Nghiên cứu nhân giống và khảo nghiệm một số dòng keo bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại Viện nghiên cứu cây nguyên liệu giấy (Luận án tiến sĩ)

Nghiên cứu nhân giống và khảo nghiệm một số dòng keo bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại Viện nghiên cứu cây nguyên liệu giấy (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu nhân giống và khảo nghiệm một số dòng keo bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại Viện nghiên cứu cây nguyên liệu giấy (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu nhân giống và khảo nghiệm một số dòng keo bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại Viện nghiên cứu cây nguyên liệu giấy (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu nhân giống và khảo nghiệm một số dòng keo bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại Viện nghiên cứu cây nguyên liệu giấy (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu nhân giống và khảo nghiệm một số dòng keo bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại Viện nghiên cứu cây nguyên liệu giấy (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu nhân giống và khảo nghiệm một số dòng keo bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại Viện nghiên cứu cây nguyên liệu giấy (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu nhân giống và khảo nghiệm một số dòng keo bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại Viện nghiên cứu cây nguyên liệu giấy (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu nhân giống và khảo nghiệm một số dòng keo bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại Viện nghiên cứu cây nguyên liệu giấy (Luận án tiến sĩ)

1 TR I H C THÁI NGUYÊN NG I H C NÔNG LÂM - PH M V N H I NGHIÊN C U NHÂN GI NG VÀ KH O NGHI M M T S DÒNG KEO LAI B NG PH NG PHÁP NUÔI C Y MÔ T BÀO T I VI N NGHIÊN C U CÂY NGUYÊN LIÊU GI Y Chuyên ngành: Lâm h c Mã s : 60 62 02 01 LU N V N TH C S LÂM H C Ng ih ng d n khoa h c: TS D Thái Nguyên - 2014 ng V n Th o i L I CAM OAN Tôi xin cam oan cơng trình nghiên c u c a riêng tôi, s li u công trình hồn tồn trung th c, xác Tơi xin ch u trách nhi m hồn tồn v nh ng k t qu Tác gi Ph m V n H i ii L IC M có N c k t qu này, tơi xin bày t lịng bi t n sâu s c, chân thành - giúp , t o m i i u ki n hồn thành cơng trình nghiên c u – trình th c hi n lu n v n giúp hồn thành lu n v n Tơi xin chân thành c m n s giúp c a gia ình b n bè ng nghi p M c dù có nhi u c g ng, song khơng tránh kh i nh ng sai sót Tơi r t mong s óng góp ý ki n, ch b o c a quý th y cô b n Thái Nguyên, ngày tháng n m 2014 Tác gi Ph m V n H i iii M CL C M U M c tiêu yêu c u c a tài 2.2 Yêu c u c a tài 3 Ý ngh a khoa h c th c ti n c a tài 3.1 Ý ngh a khoa h c 3.2 Ý ngh a th c ti n it 4.1 ng ph m vi nghiên c u c a it ng nghiên c u 4.2 Ph m vi nghiên c u c a Ch tài tài ng 1: T NG QUAN TÀI LI U 1.1.Nh ng nét chung v dòng keo lai 1.2 Tình hình nghiên c u th gi i Ch ng : N I DUNG VÀ PH Vi t Nam NG PHÁP NGHIÊN C U 18 2.1 N i dung nghiên c u 18 2.1.1 Nghiên c u nh h kh trùng ng c a n ng ch t kh trùng th i gian n t l n y ch i , h s nhân ch i t l n y ch i h u hi u c a m u thí nghi m 18 2.1.2 Nghiên c u xác nh môi tr ng tái sinh ch i t o ngu n v t li u ban u 18 18 2.2 Ph ng pháp nghiên c u: 18 2.2.1 V t li u nghiên c u 18 iv th i gian kh trùng n t l n y ch i , h s nhân ch i t l n y ch i h u hi u c a m u thí nghi m 19 2.2.3 Ph ng pháp nghiên c u xác ngu n v t li u ban nh môi tr ng tái sinh ch i t o u 21 24 Ch ng : 30 3.1 Nghiên c u nh h trùng ng c a n ng ch t kh trùng th i gian kh n t l n y ch i , h s nhân ch i t l n y ch i h u hi u c a m u thí nghi m 30 3.1.1 K t qu nghiên c u nh h trùng i v i dòng keo lai KL2 30 3.1.2 K t qu nghiên c u nh h trùng ng c a ch t kh trùng th i gian kh i v i dòng KL20 33 3.1.3 K t qu nghiên c u nh h trùng ng c a ch t kh trùng th i gian kh i v i dòng KLTA3 36 3.2 Nghiên c u xác ban ng c a ch t kh trùng th i gian kh nh môi tr ng tái sinh ch i t o ngu n v t li u u 39 3.2.1.K t qu nghiên c u xác v t li u ban u u u nh môi tr ng tái sinh ch i t o ngu n i v i dòng keo lai KL20 41 3.2.3 K t qu nghiên c u xác v t li u ban ng tái sinh ch i t o ngu n i v i dòng KL2 39 3.2.2 K t qu nghiên c u xác v t li u ban nh môi tr nh môi tr ng tái sinh ch i t o ngu n i v i dòng keo lai KLTA3 42 v 3.2.4 So sánh v h s nhân ch i t l ch i h u hi u gi a dòng nghiên c u 46 47 K T LU N VÀ KI N NGH 53 K t lu n 54 54 TÀI LI U THAM KH O 55 vi DANH M C CÁC C M T C : DSH : a d ng sinh h c VI T T T i ch ng GPA : Global Plant of Action MS : Murashige & Skoog SH : Schenk & Hildebrandt TNDTTV : Tài nguyên di truy n th c v t WPM : McCOWN’s Woody Plant vii DANH M C CÁC B NG B ng 2.1 Công th c kh trùng m u c y 20 B ng 2.2 Thành ph n môi tr ng c b n tài ã th nghi m 21 B ng 2.3 Cơng th c thí nghi m xác nh mơi tr B ng 3.1 K t qu nghiên c u nh h ng c a ch t kh trùng th i gian kh trùng i v i dòng keo lai KL2 31 B ng 3.2 K t qu nghiên c u nh h gian kh trùng B ng 3.4 nh h ng c a ch t kh trùng th i i v i dòng KL20 34 B ng 3.3 K t qu nghiên c u nh h gian kh trùng ng tái sinh ch i 22 ng c a ch t kh trùng th i i v i dòng KLTA3 37 ng c a môi tr ng c b n n hi u qu nhân ch i dòng KL2 40 B ng 3.5 nh h ng c a môi tr ng c b n n hi u qu nhân ch i dòng keo lai KL20 41 B ng 3.6 nh h ng c a môi tr ng c b n n hi u qu nhân ch i dòng keo lai KLTA3 43 47 tháng tu i 49 th i i m tháng tu i 50 viii DANH M C CÁC HÌNH 33 3.2: H 20 36 39 3.4: M t s hình nh k t qu th nghi m môi tr ng c b n 46 51 51 U M : Hi n nay, g ngu n nguyên li u ph c v cho s n xu t c a T ng công ty gi y Vi t Nam Nhu c u nguyên li u hàng n m c a T ng công ty kho ng 500.000m3, ó cơng ty lâm nghi p m i ch cung c p c kho ng 60% nhu c u Thêm vào ó di n tích t tr ng loài nguyên li u gi y ngày b thu h p nhu c u tr ng lồi cơng nghi p nơng nghi p khác Vì v y vi c nghiên c u nâng cao n ng su t ch t l ng r ng ngày c p thi t Trong ó nhi u di n tích r ng tr ng T ng công ty gi y cịn th p khơng ngun nhân gi ng t yêu c u, m t nh ng a vào tr ng r ng s n xu t có ch t l ng khơng cao Do ó vi c t ng n ng su t r ng tr ng b ng s d ng ngu n gi ng có ch t l ng vi c làm c n thi t Phú Th t nh mi n núi, trung du, t ng di n tích t nhiên c a Phú Th 3.519,56 km2, t c a Phú Th c chia theo nhóm sau: t feralít vàng phát tri n phi n th ch sét, di n tích 116.266,27 chi m t i 66,79% (di n tích i u tra) t ng t th ng có cao 100 m, t dày, thành ph n c gi i n ng, mùn Lo i d ng tr ng r ng, m t s n i d cd t th ng s i 25o có th s d ng tr ng công nghi p Hi n nay, Phú Th m i s d ng nông – lâm nghi p; d c l n, c kho ng 54,8% ti m n ng t ch a s d ng cịn 81,2 nghìn ha, ó 57,86 nghìn Di n tích r ng hi n c a Phú Th có t i núi có che ph r ng l n (42% di n tích t nhiên) V i di n tích r ng hi n có 144.256 ha, ó có 69.547 r ng t nhiên, 74.704 r ng tr ng, cung c p hàng v n t n g cho công nghi p ch bi n hàng n m Các lo i ch y u nh b ch àn, m , keo, b m t s loài b n a ang phát tri n ( ý nh t v n nh ng ph c v cho ngành công nghi p s n xu t gi y).T nh phú Th 54 Mơi tr ng MS thích h p nh t cho tái sinh ch i v i h s nhân ch i t 1,3 l n t l ch i h u hi u 20,0% 1.3 -M nghi m 1/7/2013), hi n tr ng thí m b o an toàn - T l s ng t m i thi t l p n m 2013 t i Tiên Kiên có t l s ng c xem t i 100% 20) th i ngh ánh giá b keo lai ( c u 20) y th nghi m h n ch nên m i t c nh ng k t qu b c tài u V kh trùng m u: C n th nghi m NaClO, Ca(ClO)2 H2O2, trùng b m t b ng c n V môi tr ng th i có th nghi m m t s n ng h u hi u th p c lo i môi tr i v i giai o n kh th i gian khác ng nuôi c y c b n : Do môi tr ch (m i thí nghi m mơi tr i v i ch t kh trùng khác nh ng th nghi m h n ng) nên h s nhân ch i t l ch i tài c n ti p t c th nghi m môi tr ng ni c y thích h p cho dịng nghiên c u ng khác tìm 55 TÀI LI U THAM KH O I Ti ng vi t Lê V n Chi (1992), “Cách s d ng ch t i u hoà sinh tr ng vi l ng hi u qu cao” Nhà xu t b n Khoa h c – K thu t, trang – 2 Nguy n Quang c (2002), “Báo cáo gi ng 2002” Trung tâm nghiên c u nguyên li u gi y, Phù Ninh C.E Harwood, Lê ình Kh , Hà Huy Th nh, Phí H ng H i (2005),“Báo cáo t ng quan v ngu n gi ng ph ng pháp nhân gi ng cho loài Keo ph c v tr ng r ng cung c p g x Vi t Nam” Báo cáo tài, Trung tâm nghiên c u gi ng r ng-Vi n khoa h c Lâm nghi p Vi t Nam, Hà N i Hoàng Ng c H i (2006), “Nghiên c u ch n gi ng lâm nghi p Trung tâm nghiên c u nguyên li u gi y, Phù Ninh Nguy n Th Ng c Hu (2007), “T ng quan v b o t n tài nguyên di truy n th c v t ph c v m c tiêu l ng th c nông nghi p th gi i Vi t Nam” Vi n Khoa H c Nông nghi p Vi t Nam, Hà N i Nguy n S Hu ng (1999), “K t qu n ch n kh o nghi m dịng vơ tính lồi b ch àn Eucalyptus urophylla t i vùng nguyên li u gi y Trung tâm B c b Trung tâm nghiên c u nguyên li u gi y, Phù Ninh Nguy n S Hu ng, Hu nh c Nhân, Nguy n Thái Ng c, Nguy n V n Th ch Nguy n Quang c (2003),‘‘Báo cáo k t qu tr ng thí nghi m m t s dịng b ch àn vơ tính keo lai t i vùng Trung tâm B c b ông Nam b nh m công nh n gi ng m i ph c v s n xu t lâm nghi p” Trung tâm nghiên c u nguyên li u gi y, Phù Ninh 56 oàn Th Mai ( 2009), “Nghiên c u nhân nhanh gi ng keo lai t nhiên, keo lai nhân t o, b ch àn Uro, b ch àn lai nhân t o lát hoa m i ch n t o b ng công ngh t bào” Báo cáo tài, Trung tâm nghiên c u gi ng r ng-Vi n khoa h c Lâm nghi p Vi t Nam, Hà N i oàn Th Thanh Nga (2007), “Báo cáo gen 2007” Vi n nghiên c u nguyên li u gi y, Phù Ninh 10 oàn Th Thanh Nga (2008), “ c ng nghiên c u nhi m v : B o t n l u gi ngu n gen nguyên li u gi y” Vi n nghiên c u nguyên li u gi y, Phù Ninh 11 oàn Th Thanh Nga Ph m Th Kim Thanh (2000), “Nghiên c u nh h ng c a m t s ch t i u hịa sinh tr ng lên q trình nhân ch i keo lai” Vi n nghiên c u nguyên li u gi y, Phù Ninh 12 Nguy n Hoàng Ngh a (1997a), “B o t n tài nguyên di truy n th c v t r ng” Vi n khoa h c lâm nghi p Vi t Nam, Hà N i 13 Nguy n Hoàng Ngh a (1997b), “B o t n ngu n gen r ng” Vi n khoa h c lâm nghi p Vi t Nam, Hà N i 14 Nguy n Hoàng Ngh a (1999), “B o t n a d ng sinh h c” Vi n khoa h c lâm nghi p Vi t Nam, Hà N i 15 Hu nh c Nhân (1996),“T ng quan công tác c i thi n gi ng tr ng r ng b ng mô – hom vùng nguyên li u gi y Trung tâm nh h ng tri n v ng” Trung tâm nghiên c u nguyên li u gi y, Phù Ninh 16 Hu nh Quang c Nhân , Nguy n Thái Ng c, Nguy n S Hu ng Nguy n c (2005), “Báo cáo k t qu tr ng thí nghi m m t s dịng b ch àn vơ tính keo lai vùng trung tâm B c B ông Nam B nh m công nh n gi ng m i ph c v s n xu t lâm nghi p” Vi n nghiên c u nguyên li u gi y, Phù Ninh 57 ình Kh , D 17 Lê Tr ng ng M ng Hùng (2003) ‘‘Giáo trình gi ng r ng” i h c Lâm nghi p, Hà N i 18 Lê ình Kh (2003), “Ch n t o gi ng nhân gi ng cho m t s loài tr ng ch y u Vi t Nam ”.Nhà xu t b n Nông nghi p, Hà N i 19 Nguy n Quang Th ch (2009), “C s công ngh sinh h c T p ba - Công ngh sinh h c t bào” Nhà xu t b n giáo d c, Hà N i 20 Ph m Th Kim Thanh (2008), “ Nghiên c u nhân gi ng m t s dòng B ch àn xu t x Keo Tai t giâm hom” Báo cáo ng b ng ph ng pháp nuôi c y mô t bào tài, Vi n nghiên c u nguyên li u gi y, Ninh II Ti ng Anh 21 Christine Le Roux (2009), “Bradyrhizobia Nodulating the Acacia mangium × A auriculiformis Interspecific Hybrid Are Specific and Differ from Those Associated with Both Parental Species” Appl Environ Microbiol 22 Monteuuis Olivier & Marie-Claude Bon (2000), “Inuence of auxins and darkness on in vitro rooting of micropropagated shoots from mature and juvenile Acacia mangium” Plant Cell, Tissue and Organ Culture 63, p 173–177 23 R Yasodha (2004), “Micropropagation for quality propagule production in plantation forestry” Indian Journal of Biotechnology, Vol.3, April 2004, pp, 159-170 24 M Sedley and J Habard (1992), “Hybridisation techniques for acacia” Aciar technical reports no 20, canberra, pp11 Ph l c 01 Thành ph n môi tr STT al ng c b n tài ã th nghi m M4 MS WPM SH 360.00 1,650.00 400.00 - 1,800.00 1,900.00 - 2,500.00 ng (mg/l) NH4NO3 KNO3 KH2PO4 270.00 170.00 170.00 - Ca(NO3)2.4H2O 178.00 - 556.00 - CaCl2 200.00 332.00 72.50 151.00 MgSO4 360.00 370.00 180.70 195.00 (NH4)H2PO4 - - - 300.00 K2SO4 - - 990.00 - Vi l ng (mg/l) H3BO3 10.00 6.20 6.20 5.00 MnSO4.H2O 25.00 16.90 22.30 10.00 ZnSO4.7H2O 10.00 8.60 8.60 1.00 CuSO4.5H2O 2.50 0.025 0.25 0.20 Na2MoO4.2H20 2.50 0.25 0.25 0.10 FeNaEDTA 36.70 36.70 36.70 19.80 KI - 0.83 - - CoCl2.6H2O - 0.025 - - Vitamin (mg/l) Myo-inositol 100.00 100.00 100.00 100.00 Nicotinic acid 5.00 5.00 5.00 5.00 Pyridoxine HCl 0.50 0.50 0.50 0.50 Thiamine HCl 2.00 2.00 2.00 2.00 Glycine 2.00 2.00 2.00 2.00 Các hóa ch t khác (mg/l) Saccharose 30,000.00 30,000.0 30,000.0 30,000.0 Agar 5,000.00 5,000.00 5,000.00 5,000.00 NaOH 36.00 36.00 36.00 36.00 Ph l c 02 K t qu phân tích th ng kê v nh h ng c a ch t kh trùng th i gian kh trùng m u Ph l c 2.1 Dòng Keo lai KL2 Chi-Square Tests Asymp Value Df sided) Pearson Chi-Square 3.320E2a 21 000 Likelihood Ratio 310.290 21 000 N of Valid Cases 1200 Sig (2- a cells (25.0%) have expected count less than The minimum expected count is 3.13 Ph l c 2.2 Dòng Keo lai KL20 Chi-Square Tests Asymp Sig (2Value Df sided) Pearson Chi-Square 1.293E2a 21 000 Likelihood Ratio 159.280 21 000 Linear-by-Linear Association 9.793 002 N of Valid Cases 1200 Chi-Square Tests Asymp Sig (2Value Df sided) Pearson Chi-Square 1.293E2a 21 000 Likelihood Ratio 159.280 21 000 Linear-by-Linear Association 9.793 002 a cells (25.0%) have expected count less than The minimum expected count is 2.88 Ph l c 2.3 Dòng Keo lai KLTA3 Chi-Square Tests Asymp Sig (2Value Df sided) Pearson Chi-Square 3.134E2a 21 000 Likelihood Ratio 341.452 21 000 Linear-by-Linear Association 158.038 000 N of Valid Cases 1200 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 5.13 Ph l c 03 Phân tích th ng kê nh h ng c a môi tr ng c b n s nhân ch i t l ch i h u hi u Ph l c 3.1 Dòng KL2 Test Statisticsa,b He so nhan choi Ty le choi huu hieu Chi-Square 13.264 10.586 Df 4 Asymp Sig .010 032 a Kruskal Wallis Test b Grouping Variable: Cong thuc He so nhan choi Duncan Subset for alpha = 0.05 Cong thuc N Moi truong M4 6067 Moi truong 1/2MS 3 7467 Moi truong WPM 9333 Moi truong SH 1.0333 nh Moi truong MS 1.2400 Sig 1.000 1.000 126 1.000 Ty le choi huu hieu Duncan Subset for alpha = 0.05 Cong thuc N Moi truong M4 1.1500 Moi truong SH 4.4500 Moi truong WPM 4.9700 Moi truong 1/2MS 6.2167 Moi truong MS Sig 20.7533 071 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Ph l c 3.2 Dòng KL20 Test Statisticsa,b He so nhan choi Ty le choi huu hieu Chi-Square 13.264 10.133 Df 4 Asymp Sig .010 038 a Kruskal Wallis Test b Grouping Variable: Cong thuc He so nhan choi Duncan Subset for alpha = 0.05 Cong thuc N M4 6867 1/2MS WPM 1.0133 SH 1.1133 MS 8267 1.3200 Sig 1.000 1.000 126 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed He so nhan choi Duncan Subset for alpha = 0.05 Cong thuc N M4 6867 1/2MS WPM 1.0133 SH 1.1133 MS Sig 8267 1.3200 1.000 1.000 126 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Ph l c 3.3 Dòng KLTA3 Test Statisticsa,b Chi-Square He so nhan choi Ty le choi huu hieu 12.967 11.857 Df 4 Asymp Sig .011 018 a Kruskal Wallis Test b Grouping Variable: Cong thuc He so nhan choi Duncan Subset for alpha = 0.05 Cong thuc N M4 5800 1/2MS 6933 WPM 9000 SH 1.0333 MS Sig 1.3000 171 113 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Ty le choi huu hieu Duncan 1.000 Subset for alpha = 0.05 Cong thuc N M4 0000 1/2MS 8533 8533 SH 4.3300 4.3300 WPM MS Sig 5.1500 19.8267 080 083 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Ph l c 04 B ng 13 So sánh h s nhân ch i t l ch i h u hi u gi a dòng nghiên c u Test Statisticsa,b H s nhân ch i T l ch i h u hi u Chi-Square 1.443 4.263 Df 2 Asymp Sig .486 119 a Kruskal Wallis Test b Grouping Variable: Dòng ... 3.2.2 K t qu nghiên c u xác v t li u ban nh môi tr nh môi tr ng tái sinh ch i t o ngu n i v i dòng keo lai KLTA3 42 v 3.2.4 So sánh v h s nhân ch i t l ch i h u hi u gi a dòng nghiên c u ... nh h ng c a môi tr ng c b n n hi u qu nhân ch i dòng keo lai KL20 41 B ng 3.6 nh h ng c a môi tr ng c b n n hi u qu nhân ch i dòng keo lai KLTA3 43 47 tháng tu i ... a tài, th c hi n nghiên c u keo lai KL2, KL20 KLTA3 hi n có t i Vi n nghiên c u nguyên li u gi y - Các môi tr ng nuôi cây; m t s hóa ch t 4.2 Ph m vi nghiên c u c a N i dung nghiên c u c a tài