Xác định hàm lượng axit amin tự do trong một số loài nấm nuôi cấy bằng phương pháp sắc ký lỏng hplc

TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === 664 ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Đề tài: XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG AXIT AMIN TỰ DO TRONG MỘT SỐ LOÀI NẤM NUÔI CẤY BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HPLC Giáo viên hƣớng dẫn: TH.S HOÀNG VĂN TRUNG Sinh viên thực : NGUYỄN THỊ THANH HUYỀN Lớp : 50K- Công nghệ thực phẩm Mssv : 0952040415 VINH, THÁNG 01/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÖC - NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Thanh Huyền MSSV: 0952040415 Khóa: 50 Ngành: Cơng nghệ hóa thực phẩm 1.Tên đề tài Nội dung nghiên cứu: Họ tên cán hƣớng dẫn: Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày tháng năm Ngày hoàn thành đồ án Ngày tháng năm Ngày tháng năm : Chủ nhiệm môn Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) (Ký, ghi rõ họ, tên) Sinh viên hoàn thành nộp đề tài tốt nghiệp trƣớc ngày tháng năm Ngƣời duyệt (ký, ghi rõ họ, tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP - TỰ DO - HẠNH - PHÚC BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Thanh Huyền Khóa: 50 MSSV: 0952040415 Ngành: Công nghệ thực Phẩm Cán hƣớng dẫn: Cán duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: Nhận xét cán hƣớng dẫn: Ngày tháng Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) năm BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP - TỰ DO - HẠNH – PHÚC BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Thanh Huyền Khóa: 50 MSSV: 0952040415 Ngành:Cơng nghệ thực Phẩm Cán hƣớng dẫn: Cán duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: Nhận xét cán duyệt : Ngày tháng năm Cán duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung LỜI CẢM ƠN Khóa luận đƣợc thực phịng thí nghiệm Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trƣờng, Trƣờng Đại học Vinh Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn đến thầy giáo Th.s Hồng Văn Trung - Khoa Hóa, Trƣờng Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hƣớng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi suốt q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn Ths Chu Thị Thanh Lâm - Khoa Hóa, Trƣờng Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi q trình thực hiện, hƣớng dẫn cách pha hóa chất cách sử dụng máy HPLC Đề tài đƣợc hoàn thành nhờ hỗ trợ kinh phí từ đề tài Nghị định thƣ hợp tác Việt Nam - Đài Loan PGS.TS Trần Đình Thắng - khoa Hóa học, trƣờng Đại Học Vinh Nhân dịp này, xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, cán khoa Hoá, trƣờng Đại học Vinh tạo điều kiện cho đƣợc học tập nghiên cứu môi trƣờng học tập khoa học, giúp cho tơi có kiến thức vững vàng trƣớc bƣớc vào đời Cuối tơi xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè – đặc biệt bạn nhóm đồ án thầy Trung hƣớng dẫn giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận Vinh, ngày 09 tháng 01 năm 2014 Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Thanh Huyền ii Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung Danh Mục từ viết tắt Ala: Alanin AQC: Aminoquinolil-nhydroxysuccinimidyl carbamat Arg: Agrinin Asp: Axit Aspartic Cys: Cystin FMOC: 9-Florenylmethyloloroformat Glu: Glutamic Gly: Glycin His: Histidin HPLC: Sắc kí lỏng hiệu cao Ile: Isoleucin Leu: Leucin Ly: Lyscin Met : Methionin OPA : Ortho-phthalaldehyd/ orthophthaldialdehyd Phe : Phenylalanin PITC : Phenyl isothiocyanat Pro : Prolin Ser : Serin Thr : Threonin Tyr : Tyrosin Val : Valin iii Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Nhiệm vụ đồ án Đối tƣợng nghiên cứu CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN Tổng quan Nấm.[14,15,21] 1.1 Giới thiệu giới nấm 1.2 Phân loại nấm 1.3 Các đặc điểm sinh học nấm 1.3.1 Đặc điểm cấu tạo tế bào 1.3.2 Đặc điểm dinh dƣỡng: Có nhóm 1.4 Thành phần dinh dƣỡng nấm 1.5 Công dụng nấm Tổng quan Protein axitamin 10 2.1 Định nghĩa phân loại protein [8,29,17] 10 2.2 Cấu tạo phân tử protein [13,16,26,27] 10 2.2.1 Thành phần nguyên tố protein 10 2.2.2 Đơn vị cấu tạo sở protein – axit amin 11 2.2.2.1 Phân loại axitamin[9,12,18,25,27,28] 11 2.2.2.2 Peptid 12 2.3 Cấu trúc phân tử protein[12,13,16,27] 13 2.3.1 Cấu trúc bậc protein 13 2.3.2 Cấu trúc bậc hai protein 13 2.3.3 Cấu trúc bậc ba protein 13 2.3.4 Cấu trúc bậc bốn protein 14 2.4 Một số tính chất hóa lý protein axit amin.[1,3,5,9,12,14,18] 14 2.4.1 Tính chất biến tính 14 iv Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hồng Văn Trung 2.4.2 Tính chất lƣỡng tính: 15 2.4.3 Tính kị nƣớc: 15 2.5 Tính chất hóa học protein axit amin.[1,3,5,9,12,14,18] 15 2.6 Chức năng, vai trò protein axit amin.[1,9,12,14] 17 2.6.1 Chức protein 17 2.6.2 Vai trò axit amin 18 2.7 Lƣợng nhu cầu axit amin cần thiết ngƣời 19 2.8 Nguồn protein axitamin [1,9] 20 2.8.1 Trong thực phẩm 20 2.8.2 Protein axit amin trong nấm 21 P hƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) xác định hàm lƣợng axit amin tự nấm.[2,3,4,10,14,15,16,18,30] 21 3.1 Cơ sở lý thuyết 21 3.2 Nguyên tắc trình sắc ký cột 22 3.3 Phân loại 23 3.4 Cấu tạo hệ thống HPLC 23 3.5 Các đại lƣợng đặc trƣng HPLC 27 3.6 Cách đo HPLC 27 CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 28 Thiết bị 28 Dụng cụ 28 Hoá chất 28 Kỹ thuật thực nghiệm 29 4.1 Chất tạo dẫn xuất 29 4.2 Chuẩn bị hóa chất phân tích 29 4.3 Chuẩn bị xử lí mẫu 30 4.4 Tiến hành phân tích máy 31 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 v Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung 3.1 Xây dựng đƣờng chuẩn biểu diễn phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ 33 3.2 Giá trị LOD, LOQ 38 3.3 Đổi đơn vị 40 3.4 Tính kết 40 3.5 Sắc đồ mẫu 48 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 4.1 Kết luận 52 4.2 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 vi Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Trị số ƣớc lƣợng đòi hỏi axit amin cần thiết (mg/kg cân nặng/ngày): 19 Bảng 3: Gradient pha động A : Pha động B 31 Bảng 4: Chƣơng trình bơm mẫu 32 Bảng 5: Sự phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ axits Aspitic: 34 Bảng 6: Giá trị LOD, LOQ axit amin Asp 38 Bảng 7: Giá trị LOD LOQ 39 Bảng 8: Đổi đơn vị 40 Bảng 9: Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm Lỗ: 41 Bảng 10: Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm 01: 42 Bảng 11: Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm 619: 43 Bảng 12: Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm 02 : 44 Bảng 13: Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm HKG401: 45 Bảng 14: Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm 621: 46 Bảng 15: Hàm lƣợng axit amin mẫu nấm HKG 406 : 47 vii Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung C = ( C0 x Vđm x f )/m Trong đó: C nồng độ axit amin có mẫu tính µg/g C0 hàm lƣợng axit amin đo đƣợc tính ppm hệ số pha lỗng f Vđm thể tích bình định mức tính ml m khối lƣợng mẫu Áp dụng công thức trên, ta tính hàm lượng axit amin mẫu nấm thu kết sau: Ta có hàm lƣợng axit amin 1g mẫu nấm Lỗ nhƣ sau: Bảng 9: Hàm lượng axit amin mẫu nấm Lỗ: TT Axit amin Diện tích Hàm lƣợng C (μg/g) ppm Asp - - Glu 5491.36914 12.25883 122.58832 Ser 2473.07471 2.83271 28.32708 His - - - Gly - - - Thr 1.12021x 104 14.86960 148.69600 Ala 2115.60400 2.14129 21.41295 Arg 2510.76147 4.29585 42.95851 Tyr 900.38782 1.68213 16.82138 10 Cys-SS-Cys 3248.15186 11.51328 115.13288 11 Val - - - 12 Met 2984.53589 4.12373 41.23728 41 - Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung 13 Phe 1696.33459 2.64661 26.46614 14 Ile 1.71013x 104 25.46835 254.68349 15 Leu - - - 16 Lys 3722.83276 16.79515 167.95149 17 Pro 1301.58557 2.80958 28.09583 101.43711 1014.37135 Tổng Tƣơng tự ta có hàm lƣợng axit amin 1g mẫu nấm 01 nhƣ sau: Bảng 10: Hàm lượng axit amin mẫu nấm 01: TT Axit amin Hàm lƣợng Diện tích C (μg/g) ppm Asp - - - Glu 3553.24902 7.71428 77.14281 Ser 298.30981 0.18210 1.82101 His 0.78672 7.86719 Gly - - - Thr 1.02836x104 13.63619 136.36187 Ala 1152.90393 1.09069 10.90696 Arg 1142.80457 1.66317 16.63174 Tyr 1.22509 x 104 26.51774 265.17743 10 Cys-SS-Cys 2305.71191 8.13598 81.35980 11 Val - - - 12 Met 3961.96924 5.60563 56.05633 353.70764 42 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung 13 Phe 1047.54346 1.00576 10.05759 14 Ile 4829.39111 7.11872 71.18726 15 Leu 1313.25476 1.52584 15.25843 16 Lys 2544.44287 11.38217 113.82177 17 Pro 2305.22266 4.95392 49.53929 91.31891 913.18948 Tổng Tƣơng tự ta có hàm lƣợng axit amin 1g mẫu nấm 619 nhƣ sau: Bảng 11: Hàm lượng axit amin mẫu nấm 619: TT Axit amin Hàm lƣợng Diện tích C (μg/g) ppm Asp - - - Glu 4966.17285 11.02734 110.27340 Ser 691.79419 0.61906 6.19065 His 846.43005 2.01861 20.18614 Gly - - - Thr 1.59974 x 104 20.59524 205.95242 Ala 1452.35388 1.41748 14.17487 Arg 1570.97449 2.48684 24.86842 Tyr 1.55772 x 104 33.79601 337.96015 10 Cys-SS-Cys 4029.15576 14.31207 143.12077 11 Val - - - 12 Met 3741.66895 5.27163 52.71632 43 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung 13 Phe 1473.07800 2.08197 20.81976 14 Ile 1.42128 x 10 21.14928 211.49282 15 Leu - - - 16 Lys 4538.06055 20.53992 205.39923 17 Pro 1.31125 x 104 28.04451 280.44512 163.41996 1613.60007 Tổng Tƣơng tự ta có hàm lƣợng axit amin 1g mẫu nấm 02 nhƣ sau: Bảng 12: Hàm lượng axit amin mẫu nấm 02 : TT Axit amin Hàm lƣợng Diện tích C (μg/g) ppm Asp - - - Glu 2554.15869 5.37159 53.71588 Ser 575.80023 0.47491 4.74916 His - - - Gly - - - Thr 6105.16797 8.02496 80.24964 Ala 934.53876 0.85239 8.52390 Arg - - - Tyr 6545.24023 14.03343 140.33431 10 Cys-SS-Cys 817.55975 2.80307 28.03070 11 Val 1121.85535 1.14880 11.48803 12 Met 301.93280 0.05658 0.56581 13 Phe - - - 44 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung 14 Ile 4243.44971 6.24261 62.42598 15 Leu - - - 16 Lys 1905.22791 8.44592 84.45923 17 Pro 2510.32520 5.39214 53.92146 51.6976 516.97607 Tổng Tƣơng tự ta có hàm lƣợng axit amin 1g mẫu nấm HKG401 nhƣ sau: Bảng 13: Hàm lượng axit amin mẫu nấm HKG401: TT Axit amin Hàm lƣợng Diện tích C (μg/g) ppm Asp - - - Glu 5661.01270 12.65661 126.56617 Ser 984.85651 0.98326 9.83261 His 552.76971 1.28441 12.84410 Gly - - - Thr 9714.69434 12.87219 128.72194 Ala 2254.25171 2.29260 22.92602 Arg 2354.31274 3.99470 39.94700 Tyr 1.31903 x 104 28.57320 285.73203 10 Cys-SS-Cys 4850.88037 17.25679 172.56792 11 Val - - - 12 Met 705.88513 0.66902 6.69022 13 Phe 1096.54224 1.12968 11.29680 14 Ile 1.31731 x 104 19.59461 195.94614 45 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung 15 Leu - - - 16 Lys 3853.28589 17.39439 173.94390 17 Pro 1.49754 x 104 32.02469 320.24693 151.87495 1368.78499 Tổng Tƣơng tự ta có hàm lƣợng axit amin 1g mẫu nấm 621 nhƣ sau: Bảng 14: Hàm lượng axit amin mẫu nấm 621: TT Axit amin Hàm lƣợng Diện tích C (μg/g) ppm Asp - - - Glu 665.42358 0.94283 9.42836 Ser 1258.28833 1.32306 13.23062 His - - - Gly - - - Thr 666.63403 0.72156 7.21562 Ala 287.87149 0.14668 1.46681 Arg 878.49219 1.15387 11.53874 Tyr 1650.09998 3.32255 33.22555 10 Cys-SS-Cys 463.92770 1.15358 11.53580 11 Val 267.58112 8.61184 x 10-3 0.08612 12 Met 687.11639 0.66005 6.60056 13 Phe 1261.94849 1.54801 15.48010 14 Ile 1000.27417 1.39324 13.93241 15 Leu 476.65533 0.31261 3.12617 46 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung 16 Lys 2136.96606 9.51042 95.10419 17 Pro 817.79559 1.77593 17.75929 23.97300 239.62880 Tổng Tƣơng tự ta có hàm lƣợng axit amin 1g mẫu nấm HKG 406 nhƣ sau: Bảng 15: Hàm lượng axit amin mẫu nấm HKG 406 : TT Axit amin Hàm lƣợng Diện tích C (μg/g) Ppm Asp - - - Glu 6407.60889 14.40725 144.07255 Ser 920.31445 0.90305 9.03052 His 1200.22498 2.90316 29.03165 Gly - - - Thr 1.55600 x 104 20.72185 207.21858 Ala 3082.51001 3.19648 31.96485 Arg 2186.22827 3.67115 36.71153 Tyr 1.02459 x 104 22.14075 221.40750 10 Cys-SS-Cys 380.51520 1.23688 12.36886 11 Val 534.35742 0.36467 3.64676 12 Met 2610.93677 3.55730 35.57308 13 Phe 1571.32471 2.33045 23.30453 14 Ile 8599.75391 12.75636 127.56359 15 Leu 467.97165 0.30002 3.00024 16 Lys 2702.76172 12.10942 121.09421 47 Đồ án tốt nghiệp 17 GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung Pro 5236.95605 Tổng 11.21780 112.17799 111.81659 1118.16644 3.5 Sắc đồ mẫu Nấm Lỗ Hình 14: Sắc kí đồ mẫu nấm Lỗ Mẫu 01: 48 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hồng Văn Trung Hình 15: Sắc kí đồ mẫu nấm 01 Mẫu 02: Hình 16: Sắc kí đồ mẫu nấm 02 49 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hồng Văn Trung Mẫu HKG 406: Hình 17:Sắc kí đồ mẫu nấm HKG 406 Mẫu HKG 401: Hình 18: Sắc kí đồ mẫu nấm HKG 401 50 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung Mẫu 621: Hình 19: Sắc kí đồ mẫu nấm 621 Mẫu 619: Hình 20: Sắc kí đồ mẫu nấm 619 51 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Sau hồn thành khóa luận, tơi thu đƣợc kết sau: - Đã xây dựng đƣợc phƣơng trình đƣờng chuẩn 17 loại axit amin - Phát thấy hàm lƣợng 17 loại axit amin có 7/8 loại axit amin thiết yếu cần thiết cho ngƣời lớn Hàm lƣợng axit amin tƣơng đối lớn Nhìn chung, mẫu nấm có hàm - lƣợng axit amin tự lớn là: nấm Lỗ, nấm HKG 406, nấm 619 nấm HKG 401:  Tổng lƣợng axit amin có mẫu nấm Lỗ: 1014,37135 µg/g  Tổng lƣợng axit amin có mẫu nấm HKG 406: 1118.16644 µg/g  Tổng lƣợng axit amin có mẫu nấm HKG 401: 1368.78499 µg/g  Tổng lƣợng axit amin có mẫu nấm 619: 1613.6007 µg/g Tyrosine loại axit amin chiếm lƣợng lớn đa số mẫu nấm: - + Nấm 01: 265.17743 µg/g + Nấm 02: 140.33431 µg/g + Nấm HKG 401: 285.73203 µg/g + Nấm 619: 337.96015 µg/g + Nấm HKG 406: 221.40750 µg/g 4.2 Kiến nghị Nếu có thể, đề nghị cho máy chạy thử dẫn xuất AQC (Aminoquinolilnhydroxysuccinimidyl carbamat) PITC (Phenyl isothiocyanat) để xác định đầy đủ 17 loại axit amin có nấm Linh Chi xác định xác nồng độ có mặt axit amin xuất Píc sắc ký Mong muốn đƣợc tiếp tục nghiên cứu đánh giá thành phần axit amin nhiều loại nấm Linh Chi khác để khẳng định đƣợc giá trị loại nấm dƣợc liệu 52 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt: 53 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung Hoàng Kim Anh Hóa học thực phẩm NXB Khoa học kỹ thuật Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng cộng (1985) Các phương pháp sắc ký Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hoàng Minh Châu, Từ Vọng Nghi, Từ Văn Mặc Cơ sở hóa học phân tích Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật Nguyễn Đức Lƣơng, Thí Nghiệm cơng nghệ sinh học, Nhà xuất Đại hoc Quốc Gia TP Hồ Chí Minh Lê Ngọc Tú, Hóa sinh cơng nghiệp, Nhà xuất Khoa Học Kỹ thuật Trần Bích Lam, Thì nghiệm hóa sinh thực phẩm, Nhà xuất Đại hoc Quốc Gia TP Hồ Chí Minh Nguyễn Quang Vinh (2004), Thực tập hóa sinh học, Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội Hà Huy Khôi (2004), Những đường biên dinh dưỡng học, Nhà xuất y học Nguyễn Trung Nhuần, Phạm Thị Thu (2002), Bách khoa dinh dưỡng, Nhà xuất phụ nữ Hà Nội, trang 28 -52 10 Phạm Luận (1999), Cơ sở lý thuyết sắc kí lỏng hiệu cao, Khoa Hóa học, Trƣờng Đại học Tổng hợp Hà Nội 11 Bùi Văn Sổ, Bùi Thị Nhƣ Thuận (1978), Kiểm nghiệm lương thực thực phẩm, Nhà xuấtt Khoa học Kĩ thuật – Hà Nội trang 128 – 183 12 Nguyễn Hữu Nhân, Dinh dưỡng học, Nhà xuất nông nghiệp, trang 44 – 49 13 Lê Ngọc Tú, Hóa sinh cơng nghiệp, Nhà xuất Khoa học Kĩ thuật, trang 92 – 124 14 Nguyễn Lân Dũng, 2002, Công nghệ nuôi trồng nấm – tập 1,2, Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội 15 Lê Duy Thắng (1999) Kĩ thuật trồng nấm – Tập 1: Nuôi trồng số nấm ăn thong dụng Việt Nam Nhà xuất Nơng nghiệp, TP Hồ Chí Minh Tiếng Anh 16 Kenneth J Carpenter (1994), protein and energy, Cambridge university press, p 119 – 177 17 Judy A White and R J Hart, HPLC Analysis of aminoacid 18 I Molnar-Per (2000), Role of chromatography in the analysis of sugar, carboxylic acids and amino acid in food, Journal of Chromatography A, 891, p - 32 54 Đồ án tốt nghiệp GVHD: Th.S Hoàng Văn Trung 19 Moore, S.Stein, W.H (1948) Phorimatric ninhydrin method for use in the chromatography of amino acid, journal of Biological Chemistry 176, p.367-388 20 Moore, S.Stein, W.H (1948) Amodified nihydrin reagent for the photometric determinanation of amino acid and related compounds, journal of Biological Chemistry 211, p/907 – 913 Trang Web: 21 http://tusach.thuvienkhoahoc.com 22 http://www.hoahocvietnam.com 23 http://www Namlinhchi.com 24 http://chemistry.about.com 25 http://www.ebook.edu.vn 26 http://tailieu.vn 27 http://chemistry.about.com/z/js/o.htm?k=protein%20amino%20acids&d=protein%2 0Amino%20Acids 28 http://www.ebook.edu.vn/?page=1.18&view=6449 29 http://tailieu.vn/xem-tai-lieu/phan-loai-cac-acid-amin.280102.html 30 http://www.biology.arizona edu/biochemistry/problem_sets/aa/aa.html 31 duocpham.vn 32 http://www.moon.vn/baigiang/LyThuyet.aspx?ChuyenDeID=402&SubjectID=3 33 http://www.genome.jp/kegg/pathway/map/map00280.html 34 http://www.vca.gov.vn/Web/Content.aspx?distid=2454&lang=vi-VN 55 ... protein axitamin [1,9] 20 2.8.1 Trong thực phẩm 20 2.8.2 Protein axit amin trong nấm 21 P hƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) xác định hàm lƣợng axit amin tự nấm. [2,3,4,10,14,15,16,18,30]... sắc ký cột thành phƣơng pháp phân tích có tốc độ nhanh hiệu suất cao Xuất phát từ thực tế đó, lựa chọn đề tài nghiên cứu: ? ?Xác định hàm lượng axit amin tự số loài nấm nuôi cấy phương pháp sắc ký. .. nấm P hương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) xác định hàm lượng axit amin tự nấm. [2,3,4,10,14,15,16,18,30] 3.1 Cơ sở lý thuyết HPLC viết tắc chữ đầu tiếng anh phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp (high