Tiết tỳc sau khi bắt về ủược làm thành tiờu bản ủể nghiờn cứu về hỡnh thể và ủịnh loại.
Cú rất nhiều phương phỏp khỏc nhau ủể làm tiờu bản tiết tỳc từ con non ủến con trưởng thành. Quy trỡnh gồm các bước:
– Giết chết mẫu vật.
– Làm giãn nở mẫu vật nếu cần.
– Dựng tiêu bản.
1. CHUẨN BỊ MẪU VẬT ðỂ LÀM TIÊU BẢN 1.1. Dụng cụ
– Lọ nhỏ hay hộp nhỏ – Chậu nhỏ
– Kệ bằng giấy – Cát ẩm.
1.2. Hóa chất
Có thể dùng một trong những chất sau:
– Chloroform/Ether – Carbon tetrachloride – Cyanid.
1.3. Mẫu vật: các loại tiết túc
Khi nhận mẫu vật, nếu vật cũn sống, ta phải giết chết chỳng. Tựy theo từng loại và từng giai ủoạn phỏt
triển của tiết tỳc mà ta cú cỏch giết khỏc nhau. ðối với những tiết tỳc ủó khụ cứng, ta phải làm mềm và duỗi chúng ra.
1.4. Kỹ thuật giết tiết túc
Những tiết tỳc trưởng thành thuộc bộ Diptera và Hemiptera bắt ủược ngoài ủịa ủiểm, giết tại chỗ rồi ủựng trong lọ nhỏ hay hộp nhỏ.
ðối với tiết túc nuôi trong phòng thí nghiệm thì cần phải có thời gian cho tiết túc mạnh mẽ và cứng cáp thường từ 6 giờ – 24 giờ, rồi mới giết bằng những húa chất sau ủõy:
– Chloroform: thông dụng nhất.
– Ether: cách dùng giống chloroform.
– Carbon tetrachlorid: dùng thay chloroform và ethyl acetat, không bắt cháy.
Dùng ống nghiệm hoặc lọ nhỏ, cho giấy thấm vào, nhỏ vài giọt chloroform vào ống nghiệm, cho tiết túc vào ống nghiệm, ủậy kớn ống nghiệm bằng nỳt chai.
– Cyanid: dựng giết cỏc loại tiết tỳc lớn như giỏn. Sau khi tiết tỳc chết thỡ phải lấy ra khỏi lọ cyarid ủể trỏnh sự ủổi màu của cơ thể.
1.5. Làm giãn nở các mẫu tiết túc
– ðối với những mẫu tiết túc vừa giết xong, ta có thể làm tiêu bản ngay.
– ðối với những mẫu ủó bị khụ cứng và do cỏc nơi gửi về thỡ ta làm cho cơ thể của chỳng gión nở ra trước khi làm tiờu bản ủể chỳng khụng bị góy vụn chõn cỏnh khi dựng tiờu bản.
– Cách làm giãn nở côn trùng gồm:
Dựng 1 chậu nhỏ ủựng cỏt ẩm hoặc rải nước ướt, ở phớa trờn cú một kệ bằng giấy, chậu cú thể ủậy nắp kớn. Ngoài ra, ta cũn cho thờm vào chậu một ớt chất thymol và phenol ủể trỏnh nấm mốc.
ðặt mẫu vật lờn kệ giấy, ủậy nắp. ðể trong một thời gian, lõu hay mau tựy thuộc loại tiết tỳc cú kớch thước cơ thể khỏc nhau, trung bỡnh từ vài giờ ủến 2 ngày.
Sau ủú tiến hành làm tiờu bản như mẫu vật tươi.
2. KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN 2.1. Mẫu vật có kích thước nhỏ: Bọ gậy
Bọ gậy và cỏc loại tiết tỳc cú kớch thước nhỏ khỏc ủược làm tiờu bản giữa lam kớnh và lỏ kớnh. Trước khi làm tiờu bản, nếu loại tiết tỳc nào cú màu sắc ủậm, cần phải làm trong bằng KOH 10%; cũn với loại tiết tỳc nào cú thõn dày, cần phải ộp cho dẹp, chỳ ý ộp từ từ ủể khụng làm vỡ mẫu vật. Dưới ủõy là phần mụ tả làm tiêu bản bọ gậy.
a) Dụng cụ
– Que thủy tinh – Hai kim côn trùng – Lam kính
– Lá kính – Nhãn giấy – Bọ gậy.
b) Hóa chất
Dung dịch dán lam kính:
c) Quy trình kỹ thuật
ðịnh loại và tên bọ gậy trước khi làm tiêu bản.
ðặt bọ gậy lên lam kính.
Lấy que thủy tinh nhỏ 1 giọt dung dịch dán lam kính lên trên bọ gậy.
ðặt lá kính lên trên giọt dung dịch dán lam kính.
Nếu cần, lấy kim cụn trựng chỉnh sửa tư thế ủể thấy rừ cỏc chi tiết cần ủịnh danh.
Nếu có bọt khí giữa 2 lam kính thì dùng kim côn trùng chỉnh cho hết bọt khí.
ðể khụ tiờu bản ủó hoàn thành.
Dán nhãn vào góc của lam kính.
Ghi tên, nơi bắt, thời gian bắt bọ gậy lên nhãn.
2.2. Mẫu vật có kích thước lớn: Muỗi
– Những tiết tỳc cú thõn lớn thỡ khụng thể làm tiờu bản giữa 2 lỏ kớnh, mà ủược cắm kim qua thõn.
– Sau khi cắm kim, tiết tỳc ủược giữ trong ống thủy tinh hoặc cất trong hộp kớn. Ống thủy tinh phải thật khụ, sấy kỹ, ủỏy ống cú chất chống mốc, ủược ngăn giữ bằng bụng. Nỳt của ống thủy tinh phải thật kớn và gắn bằng Paraffine.
– Những tiết túc có thân hình quá lớn thì có thể ngâm trong cồn, khi cần lấy ra quan sát dưới kính lúp hoặc kớnh hiển vi. Sau khi ủịnh danh tiết tỳc rồi, viết tờn và gắn nhón ủể làm sưu tập.
a) Dụng cụ
– Ống thủy tinh nhỏ có nắp
– Kim cắm: kim không gỉ, có thể bằng thủy tinh – Bông
– Băng phiến – Nhãn – Miếng bấc.
b) Hóa chất – Ether – Paraffine.
c) Quy trình làm tiêu bản muỗi – Chuẩn bị dụng cụ:
Sấy khô ráo ống thủy tinh nhỏ có nắp.
Cắm kim thủy tinh vào giữa nắp.
– Chuẩn bị muỗi:
Cú thể dựng muỗi bắt ủược hoặc muỗi nuụi ủể làm tiờu bản, nhưng nếu dựng muỗi ủược nuụi từ bọ gậy cho ủến khi trưởng thành thỡ tiờu bản sẽ ủược giữ tốt hơn.
Nếu bụng muỗi cũn mỏu thỡ phải nuụi một thời gian ủể tiờu hết mỏu rồi mới làm tiờu bản (ủể trỏnh bị mốc).
ðối với muỗi chết và khô lâu ngày:
+ ðể muỗi lờn một tấm giấy thấm rồi ủặt lờn miệng ống thủy tinh cú nước.
+ ðun ống thủy tinh, hơi nước bốc lên ngấm vào muỗi.
+ Muỗi giãn nở rồi dùng làm tiêu bản (tránh gãy, vụn, khô).
– Giết chết muỗi:
Bắt muỗi cho vào ống thủy tinh.
ðặt 1 miếng bông tẩm ether hoặc chloroform vào miệng ống, (không nên cho muỗi chạm vào bông).
Cú thể dựng khúi thuốc lỏ bằng cỏch nhả khúi vào và ủậy kớn nắp lại.
– Làm tiêu bản:
ðể muỗi chết lên tấm bấc.
Sửa cho muỗi nằm ngửa, 2 cỏnh sỏt vào bấc, chõn ủưa lờn.
Cầm nắp cú kim cắm ủõm thẳng vào ngực giữa (giữa ủụi chõn giữa). Khụng nờn cắm quỏ sõu ủể kim ló lên thân muỗi.
Sau khi cắm ta lấy kim nhỏ sửa hai cỏnh và chõn ủể dễ quan sỏt.
Cắm nắp cú con muỗi vào ống (khụng ủể muỗi chạm vào thành ống ủể trỏnh góy chõn và cỏnh).
ðặt ống muỗi vào tủ sấy 56oC ủể muỗi khụ và diệt trựng.
Sau 6 – 7 giờ, lấy ống ra ủể nguội, mở nắp ra, ủặt ngửa nắp lờn bàn.
Cho nhón ghi tờn, tuổi, ủịa ủiểm, thời gian bắt muỗi vào ủỏy ống.
Cho băng phiến vào ủỏy ống, dày khoảng 1cm.
Nén chặt bông thấm nước sao cho mức của bông ngang với mức của nhãn.
ðun chảy paraffine (khụng ủể sụi), nhỳng nắp ống thủy tinh cú muỗi vào paraffine, ủậy ống thủy tinh lại.
2.3. Tiêu bản các loại côn trùng: chí, rận, bọ chét
Giết chí, rận hay bọ chét rồi giữ trong cồn 90o (nếu côn trùng có máu thì pha thêm acid acetic 5%
trong cồn 90o).
Ngâm trong dung dịch KOH 10% khoảng 30 – 60 phút ở 50oC.
Rửa mẫu côn trùng 2 lần với nước sạch.
Chuyển sang cồn 70o trong 30 phút.
Chuyển sang cồn 90o trong 10 phút.
Chuyển sang cồn 100o trong 20 phút.
Làm trong mẫu vật bằng xylen hoặc creozote trong 20 phút.
Chỉnh tư thế của côn trùng.
ðậy lá kính, tránh bọt khí.
Dán tiêu bản bằng baume Canada.
ðể khụ ở nhiệt ủộ phũng thớ nghiệm.
2.4. Tiêu bản các tiết túc lớn khác
Kỹ thuật cắm kim vào ngực tiết tỳc ủược dựng cho cỏc loại tiết tỳc lớn như ruồi nhà, ruồi trõu, ruồi họ Calliphoridae, Oestridae. ðối với vựng nhiệt ủới nờn chọn kim khụng gỉ hoặc kim bằng thủy tinh.
– Cách cắm kim:
Dựng kim ủõm ủỳng vào giữa ngực tiết tỳc và giữ nú ở ủộ cao 1cm cỏch ủầu của kim.
Sau ủú dựng miếng gỗ ghim kim cú tiết tỳc, chỉnh cho cỏc bộ phận của tiết tỳc ủược ngang nhau.
CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ
1. Anh (chị) cho biết mục ủớch của việc làm tiờu bản tiết tỳc và quy trỡnh làm tiờu bản tiết tỳc.
2. Mô tả cách giết mẫu vật tiết túc nói chung.
3. Khi nào cần làm giãn nở mẫu vật? Mô tả cách làm giãn nở muỗi.
4. Mô tả cách làm tiêu bản bọ gậy.
5. Trình bày cách làm tiêu bản muỗi.
6. So sánh cách làm tiêu bản bọ chét với tiêu bản muỗi. Tại sao phải ngâm bọ chét vào KOH?
7. Mô tả cách làm tiêu bản ruồi nhà.
Bài 20