Bài viết “Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất và xác định hàm lượng các ginsenosid Re, Rg1 và Rb1 trong sâm Hoa Kỳ bằng phương pháp HPLC với đầu dò PDA” được thực hiện với mục đích xây dựng một quy trình chiết xuất và kiểm nghiệm để kiểm soát hàm lượng hoạt chất trong các chế phẩm sâm.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 TỐI ƯU HÓA ĐIỀU KIỆN CHIẾT XUẤT VÀ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CÁC GINSENOSID RE, RG1 VÀ RB1 TRONG SÂM HOA KỲ (Panax quinquefolius L.) BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC VỚI ĐẦU DỊ PDA Nguyễn Thanh Tuyền*, Vũ Hải Đăng*, Ngơ Kiến Đức* TÓM TẮT Mở đầu: Sâm Hoa Kỳ (Panax quinquefolius L.) dược liệu quý thuộc chi Panax, có tác dụng tốt nhiều hệ quan khác hệ thần kinh, tim mạch, miễn dịch,… Các sản phẩm từ sâm cao chiết sâm phong phú đa dạng, nhiên chất lượng sản phẩm chưa đảm bảo Do đó, đề tài “Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất xác định hàm lượng ginsenosid Re, Rg1 Rb1 sâm Hoa Kỳ phương pháp HPLC với đầu dò PDA” thực với mục đích xây dựng quy trình chiết xuất kiểm nghiệm để kiểm soát hàm lượng hoạt chất chế phẩm sâm Mục tiêu: Khảo sát tìm điều kiện chiết xuất tối ưu ginsenosid sâm Hoa Kỳ Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời ginsenosid Re, Rg1 Rb1 sâm Hoa Kỳ phương pháp HPLC với đầu dò PDA Đối tượng nghiên cứu: Re, Rg1 Rb1 sâm Hoa Kỳ (Panax quinquefolius L.) Phương pháp nghiên cứu: tối ưu hóa điều kiện chiết xuất ginsenosid mơ hình Box-Behnken Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời ba ginsenosid Re, Rg1 Rb1 theo hướng dẫn ICH 2005 Kết quả: Quy trình định lượng đồng thời ba ginsenosid Re, Rg1 Rb1 xây dựng thẩm định đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ độ xác cao Xác định ảnh hưởng yếu tố nồng độ ethanol, tỉ lệ dung môi/dược liệu thời gian chiết lên hiệu suất chiết ginsenosid Điều kiện chiết xuất tối ưu ginsenosid ethanol 69,4%, tỉ lệ dung môi/dược liệu 51,4 ml/ g với thời gian chiết 6,1 Kết luận: Quy trình chiết xuất ginsenosid với thơng số tối ưu quy trình định lượng đồng thời ba ginsenosid sâm Hoa Kỳ ứng dụng kiểm nghiệm nhằm đảm bảo chất lượng sản phẩm có chứa sâm Từ khóa: ginsenosid, sâm Hoa Kỳ, mơ hình Box-Behnken, Panax quinquefolius L ABSTRACT OPTIMIZATION OF EXTRACTION AND DETERMINATION OF GINSENOSIDE RE, RG1 AND RB1 IN AMERICAN GINSENG (Panax quinquefolius L.) BY HPLC WITH PDA DETECTOR Nguyen Thanh Tuyen, Vu Hai Dang, Ngo Kien Duc * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 - No 2- 2019: 108-115 Background - Objectives: American ginseng (Panax quinquefolius L.) is a precious medicinal plant in Panax genus, which has various benefits on nervous, circulatory, and immune system,… There are many products from ginseng and ginseng extracts, however, the quality of these products is not consistent * Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: TS Ngô Kiến Đức ĐT: 0903055357 108 Email: ngokienduc@gmail.com Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Therefore, the aim of this study was to optimize condition of extraction and develop a HPLC method for assay of Re, Rg1 and Rb1 to ensure quality and consistency of ginseng products Method: Extraction conditions of ginsenosides was optimized using Box – Behnken design A HPLC – PDA method for assay of Re, Rg1 and Rb1 was developed and validated according ICH 2005 guidelines Results: The HPLC - PDA method for determination of ginsenoside Re, Rg1 and Rb1 was developed and validated The method requirement of system suitability, specificity, linearity, high accuracy and precision The effects of ethanol concentration, solvent/sample ratio and extraction time on extraction yield of ginsenosides was evaluated The optimized condition for ginsenosides extraction was 69.4% ethanol, a ratio of 51.4 ml solvent to g sample and an extraction time of 6.1 hours Conclusion: The extraction process with optimized parameters and the method for simultaneous determination of three ginsenosides in American ginseng can be applied for quality control of ginseng products Keywords: ginsenosides, American ginseng, Box-Behnken design, Panax quinquefolius L ĐẶT VẤNĐỀ Mẫu nghiên cứu Sâm Hoa Kỳ (Panax quinquefolius L.), gọi sâm Wisconsin loại dược liệu quý thuộc chi Sâm (Panax) Sâm Hoa Kỳ khác biệt với sâm Hàn Quốc tỉ lệ loại ginsenosid có tác dụng sinh học tương đối khác Theo số nghiên cứu(6), sâm Hoa Kỳ có tác dụng nhiều hệ quan khác hệ thần kinh, tim mạch, hô hấp, tiêu hóa, miễn dịch, có tác dụng tốt bệnh tiểu đường, ung thư Ở Việt Nam năm gần đây, sâm Hoa Kỳ ngày nhiều người biết đến sử dụng Các sản phẩm từ sâm cao chiết sâm ngày phong phú đa dạng, nhiên chất lượng nhiều sản phẩm chưa kiểm soát Để kiểm tra chất lượng chế phẩm sâm, người ta thường xác định hàm lượng hoạt chất ginsenosid sâm kỹ thuật HPLC(7) Đề tài thực dựa nhu cầu thực tế cần kiểm soát hàm lượng ginsenosid sản phẩm từ sâm để đảm bảo chất lượng hiệu sản phẩm Sâm Wisconsin (Panax quinquefolius L.) nhập công ty CPĐT Thảo Dược Xanh ĐỐI TƯỢNG–PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Re, Rg1 Rb1 sâm Hoa Kỳ (Panax quinquefolius L.) Chuyên Đề Dược Chất đối chiếu, hóa chất dung môi Chất đối chiếu ginsenosid Re, hàm lượng 94,28% tính ngun trạng, số lơ: GRe-0010913; ginsenosid Rg1, hàm lượng 96,43% tính ngun trạng, số lơ: GRg1.Ref.012011; ginsenosid Rb1, hàm lượng 99,17% tính nguyên trạng, số lơ: GRb1.Ref.012011 Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh cung cấp Dung môi dùng cho nghiên cứu bao gồm: ethanol 96% (Việt Nam), acetonitril methanol (J.T.Baker, Mỹ) Trang thiết bị Cân phân tích Mettler Toledo XP26 (Mỹ); Cột sắc ký SunfireTM C18 (5 μm, 4,6 x 250 mm) (Mỹ); Hệ thống HPLC/PDA HP Series 1050 (Mỹ) Lựa chọn điều kiện phân tích Theo nghiên cứu cơng bố, để phân tích ginsenosid cột sắc ký thường sử dụng cột pha đảo C18 với kích thước 150 - 250 x 4,6 mm, - μm; hệ dung môi H2O – acetonitril; kiểu rửa giải gradient; bước sóng phát 203 nm Đa số phương pháp HPLC Dược điển Mỹ(5) nghiên cứu(1,5) có thời gian phân tích dài với chương trình gradient từ 60 109 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 phút trở lên, gây tốn thời gian, dung môi, không thích hợp cho việc khảo sát tối ưu hóa điều kiện chiết xuất Do đó, đề tài lựa chọn phương pháp công ty Dionex (Mỹ) với thời gian phân tích tương đối ngắn 25 phút, sau tiến hành khảo sát lại điều chỉnh thông số sắc ký cho phù hợp với điều kiện trang thiết bị phòng thí nghiệm Điều kiện sắc ký đề nghị sau: Re Rg1 có nồng độ 1000 μg/ml, 400 μg/ml 100 μg/ml Dung dịch đối chiếu hỗn hợp lọc qua màng lọc 0,45 μm trước tiến hành sắc ký Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất Chiết hồi lưu g bột sâm Hoa Kỳ với điều kiện thay đổi nồng độ ethanol, tỉ lệ dung môi/dược liệu thời gian chiết Thí nghiệm tối Cột C18 (4,6 x 250 mm, µm) ưu hóa điều kiện chiết xuất ginsenosid Pha động: A nước B acetonitril thiết kế theo mơ hình Box-Behnken(2) yếu tố với Chương trình gradient: – phút pha động có tỉ lệ 70% A + 30% B, – phút A B thay đổi tỉ lệ theo thởi gian để đến phút pha động có tỉ lệ 60% A + 40% B, – 15 phút A B thay đổi tỉ lệ theo thởi gian để đến 15 phút pha động 100% B, 15 – 20 phút pha động 100% B, 20 – 21 phút A B thay đổi tỉ lệ theo thởi gian để đến 21 phút pha động có tỉ lệ 70% A + 30% B, 21 – 27 phút pha động có tỉ lệ 70% A + 30% B Bước sóng phát hiện: 203 nm Nhiệt độ cột: 50oC Tốc độ dòng: 0,8 ml/phút Thể tích tiêm mẫu µl Chuẩn bị mẫu Dung dịch đối chiếu gốc: Cân xác 20,167 mg chất đối chiếu Rb1 cho vào bình định mức ml, thêm khoảng ml methanol, lắc cho tan hết, thêm methanol đến vạch, lắc đều, thu dung dịch đối chiếu gốc Rb1 15 thí nghiệm Các dịch chiết thí nghiệm xác định hàm lượng ginsenosid chiết phương pháp HPLC với đầu dò PDA Kết 15 thí nghiệm xử lý phần mềm MODDE 5.0 để xác định mối tương quan yếu tố nồng độ ethanol, tỉ lệ dung môi/dược liệu, thời gian chiết với hiệu suất chiết ginsenosid; xây dựng phương trình bề mặt đáp ứng dự đoán điều kiện cho hiệu suất tối ưu Thẩm định quy trình phân tích Quy trình định lượng ginsenosid Re, Rg1 Rb1 thẩm định theo hướng dẫn ICH (2005)(3) yếu tố: tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính, giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng, độ độ xác KẾT QUẢ Tối ưu hóa hiệu suất chiết ginsenosid Thiết lập mơ hình tối ưu hóa nồng độ 4000 μg/ml Tiến hành tương tự chất Thí nghiệm tối ưu hóa điều kiện chiết xuất đối chiếu Re chất đối chiếu Rg1 thu ginsenosid thiết kế theo mơ hình Box- dung dịch đối chiếu gốc Re nồng độ 1600 Behnken yếu tố với 15 thí nghiệm, thí μg/ml Rg1 nồng độ 800 μg/ml nghiệm lặp lại lần Khoảng khảo sát tối Dung dịch đối chiếu hỗn hợp: Hút xác 1,25 ml; 1,25 ml 0,625 ml dung dịch đối chiếu gốc Rb1, Re Rg1, cho vào bình định mức ml, thêm methanol đến vạch, lắc đều, thu dung dịch đối chiếu hỗn hợp Rb1, 110 ưu yếu tố nồng độ ethanol (50-96%), tỉ lệ dung môi/dược liệu (30/1-70/1) thời gian chiết (4-8 giờ) lựa chọn dựa nghiên cứu Kim cộng (2007)(4), Dược điển Trung Quốc 2015(1) Dược điển Mỹ 40(5) Kết thí nghiệm tối ưu hóa trình bày bảng Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Từ kết bảng 1, sử dụng phần mềm MODDE 5.0 để phân tích ảnh hưởng yếu tố nồng độ ethanol, tỉ lệ dung môi/dược liệu thời gian chiết lên hàm lượng ginsenosid chiết Phương trình hồi quy mơ hình tìm là: = -200,7277 + 3,6787C + 2,4264R + 28,0417T – 0,0268C2 – 0,0253R2 – 2,3240T2 + 0,0014CR – 0,0050CT + 0,0121RT Trong đó: hàm lượng ginsenosid chiết (mg/g); C nồng độ ethanol (%); R tỉ lệ dung môi/dược liệu; T thời gian chiết (giờ) Bảng 1: Kết thí nghiệm tối ưu hóa Nghiên cứu Y học Nồng Thời Tỉ lệ dung Hàm lượng ba Mã thí độ gian TT môi/dược ginsenosid nghiệm ethanol chiết liệu (mg/g) (%) (giờ) 50 30/1 54,92 +-0 96 30/1 42,90 -+0 50 70/1 55,74 ++0 96 70/1 46,42 -050 50/1 53,83 +096 50/1 47,05 -0+ 50 50/1 54,90 +0+ 96 50/1 47,43 0-70 30/1 52,71 10 0+70 70/1 55,21 11 0-+ 70 30/1 54,24 12 0++ 70 70/1 58,67 13 000 70 50/1 71,79 14 000 70 50/1 74,99 15 000 70 50/1 77,04 Bảng 2: Kết phân tích ANOVA phương trình hồi quy Mơ hình (Model) Số dư (Residual) Không phù hợp (Lack of fit) Sai số (Pure error) Tổng Tổng Trung bình bình phương (SS) bình phương (MS) 1471,47 163,496 22,8333 4,567 8,83165 2,944 14,0016 7,001 1494,3 106,736 R2 = 0,985, R2 hiệu chỉnh = 0,957 Bậc tự (df) Giá trị F Giá trị P 14 35,8022 0,001 0,4205 0,759 Bảng 3: Kết phân tích ANOVA hệ số phương trình hồi quy Hệ số Hằng số C R T C2 R2 T2 CR CT RT Giá trị SC (Scaled & Centered) 74,2675 -4,4488 1,4497 0,7901 -14,1691 -10,1033 -9,2958 0,6274 -0,2283 0,4825 Sai số chuẩn 1,2486 0,7555 0,7587 0,7587 1,1358 1,1121 1,1121 1,0640 1,0640 1,0685 Giá trị P 0,0000 0,0020 0,1143 0,3454 0,0001 0,0003 0,0004 0,5810 0,8386 0,6705 Hình 1: Đường biểu diễn dự đốn ảnh hưởng yếu tố lên hàm lượng ginsenosid chiết Chuyên Đề Dược 111 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Kết phân tích ANOVA (Bảng 5) cho thấy mơ hình có ý nghĩa thống kê có Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất Dựa phương trình hồi quy mơ tương thích với thực nghiệm: giá trị P mơ hình hình, sử dụng cơng cụ tối ưu hóa < 0,05; giá trị P Lack of fit > 0,05; R2 hiệu (Optimizer) phần mềm MODDE 5.0 cho chỉnh = 0,957 độ tin cậy 95% phép xác định giá trị hàm lượng mong Ảnh hưởng yếu tố đối với hiệu suất chiết ginsenosid muốn giá trị tương ứng yếu Dựa vào kết bảng 3, giá trị yếu tố 74,7 mg/g chiết ethanol nồng độ giá trị bậc hai ba yếu tố nồng 69,4% với tỉ lệ 51,4 ml/ g 6,1 độ, tỉ lệ, thời gian thể mức độ ý nghĩa Điều kiện tương đương với điều kiện tin cậy cao (P < 0,05) tham gia vào mô hình thí nghiệm trung tâm giá trị hàm Như vậy, yếu tố nồng độ ethanol, tỉ lệ dung lượng dự đoán xấp xỉ với giá trị mơi/dược liệu thời gian chiết có ảnh hàm lượng quan sát từ thí nghiệm hưởng đến hiệu suất chiết ginsenosid (Hình 1) trung tâm tố Kết giá trị hàm lượng tối đa tìm Thẩm định phương pháp Tính phù hợp hệ thống Bảng 4: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu đối chiếu hỗn hợp (n=6) Ginsenosid Re Rg1 Rb1 Thời gian lưu TB 6,271 6,613 12,786 RSD% Diện tích pic TB RSD% diện Hệ số bất Số đĩa lý thời gian lưu tích pic (S) đối (As) thuyết (N) 0,59 641,79205 0,87 0,91 10648 0,59 153,56691 1,45 0,81 12855 0,22 1403,27914 0,27 0,89 174393 Độ phân giải (Rs) 1,50 34,40 Nhận xét: RSD thông số sắc ký cho ứng mẫu thử Sử dụng chức lần tiêm lặp lại nhỏ 2% Hệ số bất kiểm tra độ tinh khiết pic cho thấy pic đối nằm khoảng 0,8 – 1,5, số đĩa lý Re, Rg1 Rb1 đạt độ tinh khiết pic (hệ số thuyết lớn 2000, độ phân giải lớn tinh khiết (purity factor) nằm ngưỡng 1,5 Vậy quy trình phân tích đạt giới hạn tính (calculated threshold tính phù hợp hệ thống limit)) Như vậy, quy trình phân tích có tính Tính đặc hiệu Tiến hành sắc ký mẫu trắng (methanol), đặc hiệu Sắc ký đồ mẫu minh họa hình 2, 3, mẫu chuẩn, mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn Tính tuyến tính, độ độ xác Kết cho thấy mẫu trắng khơng xuất Tính tuyến tính pic thời gian lưu ginsenosid, sắc ký Tiến hành pha dung dịch đối chiếu hỗn hợp có nồng độ khác khoảng 20150% so với nồng độ trung bình mẫu thử Tiến hành sắc ký dung dịch đồ mẫu thử có pic có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu pic ginsenosid mẫu chuẩn Các pic ginsenosid tách hoàn toàn với pic khác sắc ký đồ Độ Diện tích pic ginsenosid mẫu Hút 900 μl dung dịch thử cho vào eppendorf thử thêm chuẩn tăng lên so với pic tương ml Thêm lượng xác định dung dịch chuẩn 112 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học thêm MeOH vừa đủ 1,5 ml cho nồng độ Độ xác trung gian mẫu thử pha chuẩn nằm khoảng tuyến Chuẩn bị mẫu độ lặp lại, tiến hành sắc ký ngày khác tính ginsenosid Re, Rg1 Rb1 ba mức nồng độ 80%, 100% 120% so với nồng độ trung bình mẫu thử Ở mức nồng độ, tiến hành định lượng lần Độ lặp lại Chuẩn bị mẫu thử, tiến hành sắc ký mẫu ngày Kết thống kê cho thấy quy trình phân tích có khoảng tuyến tính từ 80 – 600 μg/ml Re, từ 20 – 150 μg/ml Rg1 từ 200 – 1500 μg/ml Rb1 Quy trình có tỷ lệ phục hồi nằm khoảng từ 88,3-109,8% Quy trình có độ xác với RSD ngày ≤ 1,9% RSD khác ngày ≤ 3,1% Hình 2: Sắc ký đồ mẫu trắng Hình 3: Sắc ký đồ mẫu chuẩn Hình 4: Sắc ký đồ mẫu thử Chuyên Đề Dược 113 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Hình 5: Sắc ký đồ mẫu thử thêm chuẩn Bảng 5: Kết khảo sát tính tuyến tính, độ độ xác Ginsenosid Phương trình hồi quy Khoảng tuyến tính (μg/ml) R2 Tỷ lệ phục hồi Độ RSD%, n=9 Hàm lượng (mg/g) Độ lặp lại RSD%, n=6 Hàm lượng (mg/g) Độ xác trung gian RSD%, n=18 Re = 1,6228x 80 – 600 0,9990 102,11-109,80% 2,73 19,63 0,67 19,96 1,88 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng Pha loãng dung dịch đối chiếu thành nồng độ thấp dần Tiến hành sắc ký thiết lập tỷ số tín hiệu nhiễu S/N Nồng độ mà có S/N lớn gần với giới hạn phát (LOD) Tương tự, nồng độ mà có S/N lớn gần với 10 Rg1 = 1,5734x 20 – 150 0,9981 88,30-109,61% 8,16 2,63 1,94 2,65 3,11 Rb1 = 1,394x 200 – 1500 0,9996 102,53-109,48% 2,01 50,58 0,33 52,07 2,37 - Giới hạn phát hiện: ppm Rg1 Re, ppm Rb1 - Giới hạn định lượng: 16 ppm Rg1 Re, 14 ppm Rb1 - Độ với tỷ lệ phục hồi từ 88,3-109,8% - Độ xác với RSD ngày ≤ 1,939% RSD khác ngày ≤ 3,107% giới hạn định lượng (LOQ) Kết BÀNLUẬN thu sau: LOD Re Rg1 Đề tài sử dụng phần mềm MODDE 5.0 với mô hình Box-Behnken để tối ưu hóa điều kiện chiết xuất ginsenosid từ sâm Hoa Kỳ cách khảo sát biến phụ thuộc hàm lượng ba ginsenosid chiết với biến độc lập nồng độ ethanol, tỉ lệ dung môi/dược liệu thời gian chiết Các kết cho thấy nồng độ ethanol có ảnh hưởng lớn đến hiệu suất chiết ginsenosid, theo ethanol 70% cho hiệu suất chiết ginsenosid tăng đáng kể so với ethanol 50% Điều ethanol 70% có khả hòa tan tốt ginsenosid Khi nồng độ ethanol tăng lên 70%, hiệu suất chiết giảm Nguyên nhân ppm, Rb1 ppm; LOQ Re Rg1 16 ppm, Rb1 14 ppm Các ginsenosid Re, Rg1 Rb1 sâm Hoa Kỳ (Panax quinquefolius L.) định lượng phương pháp HPLC với đầu dò PDA thẩm định theo hướng dẫn ICH (2005): - Tính phù hợp hệ thống - Tính đặc hiệu - Tính tuyến tính với miền giá trị từ 20 150 μg/ml Rg1, từ 80 - 600 μg/ml Re từ 200 - 1500 μg/ml Rb1 114 Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 protein dược liệu bị đông tụ ethanol nồng độ cao, làm sức cản khuếch tán tăng lên Tương tự, tỉ lệ dung mơi/dược liệu thời gian chiết có ảnh hưởng đáng kể đến hiệu suất chiết ginsenosid Hiệu suất chiết tăng dần tỉ lệ tăng từ 30:1 lên 50:1, điều phù hợp với nguyên lý chuyển khối tăng lượng dung mơi gradient nồng độ khối dược liệu khối chất lỏng lớn nên khả khuếch tán tăng Khi tăng lượng dung mơi lên hiệu suất lại giảm Ngun nhân cho vấn đề chưa rõ, nhiên có nghiên cứu ghi nhận giảm hiệu suất chiết tăng lượng dung môi sử dụng phương pháp chiết siêu âm Hiệu suất chiết thay đổi theo thời gian chiết, cụ thể hiệu suất chiết tăng thời gian chiết tăng từ đến bắt đầu giảm dần sau Nguyên nhân trình tiếp xúc lâu với nhiệt độ cao làm biến đổi số ginsenosid Rg1, Re, Rb1,…dẫn đến hàm lượng tính theo ginsenosid bị giảm Điều kiện chiết xuất tối ưu cho sâm Hoa Kỳ xác định từ mơ hình Box-Behnken chiết ethanol 69,43% với tỉ lệ 51,44: 6,10 Kết phù hợp với nghiên cứu Kim cộng yếu tố ảnh hưởng đến việc chiết xuất ginsenosid từ rễ sâm Hàn Quốc Chuyên Đề Dược Nghiên cứu Y học KẾT LUẬN Quy trình phân tích thiết lập có tính đặc hiệu, độ độ xác, ứng dụng để kiểm tra chất lượng sản phẩm sâm Hoa Kỳ thị trường Đề tài xác lập điều kiện tối ưu để chiết xuất hoạt chất ginsenosid sâm: sử dụng ethanol 69,4% với tỉ lệ 51,4 ml g dược liệu thời gian chiết 6,1 TÀI LIỆU THAM KHẢO Chinese Pharmacopoeia Commission (2015) Chinese Pharmacopoeia of the People's Republic of China (Vol 1), pp 131-132 Ferreira S, et al (2007) Box-Behnken design: An alternative for the optimization of analytical methods Analytica Chimica Acta, 597(2): pp.179-186 International Council on Harmonization (2005) Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology Q2(R1), pp 125-154 Kim S, et al (2007) Parameters affecting the extraction of ginsenosides from the adventitious roots of ginseng (Panax ginseng C.A Meyer) Separation and Purification Technology, 56 (3): pp.401-406 The United States Pharmacopoeial Convention (2017), USP 40-NF 35, pp 6786-6790 Vuksan V, et al (2000) American Ginseng (Panax quinquefolius L) Reduces Postprandial Glycemia in Nondiabetic Subjects and Subjects With Type Diabetes Mellitus Archives of Internal Medicine, 160(7): pp.1009 Wang Y, et al (2015) Chemical analysis of Panax quinquefolius (North American ginseng): A review Journal of Chromatography A, 1426: pp.1-15 Ngày nhận báo: 18/10/2018 Ngày phản biện nhận xét báo: 01/11/2018 Ngày báo đăng: 15/03/2019 115 ... ký Tối ưu hóa điều kiện chiết xuất Chiết hồi lưu g bột sâm Hoa Kỳ với điều kiện thay đổi nồng độ ethanol, tỉ lệ dung mơi/dược liệu thời gian chiết Thí nghiệm tối Cột C18 (4,6 x 250 mm, µm) ưu hóa. .. đối chiếu gốc Rb1 15 thí nghiệm Các dịch chiết thí nghiệm xác định hàm lượng ginsenosid chiết phương pháp HPLC với đầu dò PDA Kết 15 thí nghiệm xử lý phần mềm MODDE 5.0 để xác định mối tương... dụng phần mềm MODDE 5.0 với mơ hình Box-Behnken để tối ưu hóa điều kiện chiết xuất ginsenosid từ sâm Hoa Kỳ cách khảo sát biến phụ thuộc hàm lượng ba ginsenosid chiết với biến độc lập nồng độ