Xác định sự khuếch đại gen MYCN ở bệnh nhân u nguyên bào thần kinh bằng kỹ thuật lai huỳnh quang tại chỗ

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  NGUYỄN XUÂN HUY XÁCĐỊNH SỰ KHUẾCH ĐẠI GEN MYCN Ở BỆNH NHÂN U NGUYÊN BÀO THẦN KINH BẰNG KỸ THUẬT LAI HUỲNH QUANG TẠI CHỖ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân Hà Nội– Năm 2016 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  NGUYỄN XUÂN HUY XÁCĐỊNH SỰ KHUẾCH ĐẠI GEN MYCN Ở BỆNH NHÂN U NGUYÊN BÀO THẦN KINH BẰNG KỸ THUẬT LAI HUỲNH QUANG TẠI CHỖ Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60 42 01 21 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân Hà Nội– Năm 2016 Lời cảm ơn Đề tài luận văn đƣợc thực Khoa Di Truyền Sinh học phân tử bệnh viện NHI TW Đầu tiên xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS Nguyễn Thị Hồng Vân, chủ nhiệm môn Di truyền học, khoa Sinh học, trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội Cô hết lòng quan tâm, hƣớng dẫn, bảo tận tình suốt trình nghiên cứu vừa qua Mỗi lúc gặp khó khăn, cô động viên, giúp đỡ tìm cách giải hợp lý Sự giúp đỡ hƣớng dẫn nhiệt tình cô giúp tôihoàn thành đƣợcluận văn tốt nghiệp Tôi xin đƣợc cảm ơn đồng nghiệp khoa Di Truyền Sinh học phân tử – Bệnh viện Nhi TW nhiệt tình giúp đỡtrong thời gian thực đề tài nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa Sinh học, trƣờng Đại học khoa học tự nhiên giảng dạy tạo điều kiện tốt để thực tốt việc nghiên cứu Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới bố mẹ, gia đình bạn bè giúp đỡ, ủng hộ suốt thời gian qua Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày …… tháng …… năm 2016 Học viên Nguyễn Xuân Huy MỤC LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU .4 CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .6 1.1 Lịch sử nghiên cứu 1.2 Bệnh u nguyên bào thần kinh 1.2.1 Đặc điểm lâm sàng 1.2.2 Phân loại u NBTK 1.2.3 Phân loại giai đoạn u NBTK 1.2.4 Một số yếu tố tiên lƣợng u NBTK 10 1.3 Các biến đổi di truyền liên quan đến bệnh u nguyên bào thần kinh 14 1.3.1 Khuếch đại gen MYCN .14 1.3.2 Các bất thƣờng nhiễm sắc thể .17 1.4 Mô hình di truyền u NBTK .19 1.5 Tính cấp thiết đề tài 20 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 21 2.2 Hóa chất thiết bị 22 2.2.1 Hóa chất 22 2.2.2 Trang thiết bị 22 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 2.3.1 Nuôi cấy tế bào mẫu bệnh phẩm tủy xƣơng 22 2.3.2 Phản ứng lai huỳnh quang chỗ 23 2.4 Đạo đức nghiên cứu 24 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .26 3.1 Xác định khuếch đại gen MYCN bệnh nhân u NBTK kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ (FISH) 26 3.2 Đánh giá khuếch đại gen MYCN với số yếu tố tiên lƣợng khác 31 3.2.1 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo tuổi 31 3.2.2 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo giới tính 33 3.2.3 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo mô bệnh học 34 KẾT LUẬN .39 KIẾN NGHỊ 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 Chữ viết tắt Nghĩa Tiếng Anh Nghĩa Tiếng Việt COG Children’s Oncology Group Tổ chức Ung thƣ Trẻ em DAPI 4',6-diamidino-2-phenylindole DMs Double-Minute chromatin bodies Đoạn nhiễm sắc thể kép ngắn FBS Fetal Bovine Serum Huyết phôi bò FISH Fluorescent in-situ hybridization Kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ HSR Homogeneously Staining Vùng bắt màu đồng Regions INPC International Neuroblastoma Hiệp hội Giải phẫu bệnh U Pathology Committee INRGSS International nguyên bào thần kinh Quốc tế Neuroblastoma Hệ thống phân giai đoạn u Risk Group Staging System nguyên bào thần kinh theo nhóm nguy INSS International Neuroblastoma Hệ thống phân giai đoạn u Staging System nguyên bào thần kinh MBH Mô bệnh học MKI Mitosis karyorrhexis Index NBTK Chỉ số nhân chia/nhân tan Nguyên bào thần kinh RPMI Roswell Park Memorial Institute SSC Saline Sodium Citrate Muối Natri Citrate DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các giai đoạn theo INSS Bảng 1.2 Các giai đoạn theo INRGSS 10 Bảng 1.3 Chỉ số MKI 13 Bảng 1.4 Bảng phân loại mô bệnh học 14 Bảng 2.1 Thành phần môi trƣờng nuôi cấy tế bào 22 Bảng 3.1 Kết xác định gen MYCN bệnh nhân UNBTK 28 Bảng 3.2 Danh sách 11 bệnh nhân u NBTK có khuếch đại gen MYCN 29 Bảng 3.3 Phân bố khuếch đại gen MYCN theo nhóm tuổi 31 Bảng 3.4 Phân bố không khuếch đại gen MYCN theo nhóm tuổi 31 Bảng 3.5 Phân bố khuếch đại gen MYCN theo trạng thái biệt hóa tế bào u NBTK 34 Bảng 3.6 Phân bố không khuếch đại gen MYCN theo trạng thái biệt hóa tế bào u NBTK 35 Bảng 3.7 Phân bố khuếch đại gen MYCN theo phân loại mô bệnh học 36 Bảng 3.8 Phân bố khôngkhuếch đại gen MYCN theo phân loại mô bệnh học 37 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Các vị trí xuất khối u[26] Hình 1.2 Phân loại bệnh nhân theo nhóm nguy [34] 11 Hình 1.3 Cơ chế khuếch đại gen [27] 16 Hình 1.4 Mô hình di truyền phát triển u nguyên bào thần kinh [10] 19 Hình 2.1 Vị trí đánh dấu huỳnh quang nhiễm sắc thể số 24 Hình 3.1 Khuếch đại gen MYCN tế bào u 26 Hình 3.2 Khuếch đại gen MYCN tế bào tủy xƣơng 27 Hình 3.3 Khuếch đại gen MYCN theo dạng HSR DMs 27 Hình 3.4 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN bệnh nhân U NBTK 29 Hình 3.5 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo nhóm tuổi 31 Hình 3.6 Tỷ lệ khuếch không đại gen MYCN theo nhóm tuổi 32 Hình 3.7 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo giới 33 Hình 3.8 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo giới 33 Hình 3.9 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo trạng thái biệt hóa tế bào u 34 Hình 3.10 Tỷ lệ không khuếch đại gen MYCN theo trạng thái biệt hóa tế bào u 35 Hình 3.11 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo tiên lƣợng MBH 36 Hình 3.12 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo tiên lƣợng MBH 37 MỞ ĐẦU Ung thƣ rối loạn phát triển tế bào, tế bào tăng sinh không kìm hãm, kết hình thành khối u thể Khối u tập hợp tế bào có chung đặc điểm phát triển vô tổ chức, xâm lấn chèn ép vào quan tổ chức xung quanh Ung thƣ xảy lứa tuổi,trong ung thƣ nhi chiếm khoảng 2% tổng số loại ung thƣ U nguyên bào thần kinh dạng khối u bào thai c hệ thần kinh giao cảm , tế bào khởi đầu tế bào tiền thân phát triển chƣa biệt hóa xuất phát từ mô mào thần kinh, chủ yếu xảy trẻ sơ sinh trẻ nhỏ (dƣới tuổi), tìm thấy trẻ 10 tuổi Bê ̣nh chiếm khoảng 7% số ca ung thƣ ở trẻ em toàn th ế giới [43] Tỷ lệ mắc bệnh viện Nhi Trung Ƣơng khoảng 50 ca/năm Con số ổn định nhiều năm gần Độ tuổi chẩn đoán bệnhtrung bình 18 tháng Các biến đổi di truyền tế bào ung thƣ phong phú, từ bất thƣờng cấu trúc, số lƣợng nhiễm sắc thể đến đột biến gen; dẫn đến làm thay đổi hoạt động tế bào Tuy nhiên, có vài chuyển đoạn hay đột biến gen đặc trƣng loại ung thƣ định, ví dụ nhƣ 90% bệnh nhân mắ c u lympho thể Burkitt có chuyể n đoa ̣n đă ̣c trƣ ng t(8;14) (đầu nhiễm sắc thể đƣợc chuyển đến phần cuối nhiễm sắc thể 14) hay 20-25% bệnh nhân u nguyên bào thần kinh có đột biến khuếch đại gen MYCN[40] Hiện bất thƣờng di truyền đƣợc sử dụng rộng rãi giới việc tiên lƣợng phân nhóm nguy cho b ệnh nhân u nguyên bào thần kinh Tuy vậy, Việt Nam, việc phát biến đổi di truyền chƣa đƣợc thực hiện, gây nhiều khó khăn cho bác sĩ lâm sàng vi ệc tiên lƣợng bê ̣nh lƣ̣a chọn phác đồ ều trị cho bệnh nhân Vì vậy, từ nhiều năm nay, việc cần thiết có xét nghiệm di truyền cho bệnh u nguyên bào thần kinh đƣợc đặt Xuất phát từ yêu cầu lâm sàng thực tiễn nhƣ vậy, nghiên cứu đề tài “Xác định khuếch đại gen MYCN bệnh nhân u nguyên bào thần kinh kĩ thuật lai huỳnh quang chỗ” đƣợc thực với mục tiêu sau: - Phát khuếch đại gen MYCN bệnh nhân u nguyên bào thần kinh kĩ thuật lai huỳnh quang chỗ - Xác định đượcsự liên quan với yếu tố tiên lượng khác ý nghĩa khuếch đại gen MYCN Bệnh nhân Bệnh nhân Tuổi 18 Giới Nam Bệnh nhân 8,6 Nữ Bệnh nhân 26,8 Nữ Bệnh nhân 22,9 Nam Bệnh nhân 8,7 Nam Bệnh nhân 34,6 Nữ Mô bệnh học (MBH) Giai biệt hóa thuận lợi đoạn u NBTK Không biệt hóa thuận lợi u NBTK biệt hóa u NBTK Không biệt hóa thuận lợi u NBTK Không biệt hóa thuận lợi u NBTK biệt hóa 34,4 Nữ Không biệt hóa thuận lợi không biệt hóa Bệnh nhân 11 12,5 Nữ Thuận lợi u NBTK u NBTK Bệnh nhân 10 Thuận lợi u NBTK biệt hóa Không thuận lợi Thuận lợi Điều trị trị Bỏ điều trị L2 sau đợt hóa chất M L2 L2 L2 L2 L2 M Điều trị giảm nhẹ Không có thông tin Tử vong Không có thông tin Không có thông tin Không có thông tin Không có thông tin Hiện khuếch đại gen MYCN đƣợc chấp nhận phạm vi toàn giới dấu ấn sinh học bệnh nhân u NBTK nguy cao[22].Điều có nghĩa bệnh nhân mang khuếch đại gen MYCN dù lứa tuổi hay giai đoạn có tiên lƣợng xấu kết điều trị thấp.Khi đối chiếu với kết nghiên cứu tôi, tổng số 59 bệnh nhân có 11 bệnh nhân đƣợc xếp vào nhóm nguy cao, cần điều trị hóa chất mạnh tối đa kết hợp thêm xạ trị,ghép tế bào gốc… 30 3.2 Đánh giá khuếch đại gen MYCN với số yếu tố tiên lƣợng khác 3.2.1 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo tuổi Trong 11 bệnh nhân có khuếch đại gen MYCN, có bệnh nhân thuộc nhóm dƣới 12 tháng, bệnh nhân nhóm từ 12-18 tháng, có bệnh nhân nhóm lớn 18 tháng Bảng 3.3 Phân bố khuếch đại gen MYCN theo nhóm tuổi Nhóm tuổi Số lƣợng bệnh nhân Tỷ lệ 18 tháng 64% Nhận xét: Tuổi chẩn đoán thấp phát khuếch đại gen MYCN: 8.7 tháng.Tuổi chẩn đoán cao phát khuếch đại gen MYCN: 34.4 tháng Hình 3.5 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo nhóm tuổi Bảng 3.4 Phân bố không khuếch đại gen MYCN theo nhóm tuổi Nhóm tuổi Số lƣợng bệnh nhân Tỷ lệ 18 tháng 17 35% 31 Hình 3.6 Tỷ lệ khuếch không đại gen MYCN theo nhóm tuổi Nhận xét: Nhóm tuổi chẩn đoán mắc UNBTK 18 tháng có tỷ lệ phát khuếch đại gen MYCN cao : 64%.Nhóm tuổi chẩn đoán mắc u NBTK dƣới 12 tháng từ 12- 18 tháng có tỷ lệ khuếch đại gen MYCN thấp : 18% Theo công bố giới bệnh nhân nhỏ , dƣới 12 tháng có tiên lƣợng bệnh tốt nhất.Điều có nghĩa khối u có đặc điểm sinh học thuận lợi gen tiền ung thƣ MYCN khuếch đại Ngƣợc lại bệnh nhân lớn (hơn 18 tháng) có tiên lƣợng bệnh đồng nghĩa gen MYCN có xu hƣớng khuếch đại nhiều [16] Cụ thể nhóm bệnh nhân có tuổi chẩn đoán 18 tháng có tỷ lệ khuếch đại /11 bệnh nhân chiếm 64% tổng số bệnh nhân khuếch đại,còn với nhóm bệnh nhân 12 tháng có bệnh nhân khuếch đại.Kết tƣơng đối khác biệt với nghiên cứu Schmidt cộng năm 2005 [33],Vũ Đình Quang cộng (2015)[3] Nhóm bệnh nhân từ 12-18 tháng thƣờng nằm giai đoạn 4S Đây nhóm bệnh nhân đặc biêt gồm bệnh nhân giai đoạn di đến số quan định nhƣ da,xƣơng…Đặc biệt bệnh nhân nhóm giai đoạn muộn nhƣng có khả tự thoái triển khối u.Do việc tiên lƣợng kết điều trị nhóm bệnh nhân phụ thuộc nhiều vào đặc điểm sinh học khối u mà khuếch đại gen MYCN dấu ấn tiên lƣợng xấu hàng đầu.Hiện chƣa có kết nghiên cứu tỷ lệ khuếch đại gen MYCN nhóm bệnh nhân 32 Nghiên cứu cho thấy tỷ lệ khuếch đại gen MYCN từ 12-18 tháng tƣơng đƣơng với bệnh nhân dƣới 12 tháng.Mặc dù vậy, để khẳng định phát cần có nghiên cứu sâu với kích thƣớc mẫu nhiều 3.2.2 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo giới tính Hình 3.7 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo giới Hình 3.8 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo giới Phân tích tỷ lệ khuếch đại gen MYCN cho thấytrên tổng số 11 bệnh nhân có khuếch đại gen MYCN có trẻ trai (45%) trẻ gái (55%) U NBTK khối u hệ thần kinh nên khác biệt giới nhƣ ung thứ khác(ung thƣ vú,ung thƣ tiền liệt tuyến…).Theo kết nghiên cứu 33 tỷ lệ khuếch đại gen MYCN giới nam 5/11 bệnh nhân, giới nữ 6/11 bệnh nhân.Sự khác biệt về giới ý nghĩa thống kê 3.2.3 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo mô bệnh học 3.2.3.1 Tỷ lệ khuếch đại genMYCN theo trạng thái biệt hóa Kết so sánh bệnh nhân có khuếch đại gen MYCN với kết giải phẫu bệnh trạng thái biệt hóa tế bào u bệnh nhân đƣợc thể Error! Reference source not found Hình 3.7 Bảng 3.5 Phân bố khuếch đại gen MYCN theo trạng thái biệt hóa tế bào u NBTK Trạng thái biệt hóa Số lƣợng Tỷ lệ Chƣa biệt hóa 9% Ít biệt hóa 82% Đang biệt hóa 9% Hình 3.9 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo trạng thái biệt hóa tế bào u 34 Bảng 3.6 Phân bố không khuếch đại gen MYCN theo trạng thái biệt hóa tế bào u NBTK Trạng thái biệt hóa Số lƣợng Tỷ lệ Chƣa biệt hóa 8% Ít biệt hóa 40 83% Đang biệt hóa 8% Hình 3.10 Tỷ lệ không khuếch đại gen MYCN theo trạng thái biệt hóa tế bào u Nhận xét: Số lƣợng bệnh nhân phát khuếch đại gen MYCN cao tế bào u trạng thái biệt hóa: bệnh nhân (82%),tế bào trạng thái biệt hóa chƣa biệt hóa tỷ lệ khuếch đại thấp nhất: bệnh nhân (9%) Trong trình phát triển bình thƣờng tế bào thần kinh nguyên bào thần kinh trải qua trình biệt hóa để hình thành nên tế bào thần kinh trƣ ởng thành.Khi nguyên bào thần kinh bị đột biến tăng sinh không kiểm soát hình thành nên u NBTK,các tế bào lại tiếp tục biệt hóa phát triển, vào số lƣợng tế bào biệt hóa khối u ngƣời ta chia khối u NBTK thành nhóm nhỏ:chƣa biệt hóa, biệt hóa biệt hóa Trong nhóm nhóm u NBTK biệt hóa chiếm tỷ lệ nhiều khoảng 65%-75% Theo mô hình di truyền (Hình 1.4) bệnh u NBTK tế bào biệt hóa thƣờng có thay đổi số lƣợng NST nên khả gặp khuếch đại gen MYCN 35 nhóm biệt hóa thấp.Còn tế bào u NBTK không biệt hóa có biến đổi cấu trúc NST nhƣ khuếch đại gen MYCN.Các tế bào tập trung nhóm u NBTK chƣa biệt hóa biệt hóa.Giữa nhóm này, nhóm biệt hóa chiếm đa số 90%.Do vậy, dù khả khuếch đại gen MYCN tế bào tƣơng đƣơng nhƣng tỷ lệ phát bất thƣờng bệnh nhân có khối u NBTK biệt hóa cao đáng kể Kết phát khuếch đại MYCN nhóm khác u NBTK nghiên cứu phù hợp với kết George cộng năm 2001 [18] 3.2.3.2 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo phân loại mô bệnh học Kết so sánh bệnh nhân có khuếch đại gen MYCN với phân loại giải phẫu bệnh bệnh nhân Bảng 3.7 Phân bố khuếch đại gen MYCN theo phân loại mô bệnh học Tiên lƣợng MBH Số lƣợng Tỷ lệ Thuận lợi 36% Không thuận lợi 64% Hình 3.11 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo tiên lượng MBH 36 Bảng 3.8 Phân bố khôngkhuếch đại gen MYCN theo phân loại mô bệnh học Tiên lƣợng MBH Số lƣợng Tỷ lệ Thuận lợi 28 58% Không thuân lợi 20 42% Hình 3.12 Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN theo tiên lượng MBH Nhận xét: Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN bệnh nhân có tiên lƣợng MBH không thuận lợi (64%) cao so với bệnh nhân có tiên lƣợng MBH thuận lợi (36%) Khuếch đại gen MYCN dấu ấn di truyền bệnh nhân u NBTK nguy cao với đặc điểm sinh học không thuận lợi nhƣ: tuổi chẩn đoán 18 tháng,giai đoạn muộn… MBH không thuận lợi dấu ấn mặt giải phẫu khối u ác tính cao.Do tỷ lệ phát khuếch đại gen MYCN bệnh nhân MBH không thuận lợi rõ ràng cao so với bệnh nhân MBH không thuận lợi Theo kết thu thập đƣợc, tỷ lệ khuếch đại gen bệnh nhân nhóm MBH không thuận lợi 64% cao đáng kể so với tỷ lệ khuếch đại gen MYCN nhóm lại.Sự phân bố phù hợp với nghiên cứu năm 2001 George cộng [18].Điều lần chứng minh đƣợc ý nghĩa tiên lƣợng xấu khuếch đại gen MYCN 37 Ngoài điểm là, 1/3 số bệnh nhân MBH thuận lợi có khuếch đại gen MYCN Điều có nghĩa là, kết phân loại bệnh nhân theo kết MBH không đủ độ xác, dẫn đến kết điều trị thành công không cao 38 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu trên, có số kết luận nhƣ sau: 1) 59 bệnh nhân mắc u NBTK,phát 11 trƣờng hợp có khuếch đại gen MYCN, chiếm tỷ lệ 19% 48 trƣờng hợp khuếch đại gen (81%) Hai dạng khuếch đại gen MYCNđã đƣợc xác định gồm dạng chứa đoạn chất nhiễm sắc vòng, ngắn, nằm NST dạng bắt màu đồng vùng NST 2) Nhóm tuổi chẩn đoán có số lƣợng bệnh nhân khuếch đại gen cao nhóm 18 tháng (7/11 bệnh nhân) Nhƣ vậy, nhóm tuổi lớn 18 tháng nhóm tuổi cần phải đánh giá trạng thái khuếch đại gen MYCN tất bệnh nhân 3) Tỷ lệ giới tính nhóm bệnh nhân có khuếch đại gen MYCN trẻ trai : trẻ gái Nhƣ vậy, khuếch đại gen không phụ thuộc vào giới tính 4) Tỷ lệ khuếch đại gen MYCN cao nằm nhóm u NBTK biệt hóa (9/11 bệnh nhân) Điều cho thấy, tế bào chƣa biệt hóa có ƣu xuất biến đổi di truyền cao so với tế bào biệt hóa 5) Nhóm tiên lƣợng xấu dựa theo phân loại nhóm mô bệnh học không thuận lợi Tỷ lệ khuếch đại genđƣợc phát nhóm tiên lƣợng xấu theo mô bệnh học có khuếch đại gen (7/11 bệnh nhân) cao so với nhóm mô bệnh học thuận lợi 39 KIẾN NGHỊ Trong khuôn khổ nghiên cứu này, đƣa kiến nghị nhƣ sau: 1) Nghiên cứu đánh giá tỷ lệ khuếch đại gen MYCN bệnh nhân nhi với kích thƣớc mẫu lớn 2) Tiếp tục nghiên cứu biến đổi di truyền khác có giá trị tiên lƣợng bệnh nhân u nguyên bào thần kinh nhằm hỗ trợ chẩn đoán điều trị 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Phùng Tuyết Lan (2007), Nghiên cứu số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng điều trị u nguyên bào thần kinh trẻ em, Luận án tiến sĩ, Đại học Y Hà Nội, Hà Nội Vũ Đình Quang, Nguyễn Xuân Huy, Nguyễn Thị Phƣơng Mai, Phùng Tuyết Lan, Trần Đức Hậu, Trần Ngọc Sơn, Hoàng Ngọc Thạch, Bùi Khắc Hiếu, Ngô Diễm Ngọc Nguyễn Thanh Liêm (2013), "Đánh giá khuếch đại gen NMYC bệnh nhân u nguyên bào thần kinh", Tạp chí Nhi khoa 6(1), 67-72 Vũ Đình Quang, Nguyễn Thị Hồng Vân, Phùng Tuyết Lan, Trần Ngọc Sơn, Lê Đình Công, Hoàng Ngọc Thạch, Trần Thị Chi Mai, Nguyễn Xuân Huy, Ngô Diễm Ngọc Nguyễn Thanh Liêm (2015), "Nghiên cứu mối quan hệ trạng thái gen MYCN với số yếu tố tiên lƣợng khác 41 bệnh nhân u nguyên bào thần kinh", Tạp chi Khoa học: Khoa học Tự nhiên Công nghệ 31(4S), 288-293 Tiếng Anh 10 11 Attiyeh E F., London W B., Mosse Y P., Wang Q., Winter C., Khazi D., McGrady P W., Seeger R C., Look A T., Shimada H., Brodeur G M., Cohn S L., Matthay K K and Maris J M (2005), "Chromosome 1p and 11q deletions and outcome in neuroblastoma", N Engl J Med 353(21), 2243-53 Bauchinger S., Lackner H., Schwinger W., Sovinz P., Benesch M., Sorantin E., Till H and Urban C (2014), "Primary renal neuroblastoma metastasizing into liver and lungs with tumor thrombus extension into the right atrium", Klin Padiatr 226(6-7), 369-71 Beierle E A., Trujillo A., Nagaram A., Kurenova E V., Finch R., Ma X., Vella J., Cance W G and Golubovskaya V M (2007), "N-MYC regulates focal adhesion kinase expression in human neuroblastoma", J Biol Chem 282(17), 12503-16 Bordbar M., Tasbihi M., Kamfiroozi R and Haghpanah S (2014), "Epidemiological and clinical characteristics of neuroblastoma in southern iran", Iran J Ped Hematol Oncol 4(3), 89-96 Bown N (2001), "Neuroblastoma tumour genetics: clinical and biological aspects", J Clin Pathol 54(12), 897-910 Breslow N and McCann B (1971), "Statistical estimation of prognosis for children with neuroblastoma", Cancer Res 31(12), 2098-103 Brodeur G M (2003), "Neuroblastoma: biological insights into a clinical enigma", Nat Rev Cancer 3(3), 203-16 Canete A., Gerrard M., Rubie H., Castel V., Di Cataldo A., Munzer C., Ladenstein R., Brichard B., Bermudez J D., Couturier J., de Bernardi B., Pearson A J and Michon J (2009), "Poor survival for infants with MYCNamplified metastatic neuroblastoma despite intensified treatment: the 41 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 International Society of Paediatric Oncology European Neuroblastoma Experience", J Clin Oncol 27(7), 1014-9 Caren H., Erichsen J., Olsson L., Enerback C., Sjoberg R M., Abrahamsson J., Kogner P and Martinsson T (2008), "High-resolution array copy number analyses for detection of deletion, gain, amplification and copy-neutral LOH in primary neuroblastoma tumors: four cases of homozygous deletions of the CDKN2A gene", BMC Genomics 9(353 Caren H., Kryh H., Nethander M., Sjoberg R M., Trager C., Nilsson S., Abrahamsson J., Kogner P and Martinsson T (2010), "High-risk neuroblastoma tumors with 11q-deletion display a poor prognostic, chromosome instability phenotype with later onset", Proc Natl Acad Sci U S A 107(9), 4323-8 Cohn S L., Pearson A D., London W B., Monclair T., Ambros P F., Brodeur G M., Faldum A., Hero B., Iehara T., Machin D., Mosseri V., Simon T., Garaventa A., Castel V and Matthay K K (2009), "The International Neuroblastoma Risk Group (INRG) classification system: an INRG Task Force report", J Clin Oncol 27(2), 289-97 Esiashvili N., Goodman M., Ward K., Marcus R B., Jr and Johnstone P A (2007), "Neuroblastoma in adults: Incidence and survival analysis based on SEER data", Pediatr Blood Cancer 49(1), 41-6 Evans A E and D'Angio G J (2005), "Age at diagnosis and prognosis in children with neuroblastoma", J Clin Oncol 23(27), 6443-4 Farber S., D'Angio G., Evans A and Mitus A (1960), "Clinical studies on actinomycin D with special reference to Wilms' tumor in children", Ann N Y Acad Sci 89(421-5 George R E., Variend S., Cullinane C., Cotterill S J., McGuckin A G., Ellershaw C., Lunec J and Pearson A D (2001), "Relationship between histopathological features, MYCN amplification, and prognosis: a UKCCSG study United Kingdom Children Cancer Study Group", Med Pediatr Oncol 36(1), 169-76 George R E., Attiyeh E F., Li S., Moreau L A., Neuberg D., Li C., Fox E A., Meyerson M., Diller L., Fortina P., Look A T and Maris J M (2007), "Genome-wide analysis of neuroblastomas using high-density single nucleotide polymorphism arrays", PLoS One 2(2), e255 Gostissa M., Ranganath S., Bianco J M and Alt F W (2009), "Chromosomal location targets different MYC family gene members for oncogenic translocations", Proc Natl Acad Sci U S A 106(7), 2265-70 Goto S., Umehara S., Gerbing R B., Stram D O., Brodeur G M., Seeger R C., Lukens J N., Matthay K K and Shimada H (2001), "Histopathology (International Neuroblastoma Pathology Classification) and MYCN status in patients with peripheral neuroblastic tumors: a report from the Children's Cancer Group", Cancer 92(10), 2699-708 Hallett R M., Seong A B., Kaplan D R and Irwin M S (2016), "Transcript signatures that predict outcome and identify targetable pathways in MYCNamplified neuroblastoma", Mol Oncol 10(9), 1461-1472 42 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 Hansford L M., Thomas W D., Keating J M., Burkhart C A., Peaston A E., Norris M D., Haber M., Armati P J., Weiss W A and Marshall G M (2004), "Mechanisms of embryonal tumor initiation: distinct roles for MycN expression and MYCN amplification", Proc Natl Acad Sci U S A 101(34), 12664-9 Horvilleur E., Bauer M., Goldschneider D., Mergui X., de la Motte A., Benard J., Douc-Rasy S and Cappellen D (2008), "p73alpha isoforms drive opposite transcriptional and post-transcriptional regulation of MYCN expression in neuroblastoma cells", Nucleic Acids Res 36(13), 4222-32 Maris J M and Matthay K K (1999), "Molecular biology of neuroblastoma", J Clin Oncol 17(7), 2264-79 Maris J M (2010), "Recent advances in neuroblastoma", N Engl J Med 362(23), 2202-11 Matsui A., Ihara T., Suda H., Mikami H and Semba K (2013), "Gene amplification: mechanisms and involvement in cancer", Biomol Concepts 4(6), 567-82 McCarville M B (2011), "Imaging neuroblastoma: what the radiologist needs to know", Cancer Imaging 11 Spec No A(S44-7 Morandi F., Croce M., Cangemi G., Barco S., Rigo V., Carlini B., Amoroso L., Pistoia V., Ferrini S and Corrias M V (2015), "IL-10 and ARG-1 concentrations in bone marrow and peripheral blood of metastatic neuroblastoma patients not associate with clinical outcome", J Immunol Res 2015(718975 Morgenstern D A., London W B., Stephens D., Volchenboum S L., Simon T., Nakagawara A., Shimada H., Schleiermacher G., Matthay K K., Cohn S L., Pearson A D and Irwin M S (2016), "Prognostic significance of pattern and burden of metastatic disease in patients with stage neuroblastoma: A study from the International Neuroblastoma Risk Group database", Eur J Cancer 65(1-10 Rothenberg A B., Berdon W E., D'Angio G J., Yamashiro D J and Cowles R A (2009), "Neuroblastoma-remembering the three physicians who described it a century ago: James Homer Wright, William Pepper, and Robert Hutchison", Pediatr Radiol 39(2), 155-60 Sano H., Bonadio J., Gerbing R B., London W B., Matthay K K., Lukens J N and Shimada H (2006), "International neuroblastoma pathology classification adds independent prognostic information beyond the prognostic contribution of age", Eur J Cancer 42(8), 1113-9 Schmidt M L., Lal A., Seeger R C., Maris J M., Shimada H., O'Leary M., Gerbing R B and Matthay K K (2005), "Favorable prognosis for patients 12 to 18 months of age with stage nonamplified MYCN neuroblastoma: a Children's Cancer Group Study", J Clin Oncol 23(27), 6474-80 Thurman W G., Fernbach D J and Sullivan M P (1964), "Cyclophosphamide therapy in childhood neuroblastoma", N Engl J Med 270(1336-40 Umehara S., Nakagawa A., Matthay K K., Lukens J N., Seeger R C., Stram D O., Gerbing R B and Shimada H (2000), "Histopathology defines prognostic subsets of ganglioneuroblastoma, nodular", Cancer 89(5), 1150-61 43 36 37 38 39 40 41 42 43 Vandepoele K., Andries V., Van Roy N., Staes K., Vandesompele J., Laureys G., De Smet E., Berx G., Speleman F and van Roy F (2008), "A constitutional translocation t(1;17)(p36.2;q11.2) in a neuroblastoma patient disrupts the human NBPF1 and ACCN1 genes", PLoS One 3(5), e2207 Westermann F., Muth D., Benner A., Bauer T., Henrich K O., Oberthuer A., Brors B., Beissbarth T., Vandesompele J., Pattyn F., Hero B., Konig R., Fischer M and Schwab M (2008), "Distinct transcriptional MYCN/c-MYC activities are associated with spontaneous regression or malignant progression in neuroblastomas", Genome Biol 9(10), R150 Yoshimoto M., Caminada De Toledo S R., Monteiro Caran E M., de Seixas M T., de Martino Lee M L., de Campos Vieira Abib S., Vianna S M., Schettini S T and Anderson Duffles Andrade J (1999), "MYCN gene amplification Identification of cell populations containing double minutes and homogeneously staining regions in neuroblastoma tumors", Am J Pathol 155(5), 1439-43 Zenitani M., Uehara S., Miyashita E., Hashii Y., Oue T and Okuyama H (2016), "Primary renal neuroblastoma with metastasis and matrix metalloproteinase-14 expression", Pediatr Int 58(2), 161-4 Balmain A., Gray J and Ponder B (2003), "The genetics and genomics of cancer", Nature genetics Supplement 33(238-44 Brodeur G M., Pritchard J , Berthold F., Carlsen N L., Castel V., Castelberry R P., De Bernardi B., Evans A E., Favrot M and Hedborg F (1993), "Revisions of the international criteria for neuroblastoma diagnosis, staging, and response to treatment", Journal Clinical Oncology 11(8), 1466-1477 Schell M and Bergeron C (2003), "Neuroblastoma", Orphanet Encyclopedia Society American Cancer (2015), "Neuroblastoma", Annual report, United States of America 44 ... Xác định khuếch đại gen MYCN bệnh nhân u nguyên bào thần kinh kĩ thuật lai huỳnh quang chỗ đƣợc thực với mục ti u sau: - Phát khuếch đại gen MYCN bệnh nhân u nguyên bào thần kinh kĩ thuật lai. ..ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  NGUYỄN XUÂN HUY XÁCĐỊNH SỰ KHUẾCH ĐẠI GEN MYCN Ở BỆNH NHÂN U NGUYÊN BÀO THẦN KINH BẰNG KỸ THUẬT LAI HUỲNH QUANG. .. tế bào u Hình A Tế bào u khuếch đại gen MYCN; Hình B Tế bào u có khuếch đại gen MYCN Trong 54 m u bệnh phẩm u có 44 m u u khuếch đại gen MYCN 10 m u u lại có khuếch đại gen MYCN 26