Khảo sát điều chế và một số chỉ tiêu chất lượng cao khô Hà thủ ô đỏ chế bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  SENGKHAM CHOUMLIVONG KHẢO SÁT ĐIỀU CHẾ VÀ MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CAO KHÔ HÀ THỦ Ô ĐỎ CHẾ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC Ký LỚP MỎNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2019 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI  SENGKHAM CHOULIVONG MÃ SINH VIÊN: 1401062 KHẢO SÁT ĐIỀU CHẾ VÀ MỘT SỐ CHỈ TIÊU CHẤT LƯỢNG CAO KHÔ HÀ THỦ Ô ĐỎ CHẾ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC Ký LỚP MỎNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Phạm Thái Hà Văn Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền – Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình làm khóa luận tốt nghiệp em nhận nhiều giúp đỡ từ gia đình thầy cơ, bạn bè Đầu tiên, em xin dành lời cảm ơn sâu sắc tới Đảng Chính phủ nước Cộng hòa Dân chủ Nhân dân Lào Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam tạo điều kiện cho em học tập có điều kiện tham gia nghiên cứu khoa học, thực đề tài suốt thời gian vừa qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Phạm Thái Hà Văn, người thầy tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện tốt trực tiếp giúp đỡ em suốt thời gian làm khóa luận Em xin gửi đến Bộ môn Dược học cổ truyền biết ơn cho em hội học dược thực tập hồn thành khóa luận mơn Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới người thân yêu gia đình Bố Mẹ, cảm ơn bạn bè – người sát cánh, động viên, giúp đỡ thời gian học tập làm khóa luận Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2019 Sinh viên Sengkham CHOUMLIVONG MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Hà thủ ô đỏ 1.1.1 Vị trí phân loại đặc điểm thực vật Hà thủ ô đỏ 1.1.2 Bộ phận dùng cách chế biến 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Tác dụng dược lý công dụng 1.2 Kỹ thuật sắc ký lớp mỏng kết hợp quét hình ảnh (TLC-videoscan) 1.2.1 Nguyên tắc 1.2.2 Các đại lượng đặc trưng 1.2.3 Ứng dụng phân tích thành phần hóa học cao chiết Hà thủ đỏ 10 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị nghiên cứu 12 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 12 2.1.2 Thiết bị hóa chất 12 2.2 Nội dung nghiên cứu 13 2.3 Phương pháp nghiên cứu 13 2.3.1 Phương pháp điều chế cao khô Hà thủ ô đỏ 13 2.3.2 Phương pháp định tính 14 2.3.3 Phương pháp bán định lượng emodin cao khô Hà thủ ô đỏ 16 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Hiệu suất số tiêu cảm quan cao khô Hà thủ ô đỏ 20 3.1.1 Các tiêu cảm quan: 20 3.1.2 Hiệu suất điều chế cao khô Hà thủ ô đỏ 20 3.2 Kết định tính chất có dược liệu Hà thủ đỏ điều kiện chiết xuất khác 23 3.3 Thẩm định phương pháp định lượng 25 3.3.1 Kết khảo sát độ thích hợp hệ thống 25 3.3.2 Kết khảo sát khoảng tuyến tính emodin 26 3.3.3 Độ lặp lại 28 3.4 Kết định lượng emodin cao Hà thủ ô đỏ 29 3.5 Kết tách chất có mẫu cao 29 BÀN LUẬN 32 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DL: Dược liệu DM: Dung môi EtOH: Ethanol HPTLC: High Performance Thin Layer Chromatography MeOH: Methanol MS: Mẫu sống NH3: Amoniac SKLM: Sắc ký lớp mỏng TLC: Thin Layer Chromatography DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần hóa học xác định dược liệu Hà thủ đỏ Bảng 2.1 Hố chất, dung môi 12 Bảng 2.2 Thiết kế thí nghiệm khảo sát quy trình chiết xuất 14 Bảng 2.3 Thể tích vết chấm mẫu định tính 15 Bảng 2.4 Thể tích vết chấm mẫu bán định lượng 16 Bảng 3.1 Kết tiêu cảm quan mẫu cao khô Hà thủ ô đỏ 20 Bảng 3.2 Hiệu suất quy trình điều chế cao khơ Hà thủ ô đỏ với điều kiện chiết xuất khác (%) 21 Bảng 3.3 Chỉ tiêu hàm ẩm cao Hà thủ ô đỏ 22 Bảng 3.4 Thứ tự vết mỏng định tính 23 Bảng 3.5 Kết định tính pic sắc ký 10 mẫu cao chiết 24 Bảng 3.6 Nồng độ emodin chuẩn diện tích pic đáp ứng 26 Bảng 3.7.Kết bán định lượng emodin mẫu cao Hà thủ đỏ 29 DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Đặc điểm thực vật lồi Hà thủ đỏ Fallopia multiflora (Thunb) Hình 3.1 Cao khô Hà thủ ô đỏ sau điều chế 20 Đồ thị 3.1.Hiệu suất điều chế cao khô Hà thủ ô đỏ điều kiện khác 21 Hình 3.2 Sắc ký đồ định tính mẫu cao chiết Hà thủ đỏ bước sóng 366 nm 23 Hình 3.3 Sắc ký đồ khảo sát độ thích hợp hệ thống 25 Hình 3.4 Kết xây dựng đường chuẩn từ dãy nồng độ khảo sát 26 Hình 3.5 Hình ảnh sắc ký đồ khảo sát nồng độ tuyến tính emodin 27 Hình 3.6 Sắc ký đồ khảo sát độ lặp lại…………………………………………28 Hình 3.7 Sắc ký đồ tách chất mẫu M4 mỏng 254 nm 30 Hình 3.8 Sắc ký đồ tách chất mẫu M4 mỏng 366 nm 30 ĐẶT VẤN ĐỀ Từ thời xa xưa, ơng cha ta có câu: “Muốn cho xanh tóc, đỏ da Rủ lên núi, hái hà thủ ô” Câu ca dao nói lên phần cơng dụng tuyệt vời hà thủ việc điều hồ khí huyết, bổ thần kinh, giúp đen tóc đẹp da, trì nét xn cho người Hà thủ đỏ xem thảo dược quý giá Đông y với nhiều tên gọi khác hợp, giao đằng, Bộ phận dùng phần rễ củ, có tác dụng bổ máu, trị di tinh, đới hạ, thần kinh suy nhược, sốt rét, bổ gan thận, đen râu tóc, Bộ phận mặt đất có tác dụng dưỡng tâm an thần, dưỡng huyết hoạt lạc, Trong dân gian, người ta thường sử dụng Hà thủ ô đỏ dạng chế, phương pháp truyền thống ghi nhiều tài liệu cổ truyền thống Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Cây cỏ Việt Nam, Vị thuốc Hà thủ đỏ chế biến cách ngâm với nước vo gạo nấu với nước đậu đen Ngồi ra, nhiều phương pháp chế biến khác nghiên cứu Để đánh giá chất lượng sản phẩm cao khô Hà thủ ô đỏ sau chế biến, cần thiết phải thực chiết xuất định lượng thành phần quan trọng sản phẩm sau chế biến Sắc ký lớp mỏng phương pháp phân tích đơn giản hiệu quả, phân tích dược liệu Ngày nay, nhờ thiết bị máy móc đại, phương pháp sắc ký lớp mỏng ngày hiệu điều kiện chạy sắc ký chuẩn hóa Trong khn khổ đề tài này, chúng tơi tiến hành nghiên cứu “Khảo sát điều chế số tiêu chất lượng cao khô hà thủ ô đỏ chế phương pháp sắc ký lớp mỏng ” với mục tiêu sau: (i) Điều chế cao khô Hà thủ ô đỏ chế (ii) Khảo sát định tính bán định lượng emodin cao khô Hà thủ ô đỏ chế với phương pháp sử dụng dung môi chiết khác phương pháp sắc ký lớp mỏng CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Track Sample b Profile height 4000 3000 2000 1000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Rf distance down track User: ST va chuan Signature : Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Track Sample c Profile height 4000 3000 2000 1000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Rf distance down track User: ST va chuan Signature : Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 10 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Track Sample d Profile height 4000 3000 2000 1000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Rf distance down track User: ST va chuan Signature : Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 11 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Track 10 Sample e Profile height 4000 3000 2000 1000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Rf distance down track Track 10 Sample e Peak # Start Rf H 0.533 630.9 Total Height 1689.38 User: ST va chuan Signature : Rf Max H 0.565 1689.4 Total Area : 46695 End [%] Rf 100.00 0.602 area H 118.3 A [%] Subst Name 46695.0 100.00 emodin Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 12 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Track 11 Sample f Profile height 4000 3000 2000 1000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Rf distance down track Track 11 Sample f Peak # Start Rf H 0.561 428.8 Total Height 462.115 User: ST va chuan Signature : Rf Max H End [%] 0.563 462.1 100.00 Total Area : 4622.5 Rf 0.581 area H 132.2 A [%] Subst Name 4622.5 100.00 emodin Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 13 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Track 12 Sample g Profile height 4000 3000 2000 1000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Rf distance down track Track 12 Sample g Peak # Start Rf H Rf Max H 0.557 833.2 0.564 844.5 Total Height 844.5 Total Area : 10749 User: ST va chuan Signature : End [%] Rf 100.00 0.578 area H 261.5 A [%] Subst Name 10749.0 100.00 emodin Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 14 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Track 13 Sample h Profile height 4000 3000 2000 1000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Rf distance down track Track 13 Sample h Peak # Start Rf H 0.566 624.5 Total Height 647.571 User: ST va chuan Signature : Rf Max H End [%] 0.567 647.6 100.00 Total Area : 2227.63 Rf 0.571 area H 447.5 A [%] Subst Name 2227.6 100.00 emodin Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 15 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Track 14 Sample i Profile height 4000 3000 2000 1000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Rf distance down track Track 14 Sample i Peak # Start Rf H Rf Max H End [%] 0.564 1208.8 0.564 1208.8 100.00 Total Height 1208.83 Total Area : 14269.3 User: ST va chuan Signature : Rf 0.593 area H 177.4 A [%] Subst Name 14269.3 100.00 emodin Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 16 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Track 15 Sample j Profile height 4000 3000 2000 1000 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 Rf distance down track Track 15 Sample j Peak # Start Rf H 0.551 969.4 Total Height 1442.55 User: ST va chuan Signature : Rf Max H End [%] 0.563 1442.6 100.00 Total Area : 24839.2 Rf 0.581 area H 443.7 A [%] Subst Name 24839.2 100.00 emodin Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 17 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Calibration parameters Calibration method LINEAR REGRESSION Internal standard NO Sub component analysis NO Standard amounts Standard Substance Amount Standard emodin ug emodin ug emodin ug emodin ug emodin 10 ug Standard Standard Standard Standard User: ST va chuan Signature : Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 18 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Calibration results Height calibration for substance: emodin 4000 3000 2000 1000 0 1.9 10.5 LINEAR REGRESSION Calibration method This calibration is based on standards Calibration equation (Y = height/area, X = amount detected (ug)) Y = 1.44e+003 +304 * x sdv = 6.20 Area calibration for substance: emodin 100000 80000 60000 40000 20000 0 1.9 10.5 LINEAR REGRESSION Calibration method This calibration is based on standards Calibration equation (Y = height/area, X = amount detected (ug)) Y = 3.03e+004 +8.98e+003 * x sdv = 3.81 User: ST va chuan Signature : Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 19 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Results per track Substance : emodin Track SI Rf 10 11 12 13 14 15 a b c d e f g h i j 0.573 0.567 0.565 0.561 0.560 0.563 0.565 0.563 0.564 0.567 0.564 0.563 User: ST va chuan Signature : Amount Dimension : ug p.dev.range : % H (calc) A (calc) 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 3.3 4.1 No peak detected or peak deleted by user No peak detected or peak deleted by user No peak detected or peak deleted by user < 1.9 < 1.9 < 1.9 < 1.9 < 1.9 < 1.9 < 1.9 < 1.9 < 1.9 < 1.9 < 1.9 < 1.9 Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 20 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Image document data File Created by Generated on ID E:\ha_thu_o_do_thVan\sengkham\cham15vet_1_254_2_40microlit_lan4.cpf BM.DHCT Tuesday, May 07, 2019 02:46:55 PM Calibration parameters Calibration method LINEAR REGRESSION Internal standard NO Sub component analysis NO Sample index a : MS Analysis by height replica on tracks ( ) Substance emodin Rf 0.563 Mean CV (%) n Method Comment 3.29 ug Sample index a : MS Analysis by area replica on tracks ( ) Substance emodin Rf 0.563 Mean CV (%) n Method Comment 4.09 ug Sample index b : M1 Analysis by height replica on tracks ( ) Substance emodin Rf Mean ?.?? ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index b : M1 Analysis by area replica on tracks ( ) Substance emodin Rf Mean ?.?? ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index c : M2 Analysis by height replica on tracks ( ) Substance emodin Rf Mean ?.?? ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index c : M2 Analysis by area replica on tracks ( ) Substance emodin Rf Mean ?.?? ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index d : M3 Analysis by height replica on tracks ( ) Substance emodin Rf Mean ?.?? ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index d : M3 Analysis by area replica on tracks ( ) Substance emodin Rf Mean ?.?? ?.??? ug User: ST va chuan Signature : CV (%) n Method Comment Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 21 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Sample index e : M4 Analysis by height replica on tracks ( 10 ) Substance emodin Rf Mean 0.565 ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index e : M4 Analysis by area replica on tracks ( 10 ) Substance emodin Rf Mean 0.565 ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index f : M5 Analysis by height replica on tracks ( 11 ) Substance emodin Rf Mean 0.563 ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index f : M5 Analysis by area replica on tracks ( 11 ) Substance emodin Rf Mean 0.563 ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index g : M6 Analysis by height replica on tracks ( 12 ) Substance emodin Rf Mean 0.564 ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index g : M6 Analysis by area replica on tracks ( 12 ) Substance emodin Rf Mean 0.564 ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index h : M7 Analysis by height replica on tracks ( 13 ) Substance emodin Rf Mean 0.567 ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index h : M7 Analysis by area replica on tracks ( 13 ) Substance emodin Rf Mean 0.567 ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index i : M8 Analysis by height replica on tracks ( 14 ) Substance emodin Rf Mean 0.564 ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index i : M8 Analysis by area replica on tracks ( 14 ) Substance emodin Rf Mean 0.564 ?.??? ug User: ST va chuan Signature : CV (%) n Method Comment Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 22 CAMAG VideoScan TLC/HPTLC Evaluation Software - Version 1.02.00 - Serial No 1909D004 C AMAG LAB O R AT O R IES This heading can be changed by the user Sample index j : M9 Analysis by height replica on tracks ( 15 ) Substance emodin Rf Mean 0.563 ?.??? ug CV (%) n Method Comment Sample index j : M9 Analysis by area replica on tracks ( 15 ) Substance emodin Rf Mean 0.563 ?.??? ug User: ST va chuan Signature : CV (%) n Method Comment Created: Friday, May 24, 2019 08:54:37 AM ID : 2284399632 Printed: Friday, May 24, 2019 08:55:20 AM : Page 23 ... tiêu sau: (i) Điều chế cao khô Hà thủ ô đỏ chế (ii) Khảo sát định tính bán định lượng emodin cao khô Hà thủ ô đỏ chế với phương pháp sử dụng dung môi chiết khác phương pháp sắc ký lớp mỏng CHƯƠNG... Dược Hà Nội,Việt Nam Toluen Việt Nam 2.2 Nội dung nghiên cứu - Điều chế cao khô Hà thủ ô đỏ - Xác định tiêu chất lượng cao khô Hà thủ ô đỏ cảm quan - Xác định tiêu chất lượng cao khô Hà thủ ô đỏ. .. đỏ - Khảo sát định tính bán định lượng emodin cao khô Hà thủ ô đỏ chiết với phương pháp sử dụng dung môi chiết khác phương pháp sắc ký lớp mỏng 2.2.1 Phương pháp điều chế cao khô Hà thủ ô đỏ 2.2.1.1