KỸ THUẬT CẤY NẤM
8. CÁCH QUAN SÁT MỘT CANH CẤY NẤM
– Một canh cấy cần phải giữ ủể quan sỏt trong một thời gian từ 1 – 3 tuần. Trong thời gian này, ta phải thường xuyờn theo dừi sự tăng trưởng của nấm mỗi ngày hoặc 2 ngày 1 lần cho ủến khi cú khuẩn lạc nấm hoàn chỉnh.
– Tốc ủộ mọc của khuẩn lạc nấm:
+ Mọc nhanh: từ 2 – 5 ngày, thường là nấm men hoặc nấm hoại sinh.
+ Mọc chậm: sau 1,5 ủến 2 thỏng mới cú khuẩn lạc nấm hoàn chỉnh: nhúm vi nấm gõy bệnh ngoài da.
Ví dụ: Trichophyton schoenleinii: mọc chậm.
+ Trung bình: từ 10 – 15 ngày.
+ Kết luận âm tính: sau 2 tháng.
8.2. Khảo sỏt ủại thể khuẩn lạc nấm a) Cấu tạo mặt trên của khuẩn lạc
Cấu tạo mặt trờn ủa dạng:
– Phẳng.
– Nhăn.
– Nhăn, ở giữa cao lên như miệng núi lửa. Ví dụ: Trichophyton tonsurans.
– Nhăn nheo từ trung tâm ra ngoại vi. Ví dụ: Penicillium sp.
– Giống như rắc bột: do vi nấm sinh nhiều bào tử. Ví dụ: Trichophyton mentagrophytes.
– Giống nhung: do vi nấm sinh sợi tơ nấm ngắn. Ví dụ: Microsporum canis.
– Giống len: do vi nấm sinh sợi tơ dài. Ví dụ: Mucor sp., Rhizopus sp.
– Giống sáp. Ví dụ: Trichophyton schoenleinii.
b) Màu sắc khúm nấm
– Mặt trên của khuẩn lạc nấm:
+ Màu sắc rất ủa dạng: trắng vàng, vàng nõu, xanh lỏ cõy, ủỏ, ủen,… tựy theo loại vi nấm.
+ Một khuẩn lạc nấm có thể có 2 màu. Ví dụ Aspergillus sp.: Phía trong có màu xanh hoặc nâu, phía ngoài có màu trắng.
+ Trờn mặt khuẩn lạc nấm cú thể ủọng những giọt nước. Vớ dụ Penicillium sp.
– Mặt dưới của khuẩn lạc nấm:
+ Sinh sắc tố: có những loại vi nấm không sinh sắc tố. Một số loại vi nấm sinh sắc tố. Ví dụ:
Penicillium cú màu vàng và nõu; Trichophyton sp. cú màu ủỏ, nõu; Epidermophyton sp. cú màu vàng, xanh lá cây.
+ Phân bố sắc tố:
* Chung quanh khuẩn lạc. Ví dụ: Epidermophyton.
* Lan ra hết ống nghiệm hoặc ủĩa cấy. Vớ dụ: Trichoderma.
Ghi chú: khảo sát sắc tố nên so với ống Sabouraud không cấy nấm.
8.3. Khảo sát dưới kính hiển vi
– Dựng kim cấy lấy một mẫu khuẩn lạc nấm. ðặt mẫu nấm trờn một lam kớnh ủó cú sẵn một giọt LPCB.
Nếu cần, lấy hai kim tói mỏng ra, ủặt lỏ kớnh lờn.
– Quan sát dưới kính hiển vi với vật kính x10, nếu cần xoay qua vật kính x40.
– Nếu thấy rừ bào tử và những cơ cấu ủặc biệt khỏc, người ta cú thể ủịnh danh ủược canh cấy nấm.
Nhưng nhiều khi người ta cần làm thêm:
+ Cấy nấm trờn miếng kớnh ủể xem vị trớ của bào tử.
+ Dựng mụi trường ủặc biệt ủể cho sinh bào tử hay sinh ra cơ cấu ủặc sắc của một loại nấm.
+ Khảo sỏt về tớnh chất sinh húa học hay ủặc tớnh khỏc của nấm.
+ đôi khi phải dùng tới thú ở phòng thắ nghiệm.
CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ
1. Môi trường Sabouraud có thêm kháng sinh (Mycosel) có kết quả tốt cho tất cả các loại bệnh phẩm hay không? Giải thích.
2. Cấy tìm nấm trong dịch não tủy dùng kỹ thuật nào?
3. Kỹ thuật cấy nấm trên kính áp dụng cho loại bệnh phẩm nào? Mô tả quy trình cấy nấm trên kính
4. Anh (chị) cho biết mục ủớch của kỹ thuật Dalmau và mụ tả kỹ thuật này.
5. Tại sao ta phải theo dõi một canh cấy nấm thường xuyên và trong thời gian dài?
Kỹ thuật cấy nấm trên kính
Kỹ thuật cấy nấm trên kính
Stt Thao tỏc Yờu cầu phải ủạt
1 Chuẩn bị dụng cụ và húa chất ủể cấy nấm. Dụng cụ và húa chất ủầy ủủ ủể cấy nấm.
2 Cho que thủy tinh uốn cong hình chữ U hay V vào hộp Petri.
ðặt lam kớnh lờn que. ðậy nắp hộp Petri. Hấp vụ trựng. Lam kớnh nằm cõn ủối trờn que thủy tinh.
3 Dùng dao vô trùng cắt thạch thành khối 1 x 1mm, ủặt thạch lờn lam kớnh.
Khối thạch vuụng ủều, ủược ủặt ngay ngắn ở giữa lam kính.
4 Cấy nấm ở ủiểm giữa mỗi cạnh của khối thạch. Khụng làm vỡ thạch.
5 Hơ nhẹ lỏ kớnh lờn ngọn ủốn – ủậy lỏ kớnh lờn khối thạch. Lỏ kớnh ủược ủặt ngay ngắn, cõn ủối lờn kh 6 Cho vào hộp 1 - 3ml nước cất vô trùng. ðậy nắp
hộp Petri - ủ nhiệt ủộ phũng thớ nghiệm.
Mực nước phủ kớn ủỏy hộp Petri, khụng ch lam kính.
7 Theo dõi lứa cấy. Theo dõi hằng ngày.
8 Khi thấy nấm mọc, gỡ lỏ kớnh ủặt lờn tấm lam kớnh có sẵn 1 giọt LPCB.
Gỡ và ủặt nhẹ lỏ kớnh lờn lam kớnh.
9 Gạt bỏ khối thạch trên lam kính, cấy vào bình nước sát trùng.
Khụng ủể nấm vương ra xung quanh.
10 Nhỏ lờn chổ nấm mọc 1 giọt LPCB. ðậy lỏ kớnh lờn. Khụng ủể nước tràn ra xung quanh.
11 Soi tiờu bản ủể tỡm nấm. Thấy ủược sợi tơ nấm và bào tử (nếu cú).
Stt Thao tỏc Yờu cầu phải ủạt
1 Chuẩn bị dụng cụ và húa chất ủể cấy nấm. Dụng cụ và húa chất ủầy ủủ ủể cấy nấm.
2 ðổ mụi trường ra hộp Petri. Lớp thạch trải ủều, mặt thạch phẳng.
3 Hũa tan nấm với NaCl 0,85% vụ trựng. Nấm tan ủều trong NaCl 0,85%.
4 Dùng kim cấy có nấm vạch sâu vào trong thạch 2
ủường. ðường vạch sắc nột, thẳng, cỏch nhau khoảng 1cm, thạch không bị vỡ.
5 ðốt khuyờn cấy ủể nguội vạch ủường chữ Z trờn 2 ủường cấy.
Thạch không bị vỡ.
6 Hơ lỏ kớnh trờn ngọn ủốn, phủ lờn 2 ủường cấy. Lỏ kớnh ủược ủặt ngay ngắn trờn cỏc ủường vạch.
7 Ủ nhiệt ủộ phũng 3 - 5 ngày. Theo dừi nấm mọc hằng ngày.
8 Khi thấy nấm mọc trờn 2 ủường cấy, khảo
sát trực tiếp nấm trong hộp cấy dưới kính hiển vi.
Thấy ủược nấm.
Bài 24
HÌNH THỂ ẤU TRÙNG VÀ GIUN TRƯỞNG THÀNH