THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU B7_TN2_LTCĐ-ĐHD13A TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ BỘ MÔN DƯỢC LIỆU- DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN -- BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH DƯỢC LIỆU DƯỢC LIỆU CHỨA COUMARIN GIẢNG VIÊN HƯỚNG DẪN: ThS Đỗ Văn Mãi TIỂU NHÓM – LIÊN THÔNG CĐ-ĐH DƯỢC 13A Nguyễn Lê Nhật Linh Hồ Linh Phương Trần Ngọc Thiên Vy Đỗ Công Hậu Đặng Thị Thùy Dung Dương Thị Ngọc Em Cần Thơ, 2019 A CƠ SỞ LÝ THUYẾT Coumarin hợp chất thuộc nhóm phenylpropanoid (C 6-C3) với khung benzo – α – pyron, với số tính chất sau: - - Thường tồn dạng aglycon, dễ kết tinh, khơng màu, có mùi thơm đa số dễ thăng hoa Ở dạng glycosid tan nước, dạng aglycon dễ tan dung mơi phân cực Phát huỳnh quang UV 365 nm, cường độ huỳnh quang phụ thuộc vào nhóm oxy phân tử coumarin pH dung dịch, mạnh coumarin có nhóm -OH C-7 (nhiều coumarin có OH vị trí này) Do có vòng lacton nên coumarin dễ bị mở vòng kiềm tạo thành muối tan nước, acid hố thường có đóng vòng trở lại Sau mở vòng lacton dung dịch kiềm, coumarin đơn giản tạo thành dẫn chất hydroxy cinnamic dạng cis, có huỳnh quang yếu UV 365 nm Dưới tác dụng tia UV 365 nm, chất chuyển thành dạng trans, có huỳnh quang mạnh B THỰC HÀNH Ngun vật liệu thí nghiệm 1.1 Dụng cụ, hố chất thuốc thử - Cồn 90% HCl đậm đặc Dung dịch KOH 5% methanol Dung dịch NaOH 5% Dung dịch NaOH 10% Dung dịch FeCl3 1% - Thuốc thử diazo Than hoạt Bản mỏng silica gel F254 (Merck) Hệ dung môi SKLM: S2: n-hexan –aceton (10:1) 1.2 Dược liệu - Tiền hồ (Radix Angelicae dahuricae) rễ Tiền hồ [Peucedanum prearuptorum Dunn P.decursivum (Miq.) Maxim, Apiaceae] Thực hành 2.1 Chiết xuất Lấy 1g bột dược liệu Tiền hồ cho vào bình nón 100ml, thêm 20ml cồn 96% đun sôi cách thuỷ phút 2.2 Lọc qua bông, thu dịch lọc để thực phản ứng định tính 2.3 2.4 Định tính coumarin 2.6 2.7 Định tính coumarin SKLM 2.7.1 Dịch chấm sắc ký 2.5 Dịch chiết cồn dược liệu bốc bếp cách thuỷ đến cắn Hoà tan cắn với CHCl3 dùng dịch làm dịch chấm sắc ký 2.8 2.9 2.9.1 Chuẩn bị mỏng 2.10 Sử dung mỏng silica gel tráng 2.11 Dung môi sắc ký; - Hệ S2 = n-hexan – aceton (10:1) Cho dung mơi vào bình sắc ký (đã lót sẳn giấy lọc) cho lớp dung mơi bình cao khoảng 0.5cm Đậy nắp bình sắc ký, để bảo hoà 30 phút 2.12 2.13 2.13.1 Khai triển Dùng mao quản lấy dịch chiết, chấm lên mỏng thành vết gọn thành vạch cách mép 1-1.5cm 2.14 2.15 Đặt mỏng vào bình sắc ký tư nghiêng đậy nắp bình Khi dung mơi cách mép khoảng 0.5cm lấy mỏng để bay dung môi tủ hút nhiệt độ phòng 2.16 2.17 2.17.1 Phát vết tính giá trị Rf 2.18 Quan sát mỏng đèn UV365nm 2.19 • Ở bước sóng 365m ta quan sát vết sắc ký Nhúng dung dịch KOH 5% cồn sấy nhẹ phút Phun tiếp thuốc thử diazo lên trên, dẫn chất coumarin cho vết có màu cam đến đỏ 2.20 2.21 2.22 2.23 Kết luận: 2.24 Dịch chiết có chứa coumarin 2.25 Tính Rf : 2.26 Rf (1) = 5.6 / 7.3 = 0.77 Rf (2) = 4.1 / 7.3 = 0.56 Rf (3) = 3.1 / 7.3 = 0.42 Rf (4) = 2.6 / 7.3 = 0.36 2.27 C CÂU HỎI THẢO LUẬN - 2.28 - Câu 1: Điều kiện để thực phản ứng diazo định tính Coumarin Phản ứng xảy với pH kiềm yếu, kiểm tra pH dịch lọc trước làm phản ứng - Thuốc thử diazo pha dung dịch acid cho qua nhiều thuốc thử dung dịch có pH acid phản ứng khơng xảy Thuốc thử diazo không bền nhiệt độ cao sau đun cách thuỷ dịch chiết cần để nguội làm lạnh ống nghiệm trước cho thuốc thử diazo vào Nêu khơng mở vòng lacton phản ứng sẻ khơng xảy Coumarin tan mơi trường acid, đóng vòng lacton Câu 2: Coumarin có vòng lacton, vòng có khả bị mở tạo thành muối tan nước tác dụng kiềm NaOH Ta thấy dung dịch 2.29 2.30 Và đóng lại cho acid HCl vào.Ta thấy dung dịch chuyển đục Câu : Các cumarin sau mở vòng dung dịch kiềm tạo thành dẫn chất hydroxyl cinnamic dạng Cis, có huỳnh quang yếu bước sóng 365nm Dưới tác dụng tia UV 365nm, chất chuyển sang dạng trans có huỳnh quang mạnh 2.31 2.32 - Các yếu tố ảnh hưởng đến thí nghiệm : Hệ dung mơi Chọn khơng xác sắc ký khó tách lớp Kỷ thuật Chấm mỏng Khâu chuẩn bị dịch chấm sắc ký