Xác định hàm lượng vitamin c trong rau quả bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMINC TRONG RAU QUẢ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO GVHD: THS.HỒNG VĂN TRUNG SVTH: NGUYỄN ĐÌNH NHÂN LỚP: 48K – HOÁ THỰC PHẨM MSSV: 0752040552 VINH, THÁNG 12-2011 LỜI CẢM ƠN Khóa luận thực phịng thí nghiệm Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm Môi trường, Trường Đại học Vinh Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin chân thành cảm ơn đến Ths Hoàng Văn Trung - Khoa Hóa, Trường Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi suốt q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn ThS Chu Thị Thanh Lâm - Khoa Hóa Trường Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ q trình làm thí nghiệm, hướng dẫn cách sử dụng máy HPLC đo mẫu Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, cán khoa Hố Cuối tơi xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Vinh, tháng 12 năm 2011 Sinh viên Nguyễn Đình Nhân MỤC LỤC trang Lời mở đầu 1 Lí chọn đề tài Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu CHƯƠNG I Tổng quan tài liệu I Giới thiệu Vitamin C Lược sử Vai trò vitamin C đời sống người Các nguồn vitamin C thiên nhiên 3.1 Vitamin C có thực phẩm 3.2 So sánh nguồn vitamin C Nhu cầu vitamin C hàng ngày nên Dạng tồn vitamin C Cơng thức hố học 6.1 Axit L – Ascorbic 6.2 Axit L – Dehydroascorbic 10 Phương pháp điều chế 10 Rối loạn liên quan đến vitamin C 12 8.1 Thiếu vitamin C 12 8.2 Thừa vitamin C 13 Cơ chế tác dụng 13 10 Chức miễn dịch 14 11 Ứng dụng lâm sàng 15 II Tính chất vitamin C 15 Lí tính 15 Hố tính 16 2.1 Tính axit 16 2.2 Tính khử đặc tính axit ascorbic 17 III Các phương pháp xác định vitamin C 18 Nhận xét chung 18 Định lượng ax ascorbic phương pháp vật lí 19 2.1 Phương pháp quang phổ 19 2.2 Phương pháp cực phổ 19 2.3 Phương pháp sắc kí 19 Giới thiệu phương phap sắc kí lỏng hiệu cao 19 3.1 Cơ sở lí thuyết 19 3.2 Nguyên tắc q trình sắc kí cột 20 3.3 Phân loai sắc kí ứng dụng 21 3.4 Các đại lượng đặc trung sắc kí đồ 21 3.5 Hệ thống HPLC 24 3.5.1 Bình đựng dung môi 24 3.5.2 Bộ khử khí degasse 25 3.5.3 Bơm 25 3.5.4 Bộ phận tiêm mẫu 25 3.5.5 Cột sắc kí 26 3.5.6 Đầu dò 26 3.5.7 Bộ phận tín hiệu 26 3.5.8 In kết 26 3.6 Chọn điều kiện sắc kí .26 3.6.1 Lựa chọn pha tĩnh 26 3.6.2 Lựa chọn pha động 27 3.7 Tiến hánh sắc kí 30 3.7.1 Chuẩn bị dụng cụ máy móc 30 3.7.2 Chuẩn bị dung môi pha động 30 3.7.3 Chuẩn bị mẫu đo HPLC 30 3.7.4 Cách đo HPLC 31 CHƯƠNG II Thực nghiệm 32 I Hoá chất, dụng cụ máy 32 Hoá chất 32 Dụng cụ máy móc 32 Thực nghiệm 33 3.1 Sơ đồ xử lí chất chuẩn mẫu 33 3.2 Tiến hành 33 Khảo sát đánh giá phương pháp 34 4.1 Khảo sát giới hạn phát giới hạn xác định phương pháp 34 4.2 Đánh giá hiệu suất thu hồi phương pháp 35 4.3 Khảo sát độ lặp 35 CHƯƠNG III Kết kết luận 36 3.1 Xác định khoảng tuyến tính đường chuẩn vitamin C 36 3.2 Khảo sát hàm lượng vitamin C mẫu rau 38 3.3 Khảo sát giới hạn phát (LOD) giới hạn xác định (LOQ) phương pháp 42 3.4 Xác định độ lặp lại phương pháp 42 3.5 Kết luận 44 3.6 Kiến nghị 44 Tài liệu tham khảo 46 DANH MỤC BẢNG, HÌNH, SƠ ĐỒ Bảng : Bảng : Diện tích peak vitamin C tương ứng với nồng độ chuẩn 38 Bảng : Kết phân tích hàm lượng vitamin C rau 39 Bảng : Giá trị LOD LOQ 42 Bảng : Kết trung bình,độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu rau 43 Hình : Hình Sắc đồ chuẩn vitamin C 1ppm………………………………………36 Hình Sắc đồ chuẩn vitamin C 10ppm…………………………………… 36 Hình Sắc đồ chuẩn vitamin C 50ppm…………………………………… 37 Hình Sắc đồ chuẩn vitamin C 100ppm……………………………………37 Hình Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pic thu nồng độ chuẩn vitamin .38 Hình Sắc đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu ớt khơ 1……………….39 Hình Sắc đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu ớt khơ 2……………….40 Hình Sắc đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu ớt tươi……………… 40 Hình Sắc đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu rau ngót……………….41 Hình10 Sắc đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu rau kinh giới………….41 Sơ đồ : Sơ đồ xử lí chất chuẩn mẫu .33 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ CÁI VIẾT TẮT IU: Đơn vị quốc tế DRI: Thuật ngữ chung cho tập giá trị tham chiếu sử dụng để lập kế hoạch đánh giá lượng chất dinh dưỡng người khoẻ mạnh DRIs: Chế độ phần ăn tham khảo UL: Mức độ chấp nhận RDA: Chế độ ăn uống phụ cấp LỜI MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Đã từ lâu người ta biết thức ăn bao gồm chất dinh dưỡng: protit, gluxit, lipit số muối khống Nhưng sau người ta thấy số bệnh gây thiếu chất thức ăn, vitamin (theo tiếng La Tinh: Vita sống, vitamin amin sống) Vitamin chất hữu có chất hố học rât khác nhau, mà cần lượng nhỏ thức ăn người động vật bậc cao đủ đảm bảo sinh trưởng phát triển bình thường thể Nhưng với lượng bé chúng chất cung cấp lượng Ngày người ta rõ vai trò xúc tác vitamin trình biến đổi thể Theo y học, loại vitamin cần thiết cho hoạt động sống thể nào, làm xúc tác cho q trình sinh hố, gắn liền với việc giải phóng lượng, tham gia phản ứng tế bào Việc cung cấp không đầy đủ vitamin cho thể ảnh hưởng xấu làm việc hệ thần kinh mà loạt quan khác bên thể Vì điều quan trọng phần ăn người phải có giá trị hồn chỉnh khơng phương diện calo, phương diện chất đạm mà phương diện vitamin Đối với vitamin C nói riêng có vai trị quan trọng, có vị trí đặc biệt lich sử học thuyết vitamin Thiếu vitamin C thể bị bệnh hoại huyết, ảnh hưởng tiêu cực đến tự vệ thể với bệnh nhiễm trùng khác Cơ thể hồn tồn khơng tự tổng hợp vitamin C mà phải lấy từ nguồn thức ăn ngồi vào Vì việc phân tích vitamin C thực phẩm điều cần thiết Tuy nhiên hợp chất hữu thuộc đối tượng khó phân tích, mẫu phân tích tồn nhiều chất hữu vô dạng khác nhau, gây cản trở cho q trình định lượng Do cần phải lựa chọn phương pháp phân tích hữu hiệu Có thể phân tích vitamin C phương pháp: sắc ký giấy, cực phổ, trắc quang, hóa học, sắc kí Trong phương pháp cực phổ phương pháp đặc trưng nhất, dùng nhiều thực tế để định lượng hàng loạt Phương pháp cực phổ đáp ứng yêu cầu phân tích hợp chất vơ cơ, hữu với hàm lượng nhỏ, xác Tuy nhiên điều kiện phịng thí nghiệm chưa đáp ứng nên không sử dụng phương pháp có ưu điểm rõ rệt Trong luận văn chọn phương pháp HPLC để xác định hàm lượng vitaminC số loại rau Nhiệm vụ nghiên cứu Trong khóa luận này, chúng tơi có nhiệm vụ sau: - Nghiên cứu tính chất vật lý, hóa học phương pháp xác định vitamin C - Tách vitamin C mẫu rau - Định lượng vitamin C phương pháp HPLC - Kiểm tra, đánh giá phương pháp điều kiện phân tích với q trình thực kết thu được, chúng tơi hy vọng luận văn góp phần bổ sung, hồn thiện phương pháp phân tích vitamin C nhiều đối tượng khác số rau có bán thị trường - Kết thực nghiệm Đối tượng nghiên cứu Mẫu rau thu thập từ chợ địa bàn thành phố Vinh Mỗi mẫu lấy 20g, đựng vào túi nilông Bao gồm: + ớt tươi + ớt khơ + rau ngót + rau kinh giới Các loại rau chứa nhiều vitamin C 32 CHƯƠNG II THỰC NGHIỆM I Hoá chất-dụng cụ-máy Hoá chất Tất hoá chất sử dụng luận văn thuộc loại tinh khiết hoá học (tkhh) tinh khiết phân tích (tkpt) : - Nước cất lần - Nước dùng cho HPLC - Metanol, HPLC - Acid phosphoric , tinh khiết phân tích - Chuẩn Vitamin C Dụng cụ -Máy móc - Hệ thống máy HPLC với đầu dị UV - Cột RP-18e, kích thước cột LxID: 150x4.6mm, kích thước hạt µm - Cân phân Tích có độ xác 0.1 mg ,bể siêu âm - Bình định mức 10ml - Pipet loại 0.1ml;0.5ml,1ml, 2ml, 5ml, 10ml,… - Ống Hatch - Dụng cụ thuỷ tinh loại : becher, erlen,… 33 Thực nghiệm 3.1 Sơ đồ xử lý chất chuẩn mẫu 1g ớt tươi 900ml h20 cất + ax photphoric Lọc xay nhuyễn, đồng Bộ lọc dung môi Định mức Đuổi bọt khí H20(pH3) vào bình 50ml Tạo thành Bể siêu âm Vortex Vortex phút Lọc Giấy lọc 0,45µm Dung dịch Mẫu bơm vào HPLC 3.2 Tiến hành Dung dịch chuẩn dung dịch thử : - Dung dịch acid phosphoric pH3: lấy 900ml nước cất, chỉnh pH=3 acid phosphoric Lọc qua lọc dung môi đuổi hết bọt khí bể siêu âm - Dung dịch chuẩn gốc 1000µg/ml:cân 10mg (±0.1mg) vitaminC chuẩn vào bình định mức dung tích 10ml Hồ tan định mức tới vạch Metanol - Dung dịch chuẩn 10µg/ml : hút xác 0.1ml dung dịch chuẩn gốc 1000µg/ml vào bình định mức 10 ml Định mức tới vạch dung dịch pha động - Dung dịch chuẩn 0.5, 1, µg/ml : hút xác 0.5,1,5 ml dung dịch chuẩn 10µg/ml vào bình định mức 10ml Định mức tới vạch dung dịch pha động Chuẩn bị mẫu : Mẫu ớt : 34 Cân khoảng 1.0g (±0.1g) mẫu thử đồng cho vào bình định mức 25ml Định mức H2O(pH3), Vortex phút Dung dịch thu sau lọc qua giấy lọc 0.45 µm định lượng máy sắc ký lỏng hiệu cao Tiến hành phân tích HPLC : Điều kiện phân tích - Cột sắc ký : cột pha đảo (3.1.2) - Pha động: Hỗn hợp (H20 : metanol = 60 : 40) - Tốc độ dòng : 0.7ml/phút - Bước sóng cài đặt cho đầu dị : 254nm Tiêm dung dịch mẫu thử nghiệm theo thứ tự : Các dung dịch chuẩn Dựng đường chuẩn nồng độ vitamin C diện - tích chuẩn Vitamin C Tính tốn hệ số tương quan hồi quy tuyến tính Các dung dịch mẫu thử nghiệm Tính hàm lượng Vitamin C dịch chiết - (Co) thông qua đường chuẩn xây dựng bước Đảm bảo chất lượng : Đường chuẩn phải có độ tuyến tính tốt, hệ số tương quang hồi quy tuyến tính (R2) phải lớn 99 Khảo sát đánh giá phương pháp 4.1 Khảo sát giới hạn phát (LOD) giới hạn xác định (LOQ) phương pháp Giới hạn phát (LOD) định nghĩa nồng độ nhỏ chất phân tích mà có tín hiệu sắc ký lớn gấp lần tín hiệu đường Đây thông số đặc trưng cho độ nhạy phương pháp LOD = tín hiệu chiều cao pic/nhiễu đường ≥ Giới hạn định lượng (LOQ) (limit of quantitation) nồng độ nhỏ đo phương pháp, nồng độ tối thiểu chất mẫu xác định mà thiết bị đo với RSD% quy định nồng độ chất phân tích mà cho tín hiệu gấp 10 lần tín hiệu đường 35 4.2 Đánh giá hiệu suất thu hồi phương pháp Để đánh giá hiệu suất thu hồi phương pháp tiến hành phân tích mẫu theo quy trình với phương pháp thêm chuẩn 4.3 Khảo sát độ lặp - Độ lặp lại dùng để đánh giá định lượng độ phân tán kết Đại lượng đặc trưng cho độ gần giá trị trung bình hai hay nhiều phép đo nhận điều kiện giống - Đánh giá độ lặp dựa độ lệch chuẩn tương đối (RSD) 36 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ KẾT LUẬN 3.1 Xác định khoảng tuyến tính đường chuẩn Vitamin C Dãy chuẩn vitamin C khảo sát có nồng độ sau:1ppm; 10ppm; 50ppm;100ppm Phân tích chuẩn nói xác định phương trình hồi quy tuyến tính dựa vào diện tích pic Sắc đồ đo chuẩn vitamin C nồng độ khác : Hình Sắc đồ chuẩn vitamin C 1ppm Hình Sắc đồ chuẩn vitamin C 10ppm 37 Hình Sắc đồ chuẩn vitamin C 50ppm Hình Sắc đồ chuẩn vitamin C 100ppm 38 Bảng 1: Diện tích peak vitamin C tương ứng với nồng độ chuẩn Nồng độ Diện tích píc chuẩn Lần 1 282,70520 10 1307,96252 50 7826,14795 100 1,49678 m b R2 150,46891 33,60908 0.99957 Sử dụng chương trình Microsoft Excel để xây dựng đường chuẩn, ta có phương trình đường chuẩn xác định hàm lượng vitamin C sau: Phương trình hồi qui đường chuẩn theo diện tích peak có dạng: y = mx + b x nồng độ, y tích pic m = 150,46891 b = 33,60908 Hệ số hồi quy tuyến tính R2 =0,99957 Hình Đường chuẩn biểu thị mối quan hệ diện tích pic thu nồng độ chuẩn vitamin 3.2 Khảo sát hàm lượng vitamin C mẫu rau Từ giá trị diện tích peak đo ta tính hàm lượng C (ppm) Sau ta tính hàm lượng Vitamin C (mg/kg) có mẫu ớt theo cơng thức sau: 39 C C0  V  f m Trong : - C : Hàm lượng Vitamin C có mẫu, tính theo mg/kg - Co: Hàm lượng Vitamin C Có dịch chiết ( Co) thông qua đường chuẩn , mg/l - f: Hệ số pha lỗng (nếu có) - m: Khối lượng mẫu thứ(g) Bảng 2: Kết phân tích hàm lượng vitamin C mẫu rau Mẫu Co(ppm) m(g) Vdm(ml) f C(ppm) ớt khô 0,268872 0,5055 10 0,5318 ớt khô 0,237583 0,5020 10 0,4732 ớt tươi 0,161206 0,5040 10 0,3198 rau ngót 0.511847 1,0110 25 1,2656 rau kinh giới 0,101586 0,5010 10 0,2027 Hình Sắc đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu ớt khơ 40 Hình Sắc đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu ớt khơ Hình Sắc đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu ớt tươi 41 Hình Sắc đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu rau ngót Hình 10 Sắc đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu rau kinh giới Hàm lượng Vitamin C có mẫu , tính theo mg M  C V  C   dd   f  m  1000  - C : Hàm Lượng Vitamin C có mẫu , tính theo mg - Co: Hàm lượng Vitamin C Có dịch chiết ( Co) thơng qua đường chuẩn , mg/l 42 - f: Hệ số pha loãng (nếu có) m: Khối lượng mẫu thứ(g) - - M: Khối lượng ban đầu viên thuốc.(mg) 3.3 Khảo sát giới hạn phát (LOD) giới hạn xác định (LOQ) phương pháp Giá trị LOD LOQ phương pháp qua lần đo nồng độ khác 1ppm, 10ppm, 50ppm, 100ppm ta kết bảng sau: Bảng 3: Giá trị LOD LOQ Giá trị Chuẩn vitamin C(ppm) LOD 0,008 LOQ 0,0024 Ghi : LOD   SY m LOQ   lod 10 m hệ số góc phương trình hồi quy Độ lệch chuẩn Sy: Sy   X  X tb  n 1 i X tb  X i n Qua bảng số liệu ta thấy phương pháp có khoảng giới hạn phát khoảng định lượng nhỏ chứng tỏ thiết bị có độ nhạy cao, phát hàm lượng vitamin C dạng vết có mẫu phân tích 3.4 Xác định độ lặp lại phương pháp Theo lý thuyết thống kê, đại lượng đặc trưng cho độ lặp lại độ lệch chuẩn SD hệ số biến thiên CV% (RSD) Thực phân tích 10 ml mẫu tiến hành phân tích lặp lại lần điều kiện Kết phân tích lần lặp lại độ lặp lại phương pháp nêu bảng 4.2.1 Độ lặp lại phương pháp đánh giá qua độ lệch chuẩn tương đối 43 (RSD) Dựa vào nồng độ tương ứng tính kết trung bình tính độ lệch chuẩn hệ số biến thiên theo công thức đây: Bảng Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu ớt mẫu ớt khơ TT thể tích nồng độ 10 0,5318 10 0,4732 Xtb 0,5025 S 0,0414 CV(%) 0,823 - Giá trị trung bình hàm lượng vitamin C mẫu là: n X tb   x  0,5025 n i 1 n  (x i Độ lệch chuẩn: s Độ lệch chuẩn tương đối: CV %  i 1  xtb ) n 1  0,0414 S  100  0,823 xtb Trong đó: Xi nồng độ vitamin C lần chạy thứ i Xtb nồng độ trung bình n lần chạy n số lần chạy lặp lại Nhận xét: Kết tính tốn cho thấy, phương pháp có lặp lại cao cho độ tốt đáp ứng yêu cầu định lượng Thảo luận kết quả: Từ kết phân tích thấy hàm lượng vitamin C mẫu rau Ngót nhiều hàm lượng vitamin C mẫu rau kinh giới ,ớt hàm lượng 44 vitamin C giảm nhiều để mẫu rau phá mẫu qua ngày nhiệt độ phịng Điều chứng tỏ dung dịch axit ascorbic dễ bị oxy hố khơng khí 3.5 KẾT LUẬN Đã tổng quan tầm quan trọng vitamin C, nguồn vitamin C thiên nhiên, tính chất vitamin C, phương pháp để định lượng vitamin C Đã chọn thuốc thử thích hợp có khả tham gia phản ứng oxy hoákhử thuận nghịch với axit ascorbic xác định cực đại hấp thụ chất màu bước sóng  490nm Đã loại trừ ảnh hưởng chất cản trở q trình định lượng Thời gian chiết thích hợp 1phút (tính từ lúc bắt đầu cho chất màu vào dung dịch phân tích) Đã tiến hành xác định hàm lượng vitamin C mẫu ớt tươi khụ ,2 loại rau rau ngút rau kinh giới có bán thị trường thành phố Vinh Và thu kết sau: - Hàm lượng vitamin C mẫu ớt : + ớt khô : 0,5318 + ớt tươi : 0,3198 - Hàm lượng vitamin C trong mẫu rau : + rau Ngót : 1,2656 + rau Kinh giới: 0,2027 Do thời gian không cho phép nên chúng tơi khơng thể tiến hành phân tích hàm lượng vitamin C dùng với thuốc thử khác nhau, chưa xác định hàm lượng vitamin C số hoa khác Chúng hy vọng quy trình phân tích áp dụng để phân tích hàm lượng vitamin C loại hoa khác đặc biệt sử dụng để kiểm nghiệm hàm lượng vitamin C số loại rau (nội nhập, ngoại nhập ) có bán thị trường 3.6 KIẾN NGHỊ Vấn đề sử dụng vitamin C điều trị bệnh thiếu vitamin C, thực phẩm coi tiến khoa học công nghệ áp dụng y học đời sống sức 45 khỏe Tuy nhiên không nên lạm dụng xem thường cách sử dụng vitamin C mà dẫn đến biến tính xảy Chúng ta biết triệu chứng xảy thừa thiếu vitamin C mục 8.1 8.2 Cần phải tăng cường kiểm sốt chất lượng vệ sinh an tồn thực phẩm, quy trình sản xuất thực phấm loại sản phẩm có chứa nhiều vitamin C Cần nghiên cứu lượng vitamin C diện rộng loại thực phẩm khác để từ có lựa chọn đắn Vì điều kiện có hạn nên người thực đề tài không tránh khỏi thiếu sót Rất mong góp ý bảo thầy cô giáo bạn sinh viên 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO Lê Văn Tri, Nguyễn Ngọc Doãn Sinh học vitamin NXB KHKT, Hà Nội 1987 Lê Doãn Diễn, lê Duy Thuỵ, Mỹ Xuyến, Hoàng Văn Tuyên Vitamin đời sống NXB KHTK, Hà Nội.1978 Lê Ngọc Tú, Phạm Quốc Thắng, Lê Doãn Diễn, Bùi Đức Hội, La Văn Chữ, Nguyễn Thị Thịnh Hố sinh học cơng nghiệp NXB Đại học & THCN, Hà Nội 1974 Trần Thị Hoàng Ba, Vũ Thị Bảy, Nguyễn Kim Chi, Doãn Huy Khắc, Nguyễn Quang Luân Định lượng vitamin NXB Y học Hà Nội, 1976 Đặng Thị Thu, Nguyễn Thị Xuân Sâm, Tô Kim Anh Thí nghiệm hố sinh cơng nghiệp Trường ĐH Bách khoa Hà Nội, Hà nội 1997 Phạm Thị Trân Châu, Trần Thị Láng Hoá sinh học NXB Giáo dục, Hà Nội 1999 Nguyễn Hữu Chất Enzym xúc tác sinh học NXB Y học Hà Nội, 1983 Trần ích Hoá sinh học NXB Giáo dục, Hà Nội Hồ Viết Q Phân tích lý hố NXB Giáo dục, Hà Nội 2000 Nguyễn Tinh Dung Hố phân tích, T1, T2 NXB Giáo dục, Hà Nội 1991 10 Nguyễn Khắc Nghĩa áp dụng toán học thống kê để xử lý số liệu thực nghiệm ĐH Vinh ... H O O C H 3C C CH3 (4) H2)HH2O H 3C CH3 (5) H 12 O COOH + H2O COOCH3 CH3OH + HCl C= O C HCl HOC C OH Sau ®ã CH3ONa HO - CH CH OH HO - CH CH2OH (6) O NaOC CHOH HOCH CH2OH (7) C H C HO C OH H CH2OH... (8): CHO CH2OH CH2OH CHOH CHOH C= O H2 A Suboxydans HOCH HOCH HOCH CHOH CHOH CHOH CHOH CH2OH CH2OH (1) CHOH HOCH CH2OH (2) H 3C (3) CH3 H 3C CH3 C H O C O H O O H2O KMnO4 H H O O H 2C H 2C COOH CH2OH... đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu ớt khơ 40 Hình S? ?c đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu ớt khơ Hình S? ?c đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu ớt tươi 41 Hình S? ?c đồ hàm lượng Vitamin C có mẫu rau ngót Hình 10 Sắc