GIÁO TRÌNH KÝ SINH TRÙNG THỰC HÀNH

GIÁO TRÌNH KÝ SINH TRÙNG ,THỰC HÀNH

LỜI GIỚI THIỆU Page of 218 BỘ Y TẾ GIÁO TRÌNH KÝ SINH TRÙNG THỰC HÀNH (DÙNG CHO ðÀO TẠO CỬ NHÂN XÉT NGHIỆM) Mà SỐ: ðK.01.Z.15 NHÀ XUẤT BẢN GIÁO DỤC HÀ NỘI – 2008 Chỉ ñạo biên soạn: VỤ KHOA HỌC VÀ ðÀO TẠO – BỘ Y TẾ file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page of 218 Chủ biên: PGS TS LÊ THỊ XUÂN Những người biên soạn: CN VÕ THỊ MỸ DUNG CN NGUYỄN THỊ HIỆN CN TRỊNH TUYẾT HUỆ CN NGUYỄN HỒ PHƯƠNG LIÊN PGS.TS LÊ THỊ XUÂN Tham gia tổ chức thảo: ThS PHÍ VĂN THÂM TS NGUYỄN MẠNH PHA LỜI GIỚI THIỆU Thực số ñiều Luật Giáo dục, Bộ Giáo dục & ðào tạo Bộ Y tế ñã ban hành chương trình khung ñào tạo Cử nhân xét nghiệm Bộ Y tế tổ chức biên soạn tài liệu dạy – học môn sở chuyên môn theo chương trình nhằm bước xây dựng sách ñạt chuẩn chuyên môn công tác ñào tạo nhân lực y tế Giáo trình KÝ SINH TRÙNG THỰC HÀNH ñược biên soạn dựa vào chương trình giáo dục Trường ðại học Y Dược TP Hồ Chí Minh sở chương trình khung ñã ñược phê duyệt Giáo trình ñược PGS.TS Lê Thị Xuân (Chủ biên), CN Võ Thị Mỹ Dung, CN Nguyễn Thị Hiện, CN Trịnh Tuyết Huệ, CN Nguyễn Hồ Phương Liên biên soạn theo phương châm: kiến thức bản, hệ thống; nội dung xác, khoa học; cập nhật tiến khoa học, kỹ thuật ñại thực tiễn Việt Nam file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page of 218 Giáo trình KÝ SINH TRÙNG THỰC HÀNH ñã ñược Hội ñồng chuyên môn thẩm ñịnh sách tài liệu dạy – học chuyên ngành Cử nhân xét nghiệm Bộ Y tế thẩm ñịnh năm 2008 Bộ Y tế ñịnh ban hành tài liệu dạy – học ñạt chuẩn chuyên môn ngành giai ñoạn Trong thời gian từ ñến năm, sách phải ñược chỉnh lý, bổ sung cập nhật Bộ Y tế chân thành cảm ơn tác giả Hội ñồng chuyên môn thẩm ñịnh ñã giúp hoàn thành sách; cảm ơn PGS.TS Vũ ðức Chính, PGS.TS Hoàng Tân Dần ñã ñọc phản biện ñể sách sớm hoàn thành, kịp thời phục vụ cho công tác ñào tạo nhân lực y tế Lần ñầu xuất bản, mong nhận ñược ý kiến ñóng góp ñồng nghiệp, bạn sinh viên ñộc giả ñể lần xuất sau sách ñược hoàn thiện VỤ KHOA HỌC VÀ ðÀO TẠO – BỘ Y TẾ LỜI NÓI ðẦU Giáo trình Ký sinh trùng thực hành ñược biên soạn cho sinh viên khoa Kỹ thuật Y học có mục ñích hướng dẫn cho sinh viên học môn Ký sinh trùng nhằm hoàn thiện khả chẩn ñoán dựa số thông tin lâm sàng xét nghiệm bệnh phẩm cách xem kính hiển vi, cấy Một số kỹ thuật miễn dịch ñược ñề cập ñến Giáo trình gồm có ba phần: Phần một: Phần kỹ thuật trình bày kỹ thuật xét nghiệm bao gồm phương pháp thu thập, bảo quản, xử lý bệnh phẩm Phần hai: ðịnh danh, gồm hình ảnh ký sinh trùng vi nấm gây bệnh thường gặp nước ta Ngoài việc sinh viên phải nắm vững kỹ thuật ñược giới thiệu, ñiều quan tâm sinh viên phải biết ñược ưu, nhược ñiểm phương pháp ñược chọn, phải hiểu ích lợi hạn chế Sinh viên cần phải biết lựa chọn phương pháp chẩn ñoán phù hợp với loại ký sinh trùng loại bệnh phẩm Nội dung kỹ thuật trình bày giáo trình không ñược ñầy ñủ, chứa ñựng phương pháp phổ biến ñủ dùng cho phòng xét nghiệm lâm sàng nước ta Trong giáo trình này, ñã cố gắng trình bày ñiểm ñặc trưng hình thể ñể phân biệt ký sinh trùng giải thích làm ñể xác ñịnh chúng Phần ba: Phụ lục, giới thiệu hóa chất thường dùng xét nghiệm ký sinh trùng ñường ruột; hóa chất, thuốc nhuộm môi trường xét nghiệm nấm Những hình ảnh minh họa, không hoàn chỉnh ñầy ñủ số lượng chất lượng, cung cấp cách khái quát hình thái ký sinh trùng vi nấm kỹ thuật phát chúng Các tác giả người làm việc phòng thí nghiệm nhiều năm qua có kinh nghiệm giảng dạy môn Ký sinh trùng, hy vọng sách cung cấp thông tin có giá trị cho sinh viên nhằm giúp họ có kiến thức thực tiễn chẩn ñoán ký sinh trùng, giúp cho việc phòng, chữa bệnh ñạt hiệu Do trình ñộ thời gian có hạn, không tránh khỏi thiếu sót chuyên môn in ấn, mong nhận ñược góp ý sinh viên ñồng nghiệp ñể lần xuất sau giáo trình ñược hoàn thiện Xin chân thành cảm ơn file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page of 218 CÁC TÁC GIẢ PHẦN MỘT KỸ THUẬT Bài CÁCH SỬ DỤNG VÀ BẢO QUẢN KÍNH HIỂN VI file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page of 218 ða số ký sinh trùng (KST) nhận thấy mắt thường mà cần có dụng cụ quang học ñể phóng ñại chúng lên kính lúp, kính hiển vi Tùy theo yêu cầu kỹ thuật, kính hiển vi cần có phụ tùng ñể ño kích thước KST, tụ quang ñen,… NHẮC LẠI CẤU TRÚC CỦA KÍNH HIỂN VI Kính hiển vi công cụ thường dùng quan trọng phòng xét nghiệm KST Kính hiển vi có hình dạng khác tùy theo mẫu sản xuất, cấu tạo giống nhau, gồm có phận: Thị kính thấu kính nằm phía ñể mắt nhìn ảnh qua vật kính Có loại thị kính x5, x10, x15; loại x10 thường ñược dùng nhiều Ống kính ống mà ánh sáng phải ñi qua từ vật kính ñến thị kính có chức giữ thị kính vật kính nằm cách khoảng ñịnh ðĩa mang vật kính phận có lỗ ñể gắn vật kính, xoay ñưa vật kính cần sử dụng vào ống kính Vật kính: ánh sáng ñi qua vật quan sát ñến thấu kính Có loại vật kính, thường dùng loại: – Vật kính x10: có thị trường lớn nhất, sau ñiều chỉnh ñể thấy rõ mẫu vật, vật kính thường cách kính mang vật khoảng 16mm – Vật kính x 40: có ñộ phóng ñại trung bình, sau ñiều chỉnh ñể thấy rõ mẫu vật, vật kính thường cách kính mang vật khoảng 4mm – Vật kính x100: có ñộ phóng ñại lớn nhất, sau ñiều chỉnh ñể thấy rõ mẫu vật, vật kính thường cách kính mang vật khoảng 1mm Sử dụng vật kính với dầu soi kính dùng ốc vi cấp ñể ñiều chỉnh Kính tụ quang: tập trung ánh sáng Màng chắn ánh sáng: ñể cho ánh sáng qua nhiều hay ñể vào vật kính Gương tròn dùng ñể lấy ánh sáng, thường có mặt: – Mặt lõm: sử dụng vật kính x10, x40 – Mặt phẳng: sử dụng vật kính x100 Những loại kính dùng ánh sáng bóng ñèn gắn thân máy gương Tiểu xa: dùng ñể giữ tiêu ñược gắn với trục có ốc dùng ñể di chuyển sang trái, sang phải ốc dùng ñể di chuyển phía trước, sau Thân kính mang ống kính, bàn mang mẫu vật, kính tụ quang, ốc vi cấp, ốc thứ cấp gương Chân: có chức giữ cho kính ñược vững ổn ñịnh file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page of 218 Cấu tạo kính hiển vi quang học CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI ðặt tiêu lên bàn mang tiêu ðiều chỉnh ánh sáng với gương tròn, kính tụ quang chắn sáng Xoay trục mang vật kính x10 vào ñúng vị trí Vặn ốc thứ cấp ñể thấy rõ vật Nếu cần quan sát với ñộ phóng ñại lớn ñổi qua vật kính lớn x40, dùng ốc vi cấp ñể ñiều chỉnh ñến thấy rõ vật Khi sử dụng vật kính x100, ta phải dùng dầu soi kính Nhỏ giọt dầu lên tiêu ñổi qua vật kính x100 CÁCH BẢO QUẢN KÍNH HIỂN VI ðặt kính hiển vi ñúng chỗ, xa nóng chỗ ẩm ướt Cầm kính hiển vi thân kính, tay ñỡ chân kính Phải ñể ñứng kính hiển vi, không ñược ñể kính nghiêng Cẩn thận không làm rơi chất ăn mòn hay dung dịch lên bàn kính Không ñược ñể tay ướt hay bẩn lên kính hiển vi Lau thị kính vật kính giấy lau kính trước sau dùng Khi soi với vật kính dầu, thấm giấy lau kính với giọt xylen ñể lau vật kính Sau lau với xylen, phải lau khô giấy lau kính, không xylen làm bong thấu kính gắn vật kính Trước cất kính hiển vi, ñể vật kính nhỏ vị trí quan sát hạ thấp ống kính ốc lớn Vặn nhẹ nhàng, ñừng ấn mạnh ống kính Nếu cẩn thận hơn, hạ tụ quang kính xuống Nếu tụ quang kính bẩn, lau giấy lau kính khô file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page of 218 ðể gương nghiêng, mặt phẳng phía ñể tránh bụi Che kính hiển vi bao kính Cất kính vào ñúng chỗ kính, ñể lui vào phía trong, ñừng ñể mấp mé phía CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ Trình bày cách sử dụng kính hiển vi ñể quan sát mẫu phân tươi Khi sử dụng kính hiển vi ñể soi lam máu, anh (chị) cần ý ñến yếu tố ñể nhìn thấy rõ KST sốt rét (KST SR) phết máu nhuộm? Sau soi lam máu tìm KST SR, anh (chị) bảo quản kính hiển vi trước cất vào tủ kính? Bài CÁCH CHUẨN ðỘ KÍNH HIỂN VI Xác ñịnh loài KST cần dựa vào nhiều tiêu chuẩn, ñó có tiêu chuẩn kích thước KST Ta ước lượng kích thước KST cách so sánh với vật ñã biết kích thước trước hồng cầu, cách không cho ta kết xác ðể ño ñược xác kích thước KST, ta dùng thước trắc vi ñặt thị kính DỤNG CỤ – Kính hiển vi mắt với vật kính x 10, x 40, x 100 – Dầu – Giấy lau kính – Thước trắc vi thị kính (chia thành 50 ñơn vị) – Thước trắc vi với ñộ chia 0,1 0,01mm – Thị kính (nên sử dụng thị kính x10): + Thước trắc vi có kích thước lam kính bình thường có gạch cách 0,1 0,01mm + Thước trắc vi ñặt thị kính ñường thẳng ñược chia thành 50 vạch Tùy theo ñộ phóng ñại vật kính, vạch có số ño khác file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page of 218 QUY TRÌNH KỸ THUẬT Tháo thị kính ñặt thước trắc vi thị kính vào (mặt khắc vạch hướng xuống dưới) ðặt thị kính trở lại vị trí cũ ðặt thước trắc vi lên bàn kính hiển vi Di chuyển bàn kính cho thước nằm chồng lên nhau, vạch thước trắc vi thị kính trùng với vạch thước trắc vi Nhìn phía bên phải vạch thước trắc vi ñể tìm ñiểm mà vạch thước trắc vi thị kính trùng với vạch thước trắc vi nền, ñiểm trùng gọi ñiểm Y Khoảng cách thay ñổi tùy theo vật kính sử dụng (x10, x40, x100) ðếm số vạch chia thước trắc vi thị kính, từ số ñến vạch trùng lắp (Y) ðếm số vạch chia (0,1mm) thước trắc vi từ vạch ñến vạch trùng lắp (Y), Tính ñoạn ñếm ñược thước trắc vi thị kính theo công thức sau: N = Số vạch ñếm ñược thước trắc vi (mm) n = Số vạch ñếm ñược thước trắc vi thị kính (mm) Ví dụ: Ở vật kính x10, ta có N = 0,3mm, n = 40 file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page of 218 Ví dụ: ðo chiều dài trứng giun kim ðặt tiêu lên bàn kính, quan sát trứng với vật kính ×10, chiều dài trứng giun kim tương ứng với khoảng chia thước trắc vi thị kính Ta ñã có ñơn vị thị kính vật kính x10 7,5mm, chiều dài trứng giun kim 7,5mm x = 60mm Lưu ý: – Mỗi ñộ phóng ñại vật kính (x10, x40 x100) có ñơn vị thị kính khác nhau, vạch thước trắc vi thay ñổi kích thước vạch thước trắc vi thị kính trì kích thước cũ Vì vậy, cần phải chuẩn ñộ cho loại vật kính ghi lại ñơn vị lên kính tờ giấy dán gần kính ñể dễ tra cứu – Khi muốn có số ño KST cần nhân số vạch ño ñược với ñơn vị thị kính ñể có kích thước thật – Sau vật kính ñã ñược chuẩn ñộ, ta không trao ñổi thị kính chứa thước trắc vi vật kính kính hiển vi với thị kính vật kính kính hiển vi khác Phải sử dụng vật kính thị kính ñã ñược chuẩn ñộ – Nên chuẩn ñộ ñịnh kỳ ñể bảo ñảm tính xác CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ Tạo cần phải biết kích thước KST? Trình bày cách tính ñơn vị thị kính Làm ñể ño kích thước trứng giun ñũa? Bài THU THẬP VÀ BẢO QUẢN PHÂN ðỂ XÉT NGHIỆM TÌM KÝ SINH TRÙNG file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 10 of 218 THU THẬP BỆNH PHẨM Có nhiều phương pháp lấy bệnh phẩm, việc ñịnh chọn phương pháp dựa vào giá trị giới hạn phương pháp Nếu bệnh phẩm không ñược lấy xử lý ñúng yêu cầu kỹ thuật, không phát ñược mầm bệnh 1.1 Chuẩn bị bệnh nhân trước lấy phân Nhiều kết xét nghiệm phân âm giả tạo bệnh nhân không ñược hướng dẫn ñầy ñủ hay hướng dẫn không ñúng cách Phải hướng dẫn bệnh nhân cách cẩn thận; tốt phòng thí nghiệm ñưa cho bác sĩ ñiều trị in sẵn chi tiết cần thiết ñể phát cho bệnh nhân ñược ñịnh xét nghiệm phân Dặn bệnh nhân ngày trước lấy bệnh phẩm, tránh dùng loại thuốc thực phẩm làm cho việc nhận dạng KST khó khăn như: – Thuốc: Bismuth, Magnesium, Kaolin, Baryte, thuốc ñặt vào hậu môn có dầu, mỡ – Thực phẩm nhiều cặn bã: ngũ cốc, bắp cải, salad, có nhiều hạt nhỏ, nhiều chất béo, dầu, mỡ Bệnh nhân nên ăn chế ñộ chất bã như: bánh, ñồ ăn loãng, trứng, sữa, gan,… 1.2 Lấy bệnh phẩm 1.2.1 Tại phòng xét nghiệm Tốt nên lấy phân phòng xét nghiệm – Lọ ñựng phân: + Cần phải khô sạch, nhựa giấy carton không thấm nước thủy tinh + Có miệng rộng, nắp vặn chặt + Có dán nhãn ñể ghi họ, tên, tuổi, ñịa bệnh nhân ghi ngày, lấy bệnh phẩm – Cách lấy phân: + Có thể lấy chỗ khuôn phân ñể tìm trứng giun, sán Nhưng ñể phát ñơn bào, nên lấy phân chỗ bất thường máu, nhày, lỏng, bọt lấy phân trực tràng + Không ñược lấy phân lẫn với nước tiểu, dầu, chất muối Mg, Al, Ba, Bi, Fe chất ñó làm biến dạng ñơn bào + Nếu cho bệnh nhân uống thuốc xổ, nên cho uống sulfat natri lấy phân bệnh nhân ñi lần thứ hai hay thứ ba sau uống thuốc – Lượng phân cần lấy: + Thay ñổi tùy theo mục ñích kỹ thuật xét nghiệm, thường cần khoảng – 10 gam phân (khoảng hạt lạc) ñể ñủ làm nhiều phương pháp + Trong số trường hợp tìm giun, ñốt sán, bệnh tiêu hoá phải lấy toàn số lượng phân ñược thải ñể thấy ñược KST màng nhày hay mô bì bị tróc với phân file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 204 of 218 – Nigrospora sp – Scopulariopsis sp – Monospora sp 2.2 Nhóm vi nấm hoại sinh dựa ñặc tính hình thể bào ñài – Aspergillus sp – Cladosporium sp (Hormodendrum) – Paecilomyces sp – Penicillium sp – Trichoderma 2.3 Nhóm vi nấm hoại sinh dựa ñặc tính hình thể phong bào ñài – Absidia sp – Mucor sp – Rhizopus sp – Syncephalastrum sp 2.4 Nhóm vi nấm hoại sinh dựa ñặc tính hình thể thân sợi nấm – Aureobasidium pullulans – Geotrichum sp – Rhodotorula sp – Streptomyces sp ðẶC ðIỂM CÁC LOẠI VI NẤM HOẠI SINH 3.1 Alternaria sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm phẳng nhung – Màu xanh ñến nâu ñen – Sắc tố phía sau ñen b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách, màu nâu ñen – Bào ñài không phân nhánh – Bào tử màu ñen, có nhiều vách ngăn 3.2 Cephalosporium sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm nhăn, có lông tơ – Màu trắng xám hồng file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 205 of 218 – Không sắc tố b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách – Bào ñài phân nhánh không phân nhánh – Bào tử hình bầu dục, dài, ñôi phân vách 2–3 tế bào – Bào tử thường ñứng thành chùm ñầu bào ñài 3.3 Curvularia sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm – Màu nâu sẫm ñến ñen b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách, màu nâu ñen – Bào ñài không phân nhánh – Bào tử to, vách dày màu ñen, có nhiều vách ngăn, cong 3.4 Fusarium sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm – Màu trắng, hồng hay màu xanh nhạt b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách – Bào ñài ngắn, dài, phân nhánh không phân nhánh – Bào tử có nhiều vách ngăn, hình trái chuối hay hình lưỡi liềm – Các bào tử ñôi ñứng thành chùm ñầu bào ñài – ðôi bào tử tròn hay hình bầu dục ñầu bào ñài 3.5 Helminthosporium sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 206 of 218 – Màu xám b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách, màu ñen – Bào ñài phân nhánh không phân nhánh, ñôi có nút – Bào tử phân vách, bầu dục, vách dày 3.6 Nigrospora sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm len – Màu trắng ñến xám b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách – Bào ñài không phân nhánh, phình – Bào tử hình cầu ñen, sinh từ ñầu phình bào ñài 3.7 Scopulariopsis sp Hình 37.6 Hình thể cấu tạo nấm Nigrospora sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khúm bột – Màu trắng hồng b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách – Bào ñài phân nhánh không phân nhánh – Bào tử hình trái chanh ñầu nhọn – Bào tử mọc từ bào ñài, vách xù xì 3.8 Monospora sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm – Màu trắng b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách – Bào ñài dài, ngắn, không phân nhánh – Bào tử hình cầu, vách dày, mọc từ bào ñài ngắn sát với sợi tơ nấm file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 207 of 218 3.9 Aspergillus fumigatus a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm phẳng nhung, bột – Màu xám xanh ñến xanh sẫm – Sắc tố phía sau ñen b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách, phân nhánh – Bào ñài dài, ñầu bào ñài phình to thành bầu – Phủ ñầy hay hàng tiểu bào ñài – Từ tiểu bào ñài sinh bào tử xếp thành chuỗi dài 3.10 Aspergillus niger a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm phẳng len – Màu trắng ñến vàng, già có màu nâu sẫm ñen b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách, phân nhánh – Bào ñài dài, ñầu bào ñài phình to thành bầu – Phủ ñầy hay hàng tiểu bào ñài – Từ tiểu bào ñài sinh bào tử xếp thành chuỗi dài 3.11 Aspergillus flavus a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm lúc ñầu có màu vàng sau ñổi sang màu xanh b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách, phân nhánh – Bào ñài dài, ñầu bào ñài phình to thành bầu – Phủ ñầy hay hàng tiểu bào ñài – Từ tiểu bào ñài sinh bào tử xếp thành chuỗi 3.12 Cladosporium sp (Hormodendrum) a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm phẳng nhô lên file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 208 of 218 – Màu xanh ñến ñen – Mặt trái xanh ñến ñen b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách, phân nhánh – Bào ñài phân nhánh – Bào tử hình bầu dục tạo thành chuỗi (sợi tơ nấm, bào ñài, bào tử: màu nâu) 3.13 Paecilomyces sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm phẳng bột ñến nhung – Màu vàng nâu, xám, xanh tím hay trắng b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách, phân nhánh – Bào ñài phân nhánh – Tiểu bào ñài có hình thon dài sinh bào tử bầu dục, vách nhẵn, xếp thành chuỗi 3.14 Penicillium sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm phẳng bột – Màu trắng xanh ñến xanh da trời có màu khác b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách, phân nhánh – Bào ñài phân nhánh, tiểu bào ñài xếp hình bàn tay hay chồi – Từ tiểu bào ñài sinh bào tử tròn xếp thành chuỗi 3.15 Trichoderma sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm len – Màu trắng ñến xanh – Sắc tố màu ñỏ ñậm ñến nâu sậm b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm phân vách, phân nhánh file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 209 of 218 – Bào ñài không phân nhánh, tiểu bào ñài mọc từ bào ñài hay từ nhánh nấm – Từ tiểu bào ñài mọc bào tử ñứng thành chùm 3.16 Mucor sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm len – Màu trắng ñến xám nâu hay vàng b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm lớn, không phân vách, phân nhánh – Bào ñài phình to thành túi, bên có lõi – Chứa nhiều bào tử lớn vách dày, nâu ñen 3.17 Rhizopus sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm len – Màu trắng, xám hay nâu b) Hình thể quan sát kính hiển vi Giống Mucor chân phong bào ñài có cấu trúc giống chùm rễ 3.18 Absidia sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm len – Màu trắng ñến xám, nâu hay vàng file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 210 of 218 b) Hình thể quan sát kính hiển vi Giống Mucor Rhizopus chùm rễ giả nằm chân phong bào ñài 3.19 Syncephalastrum sp a) Khuẩn lạc nấm – Mọc nhanh – Mặt khóm len – Màu trắng ñến xám ñậm b) Hình thể quan sát kính hiển vi – Sợi tơ nấm lớn, phân nhánh, không phân vách – Phong bào ñài phình to thành túi, bên có lõi – Bào tử phong túi nhỏ chứa bào tử xếp ñốt ngón tay CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ Phân biệt hình thể hiển vi loại vi nấm: Penicillium, Paecilomyces, Trichoderma Phân biệt hình thể vi nấm: Rhizopus, Mucor PHẦN BA file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 211 of 218 DUNG DỊCH BẢO QUẢN (CỐ ðỊNH PHÂN) 1.1 Formol 10% + Formaldehyd 40% + Nước cất NaCl 0,85% 100ml 1000ml Formol 5% + Formaldehyd 40% + Nước cất NaCl 0,85% 50ml 1000ml 1.2 F2AM (Phenol – Formol – Alcool – Methylene blue) – Dung dịch mẹ (dùng năm): + Xanh Methylene + Cồn ethylic 95O + Phenol ñậm ñặc + Formol + Nước cất – Dung dịch sử dụng: + Dung dịch mẹ + Formol + Phenol + Nước cất 2g 40ml 8ml 10ml 40ml 1ml 10ml 0,1ml 89ml 1.3 Dung dịch MIF (Merthiolate Iodin Formol) MIF cố ñịnh tốt cho loại ñơn bào, gồm dung dịch: – Dung dịch mẹ MIF: + Nước cất 250ml + Dung dịch Merthiolate 1/1000 200ml + Formaldehyd 40% 25ml + Glycerin 5ml – Dung dịch Lugol: + Iod 5ml + Kali Iodua 10ml + Nước cất 100ml Trước dùng, lấy 2,35ml dung dịch MIF ñổ vào 0,15ml dung dịch Lugol (không ñược làm ngược lại) file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 212 of 218 Lượng phân dùng 0,25g 1.4 Dung dịch PVA (Polyvinyl alcohol) Cồn Polyvinyl dùng làm chất ñịnh hình, bán dạng bột ðổ từ từ 5g PVA vào dung dịch sau ñây ñể nhiệt ñộ 75OC + Glycerol 1,5ml + Acid acetic băng 5,0ml + Dung dịch Schaudinn (*) 93,5ml (*) Dung dịch Schaudinn gồm: + Dung dịch bão hòa HgCl2 + Cồn phần phần 1.5 Dung dịch SAF (Sodium acetat – acetic acid formol) Bảo quản ñược bào nang thể hoạt ñộng ñơn bào, trứng nang trùng bào tử bào tử Microsporidium Có thể dùng cho tiêu nhuộm vĩnh viễn tập trung + Sodium acetate 1,5g + Acid acetic lạnh 2ml + Formaldehyd 40% 4ml + Nước cất 92ml DUNG DỊCH XÉT NGHIỆM PHÂN TRỰC TIẾP 2.1 NaCl 0,85% – 0,9% + NaCl + Nước cất cho ñủ 8,5g 1000ml 2.2 Lugol 5% Dùng ñể nhuộm trứng, ấu trùng, ñặc biệt bào nang ñơn bào – Dung dịch dự trữ: + Iod 5g + Kali iodua 10g + Nước cất cho ñủ 100ml Pha Iod Kali iodua cho tan, sau ñó cho nước cất vào Hoặc cho Kali iodua vào nước cất, sau ñó cho Iod vào, hòa tan cho hết Kali iodua nước cất vào Lọc vào chai nâu, ñậy kín tránh ánh sáng – Dung dịch sử dụng 1% – 2%: + Iod 1g – 2g + Kali iodua 2g – 4g + Nước cất 100ml Hoặc pha 1/4 dung dịch dự trữ với nước cất ñem sử dụng HÓA CHẤT DÙNG TRONG PHƯƠNG PHÁP TẬP TRUNG PHÂN 3.1 Nước muối bão hòa d = 1,15 1,20 + NaCl 25 – 30g file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU + Nước cất cho ñủ Page 213 of 218 100ml 3.2 ZnSO4 33,1% + ZnSO4 bột + Nước cất 33,1g 100ml 3.3 Formol 10% 3.4 Ether nguyên chất 3.5 Glycerin nguyên chất DUNG DỊCH SÁT TRÙNG 4.1 Phenol 5% 4.2 Formol 4% – 5% 4.3 Nước Javel PHỤ LỤC HÓA CHẤT – THUỐC NHUỘM – MÔI TRƯỜNG TRONG XÉT NGHIỆM NẤM HÓA CHẤT 1.1 Potassium hydroxide (KOH): 10%; 20% + KOH + Glycerin + Nước cất cho ñủ 10g 20g 10ml 100ml 1.2 Dung dịch phẩm xanh Lactophenol Coton Blue (LPCB) + Lactic acid + Phenol + Xanh Cotton + Glycerin + Nước cất 20g 20g 50mg 40g 20ml 1.3 Nước muối sinh lý 8,5% 0,9% + NaCl + Nước cất 8,5 9g 1000ml 1.4 Mực tàu Parker ñen N051 + Mực tàu (Nigrosin bột) + Formol 10 % 10g 100ml MÔI TRƯỜNG 2.1 Thạch Sabouraud (Sabouraud dextrose agar) file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 214 of 218 + Dextrose 40g + Peptone 10g + Thạch 20g + Nước cất 1000ml Hòa tan tất nước ñun sôi, chỉnh pH sau môi trường ñến 5,6 Phân phối môi trường vào ống nghiệm có nắp vặn, hấp khử trùng 118OC 10 phút Lưu giữ môi trường 4OC – 6OC 2.2 Sabouraud Cycloheximide Chloramphenicol agar (Mycobiotic agar) + Glucose 20g + Peptone 10g + Thạch 20g + Chloramphenicol 50mg + Cycloheximide (Actidione) 500mg + Nước cất 1000ml ðun nóng ñể hòa tan môi trường nước, cho thêm Chloramphenicol, Cycloheximide, hấp khử trùng 10 phút – Chloramphenicol 118OC + Chloramphenicol 50mg + Cồn ethylic 95o 10ml Số lượng dùng cho lít môi trường (0,05mg/ml) thay cho Chloramphenicol bằng: * Streptomycine 40 ñơn vị/ml môi trường * Penicilline 20 ñơn vị/ml môi trường – Cycloheximide + Cycloheximide 500mg + Acetone 10ml Số lượng dùng cho 1000ml môi trường 2.3 Thạch khoai ñường (Potato Dextrose Agar) + Khoai tây tươi bột 200g + Dextrose 10 – 20g + Nước cất 1000ml Hầm khoai tây khoảng giờ, nghiền nát lọc lấy nước, thêm nước cất cho ñủ 1000ml, thêm ñường 20g thạch, ñun sôi trở lại cho tan thạch, phân phối ống nghiệm có nắp vặn, hấp khử trùng 120OC 10 phút, chỉnh pH sau 5,6 2.4 Thạch bột bắp (Corn Meal Agar) + Bột bắp 50g + Thạch 15g + Nước cất 1000ml Hòa tan bột bắp, thạch nước cất ñun sôi, thêm 1% Tween 80 phân phối ống nghiệm, ñem hấp khử trùng 120OC 10 phút Ghi chú: ðể phân biệt Trichophyton rubrum Trichophyton mentagrophytes dựa vào thành lập sắc file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 215 of 218 tố (Trichophyton rubrum sinh sắc tố ñỏ), người ta dùng môi trường thay 1% Tween 80 1% Glucose 2.5 Thạch tim óc hầm (Brain Heart Infusion = BHI) + BHI + Thạch + Nước cất 40g 15g 1000ml Hòa tan tất nước, ñun sôi, hấp khử trùng 120OC 15 phút, ñể nguội 40 – 50OC, cho thêm 50ml máu "O", sau ñó phân phối ống nghiệm ñĩa 2.6 BHI có Chloramphenicol Cycloheximide + BHI 37g + Cycloheximide 500mg + Chloramphenicol 50mg + Thạch 20g + Nước cất 1000ml ðun nóng ñể hòa tan BHI, thạch, thêm Chloramphenicol Cycloheximide, hấp khử trùng 118oC 10 phút 2.7 Môi trường cơm (môi trường cháo hoa) + Gạo trắng 8g + Nước cất 25ml Cho gạo trắng nước cất vào ống nghiệm lớn bình Erlenmeyer – ñậy nắp Nấu chín Hấp khử trùng 15 – 18 phút ðể nguội Lưu giữ tủ lạnh – 6OC Khi cấy, cho mảng nấm cần ñịnh danh vào môi trường ñể nhiệt ñộ phòng THUỐC NHUỘM 3.1 Nhuộm PAS + Acid Periodic + Nước cất Pha xong ñể chai có nút vặn + Basic fuchsin 5g 100ml 0,1g 95O + Cồn ethylic 5ml + Nước cất 95ml Chế nước cất vào rượu cho Basic fuchsin vào ñến tan hết + Hydrosulfite Zn Na 1g + Acid tartarique 5g + Nước cất 100ml + Light green 1g + Acid acetic băng 0,25ml + Cồn ethylic 80O 100ml 3.2 Nhuộm Gram file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 216 of 218 3.3 Nhuộm kháng acid TÀI LIỆU THAM KHẢO Thực tập Ký sinh trùng Y học 2004 Bộ môn Ký sinh trùng, Trường ðại học Y Hà Nội Thực tập Ký sinh trùng Y học 2004 Bộ môn Ký sinh trùng, Khoa Y, ðại học Y Dược TP Hồ Chí Minh ðỗ Thị Nhuận Glenns Bulmer 1973 Vi nấm học y khoa thực dụng, Y khoa ðại học ñường Sài Gòn Bourée P 1989 Ai – demémoire de Parasitologie et de Pathologie tropicale Médécine – Sciences – Flammarion Koneman EW, Allen S D, Janda W M, Schreckenbergerand PC and Winn WC., Jr 1997 Color Atlas and Texbook of Diagnostic Microbiology 5th Edition Lynne S Garcia 1999 Practical guide to diagnostic parasitology American Society for Microbiology, Washington D.C Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Pfaller MA and Yolken RH 2003 Manual of Clinical Microbiology 8th Edition American Society for Microbiology, Washington D.C Mougeot G 1995 Conduite des examens en parasitologie Masson, Paris Milan Barcelone Rose NR, Hamilton RG and Detrick B 2002 Manual of Clinical Laboratory Immunology 6th Edition American Society for Microbiology, Washington D.C 10 Wery M 1995 Protozoologie médicale De Boeck Université 11 WHO 2003 Manual of Basic Techniques for a Health Laboratory 2nd Edition file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 217 of 218 12 Hình ảnh lấy từ INTERNET Chịu trách nhiệm xuất bản: Chủ tịch HðQT kiêm Tổng Giám ñốc NGÔ TRẦN ÁI Phó Tổng Giám ñốc kiêm Tổng biên tập NGUYỄN QUÝ THAO Chịu trách nhiệm nội dung: Chủ tịch HðQT kiêm Giám ñốc Công ty CP Sách ðH–DN TRẦN NHẬT TÂN Biên tập nội dung sửa in: NGUYỄN HỒNG ÁNH Biên tập mĩ thuật trình bày bìa: ðINH XUÂN DŨNG Chế bản: TRỊNH THỤC KIM DUNG GIÁO TRÌNH KÝ SINH TRÙNG THỰC HÀNH Mã số: 7K789Y8 – DAI In 1.300 (Qð:79), khổ 19 x 27 cm In Công ty Cổ phần In Phúc Yên file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 218 of 218 ðịa chỉ: ðường Trần Phú, thị xã Phúc Yên, Vĩnh Phúc Số ðKKH xuất bản: 865 - 2008/CXB/2 - 1917/GD In xong nộp lưu chiểu tháng 12 năm 2008 file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 [...]... stercoralis và Trichostrongylus spp và ñể ñịnh danh ký sinh trùng – Ấu trùng thường gặp nhất trong phân là giun lươn file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 34 of 218 – Tùy thời gian vận chuyển trong lòng ruột và ñiều kiện của bệnh nhân, có thể tìm thấy ấu trùng có thực quản phình (rhabditiform) và hiếm hơn là ấu trùng có thực quản hình ống (filariform) Cũng vậy, nếu... có thể kết thành sợi, hình dáng giống như ký sinh trùng Chất này ñược xem xét cẩn thận ñể tìm các ñơn bào, các trứng Schistosoma – Mô liên kết: màu trắng như xà cừ Xem dưới kính hiển vi sau khi làm trong với acid acetic sẽ thấy những sợi dài – Máu: chỉ cần ghi nhận sự hiện diện máu tươi hoặc ñã ñược tiêu hóa làm phân có màu ñen ñều – Mủ: gồm có nhiều bạch cầu ñã biến dạng – Các cặn bã thực vật chưa... khi ñổ bỏ phần nước nổi, cặn không bị xáo trộn Soi ñúng theo quy trình và quy ñịnh file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 29 of 218 Bài 6 CÁC KỸ THUẬT CHUYÊN BIỆT ðỂ PHÁT HIỆN KÝ SINH TRÙNG ðƯỜNG RUỘT Trong một số trường hợp, do ñặc ñiểm sinh học riêng biệt của một số loại giun, sán, ñơn bào mà các phương pháp xét nghiệm thông thường không thể hoặc thỉnh... ấu trùng giun, sán và bào nang ñơn bào Hai nồng ñộ thường dùng là 5% cho bào nang ñơn bào và 10% cho trứng và ấu trùng giun, sán ðể giữ hình dạng ñơn bào ñược tốt, nên pha loãng formol với dung dịch ñệm phosphat, tạo thành formol trung hòa Ghi chú: Formaldehyd bán thị trường thường chỉ 37 – 40% HCHO, tuy nhiên vẫn ñược xem là 100% Bào nang ñơn bào, trứng nang của trùng bào tử, trứng giun, sán và ấu trùng. .. luôn mang găng tay trong suốt quá trình thao tác, tránh bị nhiễm KST 3 KẾT QUẢ Nếu kết quả cấy dương tính: – ðầu giờ thứ 48 có thể thấy: + Ấu trùng giun móc + Ấu trùng giun lươn – Từ ngày thứ 2 ñến ngày thứ 4: + Ấu trùng giun móc + Ấu trùng giun lươn và giun trưởng thành ñực, cái CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ Về nguyên tắc, kỹ thuật cấy phân Harada–Mori có khác kỹ thuật Baermann không? Kỹ thuật cấy phân Harada–Mori... Dung dịch phân không tràn ra mép lá kính 7 ðặt tiêu bản lên bàn kính hiển vi Tìm KST Soi ñúng theo quy trình và quy ñịnh file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 22 of 218 Bài 5 KỸ THUẬT TẬP TRUNG KÝ SINH TRÙNG TRONG PHÂN Tập trung KST trong phân là một phương pháp thường quy ñể chẩn ñoán bệnh nhiễm KST, cho phép phát hiện thêm một số mầm bệnh mà xét nghiệm... hiển vi tìm ký sinh trùng Yêu cầu phải ñạt Dụng cụ và hóa chất ñầy ñủ ñể làm tiêu bản phân Lấy nhiều nơi trên khối phân Khoảng 7ml Quấy cho phân tan ñều Hút bỏ nước nổi không làm xáo trộn cặn Phần nước nổi phải trong Lấy ñúng 10ml formol và 3ml ether Nắp phải ñậy kín và lắc mạnh ống nghiệm trong 10 giây Lấy cẩn thận, không làm xáo trộn các lớp dịch trong ống nghiệm Lớp mỡ ñược tách khỏi thành ống còn... quản ñơn bào khác với cách bảo quản giun, sán như thế nào? Hóa chất bảo quản có ảnh hưởng gì ñến KST khi KST ñược ngâm trong thời gian lâu dài? Bài 4 KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM PHÂN TÌM KÝ SINH TRÙNG file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 17 of 218 I ðẠI CƯƠNG Trong phòng xét nghiệm, khi nhận ñược bệnh phẩm, nếu là phân tươi không có chất bảo quản, chúng ta cần quan... khăn, ñặc biệt ñối với những bào nang của ñơn bào nhỏ như Endolimax nana 3 KỸ THUẬT LƯU GIỮ KÝ SINH TRÙNG TRONG BỆNH PHẨM Giữ bệnh phẩm ở 40oC, có thể giữ ñược trứng giun, sán và bào nang ñơn bào nhiều ngày, nhiều tuần mà vẫn có thể ñịnh danh ñược dễ dàng Muốn giữ lâu phải dùng dung dịch ñịnh hình 3.1 Trứng, ấu trùng giun, sán và bào nang ñơn bào a) Lưu giữ trên tiêu bản làm từ phân ướt – ðể tránh loang... hoạt ñộng, bào nang, ấu trùng * Mật ñộ nhiễm trên tiêu bản: Ví dụ: Tìm thấy trứng giun ñũa (Ascaris lumbricoides): (+) file://C:\Windows\Temp\nbgaubudjw\Kysinhtrung_bk.htm 30/09/2009 LỜI GIỚI THIỆU Page 21 of 218 8 CÁCH XỬ LÝ DỤNG CỤ ðà DÙNG VÀ BỆNH PHẨM 8.1 Bệnh phẩm và que xét nghiệm Sau khi xét nghiệm xong, cho lọ ñựng phân và que xét nghiệm vào dung dịch sát trùng rồi hấp diệt trùng trước khi bỏ Nếu