Xây dựng qui trình định lượng và khảo sát độ ổn định của thuốc bột cefuroxim

Mục tiêu của đề tài là nghiên cứu xây dựng qui trình định lượng cefuroxim và khảo sát độ ổn định của thuốc bột cefuroxim. Xây dựng và thẩm định phương pháp HPLC với đầu dò PDA định lượng cefuroxim trong chế phẩm thuốc bột. Khảo sát độ ổn định của thuốc bột cefuroxim ở những điều kiện bảo quản khác nhau.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học XÂY DỰNG QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG VÀ KHẢO SÁT ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA THUỐC BỘT CEFUROXIM Nguyễn Thị Vương Thảo*, Trịnh Thị Thu Loan** TÓM TẮT Mục tiêu: Mục tiêu đề tài nghiên cứu xây dựng qui trình định lượng cefuroxim khảo sát độ ổn định thuốc bột cefuroxim Phương pháp: Xây dựng thẩm định phương pháp HPLC với đầu dò PDA định lượng cefuroxim chế phẩm thuốc bột Khảo sát độ ổn định thuốc bột cefuroxim điều kiện bảo quản khác Kết quả: Phương pháp HPLC với đầu dò PDA, cột C18 pha đảo, pha động gồm dung dịch đệm phosphat pH 4:Acetonitril (70:30), tốc độ dòng ml/ phút, bước sóng phát 280 nm Khoảng nồng độ tuyến tính 10100 μg/ ml, phương trình hồi qui ŷ = 53504x với R2 = 0,9999, P < 0,005 Phương pháp cho thấy có tuyến tính khoảng nồng độ khảo sát, đạt độ xác độ Về độ ổn định, hàm lượng cefuroxim chế phẩm từ lô thuốc bột liên tiếp không thay đổi sau 24 tháng bảo quản 30 oC Tuổi thọ thuốc xác định 24 tháng bảo quản 30 oC Kết luận: Phương pháp HPLC đơn giản xác, áp dụng để định lượng cefuroxim trình theo dõi độ ổn định thuốc bột cefuroxim Độ ổn định thuốc bột cefuroxim khảo sát điều kiện bảo quản khác Tuổi thọ thuốc bột cefuroxim xác định hai năm bảo quản 30oC Từ khoá: cefuroxim, độ ổn định, tuổi thọ ABSTRACT DETERMINATION OF CEFUROXIME AND ESTIMATION OF ITS STABILITY IN POWDER Nguyen Thi Vuong Thao, Trinh Thi Thu Loan * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 45 - 49 Objective: The aim of this study was to develop a method for determination of cefuroxime and estimation of its stability in powder Methods: A reversed-phase high performance liquid chromatographic method (HPLC) were described for the determination of cefuroxime in pharmaceutical preparations The stability of cefuroxime powder was estimated at accelerated and long-term conditions The shelf-life of cefuroxime powder was estimated by van’t Hoff equation Results: The HPLC method depends upon using a resersed phase C18 column at ambient temperature with a mobile phase consisting of phosphate buffer solution pH 4:Acetonitril (70:30) at a flow rate 1ml.min-1 Quantitation was achieved by PDA detection at 280 nm Calibration curve was linear over the concentration range 10-100 μg/ ml (R2 = 0.9999, RSD = 0.95%, recovery = 100.11%) The HPLC method showed good linearity, precision and accuration Cefuroxime powder stabled after 24 months at 30 oC The shefl-life of cefuroxime powder is 24 months storaged at below 30 oC Conclusion: The HPLC method was successfully applied to assay of cefuroxime powder for oral suspension The procedure was rapid, simple and suitable for quality control applications The shefl-life of cefuroxime powder * Công ty Glomed, **Khoa Dược, ĐH Y Dược TP.HCM Tác giả liên lạc: TS Trịnh Thị Thu Loan ĐT: 0918256642 Chuyên Đề Dược Khoa Email: trinhthithuloan@uphcm.edu.vn 45 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 is 24 months storaged at below 30 oC Key words: cefuroxime, stability, shelf-life ĐẶT VẤN ĐỀ Phương pháp nghiên cứu Cefuroxim kháng sinh thuộc nhóm cephalosporin hệ thứ 2, có phổ kháng khuẩn rộng, dùng nhiều điều trị bệnh nhiễm trùng(5,4) Cefuroxim điều chế nhiều dạng chế phẩm viên để uống, bột pha hỗn dịch uống, dung dịch tiêm Trong bột pha hỗn dịch uống dạng thuốc thích hợp cho trẻ em Xây dựng qui trình định lượng cefuroxim phương pháp HPLC ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Cefuroxim axetil hỗn hợp hai đồng phân quang học không đối quang A B Hai đồng phân có thời gian lưu gần nhau, vậy, điều kiện sắc ký khảo sát cho hệ số phân giải hai đỉnh đồng phân A B không nhỏ Do cefuroxim axetil có tính acid yếu (pKa = 4,7) phân cực nên điều kiện sắc ký chọn cột pha đảo, pha động gồm acetonitril dung dịch đệm phosphat pH Phương pháp thẩm định áp dụng khảo sát độ ổn định thuốc bột cefuroxim Mẫu thuốc bột bảo quản nhiệt độ cao (55oC) để tạo sản phẩm phân hủy nhằm chứng minh tính đặc hiệu qui trình phân tích có diện sản phẩm phân hủy mẫu Đối tượng nghiên cứu Chuẩn bị mẫu Thuốc bột cefuroxim pha hỗn dịch uống hàm lượng 125 mg Nơi nghiên cứu bào chế: Bộ môn Bào Chế, khoa Dược - ĐH Y Dược TP.HCM Dung dịch chuẩn gốc: Cân xác lượng cefuroxim axetil chuẩn tương đương 50 mg cefuroxim cho vào bình định mức 100 ml, thêm 10 ml methanol, lắc hòa tan, thêm dung dịch đệm phosphat pH đến vạch Lắc Để đảm bảo chất lượng thuốc suốt q trình bảo quản, lưu thơng phân phối sử dụng, độ ổn định thuốc phải công bố đăng ký lưu hành sản phẩm(2,1) Vì vậy, mục tiêu đề tài xây dựng qui trình định lượng khảo sát độ ổn định chế phẩm thuốc bột cefuroxim pha hỗn dịch uống nhằm xác định tuổi thọ thuốc cung cấp liệu cho hồ sơ đăng ký thuốc Ba lô thuốc bột sử dụng nghiên cứu độ ổn định lô 110908, lô 130908 lô 230908 Hóa chất, dung mơi Chất chuẩn: cefuroxim axetil, số lô: QT126 031007, hàm lượng 98,18% tương ứng 81,82% cefuroxim (Viện Kiểm Nghiệm thuốc TP.HCM); natri dihydrophosphat, natri dihydro phosphat đạt tiêu chuẩn dùng phân tích kiểm nghiệm (Prolabo); acetonitril methanol đạt tiêu chuẩn dủng cho HPLC (Merck) Thiết bị Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) WATERS 600E (Mỹ) Tủ vi khí hậu CARON (Mỹ), máy đo pH INOLAB pH 720 (Đức) 46 Dung dịch chuẩn định lượng: Hút xác 10 ml dung dịch chuẩn gốc cho vào bình định mức 100 ml, thêm dung dịch đệm phosphat pH đến vạch Lắc Lọc qua màng lọc 0,45 μm Dung dịch thử: Cân xác lượng bột thuốc tương ứng với 50 mg cefuroxim từ 10 gói thuốc bột nghiền trộn kỹ, cho vào bình định mức 100 ml, thêm 30 ml methanol siêu âm phút, bổ sung vừa đủ dung dịch đệm phosphat pH Lắc Lọc (bỏ 10 ml dung dịch đầu), hút xác 10 ml dịch lọc cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung dung dịch đệm pH vừa đủ Lắc Lọc qua màng lọc 0,45 μm Bơm mẫu chạy sắc ký Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Thẩm định phương pháp định lượng (HPLC) Phương pháp thẩm định tính phù hợp hệ thống, độ tuyến tính, độ xác độ theo nguyên tắc chung Khảo sát độ ổn định thuốc bột cefuroxim Để khảo sát độ ổn định, ba lô thuốc bột cefuroxim liên tiếp bảo quản điều kiện qui định Các tiêu chất lượng dùng để đánh giá độ ổn định thuốc cảm quan, hàm lượng nước, pH, hàm lượng cefuroxim độ hòa tan Tuổi thọ thực thuốc xác định thời điểm hàm lượng hoạt chất giảm đến giới hạn theo qui định bảo quản Nghiên cứu Y học điều kiện dài hạn Trong trường hợp này, tuổi thọ thực thuốc xác định hàm lượng cefuroxim giảm 90% so với hàm lượng nhãn điều kiện bảo quản 30 ± oC/ 75 ± 5% RH Tuy nhiên, để phục vụ hồ sơ đăng ký thuốc, tuổi thọ thuốc ước tính theo ngun lý van’t Hoff từ kết nghiên cứu độ ổn định 40 ± oC/ 75 ± 5% RH KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Thẩm định phương pháp HPLC định lượng cefuroxim Điều kiện sắc ký để định lượng cefuroxim xác định Hai đỉnh cefuroxim axetil A B tách hoàn toàn với hệ số phân giải lớn 2, đỉnh cefuroxim đối xứng (b) (a) (c) Hình Sắc ký đồ cefuroxim axetil chuẩn (a), cefuroxim axetil mẫu thử (b) mẫu thử bảo quản 55 oC Điều kiện sắc ký: Cột Gemini-NX, pha đảo, C18 (4,5× 50 mm, μm) Pha động: Đệm phosphat pH 4:Acetonitril (70:30 tt/tt) Tốc độ dòng: ml/ phút Bước sóng phát hiện: 280 nm Thể tích tiêm mẫu: 20 μl Nhiệt độ cột: nhiệt độ phòng Bảng Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống qui trình định lượng dung dịch mẫu chuẩn Giá trị thống kê X SD RSD (%) Thời gian lưu (phút) Đỉnh B Đỉnh A 12,72 0,04 0,31 14,25 0,04 0,25 Tính phù hợp hệ thống mẫu chuẩn (n = 6) Hệ số bất đối Tổng diện tích Hệ số phân đỉnh (AU) giải Đỉnh B Đỉnh A 2590037 12933 0,50 1,08 0,01 0,66 1,07 0,02 1,59 2,30 0,02 0,74 Số đĩa lý thuyết Đỉnh B Đỉnh A 7303 143,56 1,97 7513 58,21 0,77 Bảng Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống qui trình định lượng dung dịch mẫu thử Giá trị thống kê X SD RSD (%) Thời gian lưu (phút) Đỉnh B Đỉnh A 13,08 0,07 0,53 14,59 0,13 0,89 Chuyên Đề Dược Khoa Tính phù hợp hệ thống mẫu thử (n = 6) Hệ số bất đối Tổng diện tích Hệ số phân đỉnh (AU) giải Đỉnh B Đỉnh A 2605938 18143,95 0,70 1,11 0,01 0,48 1,08 0,04 4,06 2,33 0,03 1,29 Số đĩa lý thuyết Đỉnh B Đỉnh A 7303 143,56 1,97 7513 58,21 0,77 47 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Bảng Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống qui trình định lượng dung dịch mẫu thử bảo quản 55 oC Giá trị thống kê X SD RSD(%) Thời gian lưu (phút) Đỉnh B Đỉnh A 12,945 0,03 0,22 Tính phù hợp hệ thống mẫu thử (n = 6) Hệ số bất đối Tổng diện tích Hệ số phân đỉnh (AU) giải Đỉnh B Đỉnh A 14,45 0,03 0,19 1713062 11671,06 0,68 Kết cho thấy hệ số bất đối trung bình đỉnh cefuroxim axetil B A khoảng 1, hệ số phân giải lớn 2, số đĩa lý thuyết lớn 5000 Giá trị RSD thông số sắc ký cefuroxim axetil tất mẫu thử nhỏ 2% Vậy qui trình định lượng cefuroxim thuốc bột đạt tính phù hợp hệ thống Bảng Kết độ tuyến tính, độ xác độ phương pháp Yêu cầu thẩm định Độ tuyến tính Kết Nồng độ 10-100 μg/ ml Phương trình hồi qui: yˆ = 53504,5x (P