Nghiên cứu bệnh viêm ruột hoại tử ở đàn gà của trạm nghiên cứu chăn nuôi gà Phổ Yên (thuộc Trung tâm Nghiên cứu gia cầm Thụy Phương) và thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh (Luận văn thạc sĩ)

Nghiên cứu bệnh viêm ruột hoại tử ở đàn gà của trạm nghiên cứu chăn nuôi gà Phổ Yên (thuộc Trung tâm Nghiên cứu gia cầm Thụy Phương) và thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu bệnh viêm ruột hoại tử ở đàn gà của trạm nghiên cứu chăn nuôi gà Phổ Yên (thuộc Trung tâm Nghiên cứu gia cầm Thụy Phương) và thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu bệnh viêm ruột hoại tử ở đàn gà của trạm nghiên cứu chăn nuôi gà Phổ Yên (thuộc Trung tâm Nghiên cứu gia cầm Thụy Phương) và thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu bệnh viêm ruột hoại tử ở đàn gà của trạm nghiên cứu chăn nuôi gà Phổ Yên (thuộc Trung tâm Nghiên cứu gia cầm Thụy Phương) và thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu bệnh viêm ruột hoại tử ở đàn gà của trạm nghiên cứu chăn nuôi gà Phổ Yên (thuộc Trung tâm Nghiên cứu gia cầm Thụy Phương) và thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh (Luận văn thạc sĩ)Nghiên cứu bệnh viêm ruột hoại tử ở đàn gà của trạm nghiên cứu chăn nuôi gà Phổ Yên (thuộc Trung tâm Nghiên cứu gia cầm Thụy Phương) và thử nghiệm phác đồ điều trị bệnh (Luận văn thạc sĩ)

I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM NGUY N DUY TRANG NGHIÊN C U B NH VIÊM RU T HO I T A TR M NGHIÊN C PH YÊN (THU C TRUNG TÂM NGHIÊN C U GIA C M TH NGHI M U TR B NH LU C Thái Nguyên - 2017 THÚ Y I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM NGUY N DUY TRANG NGHIÊN C U B NH VIÊM RU T HO I T A TR M NGHIÊN C PH YÊN (THU C TRUNG TÂM NGHIÊN C U GIA C M TH NGHI M PHÁ U TR B NH Ngành: Thú y Mã ngành: 60 64 01 01 LU THÚ Y ng d n khoa h c: GS.TS Nguy n Th Kim Lan Thái Nguyên - 2017 i L ng, s li u k t qu lu th cs d ng, m i s cc b ov b t k m t h c v nào; cho vi c th c hi n lu n lu ngu n g c, tơi hồn tồn ch u trách nhi m v nh ng s li u lu Thái Nguyên, ngày tháng Tác gi lu Nguy n Duy Trang c ch rõ ii L IC hoàn thành lu n l c c a b n thân, tơi cịn nh s ch b o t n tình c ng d n: GS TS Nguy n Th Kim Lan Tôi xin chân thành c ch b o t n tình c a cơ; Tôi xin chân thành c c ti TS Nguy n Th Nga, d n tơi q trình th c t p t i Tr m Nghiên c Tôi xin chân thành c t t o - c Trung ts ki n thu n l i giúp ng Yên; n tâm Nghiên c u Gia c m Thu Phòng c t o m u tài; ih u ki n cho tơi q trình h c t p, nghiên c u hoàn thi n lu S o c a t p th th y cô giáo, s góp ý nhi t tình c a nhà khoa h c, b ng nghi trình h c t p th c hi Xin chân thành c u ki hoàn thành lu H c viên Nguy n Duy Trang tài; iii M CL C L N i L IC ii M C L C .iii DANH M C CÁC T VI T T T vi DANH M C CÁC B NG .vii DANH M C CÁC HÌNH .viii M U 1 Tính c p thi t c tài M c tiêu nghiên c u: c c ti n : T NG QUAN TÀI LI U khoa h c c tài 1.1.1 H th ng vi sinh v 1.1.2 M t s ng tiêu hoá c a gà c tính c a vi khu n Clostridium perfringens b nh vi khu n gây 1.1.3 Hi u bi t v b nh viêm ru t ho i t vi khu n Cl perfringens gây 14 1.1.4 Hi u bi t v m t s b nh ng ghép v i NE 16 tác d ng c a m t s kháng sinh 22 1.2 Tình hình nghiên c 1.2.1 Tình hình nghiên c c 24 c 24 1.2.2 Tình hình nghiên c u th gi i 25 : ng nghiên c u 26 m th i gian nghiên c u 26 2.3 V t li u nghiên c u 26 iv 2.4 N i dung nghiên c u 27 u tra tình hình b nh viêm ru t ho i t gây t i Tr m nghiên c Yên 27 2.4.2 Theo dõi tri u ch ng b ho i t gà Cl perfringens a b nh viêm ru t 27 nh vi khu n Cl perfringens t gà b nh 27 2.4.3 Phân l 2.4.4 Th nghi u tr b nh viêm ru t ho i t gà Cl perfringens gây 27 u 27 u d ch t h c thú y 27 y m u 27 nh s ng vi khu n 1g phân 29 nh m t s Cl perfringens phân l c tính sinh h c c a vi khu n c 30 nh kh ch ng Cl perfringens phân l n c m v i kháng sinh c a c 31 ct nh typ vi khu n b ng k thu t PCR (Polymerase Chain Reaction) 33 u tr cho gà m c b nh viêm ru t ho i t vi khu n Cl perfringens 36 lý s li u 37 : K T QU VÀ TH O LU N 38 3.1 K t qu theo dõi tình hình b nh viêm ru t ho i t Cl perfringens gây i Tr m nghiên c Yên 38 3.1.1 T l m c b nh t l ch t theo l a tu i gà 38 3.1.2 T l m c b nh t l ch t theo gi ng gà 42 3.1.3 T l m c b nh t l ch t c a gà 46 v 3.1.5 T l m c ch t viêm ru t ho i t gà theo tính bi t 50 3.2 K t qu theo dõi tri u tr ng b ru t ho i t a b nh viêm 51 3.2.1 T l gà có tri u ch ng/t ng s gà m c b nh 51 3.2.2 Bi u hi n b nh tích c a b nh viêm ru t ho i t 53 nh vi khu n Cl perfringens t gà b nh 55 3.3 K t qu phân l 3.3.1 K t qu phân l p vi khu n 55 nh s 3.3.3 K t qu 3.3.4 K t qu ng vi khu n g phân gà 56 nh m t s c tính sinh h c c a vi khu n 58 nh typ vi khu n Cl perfringens b ng k thu t PCR 59 3.4 Th nghi u tr b nh viêm ru t ho i t gà 60 3.4.1 Ki m tra tính m n c m v i kháng sinh c a ch ng Cl perfringens 61 3.4.2 Th nghi m m t s u tr 62 xu t bi n pháp phòng ch ng b nh viêm ru t ho i t cho gà 67 K T LU NGH 68 K t lu n 68 ngh 68 TÀI LI U THAM KH O 70 vi DANH M C CÁC T VI T T T ARN: Axit ribonucleic bp: base pair CAMP: Christie Atkins Munch - Petersen CRD: Chronic Respiratory Diseases CW: Clostridium welchii ADN: Axit deoxyribonucleic E.coli: Escherichia coli ELISA: Enzyme - Linked Immuno sorbent Assay EYA: Egg Yolk Agar FCR: Feed Conversion Rate NE: Necrotic Enteritis PCR: Polymerase Chain Reaction vii DANH M C CÁC B NG B ng 1.1 B nh vi khu n Clostridium gây ng v t B u ki n nuôi c y thích h p c a vi khu n Cl perfringens B ng 1.3 Các lo c t vi khu n Cl perfringens s n sinh (Hatheway, 1990) [30] B ng 2.1 Tiêu chu m n c m kháng sinh c a vi khu n 32 B ng 2.2 Trình t m i c a ph n nh c t c a ch ng Cl perfringens 34 B ng 2.3 Thành ph n ch t ph n c t c a ch ng Cl perfringens 35 B ng 2.4 Chu k nhi t c a ph n nh c t c a ch ng Cl perfringens 35 B ng 3.1 T l m c ch t b nh viêm ru t ho i t theo tu i gà 38 B ng 3.2 T l m c ch t b nh viêm ru t ho i t theo gi ng gà 43 B ng 3.3 T l m c ch t b nh viêm ru t ho i t 46 B ng 3.4 T l m c ch t b nh viêm ru t ho i t c 49 B ng 3.5 T l gà m c ch t b nh viêm ru t ho i t theo tính bi t 50 B ng 3.6 Tri u ch ng lâm sàng c a gà m c b nh viêm ru t ho i t 51 B ng 3.7 B nh tích c a gà m c b nh viêm ru t ho i t 54 B ng 3.8 K t qu phân l p vi khu n Cl perfringens 56 B ng 3.9 K t qu nh vi khu n phân gà 57 B ng 3.10 M t s c tính sinh h c c a ch ng Cl perfringens 58 B ng 3.11 K t qu nh typ vi khu n Cl perfringens b ng PCR 59 B ng 3.12 K t qu c t c a vi khu n Cl perfringens 60 B ng 3.13 K t qu ki 61 B ng 3.14 K t qu th nghi u tr b nh viêm ru t ho i t cho gà di n h p 63 B ng 3.15 K t qu th nghi u tr b nh viêm ru t ho i t cho gà di n r ng 65 B ng 3.16 ng d có hi u qu u tr b nh viêm ru t ho i t cho gà t i tr m 66 viii DANH M C CÁC HÌNH Hình 2.1 quy trình phân l nh vi khu n Cl perfringens 28 Hình 3.1 Bi u t l m c ch t b nh viêm ru t ho i t theo tu i gà 41 Hình 3.2 Bi t l m c ch t b nh viêm ru t ho i t theo gi ng gà 45 Hình 3.3 Bi t l m c ch t b nh viêm ru t ho i t theo mùa 47 Hình 3.4 Bi t l m c ch t viêm ru t ho i t gà theo nuôi 50 64 B ng 3.14 cho th y: Lô gà s d 1: u tr c ch u có bi u hi n u tr 10 ngày, theo dõi th y 28 gà kh i b nh (gà kh e l ng khơng cịn tri u ch ng c a b nh) gà l i ch t sau dùng thu c - ngày Hi u l Lô gà s d u tr c t 93,33% 2: S d u có bi u hi n u ch t, gi m n hình c a b nh viêm ru t ho i t 10 ngày, theo dõi th y 27 gà kh i b nh (gà kh e l u tr ng khơng cịn tri u ch ng c a b nh) gà l i ch t sau dùng thu c - ngày Hi u l u tr c Lô gà s d t 90% 3: u tr 10 ngày, theo dõi th y 30 gà kh i b nh (gà kh e l Hi u l u tr c T k t qu nh ng khơng cịn tri u ch ng c a b nh) t 100% b ng th tt l có hi u l có hi u l u tr có hi u qu u tr th p nh m t 90%; phác t t l : 93,33% u tr b nh viêm ru t ho i t m s u tr cao có k t lu n ch c ch n v hi u l c th nghi m u tr c a * Th nghi m di n r ng c hi u l c c u tr s ng gà l di n h p, t qu c trình bày b ng 3.15 65 S u S gà kh i T l kh i S gà ch t T l ch t tr (con) (con) (%) (con) (%) 100 96 96,00 4,00 100 93 93,00 7,00 100 99 99,00 1,00 K t qu b ng 3.15 cho th y: 1: S d u tr cho 100 gà m c viêm ru t ho i t , th u tr u tr 10 ngày th y 96 gà kh i b nh (gà kh e l ng bình ng khơng tri u ch ng c a b nh) Hi u qu t 96% 2: u tr cho 100 gà m c b nh viêm ru t ho i t t i tr m, th u tr kh e l qu u tr 10 ngày th y 93 gà kh i b nh (gà ng khơng cịn tri u ch ng c a b nh) Hi u u tr t 93% 3: C u tr 100 gà, th u tr ngày Sau 10 ngày theo dõi th y 99 gà kh i b nh (gà kh e l ng khơng cịn tri u ch ng c a b nh) Hi u qu yc cho k t qu u tr ng bình t 99% u tr b nh viêm ru t ho i t di n r u tr di n h p u 66 K t qu vi u tr di n h u tr nh ng gà có tri u ch ng n ng, gà y u T i th m b nh n ng, ru t phá h y n ng, t l kh i b nh th ng gà nhi m b nh n 3.4.3 cl u tr di n r ng s u tr s ng d u qu có hi u qu u tr u tr b nh viêm ru t ho i t cho gà t i tr m c hi u l c c r di n h p di n n hành áp d s K t qu ng gà l c trình bày B ng 3.16 u tr có hi u qu cao nh t c ti n s n xu t b ng 3.16 ng d có hi u qu u tr b nh viêm ru t ho i t cho gà t i tr m t u tr t1 t2 t3 Thu c u tr S T l u tr S gà kh i v tri u (con) ch ng (con) Bacitracin Methylene Disalicylate (%) 202 195 96,53 590 561 98,42 590 586 99,32 B ng 3.16 cho th y: Sau áp d mang l i k t qu vào th c t s n xu t cho gi u tr cao c chúng tơi gi i thích trình theo dõi gà m i phát hi n tri u ch ng c a b nh viêm ru t ho i t ti n h u tr ngay, nên mang l i hi u qu Hi n t u tr vào th c t s n xu t t i tr u tr cao phác i hi u qu luân phiên u tr cao, 67 gi m t l ch t, gà nhanh kh i b nh Góp ph n gi m thi t h i kinh t b nh viêm ru t ho i t gây tr m xu t bi n pháp phòng ch ng b nh viêm ru t ho i t cho gà K t qu nghiên c u c a chúng tơi nh vai trị gây b nh c a Cl perfringens gà, ch ng t tác h i c a vi khu k t qu nghiên c u c a tác gi Tr n Th H nh (1996, 1999) [3] [4], Phan b nh Cl ng c ng s (1996) [13] l perfringens gây ch t v i t l cao B ng th c nghi m invivo, m t s c tr n vào th ng vi khu n Cl perfringens phân; bao g m làm gi m s Virginiamycin, Tylosin, Penicillin, Ampicillin, Bacitracin Lactobacillus acidophilus Streptococus faecium s làm gi m thi t h i b nh B sung S faecium vào c y Cl perfringens s Th c ch lên sung lactose làm gi th c nghi m Vi ng nuôi ng Cl perfringens phân gà u tr c nh tranh ch rõ hi u qu vi c làm gi m s ng Cl perfringens ng tiêu hóa, gi m b i th , gi m t l ch t thi t h i b nh gây ng t n t i nh d ch x ng l n nha bào), v ng xuyên, vi c b sung NaCl vào n n chu ng b nhi m giúp v Hu nh Th M L không cho d ch tái xu t hi n, Nguy n Bá Hiên, Ng c Thúy (2012) [5] 68 K T LU NGH K t lu n T k t qu c tài, chúng tơi có m t s k t lu n sau: - Viêm + T l m c ch t b nh viêm ru t ho i t n theo l a tu i Gà 20 tu n tu i có t l m c cao nh t (4,57%) + Các gi ng gà nh p n i có t l m c b nh viêm ru t ho i t gi ng gà n i Gà Ross có t l m c cao nh t (12,78%) + T l gà m c b nh cao nh t vào mùa xuân (5,14%) (3,92%), th p nh t vào mùa thu (1,38%) + Gà nuôi chu ng kín có t l m c cao nh t (3,6%), ni chu ng l ng có t l m c th p nh t (1,07%) - Gà m c b nh có tri u ch ng b :r b y, ; ,n , gan thâm tím, m ó - T l phân l p vi khu n Cl perfringens t b nh ph m gà b nh 47,05% Các ch ng vi khu n Cl perfringens phân l c thu c typ A C, mang mơ t y c tính c a lồi - Vi khu n Cl perfringens m n c m m nh v i bacitracin methylene disalicylate, neomycin amoxiclin -S d b nh viêm ru t ho i t v i lo i kháng sinh cho hi u l t 93 - methylene disalicylate cho hi u l c cao nh t u tr kh i v i bacitracin 69 ngh cho gà lactobacillus acidophilus streptococcus faecium 70 TÀI LI U THAM KH O Tài li u ti ng Vi t , Nxb Ph - 80, 160 - 188 c (1997), kháng khu n vi c s d ng ph i h p kháng sinh thú y T p chí Khoa h c k thu t thú y t p IV, Nxb Nông nghi p, Hà N i Cl perfringens (TOXOID) , Báo cáo thú y Tr n Th H nh (1999), v i b nh a ch y -55 nh vai trò c a E.coli Cl.perfringens l i u nghiên c u ch t o sinh ph m phòng b nh , Báo cáo khoa h c thú y 1999-2000 B Nxb Lê Th Thi u Hoa (1991), K thu t phân l p vi khu n k khí, Nxb Hà N i Tr n Nguyên H u, Phan Xuân L c Th Yên (1988), Thu c cách s d ng, Nxb Y h c, Hà N i, tr 15 Nguy nH Nxb Nông nghi p, Hà N i, tr 43, 66, 117 Thu c thú y cách s d ng 71 10 Hu nh Th M L Ng c Thúy, Nguy n Bá Hiên (2008), M t s c tính sinh h c c a vi khu n Clostridium perfringens phân l p t bò l n m c h i ch ng tiêu ch y t i Hà N i vùng ph c n , Khoa h c k thu t thú y, t p XVI, s 4, Hà N i B nh c u trùng gia súc gia c m, Nxb Nông nghi p, Hà N i c (1978), Giáo trình b nh truy n nhi m gia súc, Nxb 12 Nguy Nông nghi p, Hà N i ng (1996), Nghiên c ch y nh h vi khu n gây tiêu l n, Báo cáo khoa h c thú y Vi n Thú y, 1996-2000 Giáo 14 , Nxb 15 , Báo cáo K 16 1996 - 2000 2), 17 , Nxb -24 Giáo 18 Nxb 19 ch 20 m Ng c Th ch (2007), Giáo trình c Th ng, H nh gia súc, Nxb Nông nghi p, Hà N i, tr - N tiêu trung nông 72 Tài li u ti 21.Alouf c J.E and C Jolivet-Reynaud (1981), Purification and characterization of Clostridium perfringens delta toxin, Infect Immun., (31), pp 536-546 22.Amimoto Katsuhiko, Taichi Noro, Eiji Oishi and Mitsugu Shimizu (2007), A novel toxin homologous to large clostridial cytotoxinsfound in culture supernatant of Clostridium perfringens type C, Microbiology (153), pp 1198-1206 23 Annamari Heikinheimo (2008), Diagnostics and molecular epidemiology of cpe-positive Clostridium perfringens type A, Academic dissertation, To be presented with the permission of the Faculty of Veterinary Medicine, University of Helsinki, for public examination in Auditorium Arppeanum, Snellmaninkatu 3, Helsinki, on April 4th, 2008 at 12noon 24.Bormann E., Gunther H., Kohler H (2002), Effect of Cl perfringens epsilon toxin on MDCK cells, Federal Institute for Health Protection of consumers and Veterinary Medicine, Division 4, Jena, Gemany 25.Cadman H., Kelly P., Zhou R., Davelaar F and Mason P serosurvey using enzyme-linked immunosorbent assay for antibodies against poultry pathogens in ostriches (Struthio camelus) from Avian Diseases, pp 621-625 26.Ceci L., Paradies P., Sasanelli M., De Caprariis D., Guarda F., Capucchio M.T and Carelli G (2006), Haemorrhagic Bowel Syndrome in Dairy Catlte: Possible role of Clostridium perfringens type A in thedisease complex , J Vet Med A (53), pp 518-523 27.Frey J and Vilei E M (2002), Molecular genetic of Clostridium perfringens toxins, In: Protein toxins of the genus Clostridium and vaccination, Proceeding of the meeting host by DSTL, UK, pp 45 - 51 73 28.Garmory H S., Chanter N., French N P., Bueschel D., Songer J G (2000), Occurrence of Cl perfringens beta2- toxin amongst animals, deteminded using genoyping and subtyping PCR assays, Department of Biomedical Sciences, Defence Evaluation and research Agency, CBD Porton Down, Salisbury, Wiltshire SP4 OJQ, UK 29.Gibert M., Jolivet-Raynaud C., Popoff M.R (1997), Beta toxin, anovel toxin produced by Clostridium perfringens, Gene 203 (1), pp 65-73 30.Hatheway C.L (1990), Toxigenic clostridia, Clin Microbiol Rev (1), pp 66 - 98 31 HTML and DNT, Mainil J., C Duchesnes, P.E Granum, M.G.Menozzi, M Peck, S.Pelkonen, M.Popoff, E Stackebrandt and R.Titball (2006), Genus Clostridium Clostridia in medical, veterinary and food microbiology: Diagnosis and typing European Concerted Action QLK2-CT2001-01267 32.Jolivet-Reynaud C., H Moreau and J E Alouf (1988), Purification ofalpha toxin from Clostridium perfringens: phospholipase C., Methods Enzymol 165, pp 91-94 33.Mc Donel J L (1980), Clostridium perfringens toxin (type A, B, C, D,E), Pharmacol Ther 10, pp 617-655 34.Minami J., Katayama S., Matsushita O., Matsushita C and Okabe A (1997), Lambda-toxin of Clostridium perfringens activates theprecursor of epsilon - toxin by releasing its N - and C - terminal peptides, Microbiol Immunol 41, pp 527 - 535 35.NCCLS (1999), Performance standards for antimicrobial disk anddilution susceptibility tests for bacteria isolated from animals, Approved Standard Pennsylvania, USA: The National Committee for Clinical Laboratory Standards 74 36.Quinn P.J Carter M.E , Markey B , Carter G.R (1999), Clostridium species, In : Clinical veterinary microbiology, chapter 17, pp 191 -208, Elsevier Limited 37.Richardson M and P.E Granum (1985), The amino acid sequence of the enterotoxin from Clostridium perfringens type A, FEBS Lett 182, pp 479-484 38.Sakurai J and Y Fujii (1987), Purification andcharacterization of Clostridium perfringens beta toxin, Toxicon 25, pp 1301-1310 39.Stevens D.L, B.E Troyer, D.T Merrick, J.E Mitten and R.D Olson (1988), Lethal effects and cardiovascular effects of purified alpha and theta toxinsfrom Clostridium perfringens , J Infect Dis 157, pp 272-279 40.Stiles B G and T D Wilkins (1986), Clostridium perfringens iotatoxin: synergism between two proteins, Toxicon 24, pp 767-773 41.Vance H.N (1967), Clostridium perfringens as a Pathogen of Cattle: ALiterature Review , Can J Comp Med Vet Sci 31, pp 248-250 72 M TS HÌNH NH C TÀI nh 1, 2: Ru t ph nh 3, 4: Niêm m c ru t bong, ho i t nh 5: m màu nh 6: Gan không mm u 73 nh 7, 8: Nuôi c y vi khu n Clostridium perfringens nh 9: ng c a vi khu n Cl Perfringens nh 10: Ph n Litmus Milk ng 74 nh 11, 12, 13, 14: K t qu ki (L p l i l n) 75 nh 15: Th nghi u tr b nh viêm ru t ho i t TN gà ... N U ng nghiên c u - Vi khu n Cl Perfringens - B nh viêm ru t ho i t vi khu n Cl Perfringens gây gà m th i gian nghiên c u m nghiên c u: + Tr m nghiên c Yên + Trung Tâm Ch - Th i gian nghiên c... H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM NGUY N DUY TRANG NGHIÊN C U B NH VIÊM RU T HO I T A TR M NGHIÊN C PH YÊN (THU C TRUNG TÂM NGHIÊN C U GIA C M TH NGHI M PHÁ U TR B NH Ngành: Thú y Mã ngành: 60 64... l m c ch t b nh viêm ru t ho i t theo tu i gà Qua hình 3.1 ta có th th khác v t l gà m c b nh t l ch t b nh viêm ru t ho i t theo tu i c a gà nuôi t i tr m nghiên c nuôi gà Ph Yên Theo Nguy n