KHẢO SÁT ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN BAO PHIM SIMVASTATIN 20 mg

Bệnh tim mạch là nguyên nhân gây tử vong hàng đầu trên thế giới. Chính vì vậy mà trong 6 thập niên qua y học trên thế giới đã tập trung rất nhiều tài lực để nghiên cứu về bệnh tim mạch và các yếu tố gây nên bệnh này. Một trong những nguyên nhân gây ra bệnh tim mạch là lượng cholesterol trong máu tăng cao. Vào thập niên 1950, dựa vào phân tích công trình nghiên cứu Framingham (Mỹ), các nhà khoa học tập trung vào một giả thiết duy nhất có thể tạm gọi là “giả thiết chất béo”. Chính giả thiết này nếu làm giảm cholesterol sẽ ngăn ngừa họăc làm giảm nguy cơ tử vong. Một trong những can thiệp được quảng bá rộng rãi hiện nay là dùng thuốc thuộc nhóm statin để làm giảm cholesterol trong máu. Thuốc nhóm statin thường được mô tả là vị cứu tinh của nhân lọai, là những thuốc vô hại. 67 Simvastatin là một thuốc làm giảm cholesterol trong máu thuộc nhóm ức chế men 3hydroxy3methylglutarylcoenzym A reductase (thuộc nhóm statin). Do có tác dụng tốt trên cả cholesterol và triglycerid nên simvastatin là thuốc hạ mỡ máu đang được sử dụng rộng rãi nhất hiện nay trên thế giới, chiếm 8090% tổng lượng thuốc giảm cholesterol trong máu được sử dụng ở các nước phát triển.67 Hiện nay trên thị trường các sản phẩm ngoại nhập thuộc nhóm statin rất nhiều: Atorvastatin (Lipitor®), Fluvastatin (Lescol®), Lovastatin (Mevacor®, Altoprev™), Pravastatin (Pravachol®) Rosuvastatin Calcium (Crestor®), Simvastatin (Zocor®)… tuy nhiên các sản phẩm này chưa được nghiên cứu nhiệt đới hoá để phù hợp với điều kiện khí hậu nước ta. Do đó hạn dùng ghi trên nhãn chưa thật chính xác, cần được xác định lại trong điều kiện khí hậu và điều kiện bảo quản ở Việt nam. Nhóm thuốc statin được sản xuất trong nước còn rất hạn chế, một số chế phẩm chưa được nghiên cứu kỹ lưỡng về độ bền vững đã đưa vào sản xuất chỉ nhằm đáp ứng được nhu cầu của thị trường Việt nam. Hạn dùng ghi trên nhãn thường chỉ là hạn dùng biểu kiến hoặc được suy từ hạn dùng của nguyên liệu. Để có được một sản phẩm tốt đáp ứng được nhu cầu sử dụng do đó Công Ty IMEXPHARM đã nghiên cứu sản xuất chế phẩm viên bao phim simvastatin 20 mg với mong muốn thay thế hàng ngoại nhập. Vì vậy chúng tôi tiến hành đề tài:“ KHẢO SÁT ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN BAO PHIM SIMVASTATIN 20 mg”Nhằm mục đích: Khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định thuốc. Dự đoán tuổi thọ của sản phẩm simvastatin. Góp phần hoàn thiện sản phẩm viên bao phim Simvastatin 20mg.

MỤC LỤC

MỤC LỤC 1

DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH 2

DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU 2

1 ĐẶT VẤN ĐỀ 3

2 TỔNG QUAN 5

2.1 TỔng quan vỀ simvastatin 5

2.1.1 Nguồn gốc 5

2.1.2 Công thức cấu tạo 5

2.1.3 Tính chất 5

2.1.4 Tác dụng dược lý và cơ chế tác dụng 5

2.1.5 Định tính 7

2.1.6 Định lượng: 8

2.2 ĐỘ Ổn định cỦa thuỐc 10

2.2.1 Khái niệm chung 10

2.2.2 Một số yếu tố tác động đến độ ổn định 10

2.2.3 Phương pháp nghiên cứu độ ổn định của thuốc 12

2.2.4 Phương pháp tính tuổi thọ và hạn dùng của thuốc 13

2.3 MỘt sỐ chẾ phẨm cÓ chỨa simvastatin trên thỊ trưỜng 14

3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14

3.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU: 14

3.2 ĐỊA ĐIỂM, TRANG THIẾT BỊ: 14

3.2.1 Địa điểm: 14

3.2.3 Trang thiết bị 15

3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

3.3.1 Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng 15

3.3.2 Xác định độ hòa tan của simvastatin 16 3.3.3 Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở của viên bao phim SIMVASTATIN 20 mg 17

3.3.4 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng tới độ ổn định của Simvastatin 18

3.3.5 Khảo sát độ ổn định và dự đoán hạn dùng 18

4.KẾ HOẠCH THỰC HIỆN 18

5 TRIỂN VỌNG CỦA ĐỀ TÀI 19

6 NƠI THỰC HIỆN ĐỀ TÀI 19

7 DỰ TRÙ KINH PHI 19

8 TÀI LIỆU THAM KHẢO 19

CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 2.2: Các điều kiện triển khai HPLC 8

Bảng 2.2: Ty lệ dung môi triển khai HPLC (*)[9] 9

Bảng 2.3 : Một số biệt dược có Simvastatin 14

1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Bệnh tim mạch là nguyên nhân gây tử vong hàng đầu trên thế giới Chính vì vậy

mà trong 6 thập niên qua y học trên thế giới đã tập trung rất nhiều tài lực để nghiên cứu về bệnh tim mạch và các yếu tố gây nên bệnh này Một trong những nguyên nhân gây ra bệnh tim mạch là lượng cholesterol trong máu tăng cao Vào thập niên

1950, dựa vào phân tích công trình nghiên cứu Framingham (Mỹ), các nhà khoa học tập trung vào một giả thiết duy nhất có thể tạm gọi là “giả thiết chất béo” Chính giả thiết này nếu làm giảm cholesterol sẽ ngăn ngừa họăc làm giảm nguy cơ tử vong Một trong những can thiệp được quảng bá rộng rãi hiện nay là dùng thuốc thuộc nhóm statin để làm giảm cholesterol trong máu Thuốc nhóm statin thường được mô

tả là vị cứu tinh của nhân lọai, là những thuốc vô hại [6][7]

Simvastatin là một thuốc làm giảm cholesterol trong máu thuộc nhóm ức chế men 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzym A reductase (thuộc nhóm statin) Do có tác dụng tốt trên cả cholesterol và triglycerid nên simvastatin là thuốc hạ mỡ máu đang được sử dụng rộng rãi nhất hiện nay trên thế giới, chiếm 80-90% tổng lượng thuốc giảm cholesterol trong máu được sử dụng ở các nước phát triển.[6][7]

Hiện nay trên thị trường các sản phẩm ngoại nhập thuộc nhóm statin rất nhiều: Atorvastatin (Lipitor®), Fluvastatin (Lescol®), Lovastatin (Mevacor®, Altoprev™), Pravastatin (Pravachol®) Rosuvastatin Calcium (Crestor®), Simvastatin (Zocor®)… tuy nhiên các sản phẩm này chưa được nghiên cứu nhiệt đới hoá để phù hợp với điều kiện khí hậu nước ta Do đó hạn dùng ghi trên nhãn chưa thật chính xác, cần được xác định lại trong điều kiện khí hậu và điều kiện bảo quản ở Việt nam

Nhóm thuốc statin được sản xuất trong nước còn rất hạn chế, một số chế phẩm chưa được nghiên cứu kỹ lưỡng về độ bền vững đã đưa vào sản xuất chỉ nhằm đáp ứng được nhu cầu của thị trường Việt nam Hạn dùng ghi trên nhãn thường chỉ là hạn dùng biểu kiến hoặc được suy từ hạn dùng của nguyên liệu Để có được một sản phẩm tốt đáp ứng được nhu cầu sử dụng do đó Công Ty IMEXPHARM đã nghiên

cứu sản xuất chế phẩm viên bao phim simvastatin 20 mg với mong muốn thay thế hàng ngoại nhập

Vì vậy chúng tôi tiến hành đề tài:

“ KHẢO SÁT ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VIÊN BAO PHIM SIMVASTATIN 20 mg”

Nhằm mục đích:

- Khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định thuốc.

- Dự đoán tuổi thọ của sản phẩm simvastatin Góp phần hoàn thiện sản phẩm viên bao phim Simvastatin 20mg.

2 TỔNG QUAN

2.1 TỔNG QUAN VỀ SIMVASTATIN

2.1.1 Nguồn gốc

Simvastatin thuộc nhóm thuốc trị tăng lipid huyết

2.1.2 Công thức cấu tạo

Simvastatin, CTPT: C 25 H 38 O 5 , M = 418,566 [3][7] [10][12]

Tên khoa học

1S,3R,7S,8S,8aR)-8-{2-[(2R,4R)-4-hydroxy-6-oxooxan-2-yl]ethyl}-3,7-dimethyl-1,2,3,7,8,8a-hexahydronaphthalen-1-yl 2,2-dimethylbutanoate

2.1.3 Tính chất

Bột kết tinh màu trắng đến gần như trắng, hầu như không tan trong nước, tan nhiều trong methylen chlorid, tan hoàn toàn trong alcohol

2.1.4 Tác dụng dược lý và cơ chế tác dụng

+ Dược động học:[3]

Sau khi được hấp thu từ ống tiêu hóa, Simvastatin chuyển hóa vượt qua lần đầu mạnh ở gan Do đó sinh khả dụng của thuốc trong vòng tuần hoàn lớn thì thấp và biến đổi dưới 5% liều uống được ghi nhận là đến tuần hoàn dưới dạng chất chuyển hóa có hoạt tính

Thuốc gắn kết mạnh với protein huyết tương (95%)

Simvastatin đươc thủy phân ở gan thành dạng acid beta-hydroxy có hoạt tính.

Ba chất chuyển hóa khác đã được phân lập là các dẫn chất hydroxy, 6-hydroxy methyl và 6-exomethylen

Simvastatin giải trừ phần lớn qua phân, chủ yếu là phần thuốc không được hấp thu và chiếm 60% liều uống Khoảng 10-15% thuốc thải trừ qua đường thận Thời gian bán hủy của chất chuyển hóa có hoạt tính là 1,9 giờ

Hình 2.1: Simvastatin và các chất phân hủy [9]

+ Chỉ định

Simvastatin được dùng để hổ trợ cho chế độ dinh dưỡng ở bệnh nhân tăng cholesterol máu nguyên phát gây ra do sự tăng các lipoprotein cholesterol trọng lượng phân tử thấp (LDL) ở những bệnh nhân có nguy cơ bệnh động mạch vành mà không đáp ứng được với chế độ ăn kiêng

Simvastatin cũng được dùng để làm giảm nồng độ cholesterol lipoprotein

trọng lượng phân tử thấp (LDL) ở những bệnh nhân vừa tăng cholesterol, vừa tăng triglicerid máu

+ Tác dụng phụ

Tác dụng phụ nhẹ, thường gặp, hồi phục: Nhức đầu, khó tiêu, trung tiện, táo bón, đau bụng

Các tác dụng phụ nặng, ít gặp: Tăng transaminase huyết là biểu hiện của độc gan (1 – 1,5 %), tăng creatin kinase, bệnh cơ (< 1%) Bệnh cơ, thường xảy ra khi phối hợp với các thuốc ức chế miễn dịch như cycloserin hoặc các thuốc hạ lipid khác như gemfibrozil, niacin có thể gây globin cơ - niệu kịch phát (rhabdomyolysis) với biểu hiện myoglobin niệu suy thận Cần theo dõi chức năng thận: Mức creatinin, BUN

+ Liều dùng

Simvastatin được sử dụng bằng đường uống

Cần cho người bệnh dùng chế độ dinh dưỡng giảm cholesterol chuẩn trước khi dùng simvastatin và người bệnh cần tiếp tục ăn kiêng trong suốt quá trình điều trị với Simvastatin

Liều khởi đầu là 5-10 mg/ngày, uống vào buổi tối.Liều tối đa là 40 mg/ngày Liều dùng cần được điều chỉnh theo đáp ứng từng cá thể

2.1.5 Định tính

+Thử nghiệm A: Phổ hấp thu hồng ngoại

- Mẫu thử: Nghiền mịn nhẹ nhàng 5 mg chất thử trong cối chày mã não, thêm một giọt parafin lỏng, phân tán đều để tạo thành bột nhão mịn kẹp bột nhão giữa 2 viên kali bromid và quét phổ ngay theo SOP 2.147 hiện hành trong vùng từ 4000 cm-1 đến 600 cm-1

- Mẫu chuẩn: Nghiền mịn nhẹ nhàng 5 mg chuẩn đối chiếu Simvastatin trong cối chày mã não và tiến hành song song và cùng điều kiện như mẫu thử

- Mẫu trắng: Dùng 2 viên kali bromid kẹp lại để quét phổ nền

- Đánh giá: Phổ truyền quang của chất thử phải giống với phổ truyền quang của chất chuẩn về vị trí và cường độ tương đối của các cực đại hấp thu

+Thử nghiệm B: Phổ hấp thu tử ngoại

- Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 20 mg chất thử cho vô bình định mức

20 ml, hòa tan và pha loãng với acetonitril vừa đủ 20 ml, lắc đều (dung dịch 1%) Hút chính xác 2 ml dung dịch 0,1% cho vô bình định nức 20 ml, pha loãng với acetonitril vừa đủ 20 ml, lắc đều Hút chính xác 1 ml dung dịch này pha loãng với acetonitril vừa đủ 10 ml, lắc đều

- Dung dịch chuẩn: cân chính xác khoảng 20 mg chuẩn Simvastatin cho vô bình định mức 20 ml, hòa tan và pha loãng với acetonitril vừa đủ 20 ml, lắc đều (dung dịch 0,1%) Hút chính xác 2 ml dung dịch 0,1% cho vô bình định mức 20 ml, pha loãng với acetonitril vừa đủ 20 ml Hút chính xác 1 ml dung dịch này pha loãng với acetonitril vừa đủ 10 ml, lắc đều Quét phổ dung dịch chuẩn và thử trong vùng 200 nm – 400 nm

- Đánh giá: Phổ hấp thu tử ngoại của dung dịch thử và chuẩn phải giống nhau

về vị trí tương đối của các cực đại và cực tiểu được ghi trong cùng điều kiện

2.1.6 Định lượng:

Có nhiều quy trình định lượng Simvastatin bằng phương pháp HPLC được công bố

Bảng 2.2: Các điều kiện triển khai HPLC Điều kiện 1 [8] Điều kiện 2 [9]

4.6 mm × 50 mm, 3.5 μm

Pha động

methanol: acetonitrile:

water 75:18.75:6.25 v/v/v

Microemulsion (*)

Tách

simvastatin, lovastatin, hydroxy acid, methylsimvastatin, acetate ester, anhydrosimvastatin

Bảng 2.2: Ty lệ dung môi triển khai HPLC (*)[9]

1 Heptane SDS n-Butanol 25 mMphosphate/pH 7.0 disodium

2 Cyclohexane SDS n-Butanol 25 mMphosphate/pH 7.0 disodium

3 Diisopropyl ether SDS n-Butanol 25 mMphosphate/pH 7.0 disodium

4 Ethylacetate SDS n-Butanol 25 mMphosphate/pH 7.0 disodium

5 Diisopropyl ether SDS n-Penthanol 25 mMphosphate/pH 7.0 disodium

6 Diisopropyl ether SDS n-Propanol 25 mMphosphate/pH 7.0 disodium

7 Diisopropyl ether SDS n-Acetonitrile 25 mMphosphate/pH 7.0 disodium

8 Diisopropyl ether SDS n-Tetrahydrofuran 25 mMphosphate/pH 7.0 disodium Mọi dung môi trên (*) được pha theo tỷ lệ 1:2:6.6:90.4 (w/w/w/w).

Ngoài ra một số tài liệu khác cũng đề cập đến việc sử dụng lovastatin làm chuẩn nội ? (Nếu ko dùng chuẩn nội thì bỏ dung dịch chuẩn gốc)

- Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 30 mg chất thử cho vô bình định mức

100 ml hòa tan và pha loãng với dung môi hòa tan vừa đủ 100 ml, lắc đều Lọc qua màng lọc 0,45µl, bỏ vài ml dịch lọc đầu

- Dung dịch chuẩn gốc: Cân chính xác khoảng 6 mg chuẩn làm việc lovastatin (mcL) cho vô bình định mức 20 ml hòa tan và pha loãng với dung môi hòa

tan vừa đủ 20 ml, lắc đều.

- Dung dịch chuẩn: Cân chính xác khoảng 30 mg chuẩn làm việc Simvastatin cho vô bình định mức 100 ml, thêm chính xác 1 ml dung dịch chuẩn gốc hòa tan và pha loãng với dung môi hòa tan vừa đủ 100 ml, lắc đều lọc qua màng lọc 0,45µm, bỏ vài ml dịch lọc đầu

+ Điều kiện phân tích

2.2 ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA THUỐC

2.2.1 Khái niệm chung

Độ ổn định của thuốc là khoảng thời gian mà thuốc còn giữ được những đặc tính (về chất lượng và hàm lượng) theo qui định của tiêu chuẩn kỹ thuật

Độ ổn định của thuốc còn được đặc trưng bằng hạn dùng hay tuổi thọ của thuốc Hạn dùng là

ngày ghi trên bao bì, nhãn của sản phẩm cho biết thời hạn của thuốc vẫn còn đạt chất lượng

quy định nếu như được bảo quản đúng với điều kiện đã xác định

Tuổi thọ xác định căn cứ vào 2 yếu tố:

t90 = khoảng thời gian mà hàm lượng thuốc còn 90% so với hàm lượng ban đầu

tx = khoảng thời gian mà hàm lượng các sản phẩm phân hủy còn trong giới hạn cho phép

Hạn dùng = tuổi thọ + ngày sản xuất [1] [2]

2.2.2 Một số yếu tố tác động đến độ ổn định

Những quá trình xảy ra trong khi bảo quản thuốc có thể dẫn đến sự thay đổi thành phần hóa học hoặc tính chấy vật lý của chúng (tạo cặn, thay đổi màu sắc và trạng thái)

Những quá trình này có thể làm mất dần hoạt tính sinh học hoặc tạo ra các tạp chất làm thay đổi hiệu lực và tác dụng thuốc

+ Nguyên liệu:

Tất cả các thành phần cấu tạo nên viên thuốc như: hoạt chất chính, các loại tá dược… đều phải tinh khiết, hàm lượng tạp chất nằm trong giới hạn cho phép Với các nguyên liệu có thời hạn như kháng sinh, các sản phẩm sinh học… thì phải còn hạn dung đủ dài trước khi đưa vào sản xuất Các nguyên liệu này nếu cận date thì khi bào chế sản phẩm sẽ bị phân hủy nhanh hơn

+ Kỹ thuật bào chế:

Việc lựa chọn kỹ thuật bào chế phù hợp cho từng loại hoạt chất giúp nhà sản xuất đạt được mục tiêu sản xuất thuốc có chất lượng tốt, ít bị biến đổi Kỹ thuật bào chế thích hợp bao gồm cả điều kiện trang thiết bị sản xuất phù hợp, nhà máy cần đạt chuẩn GMP Công thức pha chế cần lưu ý tránh phối hợp các thành phần làm tăng sự pjân hủy của hoạt chất hay của tá dược có trong thành phẩm

+ Bao bì:

Bao bì là vật tiếp xúc trực tiếp hay gián tiếp với thành phần của thuốc, nên có ảnh hưởng đến độ ổn định của thuốc Khả năng tương tác giữa các chất cấu thành bao bì với các thành phần có trong thuốc rất lớn Do vậy việc lựa chọn bao bì và nắp đậy cũng liên quan nhiều đến độ ổn định của thuốc Mặt khác bao bì còn giúp thuốc tránh được các tác động không có lợi từ bên ngoài như

độ ẩm, bức xạ, oxy…

+ Sự ảnh hưởng của điều kiện khí hậu: [2]

Trong số những yếu tố vật lý, tác động nhiếu hơn cả đến tính ổn định của thuốc là nhiệt độ, độ ẩm và ánh sáng

+ Nhiệt độ:

Nhiệt độ đóng vai trò quan trọng đối với sự ổn định của thuốc Khi nhiệt độ tăng quá trình hóa lý trong thuốc xảy ra nhanh hơn làm cho tốc độ phản ứng tăng nhanh Nhiệt độ cao làm bốc hơi dung môi, hoạt chất kéo theo việc làm

giảm các thành phần Ngược lại nhiệt độ thấp tạo nên sự kết thành khối, hoặc tái kết tinh ảnh hưởng đến độ rã và khả năng giải phóng hoạt chất

+ Độ ẩm: [4]

Độ ẩm không khí giảm làm giảm hàm lượng nước kết tinh trong thuốc, độ ẩm không khí tăng ảnh hưởng đến lý tính của các dược phẩm làm tăng quá trình thủy phân tạo ra các sản phẩm phân hủy như các dạng sản phẩm khô bị hút

ẩm, các dạng bột đông khô, sủi bọt, làm phai màu viên bao, làm thuốc bột bị vón, tạo điều kiện cho sự xuất hiện hoặc tăng trưởng của các vi sinh vật, làm giảm hoạt tính

+ Ánh sáng:[4]

Ánh sáng có những tác động khác nhau đối với dược phẩm Thông thường ánh sáng xúc tác các phản ứng oxy hóa bằng cách tạo ra gốc tự do, thúc đẩy quá trình phân hủy thuốc, làm thuốc dễ chuyển màu

Tác động của ánh sáng thường do các tia hồng ngoại có bước sóng từ 750 nm – 10.000 nm, kích thích oxy trong không khí làm tăng khả năng oxy hóa và tia tử ngoại có bước sóng từ 50 nm – 400 nm, đặc biệt là các tia có bước sóng

từ 200 nm – 290 nm dưới tác động của tia tử ngoại nguyên tử oxy kết hợp với các ion oxy hay phân tử oxy tạo ra ozon có khả năng oxy hóa mạnh hơn oxy

2.2.3 Phương pháp nghiên cứu độ ổn định của thuốc

+ Phương pháp già hóa cấp tốc: [4][5][11]

Là phương pháp phân hủy nhân tạo đặt thuốc ở các điều kiện khắc nghiệt như nhiệt độ cao hơn nhiệt độ bảo quản bình thường, làm cho tốc độ phân hủy thuốc tăng nhanh hơn, rút ngắn thời gian theo dõi, đánh giá chất lượng thuốc Được phép sử dụng nhiệt độ cao nhất để đảm bảo xác định tuổi thọ của thuốc trong thời gian ngắn nhất, nhưng nhiệt độ này không vượt quá nhiệt độ làm phân hủy thuốc Nghĩa là nhiệt độ thử nghiệm phải nằm trong giới hạn không làm thay đổi cơ chế phản ứng thuốc, cũng như không làm biến đổi trạng thái,

cấu trúc hóa lý của nguyên liệu hoặc thành phẩm dạng bào chế,…

+ Phương pháp theo dõi tự nhiên:

Điều kiện bảo quản thuốc thực nghiệm gần với điều kiện bảo quản thực của thuốc lưu hành trên thị trường

Sau từng thời gian định kỳ đánh giá chất lượng theo tiêu chuẩn qui định Dựa trên phân tích thống kê kết quả tính toán để xác định độ ổn định (tuổi thọ) của thuốc Hoặc theo dõi diễn biến sự giảm hàm lượng dưới 90% theo thời gian dưới những điều kiện bảo quản dự kiến mà sản phẩm sẽ lưu hành trên thị trường

2.2.4 Phương pháp tính tuổi thọ và hạn dùng của thuốc

+ Phương pháp Arrhenius: [5]

Lão hóa cấp tốc ở nhiều nhiệt độ:

Mẫu đặt trong tủ vi khí hậu nhiệt độ t0C bình thường + 100C, + 200C, + 300C hay hơn

Xác định hàm lượng thuốc bằng phương pháp qui định sau những khoảng thời gian nhất định để trong tủ vi khí hậu

Xây dựng đường biểu diễn ln[D%]=f(t) hay lg[D%]=f(t) ở từng t0C bảo quản Xác định các hệ số k của từng điều kiện bảo quản

Thiết lập được bảng tương ứng giữa lnk (hay lgk) và 1000/T

Từ đường biểu diễn trên suy ra lnk25

Từ lnk 25 tính được k25 và t90 theo công thức: t90 = 25

0,1053

K

+ Phương pháp van’t Hoff:

Xác định hàm lượng theo thời gian

Vẽ đường ln[D]=f(t) để tính được k1

Tính tuổi thọ ở nhiệt độ t1 = t90(t1)

Sử dụng công thức van’t Hoff để suy ra tuổi thọ ở nhiệt độ cần bảo quản t