Xác định tạp nhiễm Salmonella trong thịt lợn tại Thành phố Thái Nguyên bằng kĩ thuật sinh học phân tử (Khóa luận tốt nghiệp)

Xác định tạp nhiễm Salmonella trong thịt lợn tại Thành phố Thái Nguyên bằng kĩ thuật sinh học phân tử (Khóa luận tốt nghiệp)Xác định tạp nhiễm Salmonella trong thịt lợn tại Thành phố Thái Nguyên bằng kĩ thuật sinh học phân tử (Khóa luận tốt nghiệp)Xác định tạp nhiễm Salmonella trong thịt lợn tại Thành phố Thái Nguyên bằng kĩ thuật sinh học phân tử (Khóa luận tốt nghiệp)Xác định tạp nhiễm Salmonella trong thịt lợn tại Thành phố Thái Nguyên bằng kĩ thuật sinh học phân tử (Khóa luận tốt nghiệp)Xác định tạp nhiễm Salmonella trong thịt lợn tại Thành phố Thái Nguyên bằng kĩ thuật sinh học phân tử (Khóa luận tốt nghiệp)Xác định tạp nhiễm Salmonella trong thịt lợn tại Thành phố Thái Nguyên bằng kĩ thuật sinh học phân tử (Khóa luận tốt nghiệp)Xác định tạp nhiễm Salmonella trong thịt lợn tại Thành phố Thái Nguyên bằng kĩ thuật sinh học phân tử (Khóa luận tốt nghiệp)

i I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM - HÀ TH UYÊN NH T P NHI M Salmonella TRONG TH T L N T I THÀNH PH THÁI NGUYÊN B NG K THU T SINH H C PHÂN T KHÓA LU N T T NGHI H o IH C : Chính quy Chuyên ngành : Công ngh sinh h c Khoa : CNSH - CNTP Khóa h c : 2011 - 2015 Gi ng d ng ThS Ma Th Trang Thái Nguyên ii L IC Trong trình h c t p nghiên c c khóa lu n t t nghi p v i s n l c c a cá nhân, , ch b cs ng viên c a th y cơ, b ng d n, p hồn thành lu Tơi xin bày t lịng bi c t i th y giáo: ng gi ng viên Khoa Công ngh Sinh h c Công ngh Th c ph m i h c Nông Lâm Thái Nguyên, ThS Ma Th Trang cán b t i B môn Sinh h c Phân t Công ngh Gen - Vi n Khoa h c S s ng i h n tình ch b o, tr c ti su t th i gian th c hi hoàn ch nh lu ng d n q trình t nghi p Tơi xin chân thành c o Vi n Khoa h c S s ng - i H c Thái Nguyên, ban ch nhi m Khoa Công ngh Sinh h c Công ngh Th c ph m - i h c Nông Lâm Thái Nguyên, cán b , anh ch làm vi c t i B môn Sinh h c Phân t Công ngh Gen- Vi n Khoa h c S s ng - ih ,t u ki nghiên c u Cu i cùng, xin g i l i c ng viên, chia s t qua m h c t p, nghiên c u hồn thành lu Tơi xin chân thành c Thái Nguyên, N Sinh viên Hà Th Uyên h c t p iii DANH M C CÁC T , CÁC C M T VI T T T T vi t t t T , thu t ng BPW : Buffered Peptone Water CIAA : 24 Chloroform : Isoamylacohol CDC : Centers for Disease Control and Prevention Cs : C ng s DNA : Deoxynucleotideacid dNTP : Deoxyribonucleic Acid DCA : Deoxycholate citrate agar E.coli : Escherichia coli ELISA : Enzyme Linked Immunosorbent Assay - Xét nghi m h p th mi n d ch liên k t v i enzyme EU : European Union - Liên minh châu Âu FAO : Food and Agriculture Organization - T ch c c Nông nghi p Liên Hi p Qu c PCR : Polymerase Chain Rection - Ph n ng chu i trùng h p TE : Tris EDTA TCVN : Tiêu Chu n Vi t Nam TT : Tetrathionate Mueler Kauffman Broth v/p : Vòng/ phút XLD : Xylose Lysine Desoxycholate Agar WHO : Word Health Organization T ch c Y t Th gi i ii DANH M C B NG B ng 2.1: B ng phân lo i Salmonella v t ch theo phân lo i KauffmannWhite B ng 2.2: Các tính ch n c a Salmonella B ng 3.1: Trình t c p m i s d ng nghiên c u 27 B ng 3.2: Danh m c thi t b 29 B ng 3.3: Thành ph n ph n ng PCR 33 B ng 3.4: Thành ph n ph n i 34 B ng 4.1: So sánh hai quy trình phát hi n salmonella th t l n 36 B ng 4.2: K t qu S hi n di n c a vi khu n Salmonella spp, S enterica th t l n a bàn thành ph Thái Nguyên 43 iii DANH M C HÌNH Hình 3.1: Chu trình nhi t c a ph n ng PCR v i m t c p m i 34 Hình 3.2: Chu trình nhi t ph n i 35 Hình 4.1: K t qu th nghi m hai quy trình phát hi n Salmonella th t l n .37 Hình 4.2: Phát hi n Salmonella spp S enterica b Hình 4.3a: K t qu phát hi n Salmonella th t l n t i ch i 39 m 40 Hình 4.3b: K t qu phát hi n Salmonella th t l n t i ch Túc Duyên 41 Hình 4.3c K t qu phát hi n Salmonella th t l n t i ch Trung tâm 42 v M CL C Trang U Ph n 1: M 1.1 tv 1.2.M u 1.3.M c tiêu nghiên c u c, th c ti n c tài c c ti n Ph n 2: T NG QUAN TÀI LI U 2.1 Tình hình ng c th c ph m nhi m Salmonella 2.1.1 Trên th gi i 2.1.2 Vi t nam 2.2 T ng quan v Salmonella 2.2.1 L ch s phát hi n 2.2.2 Phân lo i m hình thái m ni c 2.2.5 S m sinh hóa kháng c a vi khu n 2.2.6.C u trúc kháng nguyên y u t c l c 10 m gây b nh Salmonella 12 2.3 Các ph ng pháp phát hi n Salmonella 15 2.3.1 Phát hi n Salmonella b ng ph ng pháp nuôi c y truy n th ng 15 2.3.2 Phát hi n Salmonella b ng ph ng pháp hi 2.3.3 T ng quan ph i 18 ng pháp PCR (Polymerase chain reaction) 21 vi PH N 3: I T NG, N I DUNG VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U 26 it ng ph m vi nghiên c u 26 it ng nghiên c u 26 3.1.2 Ph m vi nghiên c u 26 m th i gian nghiên c u 26 m nghiên c u 26 3.2.2 Th i gian th c hi n nghiên c u 26 3.3 V t li u, hóa ch t, thi t b nghiên c u 26 3.3.1 V t li u nghiên c u 26 3.3.2 Hóa ch t 27 3.3.3 Thi t b 29 3.4 N i dung nghiên c u 29 3.5 Ph 3.5.1 Ph ng pháp nghiên c u 30 ng pháp thu m u 30 3.5.2 So sánh hai quy trình phát hi n Salmonella th t l n 30 3.5.3 Ph n ng PCR 33 3.5.4 Ph n di ki m tra s n ph m PCR 35 Ph n 4: K T QU NGHIÊN C U 36 4.1 K t qu th nghi m hai quy trình phát hi n Salmonella th t l n 36 4.2 S d ng ph i h p hai c p m i 38 4.3 K t qu phát hi n Salmonella nhi m th t l n t i khu v c Thành Ph Thái Nguyên 40 PH N 5: K T LU N VÀ KI N NGH 47 5.1 K t lu n 47 5.2 Ki n ngh 47 TÀI LI U THAM KH O P 1.1 Ch ng v sinh an toàn th c ph nhi u qu c gia Th c ph i quan tâm l n c a m b o yêu c u s n s c kho tính m ng c i tiêu dùng ch ng tr c ti p ng cu c s ng c a nhân dân v i s phát tri n kinh t xã h i [4] Theo s li u th ng kê c a c c an toàn v sinh th c ph m m c ta có kho ng 250 - 500 v ng c th c ph m v i 7.000 - 10.000 n n nhân 100 - 200 ca t vong Riêng t nh Thái nguyên, n m 2014 t l m c 4,7/100.000 dân, tháng 4/2014 có 04 v ng v ng ng c x y v i quy mô nhi c th c ph m Ph n l n i m c, nguyên nhân ch y u gây c th c ph m b nhi m vi sinh v t, chi m t l 43,2% [18] c bi t vi khu n Salmonella th ph m gây v ng c th c ph m Theo th ng kê c a C c v sinh an toàn th c ph m v ng c x y vào ngày 4/10/2013 t i công ty MTV Wondo n, huy n Ch G o, t nh Ti n Giang) th t viên b nhi m Salmonella công nhân m c ph i nh p vi n M t v ng c t p th khác x y ngày 10/7/2013 n 232 công nhân c a công ty Foremart Vi t Nam thu c t nh ng ng r t l c Theo WHO/ FAO ng n s c kh c th c ph m x y nhi u i kinh t Quy trình phân tích Salmonella th c ph m v n ch y u s d ng y truy n th ng n nuôi c y k t h p v bao g m nhi u cơng c ki m tra hố sinh t n nhi u th i gian n ngày (ISO 6579: 2003), t n nhi u công s vi c phân tích nhanh m u th c ph m nhi m m m b nh ch nhân gây ng c nghi ng Salmonella gây M t khác quy trình phân tích khơng cho phép phân bi t loài hay phân loài Salmonella v i S phát hi n ch m vi khu n gây b nh m u th c ph m m t nh ng nguyên nhân làm tác nhân gây b c ng, i lây lan n s c kho , tính m ng i, gây thi t h i v kinh t Nh ng ti n b c a khoa h c k thu t, k thu t sinh h c phân t cho phép phát tri m tra r t nh y nhanh s hi n di n c a dịng vi khu n mà khơng c n nuôi c y dài [5] K thu t ph n ng chu i polymerase chain reaction (PCR) m t k thu gi n, có nh c hi u cao, th i gian ch c u thi t b ph c t p D a vào viêc s d ng c p m n không yêu c hi u khu i c hi u cho t ng ch ng, k thu t PCR cho phép phát hi n nm ch ng vi khu n gây b nh [11] c ng d ng k thu t PCR phát hi n nhanh Salmonella m an toàn th c ph m Salmonella gây góp ph n vào vi c ki m soát m m b o s c kh e c Xu t phát t th c ti t th c, ng i s ng, ng nhi m vi khu n Salmonella th t l n t i khu ch xung quanh Thành Ph Thái Nguyên ti n hành nghiên c tài: nh t p nhi m Salmonella th t l n t i Thành ph Thái Nguyên b t sinh h c phân t nh t p nhi m Salmonella th t l n t i Thành ph Thái Nguyên b ng k thu t PCR Hồn thi n quy trình phát hi n nhanh Salmonella m u th t b ng k thu t PCR Xác nh t l nhi m Salmonella spp S.enterica th t l n khu v c thành ph Thái Nguyên Hoàn thi n quy trình phát hi n nhanh Salmonella th t l n Giúp sinh viên rèn luy n k làm vi c K t qu nghiên c u góp ph n b Salmonella t p nhi m th t l n m, nghiên c u, tác phong 39 cho bi t m u có ch a ch ng S enterica (S typhimurium ho c S enteritidis) c l i n u s d ng c p m ki m tra s hi n di n chung c a vi khu n Salmonella ph n l n k t qu Salmonella spp cho âm tính ng ch ng S ng chi enterica hi n di ng v i m th p [7] kh c ph c i h p c hai c p m i invA spvC m t ph n ng PCR Hình 4.2: Salmonella spp S enterica ng ch y L: Thang DNA chu n GeneRulerTM 100 bp (Thermo Scientific) ng ch y - i ch ng ch y ng ch y 1- 2: Salmonella spp; ng ch y ng ch y - 6: ng ch y 7- 8: Bacillus S n ph m ph n 1,5% K t qu c th hi n PCR nh ng m u xu t hi c phân tích b n di gel agarose hình 4.1 cho th y phân tích s n ph m 521 bp 400 bp ch ng t m có ch a vi khu n S enterica, nh ng m u ch xu t hi n m 521 bp 40 ch ng t m u ch ch a vi khu n Salmonella spp a ch ng S enterica K t qu nghiên c u c a thu ng t i v a nh phát hi n lúc hai dòng vi khu n Salmonella spp S enterica kinh t , ti t ki mc ak c th i gian Salmonella Nguyên * K t qu i di n phát hi n Salmonella th t l n t i ch Hình 4.3a: h m Salmonella ng ch y L: Thang DNA chu n GeneRulerTM 100 bp (Thermo Scientific) ng ch y - i ch ng ch ng ch y 1-5: M u th t l n ch bu i ch ng ch y - 10: M u th t l n ch bu i chi u T hình th y m u phù h p v ng ch y s 3,7 xu t hi c s n ph m PCR theo lý thuy t, m u nhi m Salmonella spp M u ng ch y s xu t hi sáng 521 bp ng s 3, i kích 41 c s n ph m PCR theo lý thuy t, m u ng ch y s nhi m S enterica *K t qu i di n phát hi n Salmonella th t l n t i ch Túc Duyên Hình 4.3b: Salmonella Túc Duyên ng ch y L: Thang DNA chu n GeneRulerTM 100 bp (Thermo Scientific); ng ch y - i ch ng ch 5: M u th t l n ch bu th t l n ng ch y 1- ng ch y - 10: M u th t l n ch bu i chi u T hình th y m u th t l n 521 bp phù h p v i ch ng ch y s 4,10 xu t hi sáng c s n ph m PCR theo lý thuy t ch ng t m u ng ch y s 4, 10 nhi m Salmonella spp M u xu t hi ph m PCR theo lý thuy t, m u ng ch y s c 521 bp 400 ng ch y s nhi m S enterica cs n 42 * K t qu i di n phát hi n Salmonella th t l n t i ch Trung tâm Salmonella âm ng ch y L: Thang DNA chu n GeneRulerTM 100 bp (Thermo Scientific) ng ch y - i ch ng ch ng ch y - 5: M u th t l n ch bu i ch ng ch y - 10: M u th t l n ch bu i chi u T hình th y m u phù h p v ng ch y s 3,7,9 xu t hi sáng 521 bp c s n ph m PCR theo lý thuy t ch ng t m u th t l n ng ch y s 3,7,9 nhi m Salmonella spp khơng có m u nhi m vi khu n S enterica i v i th c ph c bi t th c ph m có ngu n g ng v t, vi c ki m tra ch tiêu Salmonella yêu c u b t bu c Nó m t nh ng tiêu chu n c n thi Vi t Nam, theo tiêu chu n v 7064 : 2002 q ng v sinh an toàn th c ph m i v i th c ph m c a b y t (TCVN nh ch tiêu vi sinh v t th t) yêu c ng Salmonella 25 g th c ph m Vì v y chúng tơi ti n hành ki m tra 60 m u th t 43 l n t i ch : m, Túc Duyên, Trung t vi khu n Salmonella b ng k thu ki m tra s hi n di n c a i B ng 4.2: K t qu S hi n di n c a vi khu n Salmonella spp, S enterica th t l n Ch S m u a bàn thành ph Thái Nguyên Salmonella spp Sáng 10 Chi u 10 Túc Sáng 10 Duyên Chi u 10 Sáng 10 Chi u 10 S typhimurium ho c S enteritidis h m Trung tâm 1 K t qu t b ng 4.2 cho th y 60 m u th t l c ki m tra có 12 m u nhi m Salmonella chi m t l 20% Trong t ng s m u th t ki m tra vào bu i sáng 30 m u ch phát hi n th y có m u nhi m vi khu n Salmonella chi m t l 10 % (3 m u nhi m Salmonella spp chi m t l nhi m 10 % khơng có m u nhi m S enterica) Trong t ng s m u th t ki m tra vào bu i chi u 30 m u phát hi n m u nhi m vi khu n Salmonella chi m t l 30 % (7 m u nhi m Salmonella spp chi m t l nhi m 23,33 % m u nhi m vi khu n S enterica chi m chi m t l nhi m 6,67 %) T k t qu ph n l n th t l n b nhi m b i Salmonella spp, t l th t l n nhi m S enterica có mang gen spvC th p hi n di ng v i m th p [7] Theo nghiên c u Tr n Th Xuân Mai cs (2011) 40 m u th t l n m u nhi m Salmonella spp chi m t enterica chi m 2,5% [14] S enterica l c ki m tra có 19 47,5% m u nhi m S 44 Th t l n mua bu i ch chi u có t l nhi m Salmonella bu i sáng Theo s chênh l ch v t l nhi m do: T i ch ti ng th t l n vào hai th i m - gi sáng 13 - 14 gi chi u nên t i th m l y m u u cách lúc gi t m kho ng - ti ng v y m nhi m s chênh l ch Tuy nhiên, m y u s nhi m khu n chênh l ng th t bán vào bu i sáng t Vào bu i chi u, th y, b o qu n t o ki n thu n l i cho vi khu n xâm nhi m vào, không khí cao lên vi khu m, vào nh ng ngày u ki n phát tri n m Trong m t ngày m nhi m khu vào t u ki n ng, t khác nhau, tùy thu c t ng khu v c K t qu hoàn toàn phù h p v i nghiên c u c a Tr n Th H nh (2006) M bi i v t l nhi m Salmonella th t l n t i thành ph Thái Nguyên theo th i gian l y m Hình 4.4: Bi m bi u ng phát tri n Ngồi nhi m khu n cịn ph thu c vào t ng th nhi i chi u c minh h a qua hình 4.4 i v t l nhi m Salmonella th t l n t i thành ph Thái Nguyên theo th i gian l y m u 45 Trong 60 m u th t l n mua t i ch h m, Túc Duyên, Trung tâm ki m tra t l nhi m ch c tóm t t b ng nhi m Salmonella th t l n t i ch 4.2 Chúng nh n th y m ph m 20%, ch Túc Duyên 25%, ch Trung tâm 15% Ch Túc Duyên có t l nhi m cao nh t, ch Trung tâm t l nhi m th p nh t Nguyên nhân làm cho th t l n bán t i ch h m, Túc Duyên, Trung tâm b nhi m Salmonella vi c gi t m ph n l m nhi gi t m m gi t m mang tính ch t t m b , d ng c gi t m Ngu m b o v sinh c s d ng q trình gi t m b nhi m Sau gi t m cv nb c y, th t khơng bao gói b o qu 2003) cho r ng: Th t b nhi m khu n ch y chuy c, d ng c gi t m , trình v n m b o v sinh l nhi m Salmonella th t t i ba ch có s chênh Bên c l ch: Ch Túc Duyên tình tr ng v sinh kém, th m t hàng khác, n i t ng th c bày bán xen k v i c bày bán c nh m t bàn mà t nguyên nhân vi khu n Salmonella có th khơng có s Vi khu n Salmonella t phân l n có th xâm nh p vào th t b làm ô nhi m gián ti ng gi t m c, d ng c t m vào th t ho c vi khu n ln có m t ch t ch a (d dày, ru t) ô nhi m tr c ti p vào th t gi t m Ch do: Th qua l ng t v y ch c ch m b o v sinh h m t l nhi m cao th sau ch Túc Duyên nguyên nhân c bày bán bàn g t v trí th p tr u ki n cho ru i nh ng phát tri n,v n nhi m khu n th t i l i nh ng ô nhi c 46 Ch Trung tâm có t l nhi m th p nh t do: Các lo qu n lý quy ho ch h u h t m có khu v c c bày bán khu v c riêng r , bán th t, ch c v sinh, qu y bán th t c p g ch men v y vi c v sinh sau m i bu s n không b dàng, t bàn th t K t qu m t s nghiên c u phát hi n Salmonella th t Vi t Nam: Theo báo cáo c a Thi Thu Hao Van (2007) cho bi t t l th t l n b nhi m Salmonella spp l ch siêu th thành ph H Chí Minh: T ng 50 m u th t c ki m tra có 32 m u nhi m Salmonella spp chi m t l 64% [41] Phan TT cs (2005) ng b ng song c u long t l nhi m Salmonella th t l n 69,9% [32] Theo Nguy n Ng c Tuân cs (2006) cho th y t l th t l n nhi m Salmonella spp t nh mi n Tây Nam b t 2004 - 2005 59,7%, bi n thiên t n 90% Theo Huong cs th t gà Hà N i, S Ph n l n k t qu nghiên c u c a báo cáo v a u dùng (2006) s ki u huy t phân l p t typhimurium chi m t l 7,75 % y truy n th ng nghiên c u c phát hi n Salmonella K t qu y quy trình PCR mang l i k t qu xác, l nh y r t cao T k t qu tr ng ô nhi m th t l n cao, t l nhi m mua bu i ch chi u có t l nhi m Salmonella y hi n ch khác nhau, th t bu i sáng Ph n l n th t b nhi m b i Salmonella spp, t l th t nhi m S enterica có mang gen spvC th p 47 T k t qu nghiên c u th o lu n ts k t lu n sau: - nghi m so sánh quy trình phát hi n Salmonella m u th t b ng ph n ng PCR K t qu c u phát hi c Salmonella th t l n, quy trình phát hi n 12 gi t xác, giúp ti t ki n th i gian, công s c, kinh t - S d ng ph i h p c p m chuyên bi r t chuyên bi i: C p m i invA r t phát hi n dòng vi khu n Salmonella spp c p m i spvC phát hi n dòng vi khu n S enterica (S enteritidis S typhimurium) Ph i h p hai c p m i m t ph n ng PCR giúp phát hi n m t lúc c hai dòng vi khu n Salmonella spp S enterica giúp ti t ki m th i gian kinh phí - K t qu phát hi n Salmonella nhi m th t l n t i khu v c Thành Ph Thái Nguyên: + Trong 60 m u th t l n ch xung quanh thành ph Thái Nguyên c ki m tra có 12 m u nhi m Salmonella chi m t l 20% + Ch h m có t l nhi m Salmonella 20%, ch Túc Duyên 25%, ch Trung tâm 15% - Ti n hành th nghi m v i s ng m u l n thêm nh ng ch khác - Ngoài ra, c n ti n hành nhi u th Salmonella lo i th c ph ch , tr ys nghi m ki m tra ch tiêu nh, nem, giò, I.Tài li u ti ng vi t c, Nguy n Công Kh n, Tr Phan Th Kim, Nguy n PhùngTi n, p (2005) "Các b nh ô nhi m - Lây nhi m th c ph m." Nxb Y h c Lê Huy Chính (2007) "Vi sinh v t y h c." NXB Y h c Nguy n Ng c Tuân, L H N., Hu m "Tình hình nhi m Salmonella phân th t bò, heo t i m t s t nh mi n Tây Nam b " T p chí KHKT Nông Lâm Nghi p : 90- 95 h c (2005), M t s Nguy t p 2, Nxb khoa h c k thu t, trang 103-132 Nguy n Th Kê, Cao Minh Nga (2007) "Phát hi n m t s vi khu n pháp PCR." T p chí Y H c gây nhi m th c ph m b TP H Chí Minh u vi sinh v t Ph b n s Nguy n Thu Trang (2005) "Kh o sát thành ph n loài ph thành ph n ki u huy t c a ch ng Salmonella nhi m th c ph m." i h c Nông Lâm thành ph H Chí Minh Nguy n Ti g (2002) "Phát hi n phân bi t Salmonella spp, Salmonella enterica b hi nhiên." o sát t n s xu t i c a Salmonella enterica I th y s c T nhiên TPHCM Nguy n Trí Nhân, Nguy n H ng Nhã Trâ Tr c t ng Th o, c (2005) "T o dòng bi u hi n gene mã hóa kháng nguyên H,g:m c a Salmonella enteritidis t bào Ecoli." H i ngh khoa h c tồn qu c v Cơng ngh sinh h c Nguy nh c hi u c a P nh tr c ti p Salmonnella t b nh ph m phân." i i h c Y Hà N i 10 Ph m Minh Thu, (2007) "Phát hi n salmonella spp th c ph m b Vi n Pasteur TP H Chi Minh (2006) "Nh ng k thu t PCR 11 Quy ng d ng phân tích DNA." Nxb khoa h c t nhiên công ngh t p 12 Tr t c (2002) c, th c ph m, m ph m NXb Giáo d c 13 Tr n Th t v th o khoa h c v b nan gi i." H i phía nam 14 Tr n Th Xuân Mai, Võ Th n Th hoàng Y n, (2011) " Phát hi n nhanh salmonella spp, Nguy salmonella enterica hi n di n th c ph m b ng k thu t PCR i (multiplex PCR)." T p chí Khoa h c 20: 198-208 15 Vi t Hoa (2002) "Giáo trình t c t p vi sinh th c ph m." i h c Nông Lâm TP HCM: 74 II.Tài li u ti ng Anh 16 A thena w Lin, Miguel A Usera, Richard A Goldsby.,(1996) "Application of Random Amplified Polymorphic DNA Analysis To Differentiate Strains of Salmonella enteritidis." Journal of clinical Microbiology 34:870 876 17.Andréa dos Santos Schneid,Kelly Lameiro Rodrigues,DaviChemel, Eduardo Cesar Tondo, Marco Antônio Zacchia,AyubJosé Antonio Gui marães Aleixo., (2006) "Evaluation of an indirect ELISA for the detection of Salmonella in chicken meat." Braz J Microbiol 37 18 Arunava D., Hari S S., Shalini U., Ganeshkumar A., Karthikeyan M., (2012) "Molecular Characterisation of Salmonella enterica Serovar typhi Isolated from Typhoidial Humans." Malaysian Journal of Microbiology 8: 148- 155 19 Baay, M F and J H Huis in 't Veld., (1993) "Alternative antigens reduce cross-reactions in an ELISA for the detection of Salmonella enteritidis in poultry." J Appl Bacteriol 74(3): 243-247 20 Babalola O O., (2003) "Molecular techniques: An overview of methods for the dection of bacteria." African Journal of Biotechnology 12: 710- 713 21 Bernner H W F and Stubbs D A., (1991) "Phage typing of Salmonella enterica in the United State." Journal Clincal Microbiology 29: 20 22 Bianca Ramalho Quintaes, Nilma Cintra Lea, Eliane Moura Falavina Reis, Ernesto Hofer.,(2004) "Optimization of randomly amplified polymorphic DNA-polymerase chain reaction for molecular typing of Salmonella enterica serovar typhi " Revista da sociedade Brasileira de Medicina Tropical 37 23 D L Baggesen, G Sorensen, E M Nielsen, H C Wegener (2010) " Phage Typing of Salmonella typhimurium - is it still a useful tool for surveil lance and outbreak investiga tion." Eurosurveillance 15 24 F.W Brenner, R.G Villar, F.J Angulo, R.Tauxe, (2003) "Salmonella Nomenclature." Microbiology 38: p 2465 2467 Journal B.Swamina., of clinical 25 Galan, J and R Curtiss., (1991) " Distribution of the invA -B -C and D genes of Salmonella typhimurium among other Salmonella serovars: invA mutants of Salmonella typhi are deficient for entry into mammalian cells." Infect Immun 59: 2901-2908 26 Herikstad, H., H.Motarjemi, Y.Tauxe, R V., (2002) "Salmonella surveillance: a global survey of public health serotyping." Epidemiol Infect 129(1): 1-8 27 Luciana Ruschel, Vladimir Pinheiro, Sílvia Dias, Maristela Lovato, Alexandre Pontes, Aldemir Reginato, Carlos Tadeu Pippi, Rui Fernando Félix., (2001) " Polymerase chain reaction ( PCR) for the detection of salmonella in artificially inoculated chicken meat." 43: 247- 250 28 N De Lappe, G Doran, J O'Connor, C O'Hare, M Cormican., (2009) "Characterization of bacteriophages used in the Salmonella enterica serovar enteritidis phage-typing scheme." J Med Microbiol 58: 86-93 29 Nakano S., ( 2007) "Development of a PCR assay for detection of Enterobacteriaceae in foods." Journal Food Protein 66: 1798 1804 30 Omar B Ahmed, Atif H Asghar, Ibrahim HA Abd El-Rahim, Hegazy AI., (2014) "Detection of Salmonella in Food Samples by Culture and Polymerase Chain Reaction Methods." Bacteriology & Parasitology 31 Paiao, F G., Arisitides, L G Murate, L S Vilas-Boas, G T.VilasBoas, L A Shimokomaki., (2013) "Detection of Salmonella spp, Salmonella enteritidis and typhimurium in naturally infected broiler chickens by a multiplex PCR-based assay." Braz J Microbiol 44(1): 37-41 32 Phan TT, K L., Ogasawara N, Tam NT, Okatani AT, Akiba M and Hayashidani H (2005) "Contamination of Salmonella in retail meats and shrimps in the Mekong Delta, Vietnam." J Food Prot 68: 1077-1080 33 Putturu Ramya, Thirtham Madhavarao, Lakkineni Venkateswara Rao., ( 2012) "Study on the incidence of Salmonella enteritidi in poultry and meat samples by cultural and PCR methods." Vet World 5: 541-545 34 Quintaes B R., (2002) "Conventional and molecular typing of Salmonella typhi strains from Brazil." Review Insitu Medical Tropical SaoPaulo 44: 315-319 35 R Ferretti, et al (2001) "Twelve - Hour PCR - Based Method for Detection of Salmonella spp in Food " American Society for Microbiology 67: 977 978 36 Rabsch W (2007) "Salmonella typhimurium phage typing for pathogens." Methods Mol Biol 37 Ruschel L., Pinheiro V., Dias S., (2007) "Polymerase chain rection for the dection of Salmonella in artificially inoculated chicken meat." Review Insitu Medical Tropical SaoPaulo 43: 247- 250 38 S m Soto, B Guera, M A Gonza lez- hevia, M C Mendoza., (1999) "Potential of Three-Way Randomly Amplified Polymorphic DNA Analysis as a Typing Method for Twelve Salmonella Serotypes." American Society for Microbiology 65: 4830 4836 39 Suzuki S., (1994) "Virulencen region of plasmid pNL 2001 of Salmonella enteritidis." Microbiology 140: 1307- 1318 40 Tan W and L A Shelef (1999) "Automated detection of Salmonella spp in foods." J Microbiol Methods 37(1): 87-91 41 Thi Thu Hao Van, G M., Taghrid Istivan, Linh Thuoc Tran and Peter J Coloe (2007) "Detection of Salmonella spp in Retail Raw Food Samples fromVietnam and Characterization of Their Antibiotic Resistance." American Society for Microbiology 73(21): 6885 6890 ... xung quanh Thành Ph Thái Nguyên ti n hành nghiên c tài: nh t p nhi m Salmonella th t l n t i Thành ph Thái Nguyên b t sinh h c phân t nh t p nhi m Salmonella th t l n t i Thành ph Thái Nguyên b... kháng nguyên b m t c a Salmonella kháng nguyên O kháng nguyên H kháng nguyên b m t Vi nh danh Kauffmann White Salmonella chia thành hai loài: Salmonella enterica Salmonella bongori c x p vào Salmonella. .. s loài Salmonella sinh khu n l c màu vàng có ho [12] Kh c xác nh n nh b ng ph n ng sinh hóa dịng vi khu n nghi ng Salmonella ng phân l p b ng th nghi m sinh hóa huy Salmonella u hi n sinh hóa