KHẢO sát độc TÍNH cấp và tác DỤNG KHÁNG VIÊM của DỊCH CHIẾT từ THÂN cây lấu đỏ

Viêm là một triệu chứng rất thường gặp trong cuộc sống, viêm có thể xuất hiện đơn độc hay đi kèm với các bệnh lý khác. Viêm là một đáp ứng bảo vệ nhằm đưa cơ thể trở về tình trạng trước khi bị tổn thương, nhưng khi đáp ứng viêm không phù hợp hay có sự gia tăng quá mức, viêm trở thành có hại cho cơ thể, gây đau đớn, tổn thương mô lành, rối loạn chức năng. Trên thị trường hiện nay thuốc kháng viêm rất phổ biến với nhiều cơ chế tác động khác nhau như các thuốc nhóm corticoid (ức chế enzyme phospholipase), NSAIDs (ức chế enzyme cyclooxygenase (COX), có 2 loại COX: COX1 có ở niêm mạc dạ dày, thận, tiểu cầu và COX2 kích thích sinh tổng hợp prostaglandin trong viêm), các thuốc kháng leucotrien – các thuốc trị hen suyễn (ức chế lipooxygenase)... Tuy tác dụng kháng viêm của các nhóm thuốc này rất tốt, nhưng bên cạnh đó cũng có rất nhiều tác dụng không mong muốn trên đường tiêu hóa, tim mạch, thận… chính vì thế mà bệnh nhân thường lo ngại khi sử dụng các thuốc kháng viêm. Hiện nay có rất nhiều công trình nghiên cứu thuốc kháng viêm nhằm để đem lại hiệu quả kháng viêm tốt nhất và giảm tối đa tác dụng phụ. Đối với nhóm thuốc kháng viêm NSAIDs tác động không chọn lọc trên COX sẽ gây viêm loét dạ dày – tá tràng (thường xảy ra), suy chức năng thận, chống kết tập tiểu cầu; để tránh tác dụng phụ trên đường tiêu hóa, các nhà khoa học đã nghiên cứu ra thuốc tác động chọn lọc trên COX2 như etodolac, nimesulid, celecoxib, rofecoxib, valdecoxib… Tuy tác dụng trên đường tiêu hóa giảm, nhưng nhiều thuốc nhóm này gây tác dụng phụ khác nghiêm trọng và không bao lâu sau đã bị rút khỏi thị trường như rofecoxib làm tăng nguy cơ đột quỵ (2004); valdecoxib gây độc, hoại tử biểu bì (2005)… Tương tự trong tây y, trong đông y cũng có nhiều công trình nghiên cứu tác dụng kháng viêm của các thuốc có nguồn gốc thiên nhiên như cao thuốc được chiết xuất từ Rau má, Rau đắng, Màn màn tím, Đinh lăng, Dây khai… đã tạo ra một hướng mới nhiều triển vọng trong điều trị viêm. Để góp phần vào tìm kiếm những thuốc có tác dụng kháng viêm tốt, giảm tối đa tác dụng phụ, chúng tôi tìm hiểu rất nhiều cây thuốc trong dân gian và nhận thấy cây Lấu đỏ được sử dụng phổ biến để điều trị cảm, bạch hầu, kiết lỵ, sốt thương hàn, viêm amydal, viêm họng, thấp khớp, đau nhức xương, đau lưng… Nhằm khẳng định thêm về tác dụng kháng viêm của cây Lấu đỏ chúng tôi đã tiến hành thực hiện đề tài “Khảo sát độc tính cấp và tác dụng kháng viêm của dịch chiết từ thân cây Lấu đỏ (Psychotria rubra (Lour.) Poir., Rubiaceace)”.

BẠCH THỊ KIỀU CHINH

KHẢO SÁT ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM

CỦA DỊCH CHIẾT TỪ THÂN CÂY LẤU ĐỎ

(Psychotria rubra (Lour.) Poir., Rubiaceae)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

Thành phố Hồ Chí Minh – 2012

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

-

BẠCH THỊ KIỀU CHINH

KHẢO SÁT ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM

CỦA DỊCH CHIẾT TỪ THÂN CÂY LẤU ĐỎ

(Psychotria rubra (Lour.) Poir., Rubiaceae)

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC

Giảng viên hướng dẫn: ThS Phạm Thị Hóa

Thành phố Hồ Chí Minh – 2012

MỤC LỤC

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

DANH MỤC CÁC HÌNH

LỜI CẢM ƠN

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY LẤU ĐỎ 3

2.1.1 Vị trí phân loại của cây Lấu đỏ 3

2.1.2 Tổng quan về chi Psychotria L 4

2.1.3 Tổng quan về cây Lấu đỏ 6

2.1.3.1 Tên gọi 6

2.1.3.2 Phân bố 6

2.1.3.3 Mô tả 6

2.1.3.4 Thành phần hóa học 8

2.1.3.5 Tác dụng dược lý 8

2.1.3.6 Tính vị, công năng 8

2.1.3.7 Công dụng 8

2.1.3.8 Bài thuốc có sử dụng Lấu đỏ 9

2.2 VIÊM 9

2.2.1 Khái niệm viêm 9

2.2.2 Nguyên nhân gây viêm 10

2.2.3 Phân loại viêm 10

2.2.4 Các giai đoạn của quá trình viêm 11

2.2.5 Biểu hiện của viêm 13

2.2.6 Tổng quan một số thuốc kháng viêm 14

2.2.6.1 Nhóm NSAIDs 15

2.2.6.2 Nhóm Glucocorticoid 17

2.3 ĐỘC CẤP 18

2.3.1 Một số khái niệm 18

2.3.2 Một số yêu cầu về thú vật thử nghiệm và đường dùng thuốc 18

2.3.3 Tầm quan trọng của việc xác định LD50 19

2.3.4 Nguyên tắc chung 20

2.3.5 Bước nhảy liều 20

2.3.6 Thăm dò liều ban đầu 20

2.3.7 Ngoại suy liều LD100 21

2.3.8 Ngoại suy liều LD0 21

2.3.9 Quan sát và ghi chép kết quả 21

2.3.10 Các trường hợp không xác định LD50 21

2.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP GÂY VIÊM THỰC NGHIỆM 22

2.4.1 Gây viêm bằng tác nhân hóa học 22

2.4.1.1 Gây viêm bằng carragenan 1% 22

2.4.1.2 Gây viêm bằng dung dịch formalin 3,5% 23

2.4.1.3 Gây viêm bằng lòng trắng trứng 24

2.4.1.4 Gây viêm bằng mù tạt dạng hỗn dịch 2,5% trong nước 24

2.4.1.5 Gây viêm bằng dextran 25

2.4.1.6 Gây viêm bằng hỗn dịch vô khuẩn kaolin 10% 25

2.4.2 Gây viêm bằng nhiệt nóng 25

2.4.3 Tạo u hạt 25

2.4.3.1 Cấy viên amian 25

2.4.3.2 Cấy hạt cotton 26

2.4.4 Tạo túi hạt 26

2.4.5 Tạo ban đỏ 27

2.4.6 Gây mẫn cảm bằng trực khuẩn lao 27

2.4.7 Gây cổ trướng 27

2.4.8 Sự ức chế men hyaluronidase 28

2.4.9 Gây tràn dịch màng phổi 28

CHƯƠNG 3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30

3.1 CHIẾT XUẤT THÂN CÂY LẤU ĐỎ 30

3.2 ĐỘNG VẬT NGHIÊN CỨU 30

3.3 THIẾT BỊ, HÓA CHẤT VÀ THUỐC THỬ NGHIỆM 31

3.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31

3.4.1 Phương pháp nghiên cứu độc tính cấp 31

3.4.1.1 Chuẩn bị dịch chiết 31

3.4.1.2 Các bước thực hiện 31

3.4.2 Phương pháp khảo sát hoạt tính kháng viêm 32

3.4.2.1 Mô hình gây u hạt thực nghiệm bằng cách cấy amian 32

3.4.2.2 Mô hình gây viêm bằng carragenan 33

3.4.3 Xử lý kết quả 36

CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 37

4.1 KẾT QUẢ 37

4.1.1 Kết quả thử độc tính cấp 37

4.1.2 Kết quả mô hình gây u hạt thực nghiệm bằng cách cấy amian 39

4.1.3 Kết quả mô hình gây viêm bằng carragenan 43

4.2 BÀN LUẬN 45

4.2.1 Bàn luận về kết quả thực nghiệm 45

4.2.2 Bàn luận về mô hình thử nghiệm 46

4.2.2.1 Phương pháp xác định độc tính cấp 46

4.2.2.2 Mô hình gây u hạt thực nghiệm bằng cách cấy amian 47

4.2.2.3 Mô hình gây viêm bằng carragenan 47

CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 50

5.1 KẾT LUẬN 50

5.2 ĐỀ NGHỊ 50

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 2.1 So sánh COX-1 và COX-2

Bảng 4.1 Thử nghiệm độc tính cấp đường uống của cao nước Bảng 4.2 Thử nghiệm độc tính cấp đường uống của cao cồn Bảng 4.3 Khối lượng u hạt tươi giữa các lô

Bảng 4.4 Khối lượng u hạt khô giữa các lô

Bảng 4.5 Sự thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian giữa các lô

Hình 2.6 Diễn tiến của quá trình viêm

Hình 2.7 Các giai đoạn của quá trình viêm

Hình 2.8 Cơ chế của một số thuốc kháng viêm

Hình 3.1 Chuột Swiss albican

Hình 3.2 A Máy đo thể tích chân chuột (Plethysmometer)

B Thao tác đo thể tích chân chuột

C Chân chuột trước khi gây viêm

D Chân chuột sau khi gây viêm

Hình 4.1 Khối lượng u hạt tươi trung bình giữa các lô

Hình 4.2 Khối lượng u hạt khô trung bình giữa các lô

Hình 4.3 Sự thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên, em gởi đến cô ThS Phạm Thị Hóa lòng biết ơn sâu sắc đã trực tiếp hướng dẫn em thực hiện đề tài này, cô luôn bên cạnh giúp đỡ, động viên, khích lệ, giúp em vượt qua mọi khó khăn trong suốt quá trình thực hiện khóa luận

Em xin chân thành cám ơn anh DS Nguyễn Thành Triết đã quan tâm chia sẻ kinh nghiệm, động viên, góp ý, dành thời gian chỉ bảo cho em trong suốt quá trình thực hiện khóa luận

Em xin chân thành cảm ơn quý thầy, cô đã dành thời gian xem xét, đánh giá và phản biện giúp em hoàn thiện bài khóa luận

Em xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến các thầy cô bộ môn Dược học cổ truyền và Dược

lý đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo và truyền đạt, trang bị cho em những kiến thức quý báo để em hoàn thành tốt bài khóa luận

Em xin chân thành cảm ơn các anh, chị bộ môn Dược học cổ truyền, bộ môn Dược

lý và các anh chị Phòng thí nghiệm đã hướng dẫn, giúp đỡ và tạo điều kiện cho em hoàn thành tốt bài khóa luận

Xin chân thành cảm ơn các bạn lớp D2007, đặc biệt các bạn cùng làm khóa luận bộ môn Dược học cổ truyền và Dược lý đã quan tâm, động viên và nhiệt tình giúp đỡ mình trong suốt quá trình học tập và làm khóa luận này

Mặc dù đã cố gắng hoàn thành bài khóa luận với tất cả tâm huyết, nỗ lực của bản thân nhưng chắc chắn không tránh khỏi sai sót Em kính mong nhận được sự chỉ bảo tận tình của quý thầy cô để bài khóa luận được hoàn thiện hơn Em xin chân thành cảm ơn!

Bạch Thị Kiều Chinh Giảng viên hướng dẫn: ThS Phạm Thị Hóa

1 Mở đầu và đặt vấn đề

Cây Lấu đỏ được sử dụng trong dân gian với nhiều công dụng như: trị cảm mạo, viêm amydal, viêm họng, tiêu chảy, vết thương chảy máu, viêm mủ da… Để làm sáng tỏ thêm tác dụng kháng viêm của cây Lấu đỏ chúng tôi tiến hành nghiên cứu “Khảo sát độc tính cấp và tác dụng kháng viêm của dịch

chiết từ thân cây Lấu đỏ (Psychotria rubra (Lour.) Poir., Rubiaceae)”

2 Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

2.1 Chiết xuất thân cây Lấu đỏ

- Chiết bằng nước: 1 kg dược liệu, sắc 2 lần, mỗi lần với 3 lít nước Dịch chiết thu được đem cô cách thủy thành cao 1/1 (khối lượng/thể tích)

- Ngấm kiệt bằng cồn 70%: 1 kg dược liệu, ngấm kiệt với một thể tích dung môi gấp 10 lần (10 lít) Dịch chiết thu được đem cô cách thủy thành cao 1/1 (khối lượng/thể tích)

2.2 Động vật thử nghiệm: Chuột nhắt trắng cùng phái chủng Swiss albino, 5-6 tuần tuổi do viện

Pasteur TP Hồ Chí Minh cung cấp

2.3 Phương pháp nghiên cứu

Độc tính cấp: Chuột được chia thành 4 lô (n=6): lô chứng (nước cất), lô thuốc thử với 3 liều khác nhau Cao nước với các liều 50 g/kg, 100 g/kg và 200 g/kg; cao cồn với các liều 40 g/kg, 80 g/kg và

160 g/kg Theo dõi hành vi, thể trạng, tỷ lệ chuột chết trong 72 giờ

Tác động kháng viêm: 2 mô hình

- Gây u hạt thực nghiệm bằng cách cấy amian: Chuột được chia thành 6 lô (n=7-8): lô chứng (nước cất), lô đối chứng (diclofenac 10 mg/kg) và 4 lô thử cao nước và cao cồn với liều lần lượt là 7,2 g/kg, 14,4 g/kg Chuột được cấy một viên amian vào vùng lưng, cho chuột uống thuốc 1 lần/ngày Đến ngày thứ 11, bóc tách u hạt tươi đem cân, sau đó sấy khô u hạt và cân lại từng u hạt

- Gây phù chân chuột bằng carragenan: Chuột được chia thành 6 lô (n=6-8): lô chứng (nước cất), lô đối chứng (diclofenac 10 mg/kg) và 4 lô thử cao nước và cao cồn với liều lần lượt là 7,2 g/kg và 14,4 g/kg Chuột được gây viêm bằng cách tiêm dưới da vào gan bàn chân phải sau 0,025 ml hỗn dịch carragenan 1%, 3 giờ sau đó đo thể tích chân chuột bằng máy đo thể tích chân chuột Plethysmometer, loại những chuột có thể tích phù dưới 50%; cho chuột uống thuốc và đo thể tích chân chuột 1 lần/ngày trong 6 ngày

3 Kết quả và bàn luận

Độc tính cấp: cho chuột uống cao thuốc với liều cao nhất có thể: 200 g/kg (cao nước), 160 g/kg (cao cồn), chuột không chết, không có biểu hiện bất thường Như vậy chưa xác định được độc tính cấp Tác động kháng viêm: cao cồn và cao nước được chiết xuất từ thân cây Lấu đỏ đều cho tác dụng kháng viêm tốt Đặc biệt cao nước liều 14,4 g/kg, cao cồn liều 7,2 g/kg cho tác dụng tốt nhất, tương đương với diclofenac 10 mg/kg

4 Kết luận

Kết quả cho thấy cao nước và cao cồn được chiết xuất từ thân cây Lấu đỏ cho tác dụng kháng viêm tốt Điều này cho thấy một tiềm năng lớn để phát triển một thuốc kháng viêm tốt ứng dụng trên lâm sàng

Bach Thi Kieu Chinh Supervisor: Master Pham Thi Hoa

1 Introduction

Psychotria rubra is used in folk with many uses such as treatment flu, sore amydal, pharyngitis,

diarrhea, bleeding wounds, pyodermas To clarify anti-inflammatory effect of P rubra we

conduct a study "Survey acute toxicity and anti-inflammatory effect of extracts from stem of

Psychotria rubra (Lour.) Poir., Rubiaceae."

2 Objective and Researching methods

2.1 Extracts from stem of Psychotria rubra

- Extraction with water: 1 kg stem, decoction 2 times, each time with 3 liters of water Distil extract become solution with concertration 1/1 (weight / volume)

- Extraction with 70% alcohol: 1 kg stem, soaked in alcohol with a volume 10 times (10 liters) Distil extract become solution with concertration 1/1 (weight / volume)

2.2 Experimental animal: 5 to 6 weeks old, white male laboratory rat of species Swiss albino

supported by HCMC Pasteur Institute

2.3 Researching method

Acute toxicity: Rats were divided into 4 groups (n = 6): control group (distilled water), 3 experimental groups are treated with three different doses Extract with water: 50 g / kg, 100 g / kg and 200 g / kg; extract with 70% alcohol: 40 g / kg, 80 g / kg and 160 g / kg Observe behavior, general health, rate of rat died in 72 hours

Anti-inflammatory: 2 experimental models

Granuloma inducted by implanting asbestos: Rats are divided into 6 groups (n = 7-8): control group (distilled water), the comparison group (10 mg / kg dosage with diclofenac) and 4 groups are treated with dosage 7.2 g / kg, 14.4 g / kg (extract with water and 70% alcohol) Rats implanted asbestos into the back, treated once a day By day 11, peel and weigh fresh granuloma, then dried and weighed again

Induction edema by carragenanin: Rats are divided into 6 groups (n = 6-8): control group (distilled water), the comparison group (10 mg / kg dosage with diclofenac) and 4 groups are treated with dosage 7.2 g / kg and 14.4 g / kg (extrac with water and 70% alcohol) Rats were causing inflammation by subcutaneous injection into the after right foot 0,025 ml suspension carragenan 1%; after 3 hours later, the paw volume is mesured by Plethysmometer, rats that have paw volume below 50% are removed Measuring the paw volume and treating once a day for 6 days

3 Results and discussion

Acute toxicity: rats are treated with the highest dosage: 200 g / kg (extract with water), 160 g / kg (extract with 70% alcohol), the rats is not dead, not abnormal So not determine acute toxicity Anti-inflammatory effect: extracts with water and 70% alcohol from the stem have good anti-inflammatory effect Extract with water (14,4 g/kg) and extract with 70% alcohol (7.2 g / kg) for the best effect, equivalent to diclofenac (10 mg / kg)

4 Conclusion

The results showed that extracts from the stem of P rubra have anti-inflammatory effect

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Viêm là một triệu chứng rất thường gặp trong cuộc sống, viêm có thể xuất hiện đơn độc hay đi kèm với các bệnh lý khác Viêm là một đáp ứng bảo vệ nhằm đưa cơ thể trở về tình trạng trước khi bị tổn thương, nhưng khi đáp ứng viêm không phù hợp hay có sự gia tăng quá mức, viêm trở thành có hại cho cơ thể, gây đau đớn, tổn thương mô lành, rối loạn chức năng

Trên thị trường hiện nay thuốc kháng viêm rất phổ biến với nhiều cơ chế tác động khác nhau như các thuốc nhóm corticoid (ức chế enzyme phospholipase), NSAIDs (ức chế enzyme cyclooxygenase (COX), có 2 loại COX: COX-1 có ở niêm mạc dạ dày, thận, tiểu cầu và COX-2 kích thích sinh tổng hợp prostaglandin trong viêm), các thuốc kháng leucotrien – các thuốc trị hen suyễn (ức chế lipooxygenase) Tuy tác dụng kháng viêm của các nhóm thuốc này rất tốt, nhưng bên cạnh đó cũng có rất nhiều tác dụng không mong muốn trên đường tiêu hóa, tim mạch, thận… chính vì thế mà bệnh nhân thường lo ngại khi sử dụng các thuốc kháng viêm

Hiện nay có rất nhiều công trình nghiên cứu thuốc kháng viêm nhằm để đem lại hiệu quả kháng viêm tốt nhất và giảm tối đa tác dụng phụ Đối với nhóm thuốc kháng viêm NSAIDs tác động không chọn lọc trên COX sẽ gây viêm loét dạ dày –

tá tràng (thường xảy ra), suy chức năng thận, chống kết tập tiểu cầu; để tránh tác dụng phụ trên đường tiêu hóa, các nhà khoa học đã nghiên cứu ra thuốc tác động chọn lọc trên COX-2 như etodolac, nimesulid, celecoxib, rofecoxib, valdecoxib… Tuy tác dụng trên đường tiêu hóa giảm, nhưng nhiều thuốc nhóm này gây tác dụng phụ khác nghiêm trọng và không bao lâu sau đã bị rút khỏi thị trường như rofecoxib làm tăng nguy cơ đột quỵ (2004); valdecoxib gây độc, hoại tử biểu bì (2005)… Tương tự trong tây y, trong đông y cũng có nhiều công trình nghiên cứu tác dụng kháng viêm của các thuốc có nguồn gốc thiên nhiên như cao thuốc được chiết xuất

từ Rau má, Rau đắng, Màn màn tím, Đinh lăng, Dây khai… đã tạo ra một hướng mới nhiều triển vọng trong điều trị viêm

Để góp phần vào tìm kiếm những thuốc có tác dụng kháng viêm tốt, giảm tối đa tác dụng phụ, chúng tôi tìm hiểu rất nhiều cây thuốc trong dân gian và nhận thấy cây

Lấu đỏ được sử dụng phổ biến để điều trị cảm, bạch hầu, kiết lỵ, sốt thương hàn, viêm amydal, viêm họng, thấp khớp, đau nhức xương, đau lưng… Nhằm khẳng định thêm về tác dụng kháng viêm của cây Lấu đỏ chúng tôi đã tiến hành thực hiện

đề tài “Khảo sát độc tính cấp và tác dụng kháng viêm của dịch chiết từ thân cây Lấu

đỏ (Psychotria rubra (Lour.) Poir., Rubiaceace)”

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY LẤU ĐỎ [1], [6], [8]

2.1.1 Vị trí phân loại của cây Lấu đỏ

Theo hệ thống phân loại của A.L Takhtajan năm 2009, cây Lấu đỏ (Psychotria rubra (Lour.) Poir., Rubiaceae) có vị trí phân loại như sau:

Psychotria rubra

(Lour.) Poir

Hình 2.1 Vị trí phân loại của Lấu đỏ Psychotria rubra (Lour.) Poir., Rubiaceae

Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta)

Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida)

Phân lớp Hoa môi (Lamiidae)

Bộ Cà phê (Rubiales)

Chi Lấu

(Psychotria L.)

Giới thực vật (Plantae)

Họ Cà phê (Rubiaceae)

2.1.2 Tổng quan về chi Psychotria L

Psychotria L là một chi lớn gồm các loài là cây bụi hoặc cây gỗ nhỏ ít khi là thân thảo trừ loài Psychotria serpens L mọc bò, bám trên đá hay gốc các cây gỗ lớn

Trên thế giới có khoảng 1900 loài, riêng ở Việt Nam chi này có 25 loài

Đặc điểm chung của chi Psychotria L.:

- Lá đơn mọc đối, gân lá hình lông chim Luôn có lá kèm với nhiều hình dạng khác nhau, mọc ở giữa hai cuống lá hay ở nách lá

- Hoa thường mọc thành xim ở đầu cành Hoa lưỡng tính, đều, mẫu 5 Lá đài giảm, đôi khi chỉ còn vài răng hay một gờ nhỏ Cánh hoa dính nhau thành hình đinh hoặc hình phễu Số nhị bằng số cánh hoa, đính trên ống tràng, xen kẽ cánh hoa Bộ nhụy với hai lá noãn hợp thành bầu dưới, hai ô, mỗi ô đựng một hay nhiều noãn

- Quả hạch, mọng hay nang

Một số loài trong chi Psychotria L và công dụng:

- Psychotria rubra (Lour.) Poir trị tiêu chảy, cảm mạo, viêm amydal, viêm họng…

- P curviflora Wall trị sốt rét, viêm họng, nhức đầu…

- P montana Bl trị đau tay chân, đau bụng…

- P adenophylla Wall trị đau ngực…

- P serpens L ngâm trong rượu trị thấp khớp, đau lưng…

Một số loài trong chi đã được nghiên cứu kỹ về thành phần hóa học và tác dụng dược lý liên quan:

- P ipecacuanha Stockes có thành phần chính là emetin và cephaelin dùng gây nôn

khi bị ngộ độc

- P viridis Ruiz et Pav có chứa các thành phần chính như dimethyltryptamin,

beta–carbolines, N–methyltryptamin trị đau đầu migraine…

- P myriantha Mull Arg có chứa strictosidinic acid và myrianthosin có tác dụng

giải lo âu, chống trầm cảm

- P malayana Jack có chứa hodgkinsine có tác dụng kháng khuẩn, trị các bệnh

ngoài da, viêm da…

2.1.3 Tổng quan về cây Lấu đỏ

2.1.3.1 Tên gọi

Tên khoa học: Psychotria rubra (Lour.) Poir., Rubiaceae

Tên đồng nghĩa:

 Antherura rubra Lour

 Psychotria reevesii Wall

Tên Việt Nam: cây Lấu đỏ

Ngoài ra còn có các tên gọi khác như: Bầu giác, Bồ chát, Men sứa, Cây chạo, Huyết

ti, Cửu tiết

Hoa nhỏ, màu trắng nhạt, mọc thành xim ở đầu cành Đài 5 răng có ống ngắn, tràng

5 cánh có lông ở họng, nhị 5 đính ở họng tràng, chỉ nhị dài bằng bao phấn, bầu hạ

2.1.3.4 Thành phần hóa học

Trên thế giới chưa có nhiều công trình nghiên cứu về cây Lấu đỏ, một số ít công trình đã nghiên cứu cho thấy trong cây Lấu đỏ có chứa tanin 14,9%, helenalin các dẫn xuất anthraquinon như psychorubrin

Hình 2.4 Psychorubrin Hình 2.5 Helenalin

2.1.3.5 Tác dụng dược lý

Theo tây y, nhiều công trình nghiên cứu chứng minh rằng psychorubrin và helenalin

được chiết xuất từ cây Lấu đỏ có tác dụng kháng Staphylococcus aureus và gây độc

tế bào, ngoài ra helenalin còn có tác dụng kháng viêm mạnh

Theo đông y, các công trình nghiên cứu cũng cho thấy cao chiết nước 2/1 (1 ml cao

nước có chứa 2 g dược liệu) của cây Lấu đỏ có tác dụng kháng S aureus, Proteus vulgaris, Streptococcus faecalis, Bacillus anthracis, Escherichia coli, Streptococcus pneumoniae (sử dụng phương pháp khuếch tán trên thạch) Rễ cây Lấu đỏ có tác

dụng kháng amip yếu Ngoài ra cây Lấu đỏ còn có tác dụng gây độc tế bào và kháng viêm tốt

2.1.3.6 Tính vị, công năng

Cây Lấu đỏ có vị đắng, tính mát, có tác dụng thanh nhiệt giải độc, khu phong trừ thấp, tiếp cốt sinh cơ

2.1.3.7 Công dụng

Cây Lấu đỏ được sử dụng phổ biến trong dân gian với nhiều công dụng như:

- Rễ chữa kiết lỵ, thương hàn, thấp khớp, đau lưng, nhức xương, vết thương chảy máu

- Lá chữa cảm mạo, bạch hầu, viêm amydal, viêm họng, tiêu chảy Dùng ngoài trị tổn thương, đụng dập, vết thương chảy máu, viêm mủ da, chàm, mẫn ngứa, sa dạ con

- Thân chữa băng huyết, lỵ, đau bụng sau khi sinh, khí hư, bạch đới, đau răng

2.1.3.8 Bài thuốc trong dân gian có sử dụng cây Lấu đỏ

- Chữa tiêu chảy: lá Lấu đỏ, củ Nâu, lá Sim, mỗi thứ 10-20 g sắc uống

- Chữa lỵ, đau bụng sau khi sinh: vỏ cây Lấu đỏ, vỏ cây Vải, mỗi thứ 10-20 g sắc uống

- Chữa chàm, mẫn ngứa, mụn lở chảy nước: lá Lấu đỏ một phần nấu nước rửa, một phần tán bột rây mịn, rắc

- Chữa kiết lỵ: rễ Lấu đỏ 8-16 g, sắc uống, dùng 3-5 ngày

- Chữa thương hàn: rễ và lá Lấu đỏ phơi khô, tán thành bột mịn Đối với người lớn uống 2-3 g, trẻ em uống 0,5 g, ngày uống 3 lần

- Chữa băng huyết, khí hư, bạch đới, tiểu ra máu: 16-20 g lá Lấu đỏ còn tươi phối hợp với lá Tiết dê và lá Huyết dụ giã nát, thêm nước gạn uống Hoặc thân cây Lấu

đỏ chặt ngắn, phơi khô, 10-20 g sắc uống

- Chữa cảm mạo, viêm amydal, viêm họng, bạch hầu: lá Lấu đỏ còn tươi, sắc uống khoảng 3-4 lần trong ngày, dùng theo tuổi: dưới 1 tuổi 35 g; 1-3 tuổi 70 g; 4-5 tuổi

90 g; 6-10 tuổi trở lên 150 g

- Chữa đau răng: cành và lá Lấu đỏ sắc đặc, ngậm

- Chữa tổn thương, đụng dập, vết thương chảy máu: rễ Lấu đỏ, rễ Tỏi lào và vỏ cây

Me lượng bằng nhau, phơi thật khô, tán nhỏ, rây mịn, rắc vào vết thương

- Đặc biệt, qua tìm hiểu chúng tôi được biết Phòng khám nhân đạo khóm 1, Thị Trấn Hòa Thành, Tây Ninh đã sử dụng 30-60 g thân cây Lấu đỏ để điều trị viêm khớp

2.2 VIÊM [3], [4], [9], [10]

2.2.1 Khái niệm về viêm

Viêm được xem là phản ứng phức tạp của cơ thể khởi phát sau khi bị tổn thương gây chết hoặc không gây chết tế bào Viêm có thể được khởi phát khi có sự hiện diện của tế bào chết của túc chủ, vi khuẩn hoặc tế bào chết của ký sinh trùng

Trên góc độ lâm sàng người ta coi viêm là đáp ứng có hại cho cơ thể vì viêm gây đau, nóng, sốt… Trên quan điểm sinh lý bệnh học: viêm là một đáp ứng bảo vệ

nhằm đưa cơ thể trở về tình trạng trước khi bị tổn thương để duy trì hằng định nội môi Tuy nhiên cũng giống như miễn dịch khi đáp ứng viêm không phù hợp hoặc có

sự gia tăng quá mức, viêm sẽ trở thành có hại cho túc chủ như đau đớn, tổn thương

mô lành, rối loạn các chức năng

Nơi bị viêm có thể bất cứ chỗ nào trên cơ thể nhưng thường nhất là các khớp xương, nội tạng, đặc biệt là các cơ quan ở vùng bụng, hệ thần kinh trung ương

2.2.2 Nguyên nhân gây viêm

Tác nhân gây viêm thuộc nhiều nguồn gốc khác nhau:

- Sinh học: vi khuẩn, siêu vi, vi nấm, ký sinh trùng…

- Cơ học: chấn thương, áp lực, ma sát, dị vật…

- Hóa học: hóa chất, thuốc, vi tinh thể urat trong bệnh thống phong…

- Miễn dịch: thoái hóa khớp, viêm đa khớp dạng thấp…

2.2.3 Phân loại viêm

Viêm có hai dạng: viêm cấp và mạn tính

Nếu viêm cấp tính tự khu trú và khỏi trong thời gian ngắn thì đây là phản ứng có lợi của cơ thể vì nhờ viêm đưa đến hiện tượng thực bào giúp bảo vệ cơ thể chống lại tác nhân gây viêm

Nhưng thường viêm trở thành có hại nếu tiến triển thành mạn tính Ta có thể phân biệt hai trường hợp của viêm mạn: viêm mạn theo sau viêm cấp do đáp ứng viêm không thành công, ví dụ còn tồn tại vi khuẩn hay dị vật trong vết thương làm cho phản ứng viêm kéo dài; viêm mạn có thể khởi phát ngay từ đầu ví dụ như đối với vài loại vi khuẩn có vỏ lipid dày khiến các tế bào thực bào khó tiêu hủy chúng, chúng có thể tồn tại và tiếp tục kích thích phản ứng viêm như lao, phong, giang mai…Có những trường hợp viêm mạn do có kích thích kéo dài bởi hóa chất hay tác nhân vật lý như hít bụi, chỉ khâu…

Đặc điểm của viêm mạn là sự tẩm nhuận đại thực bào và tế bào lympho Khi đại thực bào không có khả năng bảo vệ túc chủ chống lại sự tổn thương mô, cơ thể sẽ tạo thành vòng vây cô lập nơi bị nhiễm, lúc đó có sự thành lập u hạt U hạt bắt đầu khi đại thực bào biệt hóa thành tế bào dạng biểu mô, là các tế bào không có khả

năng thực bào nhưng có thể bắt giữ các mảnh nhỏ Các đại thực bào khác hợp lại thành các tế bào khổng lồ, khiến chúng có khả năng thực bào những mảnh to hơn Bản thân u hạt được bao bọc bởi mô sợi (sợi collagen), giữa u hạt có thể hóa hyalin hoặc tích tụ chất vôi (calcium carbonate, calcium phosphate)

2.2.4 Các giai đoạn của quá trình viêm

Trong cơ thể ta, khi có sự xuất hiện của tác nhân gây viêm nơi đó sẽ có phản ứng tạo ra các chất trung gian hóa học như: histamin, prostaglandin (PG), leucotrien (LT), serotonin, các kinin…

Chính các chất trung gian hóa học này sẽ khởi phát quá trình viêm cấp tính gồm 3 giai đoạn:

- Giai đoạn 1: còn gọi là giai đoạn giãn mạch, tức là tuần hoàn tại chỗ viêm sẽ tăng lên, mạch máu giãn ra tăng tính thấm gây ứ huyết, thần kinh bị chèn ép, đặc biệt do chính tác động của các chất trung gian hóa học mà chỗ viêm có các triệu chứng: sưng, nóng, đỏ, đau

Hình 2.6 Diễn tiến của quá trình viêm

Viêm mạn tính

Lành vết thương

Lành vết thương

Lành vết thương Thành lập u hạt

Viêm cấp tính Tổn thương tế bào

- Giai đoạn 2: các LT sẽ gây hiện tượng hóa hướng động bạch cầu (lôi kéo các tế bào bạch cầu đến chỗ viêm) để tiến đến giai đoạn 2 gọi là giai đoạn xuất hiện các bạch cầu gồm: bạch cầu đa nhân trung tính, lympho B, lympho T, tế bào mast, đại thực bào Chính đại thực bào sẽ thực bào “tác nhân gây viêm” (như vi khuẩn) và các bạch cầu khác cũng góp phần loại trừ tác nhân gây viêm Nếu hoạt động của các bạch cầu thành công thì sẽ sang giai đoạn 3

- Giai đoạn 3: gọi là giai đoạn sửa chữa, phục hồi, các bạch cầu làm thêm nhiệm vụ dọn dẹp làm sạch tổ chức viêm, phản ứng viêm giảm, tế bào sợi (fibroblastes) được hoạt hóa để thành lập collagen tạo thành sẹo làm lành tổn thương

Nếu viêm chỉ gồm 3 giai đoạn trên và kết thúc sớm thì đây là phản ứng có lợi nhằm bảo vệ cơ thể Nhưng nhiều trường hợp viêm cấp tính trở thành nặng và kéo dài gọi

là viêm mạn tính cần được chữa trị Viêm mạn tính có hại vì chỗ viêm không lành

mà có thêm các tổn thương thứ phát do xuất hiện các enzyme tiêu đạm (do vi khuẩn tiết ra), necrosin, các gốc tự do (do chính các tế bào ở chỗ viêm tiết ra) gây các rối loạn và các biến chứng như mất chức năng khớp…

Trong quá trình viêm được mô tả ở trên, người ta quan tâm đến sự xuất hiện các chất trung gian hóa học gây viêm, đặc biệt là các PG bởi vì nếu ngăn chặn sự xuất hiện của các chất trung gian hóa học này sẽ khống chế được viêm và làm giảm đau

do viêm

2.2.5 Biểu hiện của viêm

Biểu hiện tại chỗ của ổ viêm:

- Nhiễm toan: do sự ứ đọng acid lactic, thể ceton pH từ 5,5 – 6,5

- Phù nề hay sưng: do sự tăng tính thấm thành mạch máu và sự tích tụ dịch viêm

- Đỏ: do sung huyết, ứ trệ tuần hoàn

- Nóng: do tăng tuần hoàn và tăng chuyển hóa

Tác nhân gây viêm

Giai đoạn 1:

Giãn mạch

Giai đoạn 2:

Xuất hiện các bạch cầu

Giai đoạn 3:

Sửa chữa, phục hồi (giảm viêm, lành sẹo)

Tổn thương thứ phát (enzymee tiêu đạm, gốc tự

do)

Viêm mạn tính

Histamin Prostaglandin Leucotrien

Đỏ Đau

Hình 2.7 Các giai đoạn của quá trình viêm

- Đau: do phù nề, dịch viêm chèn ép vào các dây thần kinh Do các hóa chất trung gian như PG, bradykinin tác động trực tiếp lên dây thần kinh cảm giác hoặc nhiễm toan

Biểu hiện toàn thân:

- Sốt: do tổng hợp các chất gây sốt nội sinh từ bạch cầu trung tính và đại thực bào, chất này giống IL – 1 (EP/IL – 1), tác động lên trung tâm điều nhiệt ở vùng hạ đồi gây sốt

- Tăng bạch cầu với công thức bạch cầu chuyển trái Sự gia tăng bạch cầu là do tác động của C3a và các chất kích thích sinh bạch cầu ở tủy xương (CSF: colony – stimulating factor) sản xuất bởi các tế bào thực bào

2.2.6 Tổng quan một số thuốc kháng viêm

Thuốc kháng viêm nói chung được chia thành 2 loại: NSAIDs (Non-Steroidal inflammatory Drugs) và Glucocorticoid (dựa trên cấu trúc có hoặc không có nhân Steroid)

Anti-(PGE2, PGI2) Cyclo-oxygenase

Hình 2.8 Cơ chế của một số thuốc kháng viêm

2.2.6.1 Nhóm NSAIDs

Cơ chế tác động:

- NSAIDs có tác dụng kháng viêm là do NSAIDs có khả năng ức chế COX, là enzyme kích thích sinh tổng hợp PG (PG là một trong những chất gây nên hiện tượng viêm)

- Người ta nghiên cứu và nhận thấy rằng COX có hai đồng dạng (isoform) hoặc hai đồng enzyme (isoenzyme) đó là COX-1 và COX-2

- So sánh giữa COX-1 và COX-2:

- Cấu trúc polypeptid - Cấu trúc polypeptid: 60% vị

trí là các acid amin giống COX-1

- Ức chế COX-1: gây các tác

dụng phụ của NSAIDs

- Ức chế COX-2: chống viêm

Một số NSAIDs thông dụng:

- Nhóm dẫn chất Salicylat: Aspirin, Diflunisal (Dolobid), Salsalat (Disalcid)…

- Nhóm dẫn chất của acid Propionic: Fenbufen (Cinopal), Flurbiprofen (Froben), Ibuprofen (Brufen), Ketoprofen (Oruvail), Naproxen (Synflex), Acid tiaprofenic (Surgam)…

- Nhóm dẫn chất Fenamat: Acid mefenamic (Ponstan)

- Nhóm dẫn chất của acid Acetic: Diclofenac (Voltaren), Indomethacin (Indocid), Sulindac (Clinoril)…

- Nhóm dẫn chất Pyrazolon: Phenylbutazone…

- Nhóm các Oxicam: Piroxicam (Feldene), Tenoxicam (Tilcotil)

Tác dụng phụ: có thể chia làm hai loại

- Tác dụng phụ do ức chế COX-1:

 Đường tiêu hóa: NSAIDs ức chế sự tổng hợp các PG bảo vệ niêm mạc dạ dày nên có thể gây chứng khó tiêu, viêm loét dạ dày – tá tràng, thậm chí có thể gây xuất huyết tiêu hóa, thủng dạ dày

 Rối loạn đông máu: NSAIDs ức chế sự tổng hợp PGI2, TXA2 (thromboxan

A2) nên làm rối loạn chức năng kết tập của tiểu cầu gây nguy cơ chảy máu,

kể cả chảy máu đường tiêu hóa

 Thận: NSAIDs ức chế sự tổng hợp các PG, trong khi PG giúp duy trì lượng máu tới thận nên làm giảm sự tưới máu thận, giảm độ lọc cầu thận, giảm sự đào thải Na+ qua ống thận đưa đến giữ nước gây phù, làm tăng huyết áp, có thể gây suy thận cấp, suy thận mạn

 Độc đối với gan: tổn hại tế bào gan, aspirin gây hội chứng Reye

- Nguy cơ bị tác dụng phụ khi sử dụng NSAIDs

 Nên lưu ý: liều càng cao, thời gian sử dụng càng kéo dài thì nguy cơ bị tác dụng phụ của NSAIDs càng cao

Các NSAIDs mới: ức chế chọn lọc COX-2

- Để giảm thiểu tác dụng phụ trên đường tiêu hóa (do tác động ức chế COX-1) người ta đã nghiên cứu thuốc ức chế chọn lọc trên COX-2

- Một số thuốc đã được công nhận ức chế chọn lọc COX-2: etodolac, nimesulid và nhóm coxib: celecoxib, rofecoxib, valdecoxib

- Tác dụng phụ: nhóm coxib không có tác dụng chống kết tập tiểu cầu, rất hiếm gây tổn hại niêm mạc dạ dày – tá tràng nhưng vẫn ảnh hưởng đến chức năng thận giống NSAIDs

- Trong thời gian sử dụng đã có nhiều báo cáo về phản ứng có hại (ADR) của nhóm coxib như rofecoxib gây tác dụng phụ nhồi máu cơ tim và tai biến mạch máu não, valdecoxib gây độc, hoại tử biểu bì đều đã bị rút ra khỏi thị trường

Như vậy cho tới nay vẫn chưa có NSAIDs nào gọi là hoàn hảo

2.2.6.2 Nhóm glucocorticoid

Cơ chế tác động: Thuốc kháng viêm glucocorticoid có hai cơ chế kháng viêm chính

- Glucocorticoid kích thích tổng hợp lipocortin Chất lipocortin này ức chế enzyme Phospholipase A2, ngăn tổng hợp acid arachidonic, do đó làm giảm phóng thích các chất trung gian hóa học gây viêm (PG, LT…)

- Glucocorticoid làm giảm tiết các chất trung gian hóa học như serotonin, histamin

từ tế bào mast, giảm tính thấm thành mạch và ức chế sự di chuyển của bạch cầu đến

tổ chức viêm

Một số thuốc kháng viêm glucocorticoid: hydrocortison, cortison, prednison, prednisolon, betamethason, dexamethason

Tác dụng phụ:

- Khuynh hướng giữ natri, giữ nước gây phù do tác dụng của mineralocorticoid

- Tác dụng tân tạo đường có thể gây cao đường huyết

- Tác dụng phân hủy lipid từ các mô mỡ, tích trữ lipid dưới da cổ, mặt

- Làm xáo trộn chuyển hóa canxi: giảm hấp thu và tăng đào thải qua thận, dùng lâu ngày sẽ gây loãng xương

- Giảm hoạt động của các mô lympho và hoạt động sản xuất kháng thể, suy yếu hệ miễn dịch

2.3 ĐỘC CẤP [2]

2.3.1 Một số khái niệm

Độc tính của thuốc: là tính chất được biểu hiện bằng tác dụng không mong muốn,

có hại cho cơ thể Độc tính của thuốc có thể nhẹ như buồn nôn, mẫn ngứa, có thể rất nặng, thậm chí gây tử vong

Độc tính cấp của thuốc: là độc tính xảy ra sau khi dùng thuốc một lần hoặc vài lần trong ngày Nghiên cứu độc tính cấp của thuốc trên động vật thí nghiệm, chủ yếu là xác định liều chết trung bình (MLD: mean lethal dose) tức là liều làm chết 50% số con vật thí nghiệm trong những điều kiện nhất định và được ký hiệu là LD50 (Lethal dose 50%)

Liều chết (LD: Lethal dose): là liều gây chết con vật dùng thuốc, liều chết không áp dụng thử cho người mà chỉ áp dụng thử cho con vật thử nghiệm

Liều chết tuyệt đối (LD100: Lethal dose 100%): là liều nhỏ nhất gây chết 100% các con vật thí nghiệm

Liều chết trung bình (MLD: mean lethal dose): thường được ký hiệu là LD50, là liều làm chết 50% con vật thí nghiệm

Liều chết tối thiểu (LD5: Lethal dose 5%): là liều làm chết 5% số con vật thí nghiệm Có tài liệu quan niệm rằng liều chết tối thiểu là LD25 tức là liều làm chết 25% con vật thí nghiệm

Liều dưới liều chết (LD0: Lethal dose 0%): là liều lớn nhất nhưng không làm chết con vật thí nghiệm nào

2.3.2 Một số yêu cầu về thú vật thử nghiệm và đường dùng thuốc

- Loài động vật thí nghiệm: tốt nhất là tiến hành trên hai loài động vật khác nhau, một loài gặm nhấm và một loài không phải gặm nhấm, tuy nhiên thường sử dụng nhất là chuột nhắt trắng hoặc chuột cống trắng

- Giới tính: thường dùng cả đực và cái, tốt nhất là mỗi nhóm 50% đực và 50% cái

- Trạng thái sinh lý: phải dùng các con vật đã trưởng thành hoặc sắp trưởng thành

- Số lượng con vật mỗi nhóm: chưa thống nhất, nhưng theo kinh nghiệm thì một nhóm 6 con là đạt yêu cầu

- Chuẩn bị động vật thí nghiệm: trước khi dùng thuốc phải để động vật thí nghiệm nhịn đói 12 giờ, không cho động vật thí nghiệm ăn nhưng vẫn uống nước bình thường Sau khi dùng thuốc, cho động vật thí nghiệm ăn uống bình thường

- Thể tích dùng thuốc: nồng độ thuốc dùng cho các nhóm khác nhau phải khác nhau, thể tích dùng tốt nhất là 0,2-0,5 ml cho một chuột nhắt trắng nặng 20 g

- Số lần dùng thuốc: khi thử độc tính cấp, về nguyên tắc chỉ dùng thuốc một lần Trong những trường hợp đặc biệt, có thể dùng vài lần trong ngày

LD50 là một thông số rất quan trọng để đánh giá độc tính của một thuốc

Biết LD50 sẽ có phương hướng dùng liều thí nghiệm dược lý một cách đúng đắn Theo kinh nghiệm thì liều có tác dụng dược lý thường khoảng 1/10 LD50 (trong giới hạn từ 1/20-1/5 LD50) Do đó nên xác định LD50 trước khi nghiên cứu tác dụng dược lý

Liều LD50 và liều có tác dụng dược lý trên động vật thí nghiệm là một trong những

cơ sở để suy ra liều dùng trong điều trị ở người dựa vào một số phương pháp tính toán ngoại suy

Biết LD50 mới xác định được chỉ số điều trị là một thông số rất quan trọng để quyết định xem có nên đưa thuốc vào dùng trên người hay không

Chỉ số điều trị TI (therapeutic index) là tỉ số giữa liều chết trung bình LD50 và liều hữu hiệu trung bình ED50:

Một chất có TI ≥ 10 dùng được trong điều trị và ít gây ra độc hại, nếu dùng ở liều điều trị Nếu chỉ số điều trị càng lớn thì phạm vi điều trị càng lớn và độc tính càng thấp

Một chất có TI < 10 chỉ dùng trong điều trị nếu:

- Có tác dụng điều trị rất rõ rệt

- Chưa có thuốc nào an toàn hơn thay thế

- Khi dùng phải rất thận trọng, theo dõi sát tác dụng phụ có hại

2.3.4 Nguyên tắc chung

Xác định LD50 là liều gây chết 50% số con vật thí nghiệm

Con vật được chia thành nhiều nhóm tương tự nhau về giới tính, trọng lượng… Mỗi nhóm dùng một liều (tính theo kg trọng lượng), các nhóm khác nhau dùng liều khác nhau của chất thử

Đánh giá theo nguyên tắc “tất hoặc không” của mỗi nhóm

2.3.5 Bước nhảy liều (khoảng cách giữa hai liều kế tiếp nhau)

Bước nhảy liều có thể bằng nhau hoặc xấp xỉ bằng nhau Thường dùng liều nhỏ bằng 80% liều lớn kế tiếp (hoặc liều lớn bằng 125% liều nhỏ kế tiếp) Nói chung chênh lệch giữa hai liều kế tiếp so với liều lớn khoảng 10-30% là vừa

Nếu tất cả các liều nhỏ đều bằng một tỉ lệ % nhất định của liều lớn kế tiếp thì bước nhảy liều tính theo logarit của liều đều bằng nhau Vì vậy khuynh hướng hiện nay người ta thường dùng bước nhảy liều bằng nhau tính theo logarit liều

Người ta cũng có thể dùng bước nhảy liều bằng nhau không tính theo logarit

2.3.6 Thăm dò liều ban đầu

Đây là bước rất quan trọng Nếu không thăm dò mà làm ngay thì dễ xảy ra 3-4 lô chuột đều sống cả hoặc chết cả Như vậy sẽ tốn kém và không thu được kết quả

Để thăm dò, dùng 2 con vật với một liều lượng nào đó Nếu kết quả chết cả 2 con thì thăm dò 2 con khác với liều giảm đi một nửa, nếu cả 2 con đều sống thì phải dùng liều gấp đôi

Thăm dò như vậy cho đến khi thấy một liều làm 1 con sống và 1 con chết thì lấy liều đó làm cơ sở, rồi dùng một số liều lớn hơn theo bước nhảy liều đã nêu ở trên, cho đến một liều làm chết tất cả các con vật trong nhóm, và dùng một số liều nhỏ hơn cho đến một liều mà tất cả các con vật đều sống

2.3.7 Ngoại suy liều LD100

Trường hợp đã dùng 4 liều trở lên rồi mà liều cao nhất vẫn không làm chết 100% các con vật trong nhóm (chưa có liều LD100) Nhưng nếu liều cao nhất đó đã làm chết khoảng từ 90% trở lên các con vật trong nhóm thì có thể ngoại suy là: thêm một nhóm nữa dùng liều bằng liều cao nhất đã thử, cộng thêm một bước nhảy liều thì các con vật sẽ chết 100%

Trường hợp đã dùng 4 liều trở lên rồi mà liều thấp nhất vẫn có con chết, nhưng tỉ lệ chết không quá 10% thì có thể tính toán mà không cần thử thêm liều thấp hơn nữa hoặc có thể ngoại suy là: thêm một nhóm nữa dùng liều bằng liều thấp nhất đã thử, trừ đi một bước nhảy liều thì các con vật sẽ sống 100%

2.3.9 Quan sát và ghi chép kết quả

Ghi các biểu hiện độc và mức độ nghiêm trọng, sự xuất hiện độc, tiến triển và phục hồi hoặc chết qua từng thời gian của từng nhóm

Thời gian theo dõi là thời gian mà động vật thí nghiệm còn có biểu hiện độc và chết

do thuốc gây nên Thông thường nếu tiêm tĩnh mạch thì thời gian theo dõi chỉ cần

24 giờ, nếu tiêm bắp thịt, tiêm dưới da hoặc tiêm trong màng bụng thì thời gian theo dõi là 48 giờ, nếu đường uống thì cần 72 giờ

Các con vật chết trong thời gian quan sát, phải mổ xác để xem chết vì nguyên nhân

gì Những con vật còn sống sau thời gian theo dõi cũng nên mổ để xem các phủ tạng và các cơ quan trong cơ thể có bất thường gì không

Để tính LD50 phải tổng hợp được thành một bảng trong đó có ghi rõ số nhóm thí nghiệm, liều dùng, số chuột thử và số chuột chết ở mỗi nhóm

đến một mức độ nhất định, nếu cô quá sẽ trở thành cao đặc và không thể cho uống được

- Không muốn xác định LD50

 Một thuốc qua thăm dò nghiên cứu thấy một người lớn cân nặng 50 kg, uống 36 mg một ngày là có tác dụng chữa bệnh Như vậy liều dùng có tác dụng ở người là 0,6 mg/kg trọng lượng

 Cho chuột nhắt uống một liều gấp 500 lần liều đó, tức là 300 mg/kg trọng lượng, chuột vẫn không chết Trong trường hợp này có 2 cách xử trí:

 Tiếp tục dùng liều cao hơn cho đến khi có chuột chết, qua đó xác định được LD50

 Cho rằng đã dùng một liều ở chuột nhắt gấp 500 lần liều dùng ở người tính cho 1 kg trọng lượng chuột vẫn không chết, chứng tỏ thuốc có độ

an toàn cao, nên không muốn thử tiếp với liều cao hơn để xác định

LD50 và kết luận “đã cho chuột nhắt uống liều gấp 500 lần (300 mg/kg) liều dùng có tác dụng ở người chuột vẫn không chết, chứng tỏ thuốc có

độ an toàn cao”

2.4 CÁC PHƯƠNG PHÁP GÂY VIÊM THỰC NGHIỆM

2.4.1 Gây viêm bằng tác nhân hóa học

2.4.1.1 Gây viêm bằng Carragenan 1% [10], [18]

Winter (1962)

Trước khi gây viêm 1 giờ, cho chuột uống chất khảo sát với thể tích 0,1 ml/10 g trọng lượng Ở nhóm chứng chuột được uống nước muối sinh lý với cùng thể tích Tiêm hỗn dịch carragenan 1% liều 0,025 ml vào gan bàn chân trái sau của chuột

Đo thể tích chân chuột trước và sau khi tiêm carragenan 3 giờ Tác động kháng viêm được biểu diễn bằng phần trăm mức độ giảm sưng phù trên lô thử nghiệm so với lô chứng

Shanahan (1968)

Trộn lẫn chất thử nghiệm với hỗn dịch carragenan và tiêm hỗn dịch này vào gan bàn chân trái sau với liều 0,05 ml Lô chứng được tiêm cùng thể tích hỗn dịch