Khảo sát và tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao đan sâm

Đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge., Lamiaceae) là dược liệu được dùng để chữa một số bệnh như cao huyết áp, rối loạn nhịp tim, đau thắt ngực, rối loạn kinh nguyệt…Hiện nay nhu cầu trong nước và thế giới về cao Đan sâm là rất lớn. Một số công ty dược phẩm trong nước hiện đã sản xuất cao Đan sâm. Tuy nhiên, việc chiết xuất các cao này vẫn chưa đáp ứng yêu cầu sản xuất tại các nhà máy đạt GMP vì quy trình chiết xuất chưa được tối ưu hóa nên hiệu suất chiết chưa cao, chất lượng cao Đan sâm còn thấp, không ổn định. Do đó, tác dụng điều trị không đảm bảo vì chứa ít hoặc không có các hoạt chất. Chiết xuất dược liệu là một quá trình dùng dung môi để chiết tách một hoặc nhiều hoạt chất có tác động sinh học từ pha rắn là các bộ phận của dược liệu có thể là thân, rễ, quả, lá, hoa… Mối liên quan giữa các điểu kiện chiết xuất (dược liệu, dung môi và kỹ thuật) với kết quả chiết xuất (hiệu suất, tỷ lệ hoạt chất, tỷ lệ tạp chất…) được gọi là mối liên quan giữa nhân và quả. Bằng con đường dò dẫm theo kinh nghiệm, nhà chiết xuất khó lòng xác định các mối liên quan ấy một cách định lượng nên có thể khảo sát yếu tố thứ yếu mà bỏ qua yếu tố trọng yếu, tốn thì giờ mà không tìm ra các thông số phù hợp. Ngày nay, việc xây dựng một quy trình chiết xuất dược liệu có thể được thực hiện một cách khoa học bằng cách kết hợp phương pháp thực nghiệm truyền thống với sự hỗ trợ của bộ ba phần mềm gồm: a). Phần mềm thống kê: thiết kế mô hình thí nghiệm để định hướng cho thực nghiệm chiết xuất. b). Phần mềm thông minh sử dụng công nghệ thần kinhlogic mờ có thể phân tích: xu hướng, mức độ và quy luật liên quan giữa điểu kiện chiết xuất và kết quả chiết xuất. c). Phần mềm thông minh kết hợp mạng thần kinh nhân tạo với hệ diễn tả gen có thể xác lập mô hình liên quan giữa nhân và quả và trên cơ sở đó tối ưu hóa điểu kiện chiết xuất sao cho kết quả chiết xuất như mong muốn. Do đó, đề tài “Khảo sát và tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao Đan sâm” được thực hiện với các mục tiêu nghiên cứu như sau: a. Kiểm kiểm nghiệm dược liệu Đan sâm và thẩm định phương pháp định lượng tanshinon IIA. b. Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng trên hiệu suất, hàm lượng tanshinon IIA và tạp chất trong quy trình chiết xuất cao Đan sâm. c. Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao Đan sâm sao cho hiệu suất cao nhất, hàm lượng tanshinon IIA cao nhất và tạp chất tối thiểu.

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge., Lamiaceae) dược liệu dùng để chữa số bệnh cao huyết áp, rối loạn nhịp tim, đau thắt ngực, rối loạn kinh nguyệt…Hiện nhu cầu nước giới cao Đan sâm lớn Một số công ty dược phẩm nước sản xuất cao Đan sâm Tuy nhiên, việc chiết xuất cao chưa đáp ứng yêu cầu sản xuất nhà máy đạt GMP quy trình chiết xuất chưa tối ưu hóa nên hiệu suất chiết chưa cao, chất lượng cao Đan sâm thấp, khơng ổn định Do đó, tác dụng điều trị khơng đảm bảo chứa khơng có hoạt chất Chiết xuất dược liệu trình dùng dung môi để chiết tách nhiều hoạt chất có tác động sinh học từ pha rắn phận của dược liệu thân, rễ, quả, lá, hoa… Mối liên quan điểu kiện chiết xuất (dược liệu, dung môi kỹ thuật) với kết chiết xuất (hiệu suất, tỷ lệ hoạt chất, tỷ lệ tạp chất…) gọi mối liên quan nhân Bằng đường dò dẫm theo kinh nghiệm, nhà chiết xuất khó lòng xác định mối liên quan cách định lượng nên khảo sát yếu tố thứ yếu mà bo qua yếu tố trọng yếu, tốn giờ mà khơng tìm thơng số phù hợp Ngày nay, việc xây dựng quy trình chiết xuất dược liệu thực cách khoa học bằng cách kết hợp phương pháp thực nghiệm truyền thống với hỗ trợ của ba phần mềm gồm: a) Phần mềm thống kê: thiết kế mơ hình thí nghiệm để định hướng cho thực nghiệm chiết xuất b) Phần mềm thơng minh sử dụng cơng nghệ thần kinh-logic mờ phân tích: xu hướng, mức độ quy luật liên quan điểu kiện chiết xuất kết chiết xuất c) Phần mềm thông minh kết hợp mạng thần kinh nhân tạo với hệ diễn tả gen xác lập mơ hình liên quan nhân và sở tối ưu hóa điểu kiện chiết xuất cho kết chiết xuất mong muốn Do đó, đề tài “Khảo sát tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao Đan sâm” thực với mục tiêu nghiên cứu sau: a Kiểm kiểm nghiệm dược liệu Đan sâm thẩm định phương pháp định lượng tanshinon IIA b Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng hiệu suất, hàm lượng tanshinon IIA tạp chất quy trình chiết xuất cao Đan sâm c Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao Đan sâm cho hiệu suất cao nhất, hàm lượng tanshinon IIA cao tạp chất tối thiểu TỔNG QUAN 2.1 Dược liệu Đan sâm 2.1.1 Thực vật học Tên khoa học phổ thông Tên khoa học: Salvia miltiorrhiza Bunge., Lamiaceae ( Họ hoa môi) Tên Việt Nam : Đan sâm, Huyết sâm, Xích sâm, Huyết căn,… Tên nước ngồi: Dan shen, Chi shen, Zi Dan shen Mô tả thực vật Đan sâm loại thảo, sống lâu năm, cao 30-80cm, tồn thân mang lơng ngắn màu vàng nhạt Rễ mảnh có đường kính 0,5-1,5cm, phân nhánh nhiều, màu đo nâu Thân vng có gân dọc Lá kép lông chim, mọc đối: 3-5 chét, đặc biệt có đến 7, hình trứng trái xoan Lá chét thường lớn Lá kép có cuống dài, cuống chét ngắn có dìa Lá chét dài 2-7,5cm, rộng 0,8-5cm Mép chét có cưa tù Mặt chét màu xanh, có lơng mềm màu trắng, mặt màu xanh tro, có lông dài Gân mặt dưới, chia phiến chét thành múi nho Cụm hoa mọc kẽ đầu ngọn thành bơng gồm nhiều vòng sít ngọn, vòng có 3-10 hoa màu lơ tím nhạt; đài chia mơi, mơi dài ống tràng cong hình lưỡi liềm, mơi chia 2; nhị Quả bế nho, đầu tù, dài mm Mùa hoa: tháng 5-8; mùa : tháng 6-9 [3,4] Sơ đồ 2.1 Phân loại thực vật Đan sâm 2.1.2 Phân bố phận dùng Phân bố Salvia L chi lớn họ Lamiaceae, phân bố chủ yếu vùng ôn đới ấm cận nhiệt đới, có lồi vùng nhiệt đới Ở Việt Nam có 4-5 lồi, Đan sâm nhập nội Cây Đan sâm trồng nước ta có xuất xứ từ Trung Quốc Cây trồng trại thuốc Sa Pa (Viện Dược liệu) to thích nghi với điều kiện khí hậu nhiệt đới vùng núi cao Cây sinh trưởng phát triển tương đối tốt; hoa hàng năm; hạt giống thu gieo gieo lại nhiều năm Một số đưa xuống trại thuốc Tam Đảo (Viện Dược liệu) sinh trưởng Đam sâm chưa đưa vào sản xuất Những lại Sa Pa có ý nghĩa để giữ giống [2,3,4,12] Bộ phận dùng Hình 2.1 Toàn Đan sâm Rễ Đan sâm thu hái vào mùa xuân hay mùa thu, đào rễ thân rễ rửa đất cát, cắt bo rễ con, phơi âm can sấy nhẹ đến khô [8] 2.1.3 Thành phần hóa học Cho đến nay, 70 hợp chất phân lập xác định cấu trúc từ Đan sâm Salvia miltiorrhiza Bunge với hàm lượng khác Các thành phần Đan sâm phân thành nhóm hợp chất: phân cực acid salvianolic phân cực tanshinon [25,26] Hình 2.2 Hoa rễ Đan sâm Nhóm Tanshinon Nhóm tanshinon Đan sâm diterpenoid kiểu abietanoid có màu Khoảng 50 hợp chất tanshinon phân lập từ rễ của loài Salvia miltiorrhiza [28] Nhóm polyphenol Cho đến nay, khoảng 30 hợp chất polyphenol phân cực phân lập từ Đan sâm Hầu hết tổ hợp từ monomer acid caffeic, isoferulic hay acid protocatechuic [14] Một số chất gặp nhiều loài khác (acid caffeic, acid isoferulic, acid rosmarinic, methyl rosmarinat, acid protocatechuic, protocatechualdehyd), có số hợp chất tương đối chuyên biệt chi Salvia (acid salvianic, acid salvianolic A, B, C, D, E, F, G, H, I, J, acid lithospermic, ethyl lithospermat, ethyl lithospermat B, acid prolithospermic, danshensu, salviaflasid, salvinal ) Dẫn xuất của chúng chia thành nhóm dựa số đơn phân acid caffeic [14] − Acid caffeic monomer: nhóm bao gồm acid isoferulic, acid caffeic, danshensu 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-lactamid − Acid caffeic dimer: gồm acid rosmarinic, methyl rosmarinate, acid salvianic C, acid salvianolic D, acid salvianolic F, acid prolithospermic, acid salvianolic G − Acid caffeic trimer: gồm acid salvianolic A, acid lithospermic, methyl lithospermat, dimethyl lithospermat, acid salvianolic C, acid salvianolic J, acid salvianolic I − Acid caffeic tetramer: nhóm coi dẫn chất dimer của acid rosmarinic, gồm acid salvianolic E, acid salvianolic B, ethyl lithospermat, magie lithospermat B kali-amoni lithospermat B Các nhóm hợp chất khác Ngồi nhóm hợp chất có tác dụng sinh học, Đan sâm chứa nhiều hợp chất cao phân tử polysaccharid (tinh bột, đường ), lignan, polypeptid, protein Các hợp chất dễ tan nước lơi kéo theo q trình chiết xuất cao nên gọi chất khơng mong muốn cần hạn chế q trình chiết xuất [25] Bảng 2.1 Các hợp chất phân lập từ Salvia miltiorrhiza Bunge Hợp chất phân cực Hợp chất phân cực Acid salvianic A,B,C Tanshinon I,IIA,IIB,V, VI Acid salvianolic A,B,C,D,E,G Cryptotanshinon Acid rosmarinic Isotanshinon I,II,IIB Methyl rosmarinat Isocryptotanshinon Monomethyl lithospermat Hydroxytanshinon IIA Dimethyl lithospermat Methyl tanshinonat Ethyl lithospermat Danshenxinkum A,B,C,D Acid lithospermic B Dihydroisotanshinon I Protocatechualdehyd Neocryptotanshinon Acid isoferulic Deoxyneocryptotanshinon Baicalin Salviol Isomperatorin Nortanshinon Acid ursolic Tanshindiol A,B,C Bêta - sistosterol Miltiron Daucosterol 1-dehydromiltiron Stigmasterol 1-dehydrotanshinon IA Tigo-genin 1-detoisocryptotanshinon Cryptoacetalid Miltiodiol Miltipolon Tanshinlacton Formyltanshinenon Danshen-spiroketallacton Miltipolon Nor-salvioxid O O O O O O O O O tanshinon I dihydro-tanshinon I 1,2-dihydro-tanshinon I = tanshiquinon = dihydrotanshiquinon = 1,2-dihydrotanshiquinon O O O O O O * O O O * O O nortanshinon dihydro-nortanshinon O O tetrahydro-tanshinon I O O O OH O O O tanshinon IIA dihydro-tanshinon IIA O O O O 1-hydroxy-tanshinon IIA O O O O O OH O OH tanshinon IIB CH2OH dihydro-tanshinon IIB tanshinon A Hình 2.3 Cơng thức hóa học số chất thuộc nhóm tanshinon COOH O HO O OH OH HO HO HO COOH O O HO OH HO O OH OH 10 Acid salvianolic A Acid salvianolic C OH OH O O CO2H O HO COOH CO2H OH OH O OH O OH OH O Acid salvianolic I OH OH Acid isosalvianolic C COOH HO HO O HO HO O O HOOC HO O O HO OH Acid salvianolic B Hình 2.4 Một số cơng thức hóa học của nhóm polyphenol 2.1.4 Tác dụng dược lí Hoạt tính chống ung thư 58 4.2 Khảo sát điều kiện chiết xuất cao Đan sâm 4.2.1 Thăm dò điều kiện chiết xuất Một số điều kiện thăm dò để chiết xuất cao Đan sâm trình bày Bảng 4.20 kết thăm dò trình bày Bảng 4.21 Bảng 4.20 Một số điều kiện thăm dò chiết xuất cao Đan Sâm Điều kiện chiết xuất A B C D Nồng độ cồn 25 25 25 75 Tỷ lệ dung môi/ dược liệu 8 12 12 Số lần chiết xuất 1 Bảng 4.21 Kết chiết xuất cao Đan Sâm theo điều kiện thăm dò Tính chất sản phẩm A B C D Hiệu suất chiết (%) 31,6141 42,9340 34,0588 26,8131 Hàm lượng tanshinon IIA (%) 0,1215 0,1535 0,1236 0,6607 Tỉ lệ tạp chất (%) 6,7709 9,9481 8,6622 2,9754 Kết nêu cho thấy: − Thí nghiệm A có hiệu suất chiết tỉ lệ tạp chất trung bình; hàm lượng tanshinon IIA thấp − Thí nghiệm B có hiệu suất chiết cao tỉ lệ tạp chất cao; hàm lượng tanshinon IIA trung bình − Thí nghiệm C có hiệu suất chiết cao tỉ lệ tạp chất trung bình; hàm lượng tanshinon IIA thấp 59 − Thí nghiệm D có hiệu suất chiết tỉ lệ tạp chất thấp; hàm lượng tanshinon IIA cao Độ lặp lại của mẫu D trình bày Bảng 4.22 Bảng 4.22 Độ lặp lại của kết chiết mẫu D (n = 4) STT Hiệu suất (%) Tanshinon IIA (%) Tạp chất (%) 26.8131 0.6607 2.9754 25.9204 0.6715 3.1367 27.9736 0.7068 2.7934 26.5002 0.6014 3.0213 RSD% 3.22 6.64 4.79 Tuy RSD% > 2% chấp nhận mẫu dược liệu khơng đồng q trình chiết xuất có nhiều yếu tố ảnh hưởng khác Qua kết thăm dò, biến số liên quan đến quy trình chiết xuất cao Đan sâm sau: Biến số độc lập: − x1 = Nồng độ cồn − x2 = Tỷ lệ dung môi/ dược liệu − x3 = Số lần chiết xuất Biến số phụ thuộc: − y1 = Hiệu suất chiết (%) − y2 = Hàm lượng Tanshinon IIA (%) − y3 = Tỉ lệ tạp chất (%) 60 4.2.2 Thiết kế mơ hình thực nghiệm Mơ hình yếu tố đầy đủ hướng tâm thiết kế phần mềm FormData trình bày Bảng 4.23 Bảng 4.23 Mơ hình thực nghiệm (n = 15) STT x1 x2 x3 25 25 3 25 10 25 12 25 12 50 50 10 50 10 50 10 10 50 12 11 75 12 75 13 75 10 14 75 12 15 75 12 Ghi chú: x1 = Nồng độ cồn x2 = Tỷ lệ dung môi/dược liệu x3 = Số lần chiết 61 4.2.3 Thực hành chiết xuất kiểm nghiệm Cao Đan sâm theo điều kiện thiết kế chiết xuất mẫu sản phẩm kiểm nghiệm theo quy trình phần phương pháp chung Dữ liệu thực nghiệm trình bày Bảng 4.24 Bảng 4.24 Dữ liệu thực nghiệm chiết xuất kiểm nghiệm STT x1 x2 x3 y1 y2 y3 25 31,6141 0,1215 6,7709 25 42,9340 0,1535 9,9481 25 10 45,6905 0,1316 9,7253 25 12 34,0588 0,1036 8,6622 25 12 49,7583 0,4518 10,5076 50 44,3029 0,5943 8,4458 50 10 32,4930 0,2724 7,5960 50 10 46,9305 0,3884 7,7803 50 10 48,1510 0,5350 9,2280 10 50 12 45,9908 0,8004 8,4136 11 75 22,4876 0,7813 1,9886 12 75 37,3665 0,7891 3,3585 13 75 10 35,1545 0,3807 3,2718 14 75 12 26,8131 0,6607 2,9754 15 75 12 38,1940 0,6858 3,9321 Ghi chú: x1 = Nồng độ cồn x2 = Tỷ lệ dung môi/dược liệu 62 x3 = Số lần chiết y1 = Hiệu suất chiết (%) y2 = Hàm lượng Tanshinon IIA (%) y3 = Tỉ lệ tạp chất (%) 4.2.4 Liên quan điều kiện kết chiết xuất Với liệu đầu vào từ Bảng 4.24, kết phân tích liên quan nhân quản phần mềm thơng minh tóm tắt sau: Xu hướng mức độ liên quan Hiệu suất chiết (y1) có liên quan cao (R2 = 98,1451) với yếu tố khảo sát gồm nồng độ cồn (x1), tỷ lệ dung môi/dược liệu (x2) số lần chiết (x3); đó, yếu tố liên quan số lần chiết (R2 = 67,6677) yếu tố liên quan phụ nồng độ cồn (R2 = 20,2123) tỷ lệ dung mơi/dược liệu (R2 = 2,0462), xem Hình 4.14 Hình 4.14 Xu hướng liên quan y1 với x1, x2 x3 63 Hình 4.15 Xu hướng liên quan y2 với x1 Hàm lượng tanshinon IIA (y2) có liên quan trung bình (R = 58,5151) với yếu tố khảo sát nồng độ cồn (x1), xem Hình 4.15 Hình 4.16 Xu hướng liên quan y3 với x1, x2 x3 Tỉ lệ tạp chất (y3) có liên quan cao (R2 = 97,6792) với yếu tố khảo sát gồm nồng độ cồn (x1), tỷ lệ dung môi/dược liệu (x2) số lần chiết (x3); đó, yếu tố liên quan nồng độ cồn (R2 = 89,5537) yếu tố liên quan phụ tỷ lệ dung môi/dược liệu (R2 = 1,3332) số lần chiết (R2 = 6,79231), xem Hình 4.16 64 Nói chung, tất biến độc lập (điều kiện chiết xuất) có liên quan với biến phụ thuộc (kết chiết xuất), cho liệu đầu vào cho phần mềm thông minh FormRules – phân tích nhân dùng làm đầu vào cho phần mềm thông minh INForm – tối ưu hóa thơng số Quy luật liên quan Hiệu suất chiết có liên quan khơng tuyến tính (tỷ lệ tḥn) với số lần chiết: − Nếu x3 thấp y1 thấp (1,00) − Nếu x3 cao y1 cao (1,00) Hình 4.17 Sự liên quan hiệu suất chiết (y1) với số lần chiết (x3) Hàm lượng Tanshinon IIA có liên quan tuyến tính (tỷ lệ tḥn) với nồng độ cồn dung môi chiết: − Nếu x1 thấp y2 thấp (0,83) − Nếu x1 cao y2 cao (0,84) 65 Hình 4.18 Sự liên quan hàm lượng tanshinon IIA (y2) với nồng độ cồn (x1) Tỷ lệ tạp chất có liên quan khơng tuyến tính (tỷ lệ nghịch) với nồng độ cồn: − Nếu x1 thấp y3 cao (1,00) − IF x1 cao y3 cao (1,00) Hình 4.19 Sự liên quan tỷ lệ tạp chất (y3) với nồng độ cồn (x1) 66 4.3 Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao Đan sâm 4.3.1 Xác lập mơ hình liên quan nhân Thăm dò nhóm thử Với tḥt tốn RPROP, số nhóm thử thăm dò nhóm thử gồm quy trình & 14 chọn có R2 luyện R2 thử cao (Bảng 4.25) Bảng 4.25 Kết thăm dò nhóm thử Nhóm thử y1 y2 y3 R2 luyện R2 thử R2 luyện R2 thử R2 luyện R2 thử 5, 13 84,2831 96,0751 88,0764 0,05) Như vậy, điều kiện cho quy trình chiết xuất cao Đan sâm khảo sát tối ưu hóa thành cơng; kết chiết xuất cao Đan sâm dự đoán phần mềm thơng minh INForm xác; quy trình chiết xuất cao Đan sâm có tính lặp lại 71 KẾT LUẬN & ĐỀ NGHỊ Đề tài hoàn thành mục tiêu nghiên cứu đề với kết tóm tắt sau: Kiểm kiểm nghiệm dược liệu Đan sâm xây dựng phương pháp định lượng tanshinon IIA a Đã kiểm nghiệm dược liệu Đan sâm đạt số tiêu chuẩn theo DĐVN IV Dược điển Trung quốc b Đã xây dựng quy trình định lượng tanshinon IIA dược liệu cao đan sâm bằng phương pháp HPLC Quy trình định lượng khảo sát tính tương thích hệ thống thẩm định tính tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại c Đã xây dựng quy trình xác định hàm lượng hợp chất cao phân tử polysaccharid, lignan, đường, polypeptid… Đây hợp chất không mong muốn cần hạn chế trình chiết xuất cao Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng hiệu suất, hàm lượng tanshinon IIA tạp chất quy trình chiết xuất cao Đan sâm a Đã thăm dò số điều kiện kết chiết xuất cao Đan sâm làm sở cho việc thiết kế mơ hình thực nghiệm yếu tố đầy đủ hướng tâm b Đã tiến hành chiết xuất với 15 quy trình theo thiết kế kiểm nghiệm mẫu sản phẩm để làm liệu thực nghiệm c Kết phân tích liên quan nhân phần mềm thông minh FormRules cho thấy rõ xu hướng, mức độ quy luật liên quan điều kiện chiết xuất (nồng độ cồn, tỷ lệ dung môi/dược liệu số lần chiết) với kết chiết xuất (hiệu suất chiết, hàm lượng tanshinon IIA tỉ lệ 72 tạp chất) Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao Đan sâm cho hiệu suất cao nhất, hàm lượng tanshinon IIA cao tạp chất tối thiểu a Đã xác lập mơ hình liên quan nhân có tính tính tương thích tốt có khả dự đốn xác hay từ tối ưu hóa thành cơng điều kiện chiết xuất b Quy trình chiết xuất tối ưu kiểm chứng qua thực nghiệm với lần liên tiếp Kết phân tích phương sai hai yếu tố khơng lặp cho thấy quy trình chiết xuất cao Đan sâm có tính lặp lại kết dự đốn phần mềm thơng minh INForm xác c Việc xây dựng quy trình chiết xuất dược liệu bằng đường kết hợp phương pháp truyền thống với áp dụng ba phần mềm nghiên cứuphát triển (FormData – FornRules – INForm) tiết kiệm thời gian cơng sức cho kết ý Đề tài nghiên cứu nên tiếp tục với phần sau: − Kiểm nghiệm bổ sung số tiêu: vi phẫu theo DĐVN IV tiêu giới hạn kim loại nặng, hàm lượng acid salvianolic B theo dược điển Trung Quốc − Tiến hành khảo sát tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao Đan sâm dựa đồng thời hoạt chất tanshinon IIA acid salvianolic B − Xây dựng quy trình định lượng acid salvianolic B dược liệu cao Đan sâm − Xây dựng tiêu chuẩn cho cao Đan sâm ... quy trình chiết xuất cao Đan sâm c Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao Đan sâm cho hiệu suất cao nhất, hàm lượng tanshinon IIA cao tạp chất tối thiểu 3 TỔNG QUAN 2.1 Dược liệu Đan sâm 2.1.1... đề tài Khảo sát tối ưu hóa điều kiện chiết xuất cao Đan sâm thực với mục tiêu nghiên cứu sau: a Kiểm kiểm nghiệm dược liệu Đan sâm thẩm định phương pháp định lượng tanshinon IIA b Khảo sát số... kiện chiết xuất kết chiết xuất c) Phần mềm thông minh kết hợp mạng thần kinh nhân tạo với hệ diễn tả gen xác lập mơ hình liên quan nhân và sở tối ưu hóa điểu kiện chiết xuất cho kết chiết xuất