nghiên cứu đa dạng các giống chè trồng ở Thái Nguyên bằng kỹ thuật sinh học phân tử

Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN VÀ Xà HỘI BỘ MÔN SINH HỌC ĐỀ TÀI SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG CÁC GIỐNG CHÈ TRỒNG Ở THÁI NGUYÊN BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ Giáo viên hướng dẫn: ThS. Hoàng Thị Thu Yến Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Thu Phương Thái Nguyên 2008 Ti liu chia s ti: wWw.SinhHoc.edu.vn Mở đầu Tổng quan tài liệu Đối tợng và phơng pháp nghiên cứu Kết quả nghiên cứu và thảo luận Kết luận và kiến nghị Nội dung báo cáo Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Më §ÇU Cây chè Việt Nam đã đóng góp một phần không nhỏ vào sự phát triển đất nước theo hướng công nghiệp hóa - hiện đại hóa Cây chè còn góp phần giữ gìn bản sắc văn hoá dân tộc. Uống chè đã trở thành loại hình nghệ thuật trong nghệ thuật ẩm thực Việt Nam Chè là một dược liệu quý trong dân gian. chè chữa một số bệnh đường ruột, lợi tiểu, bệnh tim, béo phì, ung thư…và nhiều loại vitamin và axitamin cần thiết cho cơ thể Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn  Việc tìm ra những biện pháp đẩy mạnh năng suất và nâng cao năng lực cạnh tranh là vấn đề cần thiết với người trồng chè, cần có nhiều nghiên cứu sâu rộng về cây trồng này  Sinh học phân tử là một công cụ hỗ trợ chính xác trong việc phân tích di truyền để chọn giống  Hiện nay, việc đánh giá hệ gen cây chè vẫn còn là vấn đề khá mới mẻ. Để làm rõ hơn vấn đề này chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài: “Nghiên cứu đa dạng các giống chè trồng ở Thái Nguyên bằng kỹ thuật sinh học phân tử ”. Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Nội dung nghiên cứu đề tài bao gồm  Thu mẫu lá chè.  Tách chiết DNA tổng số.  Đo quang phổ DNA  Nghiên cứu tính đa hình của genome chè bằng kỹ thuật RAPD.  Phân tích sản phẩm RAPD bằng phần mềm sinh học phân tử. Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 1. Khái quát về cây chè 1.1. Nguồn gốc của cây chè  Vân Nam-Trung Quốc.  Vùng Atxam thuộc Ấn Độ  Việt Nam. Tæng quan tµi liÖu Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 1.2. Sự phân loại cây chè Ngành Hạn kín Angiospermae Lớp Song tử diệp Dicotylleonae Bộ Chè Theales Họ Chè Theaceae Chi Chè Camellia Loài Camellia sinensis Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 1.1.2. Đặc điểm sinh học của cây chè  Hệ rễ bao gồm: rễ trụ, rễ bên, rễ hấp thu. Rễ trụ có thể dài đến 2m nhưng thường chỉ dài đến 1m.  Cây chè có thân thẳng và tròn. Thân chè làm 3 loại: thân bụi, thân gỗ, thân gỗ nhỏ .  Cành chè mọc từ chồi dinh dưỡng. Trên cành chia thành nhiều đốt cành, biến đổi từ 1-10cm  Chè có hai loại mầm chính là mầm dinh dưỡng và mầm sinh thực Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn  Lá chè là loại lá đơn, nguyên, có hệ gân lá rất rõ, có nhiều hình dạng khác nhau: thuôn, mũi mác, ô van, trứng gà và gần tròn.  Quả chè thuộc loại quả nang, có từ 1- 4 hạt; hình tròn, tam giác, vuông  Hạt có đường kính 10 - 15 mm, trọng lượng trung bình là 1,0 - 1,6g, hình cầu, tam giác, bán cầu  Hoa chè là loại lưỡng tính, có 5 - 9 cánh màu trắng Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn PHƯƠNG PHÁP VÀ NGUYÊN LIỆU 2.1. Nguyên liệu  Mẫu lá chè lấy từ nông trường chè của công ty chè Sông Cầu, huyện Đồng Hỷ, tỉnh Thái Nguyên  Các giống chè được cung cấp: PH1, keo Tam tích và trung du lá nhỏ - Trung Quốc, Iakatamidori – Nhật Bản , LDP2 – Việt Nam, PT95- , Tri2024 và Tri777 – Srilanca 2.2. Các hoá chất và thiết bị  Các hoá chất: ethidium bromid, phenol, Các primer dNTP, Buffer Taq DNApolymerase… [...]... giữa các giống chè Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Sơ đồ phả hệ của 8 giống chè trồng ở Thái Nguyên 1.LDP2 2 PH1 3 TDLN 4 Iakatamidori 5 Tri777 6.Keo Tam tích 7 tri 2024 8 PT 95 Hình 5 Sơ đồ quan hệ di truyền giữa các giống chè Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 1 Đã tách chiết được DNA của 8 giống chè với hàm lượng DNA khá cao 2 Kết quả nhận được sau khi nghiên. .. wWw.SinhHoc.edu.vn Bảng 4: Số phân đoạn DNA xuất hiện và số phân đoạn DNA đa hình đối với mỗi mồi Mồi Phân đoạn DNA nhân bản Phân đoạn DNA đa hình Tỷ lệ % phân đoạn đa hình RA32 7 7 100% RA40 9 7 78% Tổng số phân đoạn DNA ngẫu nhiên là 16 và có kích thước từ 0,18 – 1.5 kb Trong đó có 14 phân đoạn DNA đa hình chiếm 87,5%, 2 phân đoạn DNA không đa hình chiếm 12,5% 3.4 Mối quan hệ di truyền giữa các giống. .. wWw.SinhHoc.edu.vn Kiến nghị 1 Số lượng mồi ngẫu nhiên sử dụng trong nghiên cứu đa hình các giống chè cần có nhiều hơn 2 Cần kết hợp nhiều phương pháp sinh học phân tử khác: SSR (Simple sequence region), RFLP, xác định trình tự DNA… cùng với kỹ thuật RAPD để có kết quả chính xác trong nghiên cứu đa dạng giống chè Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Xin CHÂN THÀNH CẢM ƠN ! ... nghiên cứu tính đa hình DNA được nhân bản ngẫu nhiên đã chứng tỏ sự sai khác nhau trong cấu trúc hệ gen của các giống chè 3 Khi sử dụng 2 mồi ngẫu nhiên cho thấy cả 2 mồi đều biểu hiện tính đa hình với tỉ lệ các phân đoạn dao động từ 14,3% - 90% 4 Hệ số di truyền giữa các giống dao động từ 0,3 – 0,9 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Kiến nghị 1 Số lượng mồi ngẫu nhiên sử dụng trong nghiên cứu đa. .. Trong đó có 14 phân đoạn DNA đa hình chiếm 87,5%, 2 phân đoạn DNA không đa hình chiếm 12,5% 3.4 Mối quan hệ di truyền giữa các giống chè trồng ở Thái Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Nguyên dựa trên phân tích RAPD * Kết quả hệ số tương đồng di truyền giữa các giống chè 1 2 3 4 5 6 7 8 1.000 1.LDP2 2 PH1 0.900 1.000 0.650 0.750 1.000 0.600 0.600 0.550 1.000 0.500 0.500 0.550 0.700 1.000 0.750 0.850... của DNA băng máy quang phổ Tiến hành kỹ thuật RAPD Thiết lập mối di truyền giữa các giống Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 2.3 Các phương pháp nghiên cứu Phương pháp tách chiết DNA tổng số Phương pháp đo quang phổ trên máy quang phổ tự ghi Phương pháp điện di Phương pháp RAPD Phương pháp xử lý số liệu bằng phần mềm NTSYS 2.0 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN... phân tích đa hình bằng kỹ thuật RAPD + Mồi RA32 1 LDP2 2 PH1 3 TDLN 4 Iakatamidori 5 Tri777 6 Keo Tam tích 7 tri 2024 8 PT 95 Hình 3 Hình ảnh điện di sản phẩm RAPD với đoạn mồi RA32 của 8 giống Tài liệu + Mồi RA40 chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 1.LDP2 2 PH1 3 TDLN 4 Iakatamidori 5 Tri777 6.Keo Tam tích 7 tri 2024 8 PT 95 Hình 4 Hình ảnh điện di sản phẩm RAPD Với đoạn mồi RA40 của 8 giống chè Bảng 3:... sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Các thiết bị Sản xuất Máy li tâm Hettich – Germany Tủ ấm Germany Tủ lạnh Janpan Máy điện di USA Máy đo quang phổ Phermo Electriction Máy chạy PCR Eppendorf - USA Máy soi DNA Wealtea – USA Máy chụp ảnh Gel - Doc Applied BioSciences Bể ổn nhiệt Jeiotech Tủ - 200C Italy Lò vi sóng Shorp Tài liệu chia sẻ cứu 2.3 Quy trình nghiên tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Nguyên liệu lá chè Tách chiết... PT 95 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 3.2 Kiểm tra độ tinh sạch của DNA bằng máy quang phổ Hình 1: Phổ hấp thụ DNA từ giống Tri 2024 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Hình 2: Phổ hấp thụ DNA từ giống Iakatamidori Tài liệu chia sẻ + Kết quả đo độ tinhtại: wWw.SinhHoc.edu.vn sạch DNA A 260 nm= OD260nm và A 260nm= OD280nm ; tính tỉ lệ A = OD260nm/OD280nm Giống LDP2 A 1.589 PH1 TDLN Iakatamidori... wWw.SinhHoc.edu.vn thống kê phân tại: DNA được nhân bản ngẫu nhiên trong phản ứng RAPD với 2 mồi ngẫu nhiên của 8 giống chè M 1 2 3 4 5 6 7 8 1,5 (kb) 0 0 0 0 0 0 0 1 1,25 1 1 0 0 0 0 1 0 1,0 1 1 0 0 0 0 1 1 8,5 1 1 1 1 0 1 1 0 8,0 1 1 1 0 0 1 1 0 0,7 0 0 1 0 0 0 0 1 0,64 1 1 1 0 0 0 1 0 0,6 1 1 0 1 0 1 1 0 0,5 1 1 1 1 1 1 1 0 0,2 0 0 0 0 0 0 0 1 Tổng 7 7 5 3 1 4 7 4 G RA32 Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn . wWw.SinhHoc.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN VÀ Xà HỘI BỘ MÔN SINH HỌC ĐỀ TÀI SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG CÁC GIỐNG CHÈ TRỒNG Ở THÁI NGUYÊN. tài: Nghiên cứu đa dạng các giống chè trồng ở Thái Nguyên bằng kỹ thuật sinh học phân tử ”. Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn Nội dung nghiên cứu đề tài bao gồm  Thu mẫu lá chè. . DNA  Nghiên cứu tính đa hình của genome chè bằng kỹ thuật RAPD.  Phân tích sản phẩm RAPD bằng phần mềm sinh học phân tử. Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn 1. Khái quát về cây chè