Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của viên nén sắt sulfat acidfolic

Khái quát về độ ổn định của thuốc: * Độ ổn định: Khái niêm: Độ ổn định của thuốc nguyên liệu hay chế phẩm có thể được coi là khả năng của thuốc đảm bảo các chỉ tiêu chất lượng quy định

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI

^1* ^1* ^1*

DS HÀ THỊ LÊ TRANG

NGHIÊN CỨU MỘT s ố Yế U Tố ẢNH HƯỞNG

SẮT (H) SULFAT - ACID FOLIC

Chuyên ngành : Công nghệ Dược phẩm

và bào chế thuốc

Người hướng dẫn khoa học:

PGS.TS TRỊNH VĂN QUỲ

TS PHẠM NGỌC BÙNG

Hà nội - 2000

Trong quá trình thực hiện đề tài, tôi đã nhận được sự giúp đỡ của :

TS P hạm Ngọc Bùng - Phó chủ nhiệm bộ môn bào chế trường đại học dược Hà Nội, người thầy đã tận tình hướng dẫn và giành cho tôi sự giúp đỡ quý báu trong quá trình tiến hành nghiên cứu và hoàn thành luận văn

PGS.TS Trịnh Văn Quỳ - Viện trưởng viện kiểm nghiêm, người thầy đã tận

tình giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề t à i

Thạc sỹ Nguyễn Thị Kim Xuân, cùng toàn thể cán bộ phòng hoá lý II, Viện

kiểm nghiệm đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình định lượng acid folic và sắt (II) sulfat

PGS.TS Phạm Quang Tùng, PGS.TS Bùi Kim Lién, cùng toàn thể các thầy cô

giáo phòng đào tạo sau đại học , đã giúp đỡ tôi rất nhiều trong quá trình học tập

và hoàn thành luận văn

Toàn thể thầy cô giáo, cán bộ kỹ thuật bộ môn bào chế, trường đại học dược Hà Nội, đã tạo điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình tiến hành nghiên cứu

Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đối với những sự giúp đỡ quý báu của các thầy cô giáo và các đơn vị kể trên

DS Hà Thị Lê Trang

BP : Dược điển Anh

DĐVN : Dược điển Việt Nam

HPLC ; Sắc ký lỏng hiệu năng cao

1.4 Thực tê sản xuất viên sắt - folic tại Việt Nam và trên thê giới

1.4.1 Tai Viêt Nam

Trang

1

2 2

2

2

344

5

5 55

6

6

6 6

7

8

9 9

1.5.1 Khái quát về độ ổn định của thuốc 111.5.2 Các phương pháp thử nghiệm độ ổn định

1.6 Các phương pháp định lượng sát (II) sulfat và acid folic 18

1.6.1 Định lượng sắt sulíầt (II) theo chuyên chuyên luận “Viên 18

nén sắt (II) sulfat” của dược điển Anh BP981.6.2 Định lượng acid folic theo chuyên luận ’’Viên nén acid folic 19

- sắt (II) fumarat” của dược điển Anh BP98 bằng phưoíng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

2.2.2 Phương pháp định lượng sắt (II) sulfat 25

2.2.4 Phưoỉng pháp đánh giá các tiêu chuẩn của dạng bào chế viên 26

nén

trên các mẫu thử

3.1.2 Phương pháp định lượng sắt (II) sulfat 32

3.2 Xác định ảnh hưởng của dược chất với dược chất trong viên 35 nén tới độ ổn định của thuốc

3.3 Ảnh hưởng của các tá dược đối với độ ổn định của hai dược 41 chất acid folic và sắt (II) sulfat

3.4 Ảnh hưởng của biện pháp kỹ thuật trong quy trình sản xuất 44

đến độ ổn định của viên nén

3.4.1 Bào chế các mẫu viên từ bột nồng độ có dùng biện pháp hấp 44

phụ3.4.2 Bào chế các mẫu viên nén từ các bột kép thông thường 51

không dùng biện pháp hấp phụ3.4.3 Khảo sát độ ổn định của các mẫu bằng phương pháp lão hoá 55cấp tốc ở nhiệt độ cao

để đáp ứng nhu cầu của cơ thể, do lượng sắt trong khẩu phần thấp, do giá trị của sắt trong khẩu phần giảm, do nhu cầu tăng lên hoặc do mất máu Nếu các tình trạng trên kéo dài sẽ dẫn tới thiếu máu do thiếu sắt, còn gọi là thiếu máu dinh dưỡng có thể kết hợp với thiếu acid folic.

Theo đánh giá của tổ chức y tế thế giới (WHO) 56% phụ nữ ở các nước đang phát ùiển bị thiếu máu, tại các nước đã phát triển vẫn còn khoảng 12% phụ

nữ trong lứa tuổi sinh đẻ Uiiếu máu dinh dưỡng [6], Theo một điều tra của viện dinh dưỡng, tỷ lệ thiếu máu của phụ nữ nông ứiôn trong thời gian mang thai là 49%, ở Hà nội là 41% Để phòng chống suy dinh dưõfng cho ữẻ, cần phải bắt đầu chăm sóc ngay từ khi trẻ còn trong bụng mẹ Các công trình nghiên cứu cho thấy dùng viên sắt và acid folic cho phụ nữ có thai có ảnh hưởng tốt tới sức khoẻ bà

mẹ và t ó sơ sinh [23], [24] Vì vậy viên sắt và acid folic hiện đang là thuốc phục

vn chương trình dành cho phu nữ trong lứa tuổi sinh đẻ và trẻ em của Unicef

Hiện nay viên sắt - folic đã có trên thị trường , nhưng phần lớn là thuốc nhập ngoại với giá thành khá cao Các viên này chứa hai ứiành phần chính là sắt (II) sulfat và acid folic, đó là những dược chất dễ bị oxi hoá, có thể tương tác với nhau tạo thành phức Một số xí nghiệp trong nước đã quan tâm sản xuất tớị^viên này nhưng còn chưa đi sâu nghiên cứu về độ ổn định của thuốc

Xuất phát từ thực tế đó, chúng tôi tiến hành đề tài :

“ Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng tói độ ổn định của viên nén sắt (II) sulfat-acid folic” với mục tiêu sau :

1 Xác định một số yếu tố ảnh hưcmg tới độ ổn định của viên nén sắt (II) sulfat-acid folic

2 Từ đó lựa chọn công thức viên nén và quy trình bào chế đảm bảo độ

ổn định của thuốc trong điều kiện sản xuất tại Việt Nam

Cơ thể người thu nhận acid folic từ thức ăn và một số lượng khá lớn do

vi khuẩn đường ruột sản sinh ra

Ngày nay acid folic được điều chế bằng phương pháp tổng hợp hoá học Acid folic là tên dùng để chỉ một số nhóm chất đều là acid pteroylglutamic, song chúng khác nhau ở số lượng acid glutamic hợp thành (acid pteroyl-monoglutamic, acid pteroyl-diglutamic, acid pteroyl-heptaglutamic )- Tuy nhiên khi vào cơ thể chúng bị giáng phân dần và trở thành acid ptcroyl- monoglutamic

1.1.2 Tính chất:

Bột kết tinh màu vàng hay vàng cam, để ra ánh sáng chúng bị phân huỷ

Dễ hút ẩm Không tan trong nước, ethanol, cloroform, ether, dễ tan trong các dung dịch kiềm, carbonat kim loại kiềm, các dung dịch acid hydrocloric hay acid sulfuric loãng làm cho dung dịch có màu vàng [10]

acid folic dễ tan trong dung dịch kiềm và carbonat kim loại kiềm Tác dụng với muối kim loại tạo muối mới.

- Tính base: Do các nguyên tử N mang lại Tuy nhiên acid folic có tính base yếu Tác dụng với acid mạnh tạo muối hoà tan (acid hydrocloric, acid sulfuric)

Do vừa có tính acid vừa có tính base nên khi tác dụng với muối kim loại tạo muối dạng phức chất Acid folic tạo phức chất màu xanh với ion đồng, màu vàng thẫm với ion coban, màu đỏ với ion sắt Phức này có công thức

N ■ T r X : ! í - M I I 4 - Í 'O -R í”,

Khoảng 4-5 |ug được thải qua nước tiểu hàng ngày Dùng liều cao acid folic dẫn tới tăng tỷ lệ vitamin ứiải qua nước tiểu Folat được bài tiết qua sữa mẹ.

1.1.4 Dược lý học:

Acid folic có vai ừò trong một số chuyển hoá tế bào được tóm tắt như sau:

- Chuyển homocystein thành methionin

- Chuyển serin thành glycin

- Tổng hợp thymidylat

- Chuyển hoá histidin

- Tổng hợp các purin

- Sử dụng hoặc tạo ra các format

1.1.5 Công dụng - liều lượng:

* Liều lượng:

- Dùng để điều trị; uống hoặc tiêm 0,25-Img, ngày 1 lần

- Để đề phòng và điều trị duy trì: uống, tiêm dưới da, tiêm bắp, tiêm tĩnh mạch 0,l-0,25m g, ngày 1 lần

Các nguồn Ihức ăn giùu sắí ở clạiig sắl - hem là các san phiuii 111 độiig

vật như lliỊt cá Các nguồn thírc ăn chứa sắt không phải ở dạng sắt - hem cũng

được (Ì111 thấy ờ CÍÍC sản Ịihẩni từ động vật, các loại đạii và ÍÌIỘI số loại laii, liiy

nliiôn mộl số sản phẩm tù’ rau có hàm lượng sắt cao lại đồng thời có chứíi

phosphat \h chất ức chế việc hấp thu sắt bằng cách tạo ra các phức chất không

tan

Cổ thể dùng sắt dirới dạng tổng hợp hoá học (sắt(II) sulfat, sắt(ll) fiirnarat)

1.2.2 Tính chất:

Sắt(II) sulfat khan có dạng tinh thể màu xanh, vị kim loại gắt

Sắt (II) sui fat có thể tương tác với benzoat, phosphaí và tác Iihâii oxi hoá, clo cló cÀn bảo quản Irong bìiili tráiih không khí, nút chặt

1.2.3 Dưực động học;

Sắt được hâp thu không đều và không hoàn toàn ở clạ dày, ruột Cơ quan

liAp tlui chủ yếu là lá tràng-hỗng tràng Sự hấp tlui được tương tiợ bởi acicl clo

dạ dày liêì ra hoặc các acid lừ thức ăn lon sắt ở dưới dạng sắt (II) hoặc là

(hành pliầii của các phức hợp hein (hem-ion) râì dễ hâp thu Sự liấp tliii íăiig lên klii thiếu hụt sắt hoặc trong trạng thái ăn kiêng, nliịii đói, nhưng bị giam đi

nếu hrựng clự trữ (V cơ ỉhể đã quá tải j

Cư Ihể người trưỏìig íhàiili có khoảng 3-4g Iroiig đó 2/3 có (V

và các cư quan khác [7].

Không kể đến việc xuất huyết:, sắt được bài tiết ra khỏi cơ thể (V clọng

|)Ik1ii, nước tiểu, qua da, trong mổ liôi, nhưng tổng lượng sắt mất đi râì nhỏ

và tham gia quá trình oxi hoá ở các mô bởi hai chức năng chính là:

- Vận chuyển oxy từ phổi tới các tổ chức ngoại biên

- Vận chuyển CO2 và proton từ tổ chức tới phổi để đào thải ra ngoài

1.2.5 Công dụng-Liều dùng:

* Công dụng:

Sắt (II) sulfat là một trong những muối sắt có hàm lượng sắt cao Chỉ nên dùng để điều trị và phòng bệnh thiếu máu do thiếu sắt, không nên dùng để điều trị các dạng thiếu máu khác

* Liều dùng;

Liều ban đầu từ 0,9-l,8g/ngày, sau đó duy trì 300mg/ngày

Với trẻ em dưới 1 tuổi có thể cho uống 60mg X 3 lần /ngày

vì vậy lượng huyết cầu tố cũng khác nhau đối với cùng một số lượng hồng cầu [40]

cùng tuổi và cùng sống trong một môi trường [1].

Thiếu máu có thể làm mô và các cơ quan bị suy nhược do thiếu oxy

Khó thở khi gắng sức cũng như lúc nghỉ ngơi là một triệu chứng thường gặp ở

những người Ihiếu máu nặng, đặc biệt là thiếu sắt vì ảnh hưởng chung tới toàn

bộ chuyển hoá tế bào

1.3.2 Sự thiếu hụt acid folic:

Thiếu hụt acid folic xảy ra khi cơ thể có nhu cầu cao: phụ nữ ba tháng

mang thai cuối cùng, trẻ em khi sinh ra nhẹ cân, trẻ bú sữa mẹ thiếu acid folic,

trẻ cai sữa quá muộn, những người bị nhiễm trùng hay ỉa chảy kéo dài

Thiếu hụt folic cũng thường gặp ở người bị bệnh ruột non làm ảnh

hưỏfng đến sự hấp thu folic ở thức ăn và sự tái nhập vào chu trình gan-ruột

(N ừì^ay nrợu hoặc nghiện IIÍỢU, sự hấp thu iiang^iga^oH c ở thức ăn có thể bị

hạn chế rất nhiều và chu trình gan-ruột của vitamin này có thể bị tổn hại, do

độc tính cuả mợu có tác động đến các tế bào của nhu mô gan và có thể đây là

nguyên nhân thông thường nhất của sự tạo ra nguyên hồng cầu khổng lồ do

thiếu hụt folic Các trạng thái bệnh có biến đổi tế bào ở mức cao như các

chứng thiếu máu^tan máu cũng có kèm theo chứng thiếu hụt folic

Thiếu hụt íblic tác động đến hệ thống tạo hồng cầu[39] Chứng thiếu

máu hồng cẩu khổng lồ do thiếu hụt folic hoặc do thiếu vitamin B12 rất khó

phân biệt Thiếu máu nguyên hồng cầu khổng lồ do thiếu hụt folic thường

xuất hiện nhanh hơn nhiều so với chứng bệnh này nếu do rối loạn hấp thu

vitamin B12 Các nghiên cứu cho thấy rằng mức độ tạo nguyên hồng cầu

khổng lồ thay đổi tùy theo cộng đồng dân cư được nghiên cứu và chế độ ăn cơ

bản của từng cá thể

tmởng thành tăng lên nhiều do cơ thể phát triển nhiều tổ chức mới Mỗi ngày lượng sắt mất đi ở người ti-ưcmg thành nam giới khoảng Img và ở nữ giới là 0,8mg, lượng sắt mất theo kinh nguyệt khoảng 2mg/ngày Các chế độ ăn hàng ngày thường gặp chứa khoảng 12-15mg sắt, trong đó có khoảng Img được hấp thu Lượng hấp thu là đủ cho nam giới ở tuổi trưởng thành nhưng không đủ đối với thiếu niên và phụ nữ mà lượng sắt cần thiết là 24-28mgftheo tổ chức y

tế thế giới? [7]

Thiếu máu do thiếu sắt xảy ra khi lượng sắt được hấp thu không đủ để đáp ứng nhu cầu của cơ thể, tình trạng thiếu hụt này có thể do lượng sắt trong khẩu phần thấp, do giá trị của sắt trong khẩu phần giảm, do nhu cầu tăng lên hoặc do mất máu Nêu các tình trạng trên kéo dài sẽ dẫn tới thiếu máu do thiếu sắt Thiếu máu do thiếu sắt là dạng thiếu máu dinh dưỡng hay gặp nhất với các đối tượng bị đe doạ nhiều nhất là trẻ em, học sinh và đặc biệt là phụ nữ

có thai [14], [15], [22] Trong thời kỳ có thai nhu cầu sắt tăng lên để cung cấp

đủ lượng sắt cho thai, rau thai và cho nhu cầu phân phối oxy cho quá trình oxy hoá ở các mô của cơ thể thai phụ ở phụ nữ có thai, tình trạng thiếu máu không chỉ ảnh hưởng xấu đến sức khoẻ của người mẹ, dễ gặp các tai biến chảy máu khi đẻ, mà còn làm cho thai nhẹ cân, dự trữ sắt và chất dinh dưỡng thấp, trẻ dễ bị suy dinh dưỡng, thiếu máu và làm ảnh hưởng tới sức khoẻ, sự phát triển về thể lực và trí tuệ của trẻ sau này [42]

Theo m ột điều tra của viện dinh dưỡng, tỷ lệ thiếu máu (hemoglobin

<110g/lít) ở phụ nữ nông thôn trong thời gian mang thai là 49%, đặc biệt

ở ba tháng cuối tỷ lệ này tới 59%; ở Hà Nội là 41% và ba tháng cuối của thai nghén là 48% [8 ] Nhiều tác giả đã chứng minh sự cần thiết cho phụ

nữ có thai uống viên sắt hàng ngày, nhất là trong ba tháng cuối của thời kỳ thai nghén Nghiên cứu của viện dinh dưỡng trên phụ nữ có thai dùng viên

này [9].

Công trình nghiên cứu của Hà Huy Khôi cho các phụ nữ có thai 6-7 tháng có lượng huyết sắc tố dưới llOg/lít uống liên tục mỗi ngày 2 viên (mỗi viên chứa 200mg sắt (II) sulphat và 0,25mg acid folic) cho thấy ở các phụ nữ uống thuốc đều, sau 60 ngày dùng thuốc, nồng độ huyết sắc tố trung bình từ 99g/lit lúc đầu tăng lên tới 114 g/lít Do đó để phòng chống thiếu máu dinh dưỡng có thể bổ sung viên sắt - folic [16]

1.4 THựC TẾ SẢN XUẤT VIÊN SẮT - FOLIC TẠI VIỆT NAM VÀ TRÊN THÊ GIỚI:

1.4.1 Tại Việt Nam:

Một số xí nghiệp trong nước đã bắt đầu quan tâm sản xuất viên sắt - acid folic như xí nghiệp dược phẩm Minh Hải, xí nghiệp dược phẩm Quảng Bình với thành phần chủ yếu như sau:

Sắt(II) sulfat 190mg

Tá dược vừa đủ cho một viên

1.4.2 Trên thê g iớ i:

Đã có rất nhiều hãng dược phẩm trên thế giới quan tâm nghiên cứu và sản xuất các dạng bào chế có chứa sắt và acid folic Một số biệt dược đã được

Bộ Y Tế cho phép lưu hành tại Việt Nam (bảng 1)

Bảng 1: Một số biệt dược có chứa sắt và acid folic đã được

lưu hành tại Việt Nam

chú

1 Tardyíeron B9 Sắt (II) sulfat Acid folic,

Vitamin c

Viên nén (H/30v)

Pieưe Fabre Medicament

*

2 Tardyferone Sắt (II) sulfat, Acid folic Viên nén

(H/30v)

Pieưe Fabre Medicament

%

3 Peưovit Sắt (II) fumarat, Acid folic,

Vitamin B12,

Viên nang (H/lOOv)

Medicap Ltd %

4 Ferrogreen Sắt (II) sulfat, Acid folic,

Vitamin B12,

Viên nén (H/lOOv)

Korea Green Phai'iii Co.,

=t=

5 Maltofer Fol Sắt (II) oxyd,

Polymaltosatum, Acid folic

Viên nén nhai (H/30v)

Vifor (International)

*

6 Sangobion Sắt gluconat, mangan sulfat,

acid folic, B12, c , sorbitol

Viên nang (H/250V)

P.TMerk Indonesia

7 Hemobion Sắt (II), B12, acid folic,

calcium, Cholecalciferol

Viên nang (H/lOOv)

P.T Merk Indonesia

8 Siderfol Sắt (II), B, c , acid folic Viên nang

(H/30V)

Raptakos, India

9 Siderplex Sắt (II), B, c , acid folic Thuốc nước

(H/15ml)

Raptakos, India

10 Siderfol Sắt (II) fumarrate, B, c , acid

folic

Viên nang (lọ 30v)

Spectrum Phamiaceutic als Pvt Lid India

11 Gentaron Sất (II), acid folic Nang mềm

(H/3ŨV)

Ahn Gook Korea

1.5 ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA THUỐC VÀ CÁCH XÁC ĐỊNH:

1.5.1 Khái quát về độ ổn định của thuốc:

* Độ ổn định:

Khái niêm: Độ ổn định của thuốc (nguyên liệu hay chế phẩm) có thể

được coi là khả năng của thuốc đảm bảo các chỉ tiêu chất lượng quy định trong dược điển hay tiêu chuẩn chất lượng của nhà sản xuất trong một khoảng thời gian nhất định khi thuốc được bảo quản trong đồ bao gói chuyên dụng

Độ ổn định được đánh giá bằng các chỉ tiêu [4]:

- Chỉ tiêu vật lý: màu sắc, mùi vị, trạng thái, độ đồng đều, độ rã phải giữ được đặc tính ban đầu

- Chỉ tiêu hoá học: mỗi thành phần hoạt chất phải giữ được trạng thái hoá học nguyên vẹn và hàm lượng trong khoảng giới hạn cho phép, sản phẩm phân huỷ được quy định trong giới hạn nhất định

- Chỉ tiêu vi sinh vật: độ nhiễm khuẩn ,nấm mốc , chất gây sốt phải đạt mức chất lượng cho phép

- Chỉ tiêu về độc tính: độc tính không tăng đáng kể

Khi nghiên cứu một chế phẩm thuốc mới hay hoàn thiện nâng cao chất lượng một thuốc đã được sử dụng trong lâm sàng đều phải nghiên cứu độ ổn định để từ đó quy định hạn dùng, điều kiện bảo quản [35], [37], [43],

Các yếu tố ảnh hưởti2 đến đô ổn đinh của thuốc:

Độ ổn định của thuốc bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố, có thể chia thành hai loại yếu tố sau:

+ Loại yêĩi tố thuộc về thuốc (yếu tố nội tại): gồm 3 yếu tố chính:

- Thành phần của thuốc: dược chất, các tá dược và chất phụ

- Kỹ thuật bào chế

- Bao bì: ngoài tác dụng là vật đựng, bao bì còn đóng vai trò bảo vệ thuốc: chống hút ẩm, chống nhiễm khuẩn, tránh ánh sáng, không tưcíng tác thuốc Vì vậy đối với mỗi chế phẩm phải lựa chọn bao bì thích hợp.

+ Loại yếu tố thuộc về điều kiện bảo quản (yếu tố ngoại cảnh):

Bao gồm nhiệt độ, ánh sáng, không khí (oxygen, cacbon dioxyd) và độ

ẩm Trong suốt quá trình bảo quản, lưu thông và phân phối, thuốc luôn chịu ảnh hưởng của các yếu tố ngoại cảnh Vì vậy điều kiện bảo quản vô cùng quan trọng đối với độ Ổn định của thuốc

- Nhiệt độ quyết định tới tốc độ phản ứng gây phân huỷ thuốc Ngoài ra nhiệt độ còn ảnh hưởng tới ừạng thái bền vững của một số dạng thuốc như hỗn dịch, nhũ tương, thuốc đạn, khí dung

- Ánh sáng: một số hoạt chất bị phân huỷ bởi tác dụng cuả ánh sáng

- Độ ẩm: Độ ẩm không khí cao tạo điều kiên cho nấm mốc phát triển, ngoài ra hơi nước phân huỷ một số thuốc [30]

Tình hình c h u m :

Nghiên cứu độ ổn định của thuốc đã được tổ chức y tế thế giới (WHO)

và các cơ quan quản lý về thuốc của các quốc gia quy định Từ năm 1974, Bộ

y tế Liên Xô đã có quy định tạm thời về cách xác định tuổi thọ bằng phương pháp lão hoá cáp tốc [4] Năm 1994 , WHO cũng đã có hướng dẫn thử độ ổn định của thuốc [43] Bộ y tế của một số nước như Thái Lan, Australia cũng ra hướng dẫn cụ thể [31], [32] Năm l993, cộng đồng châu Âu cùng Nhật, Mỹ đã

có hướng dẫn chung về thử độ ổn định của thuốc [34] Hướng dẫn này cũng chính thức được đưa vào dược điển Mỹ USP XXIII [41], ở Việt Nam cục quản

lý dược quy định cần có tư liệu theo dõi độ ổn định ữong hồ sơ đăng kỷ thuốc

Nghiên cứu độ ổn định cần có đề cương cụ thể Đề cương đó phải quan tâm đến thị trường dự kiến sẽ lưu thông chế phẩm thuốc, nghiên cứu trong điều kiện khí hậu cụ thể.

Theo phân vùng khí hậu của WHO, Việt Nam thuộc vùng IV khí hậu

nóng ẩm [43]:

Việt Nam với khí hậu nhiệt đới gió mùa mà thuộc tính cơ bản là nóng

và ẩm gây trở ngại cho công tác bảo quản, ảnh hưởng rất lớn tới độ ổn định của thuốc [2]

1.5.2 Các phương pháp thử nghiệm độ ổn định thuốc và điều kiện thử nghiệm:

Các phưcỉng pháp thử nghiêm độ ổn định , đặc điểm và mục đích thử nghiệm được nêu trong bảng 2

Bảng 2: Phàn loại, đặc điểm và mục đích của thử nghiệm độ ỏn định

Nhanh T® cao / 1-12 tuần Xác định nhanh các yếu tố ảnh

hưởng đến độ ổn định => chọn

công thức, quy trình bào chếĐầy đủ T°, độ ẩm khác nhau / 5 năm Tìm hạn dùng, tuổi thọ của thuốcNgắn hạn Trong điều kiện và thời gian

I.5.2.I Quỵ định chung về nghiên cứu độ ổn định:

Việc nghiên cứu độ ổn định của thuốc do các cơ sở sản xuất hay nghiên cứu, phát triển thuốc thực hiện [25]

Mục đích của thử độ ổn định được trình bày trong bảng 2 [3], [18],

Các phương pháp nghiên cứu độ ổn định của thuốc:

Nghiên cứu độ ổn định của thuốc được tiến hành bằng nhiều phươngpháp khác nhau dựa trên nguyên tắc: Thuốc được bảo quản trong điều kiện nhất định, sau từng thời gian xác định lại chất lượng thuốc theo tiêu chuẩn quy định Điều kiện bảo quản có thể là:

Điều kiện thông thường:

+ Nhiệt độ trung bình 20°c , độ ẩm 90%

+ Nhiệt độ , độ ẩm, ánh sáng thay đổi theo thời tiết tự nhiênTheo phương pháp nghiên cứu này phải theo dõi độ ổn định trong một thời gian dài (từ 2 năm trở lên)

Điều kiện khắc nghiệt:

+ Sử dụng tác nhân nhiệt độ cao (từ 30°c trở lên), loại bỏ hoàn toàn tác dụng của ánh sáng vào mẫu thử , và độ ẩm tương đối trong phòng thử

không vu’Ợt quá 90%

+ Sử dụng các yếu tố khắc nghiệt khác như nhiệt độ Ihấp, pH,

ánh sáng, lực li tâm, độ ẩm tác động lên thuốc để đánh giá sơ bộ độ ổn định của thuốc với nguyên tắc: thuốc chịu đựng được điều kiện khắc nghiệt thì có thể ổn định trong điều kiện bảo quản thông thường

Sử dụng điều kiện khắc nghiệt để đánh giá sơ bộ độ ổn định của thuốc

và ứng dụng phương pháp này có thể rút ngắn được thời gian nghiên cứu, do

vậy nó thường được gọi là phương pháp “lão hoá cấp tốc” hay “già hoá cấp tốc” [36].

I.5.2.2 Nghiên cứu độ ổn định của thuốc bằng phương pháp ỉão hoá cấp tốc:

a/ Khái niệm, mục tiêu, phạm vi ứng dụng:

“Lão hoá cấp tốc” là phương pháp nghiên cứu độ ổn định của thuốc trong điều kiện khắc nghiệt, tăng cường các tác nhân kích thích sự phân huỷ thuốc, nhằm giảm thời gian cần thiết để đánh giá độ ổn định của thuốc

Từ đó xác định được hạn dùng của thuốc (hình Ib)

+ Lựa chọn được điều kiện bảo quản để có thời gian hữu hiệu của thuốc theo mong muốn (hình Ic) [12],

Lượng thuốc

bị phân huỷ

(c)

Hình 1: Những mục tiêu cần đạt của phương pháp lão hoá cấp tốc

Cần chú ý rằng “lão hoá cấp tốc” chỉ có thể đánh giá tuổi thọ của thuốc

một cách gần đúng với tuổi thọ thật của thuốc và phương pháp này không thể

đánh giá tuổi thọ trên toàn bộ chỉ tiêu chất lượng của thuốc, ví dụ: độ rã của

viên nén

Lão hoá cấp tốc” ở nhiệt độ cao được áp dụng cho: các thuốc tổng

hợp, các kháng sinh, các vitamin, các hoạt chất tinh khiết chiết từ dược liệu;

không áp dụng được đối với: các dược liệu, men, nội tiết tố và các chế phẩm

có nguồn gốc vi sinh vật khác

b/ Những quy định cụ thể về tác nhân kích thích:

tăng nhiệt độ, tốc độ phản ứng tăng nhanh Đối với các phản ứng đồng thể, tốc

độ riêng k thường tăng hai, ba lần khi nhiệt độ tăng 10°c Đối với mỗi loại

thuốc cần xác định nhiệt độ bảo quản giới hạn, tránh thay đổi trạng thái của dạng thuốc và gây ra phản ứng không xảy ra ở điều kiện thường.

Nhiệt độ lão hoá cấp tốc được đề nghị như sau:

- Không cao hơn 60°c đối với nguyên liệu, viên nén, nang cứng, dung dịch thuốc

- Không quá 30°c đối với thuốc đạn, aerosol

- Không quá 40°c đối với các thuốc khác (nang m ềm ) [3]

* Độ ẩm: độ ẩm cao sẽ thúc đẩy sự phân huỷ do phản ứng thuỷ phân và

làm thay đổi tính chất hoá lý của thuốc Phưcíng pháp dùng độ ẩm làm tác nhân lão hoá chỉ ra độ ẩm tối đa mà thuốc chịu được và xác định được hiệu quả bảo quản của các đồ bao gói

* Ánh sáng: Các nguồn sáng nhân tạo phải có sự phân phối năng lượng

bức xạ tương tự ánh sáng mặt trời do các phản ứng quang hoá chỉ xảy ra bởi các bức xạ có bước sóng nhất định

Trong phạm vi đề tài này, tác nhân kích thích là nhiệt độ cao, còn độ

ẩm thì duy trì thích hợp (75% ± 5) và không xem xét đến tác dụng của ánh sáng vào mẫu thử

Cơ quan quản lý thuốc và thực phẩm Mỹ (FDA) hướng dẫn về thực hành sản xuất thuốc tốt (GMP) và hạn dùng của thuốc có ghi rõ:

Một nguyên tắc đối với dạng thuốc phân liều rắn, cho phép thuốc có hạn dùng trong 2 năm ở nhiệt độ phòng nếu như sau 90 ngày bảo quản (lão hoá) ở nhiệt độ 40°c và độ ẩm tương đối là 75%, hàm lượng dược chất của thuốc còn lại 90% so với hàm lượng ban đầu [38]

1.6 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG SẮT (II) SULFAT VÀ ACID FOLIC:

1.6.1 Định lượng sắt (II) sulfat theo chuyên luận “Vièn nén sắt (II) sulfat” của dược điển Anh BP 98:

* Nguyên tắc của phương pháp chuẩn độ ion [29]:

Đây là phương pháp chuẩn độ ion bằng dung dịch amoni ceri(IV)sulfat Khi ion trong muối sắt (II) sulfat đã phản ứng hết thì amoniceri(IV) sulfat phản ứng vói ion Fe-^ trong chỉ thị ferroin làm chỉ thị chuyển từ màu đỏ sang màu xanh nhạt

Chỉ thị feiToin được điều chế bằng cách: hoà sắt (II) sulfat và 1-10 phenanthrolin hydroclorid trong nước 1-10 phenanthrolin hydroclorid (Ph) tạo phức bền với ion và cho màu đỏ

* Cân và nghiền thành bột mịn 20 viên nén Hoà tan kỹ một khối lượng bột viên tương ứng với 0,5g sắt (II) sulfat khan trong hỗn hợp gồm 30ml nước

và 20 ml acid sulfuric IM và chuẩn độ với dung dịch amoni ceri (IV) sulphat 0,1M Chỉ thị màu là dung dịch feiToin sullầt

Mỗi ml dung dịch amoni ceri (IV) siilíầt tương đương với 5,585mg ionFe(II)

1.6.2 Định lượng acid folic theo chuyên luận ‘Viên nén add folic- sắt (II) fumarat’ của dược điển anh BP 98 bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

1.6.2.1 Khái niệm về sắc ký lỏng hiệu năng cao [19], [21]:

Sắc ký là một nhóm các phương pháp hoá lý dùng để tách các thành phần của một hỗn hợp Sự tách sắc ký dựa trên sự phân chia của các chất khác nhau vào hai pha luôn tiếp xúc với nhau và không hoà lẫn vào nhau: một pha tĩnh và một pha động

Trong phương pháp HPLC, pha tĩnh có thể là chất rắn có khả năng hấp phụ hoặc trao đổi ion hoặc là chất lỏng được gắn trên một chất mang rắn, được nhồi chặt trong cột chịu áp lực Pha động là dung môi phân cực hoặc không phân cực được bơm qua cột với áp lực rất cao Nếu như pha tĩnh ít phân cực hơn pha động, trái với truyền thống của sắc ký trước đây là pha tĩnh phân cực hơn pha động thì có sắc kí pha đảo; ngược lại nếu dung môi ít phân cực hơn pha tĩnh ta có sắc ký pha thuận

Các chất sau khi được tách và đưa ra khỏi cột được phát hiện bằng detector đặc hiệu đối với chất đó và được ghi lại bằng các sắc ký đồ

Một thể tích rất nhỏ của mẫu được bơm vào đầu cột, pha động lỏng sẽ đẩy mẫu dọc theo cột có chứa chất nhồi rắn gắn pha tĩnh Các cấu tử sẽ luôn được hấp phụ, giải hấp phụ khỏi pha tĩnh do sự phân bố của chúng giữa pha tĩnh và pha động, quá trình này được lặp đi lặp lại rất nhiều lần Sự rửa giải của pha động lỏng làm cho các cấu tử có hệ số phân bố khác nhau sẽ chuyển động với tốc độ khác nhau, vì vậy chúng được tách khỏi nhau Cấu tử có hệ số phân bố với pha tĩnh nhỏ sẽ được tách ra khỏi cột nhanh hơn

Quá trình rửa giải sắc ký được diễn giải như sau:

Hình 2: Quá trình tách hai chất khác nhau bằng sắc ký lỏng

thời gian cần thiết để pha động chảy qua hệ thống tách, thời gian lưu tính từ khi chất được đưa vào cột cho tới khi ra khỏi cột đạt nồng độ cực đại

t’jỊ : thời gian lưu thực : t ’jỊ = tjj

-ồị : độ lệch chuẩn , là độ rộng nửa pic tại điểm uốn

COq 5 : độ rộng pic ở nửa chiều cao

0 ị, : độ rộng đáy pic

1.6.2.2 Các đại lượng đặc trưng cho quá trình tách bằng HPLC:

* Hệ s ố dung lượng k ’ (capacity factor)

Hệ số dung lượng k ’ phụ thuộc vào bản chất của cấu tử, đặc tính của pha tĩnh và pha động, được tính theo công thức :

k = t R /tm = (Ír ■ tmV tm - (Ír/ o “ 1

Giá trị k ’ tối ưu là từ 2 đến 5 Khi k ’ nhỏ thì chất được tách kém, k ’ quá lớn làm doãng pic, độ nhạy phát hiện thấp, thời gian phân tích kéo dài.

* Độ phân giải R ( Resolution)

Là đại lượng đặc trưng cho quá trình tách giữa 2 pic khác nhau

Với độ phân giải R = 0,5 các đỉnh của pic vẫn có thể thu được một cách riêng biệt Khi định lượng độ phân giải phải đạt đến 1,5 Độ phân giải càng lớn thì thời gian phân tích càng dài nên không cần thiết R phải quá lớn

Có ba khả năng làm tăng độ phân giải của 2 pic: •

- Thay đổi giá trị k ’

- Tăng số đĩa lý thuyết N

- Tăng độ chọn lọc a

* Yếu tố không đối xứng T :

Trong thực tế, sắc kỷ đồ dạng pic hình Gauss thường không đạt được,,

mà thường thu được các pic có dạng không đối xứng Pic không đối xứng được đặc trưng bằng hệ số không đối xứng T ( Tailing factor) với a và b được xác định ở 10% chiều cao h của pic T được xác định theo công thức :

T = b/a

Để tính diện tích của pic thì T phải < 2,5 Nừu T lớn hơn 2,5 thì điểm cuối của pic tưcỉng đối khó xác định.

Hình 3: Sự không đối xứng của pic thể hiện trên trục đồ thị sác ký.

Sự không đối xứng của pic có thể do nhiều nguyên nhân sau :

- Thể tích chết giữa bộ phận bơm và Detector, thường thấy ở các pic ra trước Sự bất đối xứng cũng tăng lên khi tốc độ dòng tăng lên

- Cột quá tải : do lượng chất bơm vào vượt quá tải trọng của cột

* Nguyên tắc : là phương pháp sắc ký dựa trên cột pha đảo

Pha tĩnh : Pha tĩnh ít phân cực có các nhóm octadecyl hoặc có nhóm nitril được gắn hoá học với các chất mang trơ là các tiểu phân silica có đường

k ín h 5 |Lim n h ồ i t r o n g c ộ t 2 5 c m X 4 , 6 m m

Pha động : là dung môi phân cực bao gồm hỗn hợp ;

135 thể tích methanol

800 thể tích hỗn họfp gồm 0,938% kl/tt của natri perclorat và 0,075% kl/tt của kali dihydrophosphat (điều chỉnh pH tới7,2 với dung dịch kali hydroxyd 0,1M)

Hoà loãng hỗn hợp trên tới thể tích 1000 bằng nước cất

Detector : detector tử ngoại ở bước sóng X = 277nm

Tốc độ dòng: Iml/phút

Tmớc khi tiêm dung dịch mẫu thử vào van tiêm, dung dịch cần được xử lý

theo các bước sau :

Để tách acid folic ra khỏi hỗn hợp bột viên, dựa vào tính chất dễ hoà tan trong dung dịch kiềm của acid folic, hoà tan hỗn hợp bột viên trong dung dịch 0,57% kl/tt dikali hydrophosphat và lắc siêu âm Sau đó gạn lấy dung dịch Lọc qua màng 0,45|im Trong cùng điều kiện chạy sắc ký, tiến hành songsong với một mẫu chuẩn Căn cứ vào diện tích pic, so sánh với chất chuẩn tínhđược hàm lượng của acid folic trong viên

Như vậy qua các tài liệu tổng quan chúng tôi thấy :

- Acid folic, sắt (II) sulfat là những thành phần quan trọng, nếu thiếu sẽ gây nhiều rối loạn trong cơ thể và cần phải được bổ xung kịp thời

- Acid folic là hoạt chất có thể bị oxi hoá, khử và không ổn định

- Tại Việt Nam đã có một số xí nghiệp quan tâm sản xuất viên nén sắt- folic nhưng do điều kiện thiết bị khó khăn, acid folic chỉ được định tính,

độ ổn định của viên chưa được đi sâu nghiên cứu

Xuất phát từ thực tế nêu trên chúng tôi tiến hành đề tài này nhằm góp phần nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của viên nén sắt-folic, thiết kế công thức và xây dựng quy trình sản xuất đảm bảo thuốc có độ ổn định cao trong điều kiện sản xuất thực tế ở Việt Nam hiện nay

PHẦN 2: ĐỐI TƯỢNG - NỘI DUNG VÀ

2.2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u :

2.2.1 Phương pháp bào chê viên nén [17], [20]:

- Chúng tôi sử dụng hai phưoỉng pháp bào chế viên là :

Xát hạt ướt Dập thẳngVới các loại tá dược khác nhau và quy trình trộn bột khác nhau, tỷ lệ khác nhau nhằm xác định các yếu tố ảnh hưcmg đến độ ổn định của viên nén sắt - folic

Trong quá trình bào chế viên nén có tiến hành theo dõi, đánh giá độ trơn chảy và các thông số của b ộ t

- Phương pháp bao phim viên nén [11]

2.2.2 Phương pháp định lượng sắt (II) sulfat [26], [27], [28]:

Chúng tôi sử dụng phương pháp định lượng sắt (II) sulfat theo chuyên luận “Viên nén sắt (II) sulfat” của dược điển Anh BP98 để xác định hàm lượng sắt (II) sulíầt trong :

- Nguyên liệu

- Các mẫu viênHàm lượng sắt (II) sulfat trong các mẫu viên cho biết độ ổn định của thành phần này trong viên nén

2.2.3 Phương pháp định lượng acid folic [28]:

Chúng tôi sử dụng phương pháp định lượng acid folic bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao theo chuyên luận “Viên nén sắt (II) fumarat và acid folic” của dược điển Anh BP 98 để xác định hàm lượng acid folic trong :

- Nguyên liệu

- Các mẫu viên

Hàm lượng acid folic trong các mẫu viên cho biết độ ổn định của thành phần này t r o n g viên nén

2.2.4 Phương pháp đánh giá các tiêu chuẩn của dạng bào chế viên nén:

Đánh giá độ bền cơ học của viên biểu thị bằng lực gây vỡ viên

Đánh giá độ rã của viên theo chuyên luận của DĐVN II, tập 3 [5]

2.2.5 Phương pháp đánh giá độ ổn định:

Chúng tôi áp dụng phương pháp thử nghiệm nhanh độ ổn định ở 40°c,

độ ẩm tương đối 75% nhằm đánh giá các yếu tố ảnh hưởng đến độ ổn định của viên nén sắt (II) sulfat - acid folic

Các mẫu viên được đặt trong lọ nhựa màu nâu 2 lần nắp, nút kín và đặt trong các bình thủy tinh nắp mài kín, phía dưới bình có đặt dung dịch NaCl bão hoà để tạo vi khí hậu, hàm ẩm trung bình là 75% ± 5 Các bình này được bảo quản thời gian 3 tháng trong tủ ấm duy trì nhiệt độ 40°c ± 2 Định lượng thành phần sắt (II) sulfat và acid folic; Đánh giá các chỉ tiêu theo tiêu chuẩn chất lượng của viên nén trước và sau khi lão hóa

2.2.6 Phương pháp đánh giá kết quả:

Mỗi phép thử được lặp lại n lần trong cùng một điều kiện để cho các kết quả tương xứng Xj, X2, , x„ Các số liệu trên được xử lý thống kê để xác định các giá trị trung bình X, độ lệch chuẩn s, sai số tương đối 8 |13J

PHẦN 3: KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u3.1 KHẢO SÁT PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG SẮT (II) SULFAT VÀ

3.1.1 Phương pháp định lượng acid folic:

Áp dụng dược điển Anh 1998, chuyên luận “Viên nén sắt (II) fumarat - acid folic”, có cải tiến thao tác, đã tiến hành khảo sát cụ thể trên mẫu nghiên cứu “ viên nén sắt (II) sulfat - acid folic “ - mẫu MIO

3.1.1.1 Xác định độ lặp lại của phương pháp :

- Dung dịch thử: Cân 20 viên, nghiền thành bột mịn Cân chính xác một

lượng bột viên tương ứng khoảng 0,3 mg acid folic, chuyển vào một cối thuỷ tinh Thêm lOml dung dịch dikali hydrophosphat 0,57%, nghiền kỹ và gạn phần chất lổng vào bình định mức 50ml Làm như vậy 3 lần nữa, lần cuối cùng chuyển toàn bộ dịch nghiền trong cối vào bình định mức Lắc siêu âm trong 30 phút Để nguội, thêm dung dịch dikali hydrophosphat 0,57% tới ngấn, trộn đều Lọc qua giấy lọc, bỏ lOml dịch lọc đầu Lọc dịch lọc sau qua

g iấ y lọ c có đường kính lỗ xốp 0,45|Lim.

- Dung dịch chuẩn: H oà tan acid fo lic chuẩn trong dung dịch dikali hydrophosphat 0,57% để được dung dịch chứa ốỊig acid folic trong Im l.

- Tiến hành: Tiêm 20ịú mỗi dung dịch thử và dung dịch chuẩn vào hệ thống

sắc ký với các điều kiện chạy sắc ký đã được đưa ra trong m ục 1.6.2.3.

Lượng acid folic (X) trong một viên được tính theo công thức:

Sị 50 M

X (mg/v) = — ^— X

-Sc 1000 p

Trong đó ;

S j: Diện tích peak của dung dịch thử Sj.: Diện tích peak của dung dịch chuẩn

Q : Nồng độ dung dịch acid folic chuẩn (iLig/ml)

p : Khối lượng bột viên đã cân (g)

M ; Khối lượng trung bình viên (g)

Thực hiên 6 lần cân , kết quả được ghi trong bảng 3

Bảng 3: Khảo sát độ lặp lại của phương pháp định lượng acid folic

STT Lượng cân p (g) Diện tích peak X i (mg/v) Các số liệu thống kê

3.1.1.2 Xác định độ đúng và độ tuyến tính của phương pháp :

( Dùng phương pháp cho thêm theo đường chuẩn)

Pha một dãy dung dịch acid folic với sự có mặt của sắt (É) sulfat trong dung dịch dikali hydrophosphat 0,57% có nồng độ chênh lệch nhau Ax bằng cách:

Lấy cố định từng lượng bột viên mẫu MIO tương ứng với 0,1 mg acid folic cho vào các bình định mức 50ml được đánh số từ 0 đến 5 Lần lượt thêm vào các bình từ bình 1 đến bình 5 một lượng acid folic chuẩn thích hợp sao cho sau khi cho thêm dd dikalihydrophosphat 0,57% tới ngấn và trộn đều ta được dãy dung dịch có nồng độ acid folic cách đều nhau Ax = 2jLig/ml Như vậy ta thu được dãy dung dịch :

Đem các bình lắc siêu âm trong 30 p h ú t

Lọc, bỏ dịch lọc đầu Các dịch lọc sau đem lọc qua giấy lọc có đường kính lỗ xốp 0,45jim Tiêm 20)li1 mỗi dịch lọc thu được vào hệ thống sắc ký Ghi sắc ký đồ và đo diện tích peak, rồi so với diện tích peak của một dung dịch chuẩn acid folic có nồng độ khoảng 6^g/ml để tính kết quả

St

b =

Sc

b : Lượng acid folic tìm thấy (fj.g/ml)

S t : Diện tích peak của mẫu thử

Sc : Diện tích peak của mẫu chuẩn

Cc : Nồng độ dung dịch chuẩn (|Lig/ml)