketonuria (PKU), là loại bệnh mà trong máu có quá nhiều axít amin phenylalanine, làm chậm phát triển trí tuệ nghiêm trọng, và làm tổn hại đến hệ thần kinh. Mặt khác, con người hấp thu các axít amin cần thiết từ thiên nhiên dưới dạng kết hợp với nhiều chất khác chứ không phải chỉ riêng một chất cô lập. - Nếu dư thừa, axit aspartic có thể gây ra rối loạn nội tiết (hormone) và các vấn đề về thị lực. Aspartic acid là một chất kích thích thần kinh, ảnh hưởng đến hệ thống thần kinh trung ương, gây nên các chứng: nhức đầu, buồn nôn, đau bụng, mệt mỏi, rối loạn giấc ngủ, vấn đề về thị lực, trầm cảm, và bệnh suyễn, động kinh… - Dù sao, quan điểm của nhiều tổ chức có uy tín hiện nay ủng hộ việc sử dụng aspartame trong hạn mức cho phép, bao gồm Tổ chức Nông lương Quốc tế (FAO), Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), Ủy ban Quản lý Dược-Thực phẩm Mỹ (FDA)…. Liều dùng cho phép của aspartame mỗi ngày (ADI) là nhỏ hơn hoặc bằng 40 mg/kg thể trọng. Đây là một trong những hàm lượng cho phép sử dụng cao nhất trong số các phụ gia thực phẩm. Tuy nhiên, tháng 4 năm 2009, FESA cũng tổ chức một hội nghị gồm các chuyên gia có những kiến thức chuyên sâu về aspartame. Các chuyên gia này xem xét lại tất cả những nghiên cứu và dữ liệu về aspartame và những ảnh hưởng đến sức khỏe (nếu có) của nó. Dự kiến, đầu năm 2010, hội đồng này sẽ thông báo kết quả. Tại Việt Nam, aspartame được phép sử dụng cho các sản phẩm như đồ uống, kẹo, bia, rượu với mục đích làm tạo ngọt, điều vị với ADI cũng từ 0 – 40 mg/kg, giống như kiến nghị của các tổ chức uy tín trên thế giới. Trên những sản phẩm có sử dụng aspartame sẽ phải ghi tên “aspartame” hoặc “aspartame” hay ghi mã số “951”. - Ở Việt Nam, theo Quyết định của Bộ trưởng Bộ Y Tế, Số 3742/2001/QĐ-BYT về các chất phụ gia được phép sử dụng trong thực phẩm. Được ghi trong bảng sau: Bảng: 1.1. Giới hạn tối đa chất phụ gia aspartame trong thực phẩm [5] SttNhóm thực phẩmML 4 Stt Nhóm thực phẩm ML 1 Đồ uống có sữa, có hương liệu hoặc lên men (VD: sữa sô cô la, sữa cacao, bia trứng, sữa chua uống, sữa đặc) 600 2 Quả thanh trùng pasteur đóng hộp hoặc đóng chai 1000 3 Mứt, mứt cô đặc, mứt hoa quả 1000 4 Hoa quả ngâm đường 2000 5 Rau thanh trùng pasteur đóng hộp, đóng chai hoặc đóng túi 1000 6 Bột nhão từ cacao 3000 7 Kẹo cứng, kẹo mềm, kẹo nuga 10000 8 Kẹo cao su 10000 9 Sản phẩm dùng để trang trí thực phẩm 5000 10 Dầu trộn, gia vị (bao gồm các chất tương tự muối) 2000 11 Nước rau, quả ép 2000 12 Necta rau quả 2000 13 Bia và nước giải khát chế biến từ mạch nha 600 14 Rượu vang 600 1.1.2. Acesulfame-K [1]; [7]; [4];[8];[10] - Tên hóa học: Tên: Muối kali 6-metyl-1,2,,3-oxathiazin-4(3H)-một-2,2-dioxid Muối kali 3,4-dihydro-6-metyl-1,2,3-oxathiazin-4-một-2,2-dioxid - Tên khác: - Công thức: C4H4KNO4S - Khối lượng phân tử: 201,24 - Ngoại quan: Tinh thể màu trắng, không mùi, có vị ngọt mạnh - Chức năng: chất tạo ngọt, chất điều vị - Tính tan: tan nhiều trong nước, ít tan trong ethanol. *Tính chất acesulfame-K (E950) - Acesulfame-K được Clauss và Jensen (hãng Hoechst, Đức) tìm ra năm 1967; được FDA kiểm nghiệm và cho đưa vào sử dụng từ năm 1988, với các tên thương mại khác nhau như Sunette, Sweet one, Sweet'n safe Các sản phẩm có chứa acesulfame-K chưa gây ra bất kỳ sự cố nào cần cảnh báo. - Acsesulfame-K được sử dụng trong hơn 4000 sản phẩm trên khắp thế giới Ngoài ra, thường được dùng kết hợp với aspartame hoặc các loại đường hóa học khác vì nó có tác động hỗ trợ, tăng cường và duy trì vị ngọt của thức ăn và nước giải khát. Tính chất: - Có dạng tinh thể màu trắng với cấu trúc hóa học tương tự saccharin. Vị ngọt gấp 150 - 200 lần đường saccharose; ổn định hơn aspartame ở nhiệt độ cao và môi trường acid. 5 - Acesulfam-K không cung cấp năng lượng cho cơ thể vì nó không tham gia quá trình trao đổi chất và được thải ra ngoài theo nước tiểu mà không có bất kì sự biến đổi hóa học nào. - Thêm ưu điểm là giá thành rẻ; song điều dở là có dư vị hơi đắng - Ở Việt Nam, theo Quyết định của Bộ trưởng Bộ Y Tế, Số 3742/2001/QĐ-BYT về các chất phụ gia được phép sử dụng trong thực phẩm. Được ghi trong bảng sau: Bảng: 1.2. Giới hạn tối đa chất phụ gia aceslfame-K trong thực phẩm SttNhóm thực phẩmML Stt Nhóm thực phẩm ML 1 Đồ uống có sữa, có hương liệu hoặc lên men (VD: sữa sô cô la, sữa cacao, bia trứng, sữa chua uống, sữa đặc) 500 2 Sữa lên men và sữa có chất rennet (nguyên chất) không kể đồ uống từ sữa GMP 3 Thức ăn tráng miệng có sữa (VD: kem, sữa lạnh, bánh putđing, sữa chua hoa quả hoặc có hương liệu ) 1000 4 Quả thanh trùng pasteur đóng hộp hoặc đóng chai 500 5 Mứt, mứt cô đặc, mứt hoa quả 1000 6 Hoa quả ngâm đường 500 7 Sản phẩm cacao, sô cô la (VD: sô cô la sữa, sô cô la trắng) 1000 8 Kẹo cứng, kẹo mềm, kẹo nuga 350 9 Kẹo cao su 5000 10 Sản phẩm dùng để trang trí thực phẩm 500 11 Bánh nướng và các loại sản phẩm bánh nướng thông thường GMP 12 Bánh có sữa, trứng 350 13 Nước chấm dạng sữa (VD: nước sốt mayonne, nước sốt salát 1000 14 Nước chấm không có sữa (VD: tương cà chua, tương ớt, nước chấm có kem) 350 15 Nước quả thanh trùng pasteur đóng hộp hoặc đóng chai 600 16 Nước rau ép thanh trùng pasteur đóng hộp hoặc đóng chai 600 17 Nước giải khát có hương liệu, bao gồm nước uống dành cho thể thao, nước uống có hàm lượng khoáng cao và các loại nước uống khát 600 18 Cà phê, chè, nước uống có dược thảo và các loại đồ uống từ ngũ cốc, không kể nước uống từ cacao. GMP 19 Rượu vang 350 6 1.1.3 Tính chất của hỗn hợp aspartame và acesulfame-K - Độ ngọt cao gấp 200 lần so với đường tự nhiên, do vậy, chỉ cần một lượng rất nhỏ aspartame cũng cho độ ngọt tương đương như sử dụng đường bình thường. Vị ngọt của aspartame chậm hơn lúc đầu, nhưng lại kéo dài lâu hơn - nên nên aspartame thường được dùng kết hợp với acesulfame-K cho vị ngọt giống (và ngọt hơn) đường tự nhiên. Không để lại dư vị hoá chất hoặc vị kim loại khó chịu như một số chất làm ngọt khác, dễ bảo quản và sử dụng, giá thành rẻ hơn nhiều so với việc sử dụng đường tự nhiên nên hiện nay aspartame được sử dụng rộng rãi tại hơn 125 quốc gia trên thế giới và hiện diện trong khoảng 6.000 sản phẩm khác nhau - trong bánh kẹo, nước hoa quả, trong các sản phẩm "không đường" hoặc sản phẩm "light", "diet" , kẹo cao su, sữa chua, đường cho người ăn kiêng và ngay cả trong một số thuốc, vitamin, thực phẩm bổ sung - Aspartame được thương mại hoá dưới một số tên như Canderel, Equal, NutraSweet, Sanecta, Tri-Sweet, Aminosweet, Spoonful, Sino sweet - Acesulfame-K - còn được gọi là Sunette, Sweet One, Sweet 'n an toàn Acesulfame-K đã được phát hiện vào năm 1967 và là 150-200 lần ngọt hơn đường. Acesulfame-K là một rất ổn định, kết tinh chất ngọt với một cấu trúc hóa học tương tự như saccharin. - Acesulfame-K thường được sử dụng kết hợp với aspartame hoặc chất ngọt khác vì nó có một tác dụng hiệp đồng để tăng cường và duy trì vị ngọt của thực phẩm và đồ uống. Đó là nhiệt ổn định để nó có thể được sử dụng trong các sản phẩm nướng. Nó không cung cấp calo vì cơ thể không chuyển hóa nó và nó được bài tiết trong nước tiểu mà không bị thay đổi. - Acesulfame-K được tìm thấy trong Chương 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Nội dung nghiên cứu (1). Lựa chọn các điều kiện sắc ký để tách đồng thời hai chất acesulfame-K và aspartame trong các mẫu nước giải khát bao gồm: - Qui trình chiết mẫu nước giải khát: loại màu, thể tích dung môi chiết…. 7 - Các điều kiện tiến hành sắc ký: dung môi pha động, tỷ lệ pha động, tốc độ dòng, nồng độ pH…. (1). Đánh giá độ tin cậy của phương pháp phân tích qua các đại lượng như độ lặp lại, độ đúng, giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng. (3). Áp dụng thực tế: áp dụng phương pháp lựa chọn để phân tích một số mẫu có chứa acesulfame-K và aspartame trong các nước giải khát hiện đang lưu hành trên thị trường Thừa Thiên Huế 2.2. Thiết bị, dụng cụ và hóa chất 2.2.1. Thiết và dụng cụ - Cân phân tích AUW220D (±0,1 mg) của hãng Shimadzu Nhật Bản. - Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao Series 20A của hãng Shimadzu Nhật Bản. - Các thiết bị khác như: Tủ sấy, máy lắc, máy cất nước hai lần, thiết bị lọc nước siêu sạch. - Các dụng cụ thủy tinh như: Bình định mức các loại, pipet vạch và pipet bầu các loại, cốc - Micropipet các loại: 0,5-10μL; 10-100μL; 100-1000μL - Màng lọc 0,45μm - Cột sắc ký pha đảo C18, 150x5mm, 4,5μm - Bộ lọc hút chân không 2.2.2. Hóa chất - Nước cất hai lần lọc qua màng lọc 0,45μm. - Chất chuẩn acesulfame- K - Chất chuẩn aspartame và các hóa chất khác loại PA - KH 2 PO 4 Merck - Acetonitril (ACN) Merck - Etylacetat của PA - NaCl của PA - NaHCO 3 của PA - H 3 PO 4 2.2.3. Các dung dịch gốc: - Dung dịch gốc 5000ppm: cân mỗi loại 0,5g, lắc cho tan hoàn toàn và định mức đến 100mL. - Từ dung dịch gốc, pha các dung dịch chuẩn làm việc: 1ppm; 5ppm; 10ppm; 20ppm; 50ppm; 100ppm; 200ppm. 2.3. Phương pháp nghiên cứu 2.3.1. Xử lý mẫu: 8 + Các sản phẩm chất lỏng trong (đối với nước chanh, nước cola, các loại đồ uống) Pha loãng mẫu với nước đựng trong bình định mức 100ml. Lọc dung dịch qua bộ lọc cỡ lỗ 0,45 µm trước khi bơm. + Các sản phẩm dạng đục(nước đồ quả, đồ uống từ sữa có hương vị) Pha loãng 20ml mẫu đã đồng hóa với 50ml nước cất, định mức vừa đủ 100ml. Lọc qua giấy lọc gấp nếp, loại bỏ 10ml dịch lọc đầu tiên. Cho phần dịch lọc qua bộ lọc màng cỡ lỗ 0,45µm trước khi bơm. Để tính đến thể tích chất kết tủa,nếu chất hòa tan không chứa chất béocó trong mẫu (trường hợp này là 20ml) vượt quá 3g, thì li tâm hỗn hợp mẫu đã làm trong 10 phút với tốc độ 5000 vòng/phút, trước khi lọc sang bình định mức 100ml. Rữa phần chất lắng hai lần với nước cất và cho li tâm lại, thu lấy phần nỗi phía trên sang bình định mức 100 ml rồi pha loãng dung dịch bằng nước cất đến vạch. Nếu lượng chất không hòa tan nhỏ hơn 3 g thì cũng có thể thực hiện qui trình này. 2.3.2. Phương pháp phân tích * Điều kiện tiến hành thí nghiệm Các thí nghiệm được tiến hành trên hệ thống sắc kí lỏng hiệu năng cao của SHIMAZDU, detectơr diotarray có bước sóng từ 190 đến 800 nm, cột tách pha đảo RP C18: - Pha tỉnh và chiều dài cột: hạt hình cầu 3µm đối với cột dài 100mm, đến 10µm đối với cột dài 300 mm - Đường kính trong: 4,0mm - Tốc độ dòng : từ 0,8 ml/min đến 1ml/min - Thể tích tiêm: 10µl đến 20µl - Phát hiện ở bước sóng: λ = 217nm đối với aspartame; λ = 227nm đối với acesulfame-K; hoặc λ = 220 nm đối với cả hai chất. - Tỷ lệ pha động: + dung dịch đệm phosphat + axetonitril [80: 20] (v/v) + dung dịch đệm phosphat + axetonitril [85: 15] (v/v) + dung dịch đệm phosphat + axetonitril [90: 10] (v/v) + dung dịch đệm phosphat + axetonitril [95: 5] (v/v) * Định tính và định lượng - Định tính: Dựa trên việc so sánh thời gian lưu của các chất có trong mẫu phân tích với thời gian lưu của các chất chuẩn khi tiến hành trong cùng điều kiện sắc ký. 9 - Định lượng: + Xác định theo phương pháp ngoại chuẩn: tính tích phân các diện tích píc/chiều cao và so sánh các kết quả với giá trị tương ứng của các chất chuẩn. + Phương pháp đường chuẩn: bơm một lượng thích hợp các các dung dịch chuẩn có các nồng độ thích hợp. Vẽ diện tích pic/chiều cao của dung dịch chuẩn tương ứng với nồng độ mg/l . Kiểm tra độ tuyến tính của đường chuẩn. * Tính kết quả: + Phương pháp ngoại chuẩn: Hàm lượng các chất tạo ngọt (w), có trong dung dịch thử được tính mg/l, theo công thức sau: 1000 % )/( 22 11 × × ××× = VA FCVA lmgw (1) Trong đó: A 1 : diện tích pic của chất tạo ngọt thu được ở dung dịch mẫu thử A 2 : diện tích pic của chất tạo ngọt thu được ở dung dịch chuẩn V 1 : thể tích của dung dịch mẫu, tính bằng mililit (ml) V 2 : thể tích của dung dịch mẫu, tính bằng mililit (ml) C%: nồng độ phần trăm của chất tạo ngọt trong dung dịch chuẩn + Phương pháp đường chuẩn: Hàm lượng các chất tạo ngọt (w), có trong dung dịch thử được tính mg/l, theo công thức sau: 0 1 )/( m FCV lmgw ×× = (2) Trong đó: C : hàm lượng chất tạo ngọt có liên quan trong dung dịch thử, đọc được từ đường chuẩn, tính bằng mg/l. F,V 1 , m 0 xem trong công thức (1) 2.3.3. Đánh giá độ tin cậy của phương pháp phân tích 2.3.3.1 Độ lặp lại Đánh giá độ lặp lại trên cơ sở xác định độ lệch chuẩn và sai số tương đối RSD% của 5 phép thử song song trên mỗi đối tượng nghiên cứu. 100.(%) tb X S RSD = 10 [...]... bằng dung môi ethylacetat trong môi trờng acid phosphoric (pH =1-2 ) Sau đó đờng saccarin và acesulpham K lại đợc chiết bằng dung dịch natri hydrogen carbonat Dịch chiết đợc cất quay đuổi hết ethylacetat và thêm vào đó 2ml dung dịch TBA-Br, định mức và bơm vào hệ thống HPLC xác định bởi detector PDA ở bớc sóng 210 và 230nm Phạm vi áp dụng: Phơng pháp này áp dụng cho các sản phẩm nớc giải khát, ô mai,... bin phỏp x lý mu khỏc nhau c trỡnh by bng 3.3 Bng 3.3 thu hi aspatam v acesulpam vi hai bin phỏp chit mu khỏc nhau thu hi % Tờn cht Bin phỏp 1 Acesulpam Aspatam Bin phỏp 2 105 65 98 Kt qu thu c cho thy: Bin phỏp bin phỏp 2 cho thu hi cỏc cht phõn tớch cao ( t 89 n 105 %), sc ký cú ng nn thp Cũn bin phỏp 1 hiu sut thu hi kộm: aspatam < 70% Nh vy, bin phỏp x lý mu c la chn l lm sch mu qua ct chit... vitamin.) Theo kt qu tng hp cỏc ti liu ó cụng b v phng phỏp chun b mu phõn tớch aspatam v acesulfame-k trong nc gii khỏt [.]; [ ], chỳng tụi nhn xột rng: - Giai on lm sch mu (elean-up): lm sch ngi ta dựng k thut chit pha rn (SPE: Soil Phase Extraction) vi pha rn thng dựng l florisil .Trong trng hp ny, thờm 2ml dch lc ó lm trong vo ct, trc ú ó hot húa 3 ml methanol v 20 ml nc Cht phõn tớch c ra gii bng... nớc giải khát, ô mai, bánh mứt kẹo Đối với mẫu ở trạng thái rắn đợc xay, nghiền nhỏ và đồng nhất kỹ - Mẫu trạng thái lỏng phải trộn đều - Cân khoảng 10- 40 g cho vào ống ly tâm hoặc phẽu chiết - Thêm vào 20ml dung dịch NaCl bão hoà, thêm H3PO4 để có pH=1-2 - Chiết bằng 2x 75ml ethylacetat - Thêm 30ml muối bão hoà vào toàn bộ dịch chiết ethylacetat thu đợc - Lắc kỹ bỏ lớp nớc - Chiết lớp ethylacetat... cht ch gia nng v din tớch peak tng ng thu c trờn sc ký Trong khong nng ó kho sỏt h s tng quan R2=0,9996 i vi acesulfamK, v R2=0,9993 i vi aspartame 3.4 GII HN PHT HIN V GII HN NH LNG 3.4.1 Gii hn phỏt hin L lng cht thp nht ca cht cn phõn tớch cú th phỏt hin c v mt nh tớnh Trong phng phỏp HPLC gii hn ny c ỏnh giỏ bng: : nhiu ca ng nn, trong HPLC dựng detector DAD = 0,04 b: h s gc ca ng tuyn tớnh... mg/l iờự kin 4a tR S R T Acesunfan 3,3 1334798 11,98 3,67 Aspatam 7,2 1372789 3.2 Kho sỏt v chn la quy trỡnh x lý mu Thc t, mt s mu nc gii khỏt cú nn mu phc tp, mun phõn tớch chớnh xỏc ũi hi phi cú quy trỡnh x lý mu thớch hp khụng mt cht cn phõn tớch, do ú cn phi loi tp cht trc khi nh lng Trong qui trỡnh chun b mu phõn tớch aspartame v acesulfame trong nc gii khỏt, giai on nh hng ln nht l giai on chit... ng thi c hai cht aspartame v acesulfame-K trong nc gii khỏt Cỏc bc súng ó th ?, u tiờn chn bc súng cc i ca cht cú hm lng bộ hn l bc súng 210nm Dung mụi pha mu: Dung mụi pha mu l dung mụi hũa tan tt cht cn phõn tớch nhng hn ch tan cỏc tp cht khỏc cú trong mu, ng thi cng phi cú thnh phnh tng t vi thnh phn pha ng gim hin tng gõy nhiu ng nn trong quỏ trỡnh sc ký Th tớch bm mu: 20L (bung tiờm c nh ca mỏy)... dng Tin hnh tiờm 6 ln mu vo h thng sc ký lng cao ỏp cỏc iu kin ó chn Ghi din tớch peak thu c n nh ca h thng sc ký c biu th bng sai s tng i (RSD) ca kt qu sau 6 ln tiờm ca mu Pha mt hn hp mu chun cha: -Dung dch chun gc cha aspartame 500ppm v acesulfame-K 500ppm: Cõn chớnh xỏc mi loi 0,05g cho vo bỡnh nh mc 100ml, cho dung dch NaHCO3 0,1M lc tan hon ton ri cng dựng NaHCO3 nh mc ti vch -T dung dch.. .Trong ú: S : lch chun X tb : giỏ tr trung bỡnh 2.3.3.2 ỳng ỳng ca phng phỏp phõn tớch c ỏnh giỏ qua thu hi (Rev) khi phõn tớch mu thc t cú them chun (spiked sample) Re v(%) = x 2 x0 100 x1 Trong ú: x0 : l nng cht phõn tớch trong mu x1: l nng cht phõn tớch them chun vo mu X2: l nng cht phõn tớch xỏc nh c trong mu them chun 2.3.3.2.Gii hn phỏt hin (LOD)... 90 : 10 4a 1,5 80 : 20 4b 1,5 90 : 10 Vi cỏc iu kin phõn tớch trờn, sc ký thu c cú s phõn tỏch tng i tt, khụng cú hin tng chng pớc Tuy nhiờn, theo iu kin phõn tớch (2b) sc ký thu c cú phõn gii tt, nhng tớn hiu (chiu cao pớc) ca aspatam bộ hn so vi cỏc iu kin khỏc, hn na hờ s i xng ca pớc ra sau (S b2 = 1,33 > 1,000) cú th nh hng ti vic xỏc nh cng tớn hiu (din tớch) Khi phõn tớch iu kin (3b), mc dự . trình định lượng đồng thời chất ngọt tổng hợp aspatam và acesulpam trong một số sản phẩm thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao nhằm giải quyết các mục tiêu sau: - Xây dựng, tối. hóa và đánh giá qui trình phân tích đồng thời hai hoạt chất trên phương pháp sắc lỏng hiệu nâng cao. - Nghiên cứu phương pháp xử lý mẫu - Áp dụng quy trình xây dựng được để định lượng một số sản. hoạt chất trên trong cùng sản phẩm thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao pha đảo. Để thực hiện vấn đề này chúng tôi tiến hành triển khai đề tài: Nghiên cứu xây dựng qui trình định