Xác định hàm lượng vitamin c trong viên c sủi bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao hplc/dad

Xác định hàm lượng vitamin c trong viên c sủi bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao hplc/dad

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ HÓA HỌC BÁO CÁO ĐỒ ÁN CHUYÊN NGÀNH XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMIN C TRONG VIÊN C SỦI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC/DAD GVGD: TS Lê Đình Vũ SVTH: MSSV: 11050991 Lớp: ĐHPT7 NỘI DUNG Tổng quan lý thuyết Thực nghiệm xác định hàm lượng vitamin C viên C sủi HPLC/DAD Kết thảo luận 2 Tổng quan lý thuyết 1.1 Tổng quan vitamin C Định nghĩa: Vitamin C, gọi acid ascorbic, acid hòa tan nước chất dinh dưỡng tìm thấy số loại thực phẩm Trong thể, hoạt động chất chống oxy hóa, giúp bảo vệ tế bào khỏi thiệt hại gây gốc tự Nguồn gốc: Vitamin C có nhiều loại rau tươi nước cam, chanh, quít, có hàm lượng cao rau xanh, đặc biệt cải xanh, tiêu, khoai tây, cải brussel, rau cải, cà chua, xoong cam, quýt, chanh Trong công nghiệp, sản phẩm chứa vitamin C chủ yếu tổng hợp phương pháp hóa học từ D-glucose Tính chất vật lý: Khối lượng phân tử: 176,13 g/mol Có dạng: bột màu trắng đến vàng nhạt (khan), không mùi, vị chua Nhiệt độ nóng chảy: 193oC (phân hủy) Khả hòa tan nước: cao Khó tan rượu, không tan dung môi hữu Acid ascorbic có khả hấp thu ánh sáng tử ngoại, UVmax = 254 nm, pH = 2, UVmax = 265 nm pH = 6.4 Tính chất hóa học: CH2OH Tính acid Do hiệu ứng liên hợp nhóm carboxyl, nên HO CHO O nguyên tử hydro nhóm hydroxyl vị trí số trở nên linh động, làm cho vitamin C HO: OH có tính acid mạnh • Có thể định lượng acid ascorbic phương pháp đo kiềm, thị phenolphtalein, dung môi nước • Người ta điều chế muối ascorbat natri để pha dung dịch tiêm có nồng độ cao trung tính • Tác dụng với muối kim loại cho muối Tính khử • Việc oxy hoá acid ascorbic xảy hai mức độ khác nhau: + Sự oxy hoá khử thuận nghịch acid ascorbic thành acid dehydroascorbic Tính chất vô quan trọng tác dụng sinh học acid ascorbic, tham gia vào hệ enzym xúc tác trình oxy hoá khử xảy thể + Sự oxy hoá bất thuận nghịch acid ascorbic: Quá trình oxy hoá tạo sản phẩm acid 2,3-diceto gulonic (1), acid dehydroascorbic, furfurol (2), sản phẩm hoạt tính enzym Trong dung dịch, acid ascorbic dễ dàng bị oxy hoá oxy không khí; Độ bền vững dung dịch acid ascorbic giảm tỷ lệ thuận với nồng độ tỷ lệ nghịch với pH dung dịch Lợi ích vitamin C sức khỏe người: • Tham gia tạo colagen số thành phần tạo nên mô liên kết cơ, da xương, mạch máu • Tham gia vào trình chuyển hóa thể protid, lipid, glucid, tăng tỉ lệ hấp thu canxi vào thể • Tham gia vào trình tổng hợp số chất catecholamin, hormon vỏ thượng thận, tăng mật độ xương cột sống xương đùi • Chống stress nên giúp tăng sức đề kháng cho thể • Kết hợp với vitamin A, vitamin E chống ôxy hóa cách trung hòa gốc tự sản sinh từ phản ứng chuyển hóa, nhờ bảo vệ tính toàn vẹn màng tế bào • Hỗ trợ lớn giúp hấp thu sắt thể, vào thể có sắt hóa trị dễ dàng hấp thu sắt hóa trị 2, sắt hóa trị muốn hấp thu phải chuyển thành hóa trị 2, mà trình chuyển cần có xúc tác vitamin C nên thiếu vitamin C dễ gây thiếu máu thiếu sắt, uống viên sắt cần uống kèm với vitamin C 1.2 Tổng quan kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao Khái niệm: Sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp chia tách pha động chất lỏng pha tĩnh chứa cột chất rắn phân chia dạng tiểu phân chất lỏng phủ lên chất mang rắn, hay chất mang biến đổi liên kết hoá học với nhóm chức hữu Mobile phase (Pha động) Stationary phase (Pha tĩnh) - Quá trình tách dựa vào tính chất hóa học, vật lý hóa lý chất - Dựa trình: Hấp phụ Giải hấp phụ - Xảy liên tục pha: Pha tĩnh: chất rắn lỏng, giữ chất phân tích Pha động: chất lỏng (1 chất hỗn hợp nhiều chất), hòa tan di chuyển chất phân tích - Sắc ký lỏng chia thành nhóm Sắc ký lỏng áp suất thường (sắc ký cổ điển) Sắc ký lỏng áp suất cao (Sắc ký lỏng hiệu cao: HPLC) 2.8 Xác định hàm lượng HCl mẫu acid HCl Phạm vi áp dụng • Đối với mẫu tháp 200T nhà máy VICACO Nguyên tắc xác định • Dựa phản ứng chuẩn độ acid –bazơ Dùng dung dịch chuẩn NaOH chuẩn độ trực tiếp xuống mẫu HCl pha loãng với thị MO Tại điểm tương đương dung dịch chuyển từ không màu sang màu hồng HCl + NaOH → NaCl + H2O 37 Quy trình xác định hàm lượng HCl mẫu acid HCl NaOH 0,4931 N Cân 2,3-2,8g mẫu 30 ml nước cất 1-2 giọt PP Dừng chuẩn 38 Công thức tính toán xác định hàm lượng HCl mẫu acid HCl C1V × ĐHCl 100 × (%) HCl = m 1000 - C1 : Là nồng độ đương lượng dung dịch chuẩn NaOH (N) - V1 : Là thể tích dung dịch chuẩn NaOH (ml) - m : Khối lượng HCl (g) 39 Kết xác định hàm lượng HCl mẫu acid HCl STT Ngày 22/8/2014 Chỉ tiêu Thể tích Kết 45.20 ml 32.21 % 48.00 ml 32.40 % 46.00 ml 32.37 % Xác định hàm 28/8/2014 lương HCl mẫu acid HCl 9/9/2014 - Tất mẫu có độ tái lập tương đối cao - Hàm lượng HCl mẫu đạt theo Kiểm tra thử nghiệm nhà máy hóa chất Vicaco ( %HCl = 32 ± 1.5) 40 2.9 Xác định hàm lượng Cl2 tự mẫu acid HCl Phạm vi áp dụng • Đối với mẫu tháp 200T nhà máy VICACO Nguyên tắc xác định • Dựa phương pháp chuẩn độ oxy hóa khử, dùng dung dịch Na2S2O3 tiêu chuẩn chuẩn độ lượng I2 sinh tương đương với lượng Clo có mẫu, theo thị hồ tinh bột, điểm tương đương dung dịch không màu Phản ứng chuẩn độ : I2dư + 2S2O32- →2I- + S4O62- 41 Quy trình xác định hàm lượng Cl2 tự mẫu acid HCl Na2S2O3 0,0109 N 10 mL mẫu mL KI 10% giọt thị hồ tinh bột Chuẩn độ Tạm dừng Chuẩn tiếp Dừng lại 42 Công thức tính toán xác định hàm lượng Cl2 tự mẫu acid HCl N × V × 35,46×1000 Cl (ppm) = 10 × d - N: Là nồng độ đương lượng dung dịch chuẩn Na2S2O3 (N) - V: Là thể tích dung dịch chuẩn Na2S2O3 (ml) - d: Tỷ trọng dung dịch mẫu đo nhiệt độ 25ºC 43 Kết xác định hàm lượng Cl2 tự mẫu acid HCl STT Ngày Chỉ tiêu 22/8/2014 Xác định hàm 28/8/2014 9/9/2014 Tỷ Tích trọng 0.32 ml lượng Clo 0.52 tự ml mẫu Thể acid HCl 0.30 ml 1.155 1.156 1.156 - Hàm lượng Clo Kết tự mẫu đạt theo Kiểm tra thử nghiệm nhà máy hóa 10.7 chất Vicaco ppm (Cl2 ≤ 40 ppm) 17.4 - Tất mẫu ppm có độ tái lập tương đối cao 10.0 ppm 44 2.10 Xác định hàm lượng NaOH mẫu sản phẩm cuối NaOH giao hàng Phạm vi áp dụng • Hàm lượng NaOH > 10% Áp dụng theo TCVN 3795 – 83 Nguyên tắc xác định • Dựa chuẩn độ acid – baz để xác định tiêu này, dùng dung dịch chuẩn HCl trực tiếp xuống mẫu phân tích dùng thị acid bazơ sau: • Bước 1: dùng thị PP, điểm tương đương dung dịch màu hồng, ghi thể tích dung dịch chuẩn HCl tiêu tốn (V1) để trung hòa NaOH chuyển CO3thành HCO3- NaOH + HCl → NaCl + H2O Na2CO3 + HCl→ NaHCO3 + NaCl • Bước 2: cho tiếp thị MO vào, chuẩn tiếp HCl, điểm tương đương dung dịch chuyển từ màu vàng sang da cam Ghi nhận thể tích dung dịch chuẩn HCl tiêu tốn (V2) để trung hòa HCO3- sinh phản ứng NaHCO3 + HCl → NaCl + H2O + CO2 45 Quy trình xác định hàm lượng NaOH mẫu sản phẩm cuối NaOH giao hàng m (g) mẫu Định mức 1000 mL 1000 mL 50 mL nước cất giọt PP Hút 50 mL ến h i T n hà uẩn ch độ HCl 1N Dừng chuẩn 46 Quy trình xác định hàm lượng NaOH mẫu sản phẩm cuối NaOH giao hàng 50 mL nước cất giọt PP 1000 mL HCl 1N HCl 0,1 N Hút 50 mL Tạm dừng HCl 0,1 N giọt MO HCl 0,1 N Dừng chuẩn 47 Tạm dừng Công thức tính toán xác định hàm lượng NaOH mẫu sản phẩm cuối NaOH giao hàng %NaOH = [V 1N + ( 2V − V 3) N 2] × ĐNaOH ×100 × Vđm 1000 × m Vxđ - V1: Là thể tích dung dịch chuẩn HCl 1,0 N - C1: Là nồng độ đương lượng dung dịch chuẩn HCl 1,0N - V2: Là thể tích dung dịch chuẩn HCl 0,1 N tiêu tốn trình chuẩn độ với thị PP - C2: Là nồng độ đương lượng dung dịch chuẩn 0,1N - V3 (ml): Là thể tích dung dịch chuẩn HCl nồng độ nhỏ tiêu tốn trình chuẩn độ với thị MO - m (g): Là khối lượng mẫu 48 Kết xác định hàm lượng NaOH mẫu sản phẩm cuối NaOH giao hàng Trọng lượng (m)g Thể tích chuẩn HCl ( V1)ml Nồng độ HCl (N1) Thể tích chuẩn HCl Sản (V2)ml Thể tích chuẩn HCl phẩm NaOH giao hàng ( V3)ml Nồng độ HCl (N2) Kết (%) Ghi 48,9028 48,9733 48,8643 23,00 23,00 1,0327 1,0327 6,00 6,10 6,30 6,40 - Hàm lượng xút mẫu đạt 1,0327 theo tiêu chuẩn nhà máy hóa 6,00 chất VICACO 23,00 6,30 0,1066 0,1066 0,1066 39,85 Đạt 39,81 Đạt 39,88 Đạt (%NaOH= 40±0.5%) - Tất mẫu có độ tái lập cao 49 Tài liệu tham khảo [1] http://www.sochemvn.com/index.php/nha-may-hoa-chat-bien-hoa [2] Kiểm tra thử nghiệm sơ đồ vị trí lấy mẫu, Nhà máy hoá chất Biên Hoà VICACO [3] Thực pha chế - chuẩn độ hoá chất, Nhà máy hoá chất Biên Hoà VICACO [4] Phân tích công nghiệp II, tác giả thạc sĩ Đặng Ngọc Lý [5] Bài giảng hoá phân tích 1, khoa Công Nghệ Hoá Học [6] Nguyễn Thạc Cát, Từ Vọng Nghi, Đào Hữu Vinh, sở lý thuyết hóa học phân tích, Nhà xuất giáo dục, 209 – 212, 1996 [7] Sách thực kiểm tra thử nghiệm & biện pháp đảm bảo ATTKN, Nhà náy hoá chất Biên Hoà Vicaco [8] TCVN 5495 – 2005 - Nước thải công nghiệp – tiêu chuẩn thải [9] TCVN 2600 – 78 - Kiểm tra thống kê chất lượng 50 Thank You! Cám ơn quý thầy cô bạn theo dõi L/O/G/O 51 [...]... hàm lượng vitamin C trong viên C sủi bằng phương pháp HPLC/DAD Phạm vi áp dụng •Tiêu chuẩn này quy định phương pháp x c định vitamin C trong viên C sủi vitamin C Nguyên t c •Mẫu viên sủi vitamin C đư c hòa tan hoàn toàn trong nư c cất 2 lần tinh khiết, sau đó đư c l c qua màng l c 0.45 µm để loại bỏ c n Hàm lượng vitamin C đư c x c định bằng HPLC c detector DAD ở bư c sóng 265 nm Yêu c u chung Trong. .. SAMPLE) 5 C t tách (Colume) LÒ C T (COLUME OVEN): DÙNG ĐỂ ĐIỀU KHIỂN NHIỆT ĐỘ C T TÁCH C T TÁCH: LÀ NƠI XẢY RA C C QUÁ TRÌNH TÁCH CHẤT, GỒM C T PHÂN TÍCH VÀ C T BẢO VỆ - C t tách c kích c kh c nhau - Chiều dài: 10 – 25cm - Đường kính: 2 – 5mm (5) C t tách C t chứa pha tĩnh đư c coi là trái tim c a hệ thống s c ký lỏng hiệu năng cao - C t pha tĩnh thông thường làm bằng thép không rỉ ,chiều dài c t khoảng... đó pha động luôn chảy qua c t tách với một t c độ nhất định  Hiệu quả c a quá trình tách phụ thu c rất nhiều vào tương t c giữa c c chất trong pha tĩnh và pha động  M c đích chính c a s c ký là tách và định tính c c chất trong hỗn hợp chất ph c tạp • Quá trình tách diễn ra trong c t s c ký column Vật liệu nhồi c t 3- 5µm QÚA TRÌNH TÁCH mixed sample Mobile phase column Hỗn hợp chất tách khỏi nhau thế... chất phân tích c ái l c kh c nhau với pha tĩnh, chúng di chuyển với t c độ kh c nhau và tách ra khỏi nhau - C c quá trình tách trong s c ký lỏng:  Quá trình quan trọng nhất trong phương pháp s c ký  Những c n bằng động xảy ra giữa pha tĩnh và pha động trong c t s c ký  Là sự vận chuyển và phân bố liên t c của chất phân tích từ đầu c t đến cuối c t  Chất phân tích luôn phân bố giữa 2 pha, trong đó... khi c c cấu tử tách ra khỏi nhau sẽ lần lượt đi vào detector, tại đó chúng đư c chuyển thành tín hiệu điện Tín hiệu này đư c khuyếch đại rồi chuyển sang bộ ghi C c tín hiệu đư c xử lý ở đó rồi chuyển sang bộ phận in và lưu kết quả - Trên s c đồ nhận đư c, sẽ c c c tín hiệu ứng với c c cấu tử đư c tách gọi là peak Thời gian lưu c a peak là đại lượng đ c trưng (định tính) cho chất c n tách C n diện tích... là thư c đo định lượng cho chất c n phân tích -Thời gian chất phân tích bị pha tĩnh lưu giữ (thời gian lưu) quyết định bởi:  Bản chất c a pha tĩnh, c u tr c và tính chất c a chất phân tích  Bản chất và thành phần c a pha động dùng để rửa giải chất phân tích ra khỏi c t s c ký (pha tĩnh) - Ghi lại toàn bộ quá trình tách s c ký c a hỗn hợp chất phân tích  s c ký đồ gồm nhiều peak - Đ c điểm c a peak... − Bộ l c mẫu 0.45 µm − Hệ thống s c ký lỏng hiệu năng cao: Gồm c bơm, bộ bơm mẫu, detector DAD − C t tách với ch c năng tách theo quy định − C n phân tích độ chính x c 0.1 mg C c điều kiện chạy máy − Pha tĩnh: C t pha đảo C1 8, c hạt 0.5 µm, kích thư c 250 mm × 4.0 mm − Pha động: Dung dịch A : Dung dịch B tỉ lệ 9 : 1 − T c độ dòng: 0.3 ml/min − Detector: DAD bư c sóng 265 nm − Axit ascorbic: tlưu... hành x c định •Sau khi đã khảo sát và chọn ra đư c t c độ dòng và tỉ lệ dung môi tối ưu ta tiến hành đo chuẩn và đo mẫu đễ x c định hàm lượng vitamin C có trong mẫu Đo lần lượt c c dung dịch chuẩn c nồng độ 10 ppm, 20 ppm, 40 ppm sau đó pha dung dịch chuẩn c nồng độ ư c lượng trong khoảng 10 – 40 ppm rồi tiến hành đo với c ng điều kiện như đo c c dung dịch chuẩn, hàm lượng vitamin C trong mẫu sẽ đư c. .. đư c l c qua bộ l c 0.45 µm (dung dịch B) • Khử khí dung dịch trư c khi sử dụng, nếu c n Chất chuẩn • Axit ascorbic, w (C6 H8O6) ≥ 99.7 % Dung dịch g c • Dung dịch g c axit ascorbic, ρ (C6 H8O6) ≈ 1 mg/ml (1000 ppm) • Hòa tan một lượng axit ascorbic đã đư c cân chính x c đến 0,1 mg Chuẩn bị dung dịch mới trong ngày sử dụng Lấy mẫu và xử lý sơ bộ Trư c khi đo c n l c dung dịch qua màng l c 0.45 µm • C n chính... detector kh c nhau ỨNG DỤNG C A HPLC - Chủ yếu x c định c c hợp chất hữu c khó bay hơi trong nhiều đối tượng kh c nhau: + Amino acid + Acid hữu c + Thu c trừ sâu + … ƯU ĐIỂM C A HPLC - C thể phân tích đồng thời nhiều hợp chất - Không c n làm bay hơi mẫu - Độ phân giải cao nhờ quá trình tách trên c t - Độ nhạy cao (ppm-ppb) nhờ đầu dò - Thể tích mẫu phân tích nhỏ (1-100µL) 2 Th c nghiệm x c định hàm ... định hàm lượng Cl2 hữu hiệu xút dư mẫu Javel 2.6 X c định hàm lượng NaCl mẫu nư c muối nghèo 2.7 Phân tích hàm lượng Na2SO3 nư c muối nghèo 2.8 X c định hàm lượng HCl mẫu acid HCl 2.9 X c định hàm. .. •Tiêu chuẩn quy định phương pháp x c định vitamin C viên C sủi vitamin C Nguyên t c •Mẫu viên sủi vitamin C hòa tan hoàn toàn nư c cất lần tinh khiết, sau l c qua màng l c 0.45 µm để loại bỏ c n Hàm. .. thống s c ký lỏng hiệu cao: Gồm c bơm, bơm mẫu, detector DAD − C t tách với ch c tách theo quy định − C n phân tích độ x c 0.1 mg C c điều kiện chạy máy − Pha tĩnh: C t pha đảo C1 8, c hạt