TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ BỘ MÔN DƯỢC LIỆU- DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN -- BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU DƯỢC LIỆU CHỨA GLYCOSID TIM GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN: ThS Đỗ Văn Mãi TIỂU NHĨM – LIÊN THƠNG CĐ-ĐH DƯỢC 13A Nguyễn Lê Nhật Linh Hồ Linh Phương Trần Ngọc Thiên Vy Đỗ Công Hậu Đặng Thị Thùy Dung Dương Thị Ngọc Em Cần Thơ, 2019 Thực hành Dược liệu A B4_TN2_LTCĐ-ĐH D13A CƠ SỞ LÝ THUYẾT Glycosid tim nhóm hợp chất có cấu tạo đặc trưng có tác dụng đặc hiệu tim theo quy tắc 3R Potair Cấu tạo chung glucosid tim gồm phần: - Phần đường: đường gặp glycosid tim đường hexose pentose thông thường (như glucose, rhamnose…) hay đường desoxy thường gặp glycosid tim (đường 2-desoxy, 2,6-desoxy hexose) - Phần aglycon gồm có phần: Khung hydrocarbon có cấu trúc steroid (nhân androstan) Vòng lacton hay cạnh gắn vào vị trí C17 (hướng β) khung Các phản ứng định tính glycosid tim chủ yếu thực phần đường 2-desoxy vòng lacton cạnh - Phản ứng với phần đường 2-desoxy nhân steroid tiến hành môi trường acid - Phản ứng với vòng lacton cạnh thường thực mơi trường kiềm Thuốc thử cho phản ứng thường dẫn chất nitro thơm Các glycosid tan cồn, nước nóng; tan dung mơi phân cực, tính tan dạng aglycon ngược với tính tan dạng glycosid Trong định tính, chiết glycosid tim phương pháp sau: - Chiết cồn thấp độ (25%) ngâm qua đêm - Chiết cồn cao độ, thu hồi dung mơi, hồ tan cao cồn cồn thấp độ Các tạp chất ảnh hưởng tới định tính thường loại dung dịch chì acetat B 1.1 NỘI DUNG THỰC HÀNH Nguyên vật liệu thí nghiệm Dung mơi, hóa chất thuốc thử - Cồn 25%, cồn 96% - DCM - Dung dịch chì acetat 30% - Dung dịch natri sulfat 15% - H2SO4 đậm đặc - Anhydrid acetic - Dung dịch NaOH 10% cồn - Thuốc thử Xanthydrol - Thuốc thử Keller-Kiliani - Thuốc thử Raymond – Marthoud - Thuốc thử Kedde - Thuốc thử Legal - Thuốc thử Baljet Thực hành Dược liệu 1.2 B4_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Dược liệu Trúc đào (Folium Nerii) trúc đào (Nerium oleander L., Apocynaceae) Chiết xuất glycosid tim từ trúc đào BM chuẩn bị sẵn dịch chiết từ 5g bột Trúc đào chiết ethanol 25% Lấy 30ml dịch chiết trúc đào vào cốc 1, thêm 10ml dung dịch chì acetat 30% khuấy kỹ, để lắng 10 - 15 phút lọc qua giấy lọc cho vào cốc (khoảng 20ml) Kiểm tra việc loại tạp nhỏ thêm vào dịch lọc cốc 2, giọt dung dịch chì acetat, có xuất tủa phải cho thêm dung dịch chì acetat vào dịch lọc lọc lại Loại chì acetat thừa cách cho 10ml dung dịch natri sulfat 15% vào cốc 2, khuấy kỹ để yên 3- phút lọc qua vào cốc (khoảng 15ml) Kiểm tra lại cách nhỏ giọt natri sulfat 15% vào dịch lọc cốc 3, có xuất tủa phải cho thêm dung dịch natri sulfat 15% vào dịch lọc lọc lại Cho 15ml dịch lọc cốc vào bình lắng gạn, lắc với dung dịch DCM lần, lần 10ml Sau để yên, lọc lấy dịch lớp vào erlen khô bọc lại màng bọc thực phẩm Thực hành Dược liệu B4_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Làm khan dịch lọc Na2SO4 khan, cho ¼ muỗng Na2SO4 khan vào dịch lọc nghiên nhẹ thấy có vài hạt muối rời rạc dịch lọc khơng thấy tiếp tục cho thêm từ từ muối đến Chia dịch lọc làm khan vào ống nghiệm (đánh số 1–2–3–4–5-6 ) Đem ống nghiệm (1 – – – 4) đun cách thủy cắn khơ 3.1 Các phản ứng định tính glycosid tim Phản ứng Liebermann – Burchard Cho 1ml anhydrid acetic vào ống nghiệm ống có chứa sẵn 1ml dung dịch glycosid tim CHCl3, lắc Để ống nghiệm nghiêng vào giá, cho nhẹ nhàng theo thành ống nghiệm khoảng 1ml acid sulfuric đậm đặc, để yên (không lắc ống) Thực hành Dược liệu B4_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Mô tả: hai lớp thuốc thử có xuất vòng ngăn cách, sát phía vòng có màu hồng, phía vòng có màu xanh Nhận xét: phản ứng dương tính Kết luận: Dịch chiết có khung steroid 3.2 Phản ứng Baljet Cho 1ml thuốc thử Baljet ( 10 giọt Baljet + 10 giọt Baljet 2) vào ống nghiệm ống có chứa cắn glycoside tim, lắc ống 1’ làm ống chứng chứa thuốc thử Baljet Mô ống đỏ tả: dung dịch xuất màu cam đậm so với ống chứng ống 1’ Nhận xét: phản ứng dương tính Kết luận: Dịch chiết có vòng lacton 3.3 Phản ứng Legal Cho vào ống nghiệm ống có chứa cắn glycoside tim ống chứng ống 2’ lần lượt: giọt cồn 96% để hồ tan cắn, thêm vào giọt dung dịch NaOH 10% cồn, them tiếp giọt dung dịch natri nitroprussiat 0,5% Thực hành Dược liệu B4_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Mô tả: dung dịch ống xuất màu cam đậm ống chuẩn 2’ Nhận xét: phản ứng dương tính Kết luận: Dịch chiết có vòng lacton 3.4 Phản ứng Keller – Kiliani Cho vào ống nghiệm ống có chứa cắn glycosid tim 1ml thuốc thử Keller, khuấy kỹ cho tan Thêm nhẹ nhàng 1ml thuốc thử Kiliani dọc theo thành ống nghiệm, để yên (không lắc ống) Mô tả: mặt ngăn cách lớp thuốc thử xuất vòng màu đỏ nâu có màu xanh khuếch tán dần lên lớp Nhận xét: phản ứng dương tính Kết luận: Dịch chiết có nhóm đường KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH DỊCH CHIẾT TRÚC ĐÀO Tổng hợp kết phản ứng định tính glycosid tim, Tên phản ứng Liebermann – Burchard Baljet Legal Keller – Kiliani Nhận xét dương tính dương tính dương tính dương tính Kết luận có khung steroid có vòng lacton có nhóm đường KẾT LUẬN : Dịch chiết trúc đào có chứa dược liệu glycosid tim Thực hành Dược liệu B4_TN2_LTCĐ-ĐH D13A ...Thực hành Dược liệu A B4_TN2_LTCĐ-ĐH D13A CƠ SỞ LÝ THUYẾT Glycosid tim nhóm hợp chất có cấu tạo đặc trưng có tác dụng đặc hiệu... Marthoud - Thuốc thử Kedde - Thuốc thử Legal - Thuốc thử Baljet Thực hành Dược liệu 1.2 B4_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Dược liệu Trúc đào (Folium Nerii) trúc đào (Nerium oleander L., Apocynaceae) Chiết... Sau để yên, lọc lấy dịch lớp vào erlen khô bọc lại màng bọc thực phẩm Thực hành Dược liệu B4_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Làm khan dịch lọc Na2SO4 khan, cho ¼ muỗng Na2SO4 khan vào dịch lọc nghiên nhẹ thấy