DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOID

Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ BỘ MÔN DƯỢC LIỆU- DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN -- BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOID GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN: ĐỖ NAM QUAN TIỂU NHÓM – LIÊN THÔNG CĐ-ĐH DƯỢC 13A Nguyễn Lê Nhật Linh Hồ Linh Phương Trần Ngọc Thiên Vy Đỗ Công Hậu Đặng Thị Thùy Dung Dương Thị Ngọc Em Cần Thơ, 2019 Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOID A CƠ SỞ LÝ THUYẾT Khái niệm Các alkaloid (alcaloid) base hữu thường dễ tan dung môi hữu (như ether, benzen, cloroform, aceton, methanol ethanol) Đa số alkaloid base thự tế không tan nước Một vào alkaloid có cấu trúc amonium bậc IV tan nước tan dung mơi hữu Một số alkaloid khơng có oxy tồn duới trạng thái lỏng tan nước Một số alkaloid dạng lỏng bay lôi theo nước Một số alkaloid khơng có oxy dạng rắn thăng hoa áp suất thường Một số alkaloid có OH phenol tan phần dung dịch kiềm mạnh Dưới dạng muối, alkoaloid thường tan nước, cồn (ethanol, methanol), hay hỗn hợp cồn nước; chúng không tan tan trpng dung môi hữu phân cực (ether, benzen, cloroform) Tính chất Alkaloid thường base yếu, tan cac dung môi hữu cơ, không tan nước Khi cho alkaloid tác dụng với acid thu alkaloid dạng muối Các muối alkaloid thường dễ tan nước Các muối dễ bị chất kiềm vô (NH4OH, NaOH) chí muối khác (Na 2CO3, NaHCO3) đẩy khỏi muối cho lại alkaloid base ban đầu Alkaloid phản ứng với thuốc thử chung (thuốc thử tạo tủa) tạo thành muối khó tan (dạng kết tinh hay dạng vơ định hình) ứng dụng định tính alkaloid Một số alkaloid hay nhóm alkaloid cho màu sắc đặc trưng với số thuốc thử gọi thuốc thử đặc hiệu alkaloid (thuốc thử tạo màu) ứng dụng định tính làm thuốc thử phát sắc ký Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Các phương pháp chiết xuất Trong cây, alkaloid thường tồn dạng muối hòa tan với acid hữu vô co hay dạng kết hợp với tanin Người ta chiết alkaloid khỏi nguyên liệu thực vật nhiều cách nhìn chung quy cách là: • • Chiết alkaloid khỏi dược liệu dạng alkaloid base dung môi hữu Chiết alkaloid khỏi dược liệu dạng muối dung môi phân cực (nước, cồn, hỗn hợp cồn nước bị acid hóa) Với vài alkaloid đặc biệt, người ta chiết bằng: • • Phương pháp cất kéo lôi theo nước (chiết xuất nicotin từ Thuốc lá) Phương pháp thăng hoa (chiết xuất cfein từ Trà) Dựa vào tính tan khác dạng base dạng mưới alkaloid dung mơi, người ta loại phần tạp chất khỏi dịch chiết trước địng tính, định lượng hay phân lập alkaloid tinh khiết Các quy trình thường sử dụng chiết xuất alkaloid từ nguyên liệu thực vật dùng cho định tính alkaloid Chú ý: Thể tích dung mơi chiết, thời gian chiết phương pháp thay đổi tùy thuộc vào dược liệu phương tiện sử dụng B THỰC HÀNH I Cân khoảng 3g bột dược liệu hạt Tâm sen cho vào erlen Cho tiếp vào erlen 25 ml cồn Acetic 5% Đun cách thủy 10 phút lọc qua bơng vào chén ĐỊNH TÍNH ALKALOID TRONG DƯỢC LIỆU BẰNG PHẢN ỨNG HÓA HỌC VÀ SẮC KÝ LỚP MỎNG Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Dịch chiết cồn acid vừa thu đem đun cách thủy đến cắn Thêm 10 ml nước nóng, lọc qua giấy lọc (2 lần x 10ml) Thu dịch nước acid chia làm phần PHẦN 1: Định tính alkaloid thuốc thử chung Chuẩn bị ống nghiệm, cho vào ống 2ml dịch nước acid + Ống nghiệm cho vào 03 giọt thuốc thử Bouchardat + Óng nghiệm cho vào 03 giọt thuốc thử Valse Mayer + Óng nghiệm cho vào 03 giọt thuốc thử Dragendorff Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Mô tả nhận xét: + Ống nghiệm (Thuốc thử Bouchardat): Xuất tủa màu nâu, đục Dương tính, (++) + Óng nghiệm (Thuốc thử Valse Mayer): Xuất tủa màu trắng, đục Dương tính, (++) + Ĩng nghiệm (Thuốc thử Dragendorff): Xuất tủa màu cam, đục Dương tính, (++) Kết luận: Dược liệu Tâm sen có chứa Alkaloid PHẦN 2: Định tính sắc ký lớp mỏng Đem dịch chiết nước acid kiềm hóa NH4OH đậm đặc (#03giọt) thử với pH = 10 a Chuẩn bị mẫu thử: Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Cho dịch chiết vào bình lắng gạn, chiết 10 ml CHCl (lắc mạnh)  thu dịch chiết lớp Đem đun cách thủy đến cắn b Chuẩn bị mỏng Dùng tráng sẵn silica gel, dùng bút chì 2B kẻ đường thẳng cách mép 11,5cm đường thẳng cách mép 0.5cm Đánh dấu điểm cần chấm c Chuẩn bị bình sắc ký dung mơi Bình sắc ký rửa để thật khơ Lót miếng giấy lọc quanh lòng bình sau cho có khoảng trống dọc theo bình để quan sát sắc ký bên Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Cho hệ dung môi CHCl3 - MeOH – H2O (50:09:01) vào bình sắc ký cho lớp dung mơi bình cao khoảng 0.5cm Đậy nắp bình sắc ký, đặt nơi phẳng, để n 15-30 phút cho bão hồ dung mơi d Đưa mẫu lên mỏng khai triển Dùng mao quản lấy mẫu, chấm lên mỏng thành vạch gọn cách mép mép 1-1.5cm (phải chắn vết chấm cao mức dung môi bình sắc ký) Chờ cho vết chấm bay hết MeOH, đưa mỏng vào bình sắc ký đậy nắp bình Khi dung mơi chạy cách mép khoảng 0.5cm lấy mỏng ra, để nhiệt độ phòng sấy nhẹ khơ dung mơi e Phát - Soi đèn UV254nm Thực hành Dược liệu - B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Soi đèn UV365nm - Khi soi đèn UV bước sóng 254 365 ta thấy xuất vết sắc ký Thực hành Dược liệu f B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Nhúng nhanh mỏng vào khai chứa thuốc thử Dragendorff Tính Rf : - Rf (1) = 5.8/7.5 = 0.77 Rf (2) = 5.3/7.5 = 0.71 Rf (3) = 5/ 7.5 = 0.66 Rf (4) = 4/ 7.5 = 0.53 với Rf hỗn hợp kết luận X có thành phần hỗn hợp II ĐỊNH TÍNH ALKALOID BẰNG THUỐC THỬ ĐẶC HIỆU Dược liệu hạt Mã Tiền Cân khoảng 3g bột dược liệu hạt mã tiền vào erlen Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Cho tiếp vào erlen 40 ml H2SO4 2% Đun cách thủy 15 phút lọc qua vào cốc Đem dịch chiết nước acid kiềm hóa NH4OH đậm đặc (30 – 40 giọt) thử với pH = 10 Tiếp tục cho dịch chiết vào bình lắng gạn (lăc nhẹ) chiết 20 ml CHCl3 (lấy lớp dưới) 10 Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Dịch CHCl3 thu chia làm hai phần Đun cách thủy cắn PHẦN 1: Định tính strychnin Nhỏ vào chén thứ khoảng 02 giọt H2SO4 đậm đặc dùng đũa khuấy cho tan, thả vào becher vài hạt tinh thể K2Cr2O7, dùng đũa kéo hạt tinh thể K2Cr2O7 vào chỗ có acid Xuất vệt màu tím chuyển sang hồng vàng biến thành nâu đen PHẦN 2: Định tính brucin Nhỏ giọt HNO3 đậm đặc vào cắn chén thứ quan sát thấy xuất màu đỏ cam 11 Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Kết luận: Dược liệu hạt Mã tiền có chứa Brucin Strychnin 12 Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Dược liệu Vàng Đắng Cân khoảng 0,5 g bột dược liệu cho vào erlen 50ml Thêm 10 ml H2SO4 0,5% vài phút Lọc lấy dịch chiết qua giấy lọc Cho vào ống nghiệm khoảng ml dịch chiết nước acid nhỏ giọt nước Javen, lắc nhẹ Quan sát tượng (định tính bererin) Dung dịch ban đầu có màu vàng, nhỏ từ từ nước Javen vào dung dịch chuyển sang màu đổ máu, thừa nước Javen dung dịch chuyển lại màu vàng 13 Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Kết luận: Dược liệu Vàng đắng chứa bererin 14 ... UV254nm Thực hành Dược liệu - B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Soi đèn UV365nm - Khi soi đèn UV bước sóng 254 365 ta thấy xuất vết sắc ký Thực hành Dược liệu f B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Nhúng nhanh mỏng vào khai... xuất màu đỏ cam 11 Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Kết luận: Dược liệu hạt Mã tiền có chứa Brucin Strychnin 12 Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Dược liệu Vàng Đắng Cân khoảng 0,5... TÍNH ALKALOID TRONG DƯỢC LIỆU BẰNG PHẢN ỨNG HĨA HỌC VÀ SẮC KÝ LỚP MỎNG Thực hành Dược liệu B9_TN2_LTCĐ-ĐH D13A Dịch chiết cồn acid vừa thu đem đun cách thủy đến cắn Thêm 10 ml nước nóng, lọc qua