KỸ THUẬT TẬP TRUNG KÝ SINH TRÙNG TRONG PHÂN
1. PHƯƠNG PHÁP LÀM NỔI
Trong phương pháp làm nổi, dùng một dung dịch hoặc hỗn hợp có tỷ trọng cao hơn tỷ trọng của các bào nang, trứng giun, sỏn làm cho chỳng nổi lờn mặt nước, chất bó lắng xuống ủỏy ống nghiệm. Tiờu bản soi sạch, ớt cặn, nhưng cú một số trứng giun, sỏn khụng nổi mà chỡm xuống ủỏy như trứng giun ủũa, trứng cú nắp. Vỡ vậy, với phương phỏp làm nổi, cần soi luụn cặn ủể khụng bỏ sút KST.
1.1. Kỹ thuật dùng nước muối bão hòa (Phương pháp Willis)
– Phương phỏp này ủược dựng ủể tỡm trứng cỏc loại giun, sỏn trong phõn: trứng giun múc (rất tốt), giun ủũa, giun túc, trứng sỏn dải (dõy) và sỏn dải (dõy) Hymenolepis sp.
– Khụng dựng ủể tỡm trứng sỏn lỏ, sỏn mỏng, ấu trựng giun lươn, bào nang và thể hoạt ủộng của ủơn bào.
a) Nguyên tắc
Phõn ủược hũa tan trong nước muối bóo hũa. Trứng giun, sỏn cú tỷ trọng nhẹ hơn tỷ trọng của nước muối bóo hũa nờn nổi trờn mặt nước, dớnh vào thủy tinh (lỏ kớnh) và ủược lấy ra ủể quan sỏt dưới kớnh hiển vi.
b) Dụng cụ
– Kính hiển vi – Lam kính – Lá kính
– Lọ penicilin hoặc ống nghiệm 18 x 25mm – Que gỗ
– Hộp Petri – Kẹp.
c) Hóa chất – NaCl
– Cồn ethylic 950 – Ether
– Nước.
+ Dung dịch nước muối bão hoà:
Hoặc cho muối vào trong nước cho ủến khi muối khụng cũn tan ủược nữa, ta cú dung dịch nước muối bão hòa.
+ Dung dịch cồn – ether
* Rửa lá kính sạch dầu, mỡ bằng cồn – ether : ðổ dung dịch cồn – ether vào hộp Petri.
Cho lá kính từng chiếc vào hộp Petri, ngâm trong 10 phút.
Lấy ra lau khụ từng chiếc và cất trong hộp Petri ủể dựng dần.
d) Quy trình kỹ thuật
Cho khoảng 5g phân vào lọ penicilin hoặc ống nghiệm.
ðổ vào lọ một ít nước muối bão hòa, khoảng 1/3 lọ.
Dùng que khuấy tan phân trong nước muối.
Cho thờm nước muối bóo hũa vào ủến khi mực nước ngang miệng lọ.
Vớt bỏ các cặn bã nổi lên mặt nước.
Nhỏ thờm vài giọt nước muối bóo hũa vào lọ cho ủến khi mặt nước cong vồng lờn (khụng ủể nước muối tràn miệng lọ).
ðậy lá kính lên miệng lọ, tránh có bọt khí giữa lá kính và mặt nước.
ðể yên trong khoảng 10 phút.
Nhấc thẳng lỏ kớnh lờn (lỏ kớnh mang theo giọt nước muối ở mặt dưới) và ủặt lờn lam kớnh.
Khảo sát tiêu bản dưới kính hiển vi.
Lưu ý:
– Nếu thời gian ủể ngắn quỏ trứng sẽ chưa nổi lờn.
– Nếu ủể lõu quỏ trứng sẽ ngấm nước muối và chỡm xuống ủỏy.
– Thời gian dài hay ngắn tựy theo ủộ cao của ống nghiệm hoặc chai lọ khi sử dụng. Tốt nhất nờn thử thời gian trứng nổi với ống nghiệm và chai lọ khác nhau.
1.2. Kỹ thuật dùng dung dịch Sulfat kẽm
– Phương phỏp này dựng ủể tỡm trứng cỏc loại giun và bào nang ủơn bào trong phõn.
– Khụng dựng ủể tỡm trứng sỏn dõy, sỏn lỏ, sỏn mỏng, ấu trựng giun lươn. Khụng dựng với phõn cú nhiều mỡ.
a) Nguyên tắc
Phõn ủược hũa tan trong dung dịch sulfat kẽm bóo hũa, cú tỷ trọng 1,18. Trứng giun, sỏn cú tỷ trọng nhẹ hơn nờn nổi trờn mặt nước và ủược vớt ra ủể quan sỏt dưới kớnh hiển vi.
b) Dụng cụ – Kính hiển vi
– Ống nghiệm, ống ly tâm – Gạc
– Khuyên cấy vi trùng – Que gỗ
– Lam kính – Lá kính – Kẹp.
c) Hóa chất
Dung dịch Sulfat kẽm bão hoà:
d) Quy trình kỹ thuật
Hòa tan 5g phân với 2 – 3ml nước trong ống nghiệm.
Thờm nước cho ủủ 10ml.
Lọc dung dịch trên qua tấm gạc vào ống ly tâm.
Ly tõm 2000 vũng/phỳt trong 2 phỳt, ủổ bỏ phần nước trong bờn trờn.
Cho vào ống ly tõm một ớt dung dịch Sulfat kẽm, khuấy ủều, tiếp tục cho thờm dung dịch Sulfat kẽm vào ống cho ủến cỏch miệng ống nghiệm khoảng 2 – 3cm.
Ly tâm 2000 vòng/phút trong 2 phút.
Dựng khuyờn cấy trựng lấy phần nổi trờn mặt dung dịch ủể lờn lam kớnh.
ðậy lá kính.
Khảo sát tiêu bản dưới kính hiển vi.