Xây dựng qui trình định lượng paclitaxel bằng phương pháp điện di mao quản

Điện di mao quản là một kỹ thuật phân tích mới ở Việt Nam và có nhiều ưu điểm so với HPLC như hiệu lực tách cao, ít tốn dung môi, ít độc hại và ô nhiễm môi trường. Do đó, việc xây dựng quy trình định lượng paclitaxel bằng phương pháp điện di mao quản sẽ là một đóng góp vào dữ liệu khoa học, cũng như góp phần ứng dụng trong kiểm nghiệm chế phẩm có thành phần paclitaxel tại Việt Nam.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học XÂY DỰNG QUI TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG PACLITAXEL BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN Hứa Hoàng Oanh*, Nguyễn Phương Dung*, Trần Cơng Luận** TĨM TẮT Đặt vấn đề: Điện di mao quản kỹ thuật phân tích Việt Nam có nhiều ưu điểm so với HPLC hiệu lực tách cao, tốn dung mơi, độc hại nhiễm mơi trường Do đó, việc xây dựng quy trình định lượng paclitaxel phương pháp điện di mao quản đóng góp vào liệu khoa học, góp phần ứng dụng kiểm nghiệm chế phẩm có thành phần paclitaxel Việt Nam Mục tiêu nghiên cứu: Xây dựng quy trình định lượng paclitaxel phương pháp điện di mao quản Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Xây dựng quy trình định lượng paclitaxel chiết từ Thơng đỏ dài (Taxus wallichiana Zucc.) trồng Lâm Đồng với điều kiện điện di: hệ thống điện di Agilent G7100A; đầu dò PDA; cột mao quản - silica gel nung chảy có chiều dài tổng 56 cm; chiều dài hiệu 50 cm, đường kính 50 µm Điện thế: 20 kV Nhiệt độ: 25oC Bước sóng phát hiện: 227 nm Dung dịch điện di nền: dinatritetraborat 50 mM, pH 10, methanol 10% Thể tích tiêm mẫu: 50 mbar × 5s Kết quả: Quy trình phân tích paclitaxel phương pháp điện di mao quản thẩm định đạt tính phù hợp hệ thống, có tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính rộng, độ lặp lại độ Kết luận: Đề tài xây dựng quy trình định lượng paclitaxel cao chiết thông đỏ phương pháp điện di mao quản Từ khoá: điện di mao quản ASTRACT VALIDATING CAPILLARY ELECTROPHORESIS METHOD FOR THE DETERMINATION OF PACLITAXEL Hua Hoang Oanh, Nguyen Phuong Dung, Tran Cong Luan * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 135 – 140 Objectives: Capillary electrophoresis (CE) is a new analytical technique in Vietnam with many advantages over HPLC, such as high efficiency of separation, short analysis time, remarkably low injection volume, environmentally friendly Therefore, construction of quantitative process paclitaxel using capillary electrophoresis will be a contribution to scientific data, as well as contributing applications to the determination of the products containing paclitaxel in Vietnam The aim of this study was to establish the quantitative analysis of paclitaxel by mean of capillary electrophoresis Materials and Methods: The determination of paclitaxel isolated from Taxus wallichiana Zucc cultivated in Lam Dong province by CE was performed in a fused silica capillary with a total length of 56 cm, effective length of 50 cm, i.d 50 µm with G7100A – Agilent Life Sciences 7100 Capillary Electrophoresis Instrument The applied voltage for the determination was +20 kV A 50 mM sodium tetraborate solution (pH 10, 10% methanol) was used as a separation buffer Volume of sample injection was 50 mbar × 5s Results: The method was suitably validated with respect to linearity, accuracy, specificity, and linearity Conclusion: Quantitative procedure of paclitaxel by using capillary electrophoresis was successfully *Khoa Y Học Cổ Truyền, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS.BS Hứa Hồng Oanh ĐT: 0334205210 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền *Trường Đại học Tây Đô Email: hhoanh@ump.edu.vn * 135 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 established and evaluated Keywords: capillary electrophoresis ĐẶT VẤN ĐỀ Trong thuốc trị ung thư paclitaxel hợp chất diterpen phát vỏ lồi Thơng đỏ Taxus brevifolia miền Bắc California vào năm 1967 FDA thức phê duyệt sử dụng điều trị ung thư vú vào năm 1992(3,4) Việt Nam nghiên cứu trồng, chiết xuất paclitaxel taxoid có giá trị làm thuốc điều trị ung thư từ Thông đỏ dài (Taxus wallichiana Zucc.) Bên cạnh đó, nghiên cứu kiểm nghiệm hoạt chất tiến hành để góp phần khẳng định chất lượng nguồn dược liệu chế phẩm liên quan từ Thông đỏ dài Việt Nam Trong phương pháp kiểm nghiệm nghiên cứu điện di mao quản kỹ thuật phân tích Việt Nam có nhiều ưu điểm so với HPLC nhờ hiệu lực tách tốt, tốn dung mơi, độc hại ô nhiễm môi trường Đó lý đề tài chọn ứng dụng phương pháp điện di mao quản để định lượng paclitaxel chiết từ Thông đỏ dài trồng Lâm Đồng ĐỐITƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu thí nghiệm Nguyên vật liệu Paclitaxel chuẩn (code T7402) mua từ SigmaAldrich Số lô: MKBT3791V, độ tinh khiết nhãn ≥ 95% Paclitaxel chiết từ Thông đỏ dài (Taxus wallichiana Zucc.) trồng Lâm Đồng nhóm nghiên cứu Trung tâm Sâm Dược liệu Tp Hồ Chí Minh cung cấp Dung mơi, hóa chất nghiên cứu đạt tiêu chuẩn tinh khiết mua từ Merk (Đức): methanol, acetonitril, dinatri tetraborat, acid boric, natri hydroxyd Phương pháp nghiên cứu Khảo sát quy trình điện di Tiến hành khảo sát số điều kiện điện 136 di cách thay đổi hệ đệm, pH đệm, nồng độ đệm điện để tìm điều kiện mà pic paclitaxel đạt yêu cầu thông số điện di Điều kiện điện di thích hợp để định lượng paclitaxel Hệ thống điện di Agilent G7100A; đầu dò PDA; cột mao quản - silica gel nung chảy có chiều dài tổng 56 cm; chiều dài hiệu 50 cm, đường kính 50 µm Điện thế: 20 kV Nhiệt độ: 25oC Bước sóng phát hiện: 227 nm Dung dịch điện di nền: dinatritetraborat 50 mM, pH 10, methanol 10% Thể tích tiêm mẫu: 50 mbar x 5s Thẩm định quy trình định lượng theo hướng dẫn Bộ Y tế(1) ICH(2) gồm tiêu: tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, khoảng tuyến tính, độ lặp lại, độ Nơi tiến hành thực nghiệm Bộ mơn Hóa Phân tích – Kiểm nghiệm, Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh KẾT QUẢ Khảo sát tính phù hợp hệ thống Để đánh giá tính phù hợp hệ thống chất đối chiếu, pha dung dịch đối chiếu loãng paclitaxel có nồng độ 100 µg/ml Tiến hành điện di lần với điều kiện điện di chọn Kết trình bày Bảng Bảng Bảng kết đánh giá tính phù hợp hệ thống mẫu chuẩn Số lần TB SD RSD tm (phút) 10,508 10,471 10,458 10,413 10,434 10,888 10,529 0,087 1,70 Corr.A (mAu) 0,0456 0,0425 0,0427 0,0423 0,0438 0,0408 0,0429 0,0016 3,77 As 2,0 2,4 2,5 2,4 2,3 2,7 Các thông số thời gian lưu diện tích đỉnh bảng kết nằm giới hạn Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 cho phép có RSD