1. CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI TÌM KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT
loãng lên giọt máu. không tràn ra, chảy xuống khay.
5 Thời gian nhuộm. đúng quy ựịnh.
6 Rửa tiêu bản bằng nước trung tính,
hoặc nước cất/ nước máy. Sạch cặn, không có váng kim loại.
7 ðể tiờu bản khụ trờn giỏ ủỡ. Giọt mỏu khụ tự nhiờn, khụng bị trầy sướt.
Stt Thao tỏc Yờu cầu phải ủạt
1 Chuẩn bị dụng cụ và húa chất ủể
nhuộm tiờu bản mỏu. Dụng cụ và húa chất ủầy ủủ ủể nhuộm tiờu bản giọt máu dày.
2 Pha dung dịch tẩy phỏ vỡ hồng cầu. Pha ủỳng cụng thức.
3 Tẩy phá vỡ hồng cầu. Tiêu bản máu sau khi bị phá vỡ hồng cầu cú màu trắng hơi ủục hoặc cú màu vàng nhạt.
4 Pha dung dịch nhuộm. Pha ủỳng cụng thức.
5
Nhuộm tiêu bản:
– ðặt tiêu bản lên giá nhuộm hoặc vào bình nhuộm.
– Phủ dung dịch Giemsa ủó pha loãng lên giọt máu.
– Tiêu bản phải nằm bằng phẳng trên giá, không nghiêng.
– Thuốc nhuộm phủ kín giọt máu, không tràn ra, chảy xuống khay.
6 Thời gian nhuộm. đúng quy ựịnh.
7 Rửa tiêu bản bằng nước trung tính,
hoặc nước cất/ nước máy. Sạch cặn, không có váng kim loại.
8 ðể tiờu bản khụ trờn giỏ ủỡ. Giọt mỏu khụ tự nhiờn, khụng bị bong trúc hoặc trầy sướt.
Tỡm KST SR cần ủộ phúng ủại lớn với vật kớnh dầu (x100). Khi dựng vật kớnh dầu ủể soi lam mỏu, cần chú ý:
– ðủ ánh sáng.
– Dầu soi phải trong.
– Thị kính, vật kính phải sạch, không bị mốc.
– Trục ủẩy, ốc vi cấp phải tốt, khụng bị nhờn.
– Nâng tụ quang lên sát tiêu bản.
– Dùng gương phẳng.
– Mở rộng màng chắn sáng.
2. ðỌC TIÊU BẢN MÁU NHUỘM 2.1. Cỏch ủọc tiờu bản mỏu nhuộm
– Khảo sát giọt máu dày trước, làn máu mỏng sau.
– Quan sỏt tiờu bản ở ủộ phúng ủại nhỏ (100 lần) trước ủể quột tỡm giun chỉ. Ấu trựng giun chỉ hiếm khi có nhiều, thường chỉ có vài con trong mỗi phết máu.
– Sau ủú mới ủổi sang ủộ phúng ủại lớn ủể tỡm KST SR và ủơn bào khỏc.
– Trong một tiêu bản có thể gặp nhiều chủng loại, vì vậy phải xem nhiều vi trường. ðối với P.vivax, thường thấy nhiều giai ủoạn phỏt triển, cũn P. falciparum, thường chỉ thấy 1 – 2 giai ủoạn phỏt triển.
Cú thể xem phết mỏu với cỏc ủộ phúng ủại khỏc nhau. Tựy vào khả năng và kinh nghiệm của người ủọc lam mỏu, việc kiểm tra phết mỏu thường mất 10 ủến 20 phỳt ủể quan sỏt 100 – 300 vi trường ở ủộ phúng ủại 1000 lần.
2.2. ðọc tiêu bản giọt dày
– Trong giọt mỏu dày, tế bào mỏu tập trung nhiều nhất ở giữa. ðể tỡm KST SR, tốt nhất nờn ủọc ở ủộ phúng ủại 1000 lần.
– Khảo sỏt toàn bộ giọt mỏu theo hỡnh chữ chi ủể xem cú KST SR hay khụng, phải quan sỏt kỹ ở vựng xung quanh giọt mỏu vỡ những vựng ủú thường tập trung nhiều KST SR và sỏng, dễ xem hơn.
– Thời gian ủọc thường từ 5 ủến 10 phỳt (gần 100 vi trường với vật kớnh dầu).
– Hình thể KST SR trên tiêu bản giọt máu dày về cơ bản giống như hình thể KST SR trên tiêu bản làn máu mỏng. Tuy nhiên do phương pháp làm tiêu bản khác nhau, phương pháp nhuộm khác nhau nên hình thể KST SR trờn tiờu bản giọt mỏu dày cú khỏc hơn một chỳt, khụng ủẹp bằng ở tiờu bản làn mỏu mỏng và KST SR tập trung hơn.
2.3. ðọc tiêu bản làn máu mỏng
– Khảo sỏt phần ủuụi và hai bờn rỡa của làn mỏu ủể xỏc ủịnh rừ loại KST SR.
– KST SR thường hiện diện ở bờ hoặc ở phía cuối của phết máu do quá trình làm phết máu. ðồng thời, ta nờn kiểm tra KST SR ở phần cuối phết mỏu, nơi hồng cầu ủược tỏch riờng ra. Ở nơi này, hỡnh dạng và kớch thước của hồng cầu bị nhiễm ủược thấy rừ nhất.
– Khi xem phải kết hợp 2 yếu tố: KST SR và hồng cầu bị ký sinh ủể xỏc ủịnh kết quả và loại KST SR.
3. MỘT SỐ YẾU TỐ GÂY NHẦM LẪN KHI KHẢO SÁT TIÊU BẢN SỐT RÉT
Trong tiêu bản máu nhuộm Giemsa, có nhiều thành phần trong máu, trong thuốc nhuộm, nấm, bụi,… có thể làm cho người ủọc khụng xỏc ủịnh ủược. Nếu nghi ngờ, nờn làm lại tiờu bản khỏc hoặc gửi ủến những nơi chuyờn sõu ủể xỏc ủịnh.
– Có thể nhầm cặn thuốc, mảnh hồng cầu bị vỡ, nấm, bụi, tiểu cầu nhỏ nằm riêng lẻ với thể tư dưỡng non.
– Bạch cầu ủa nhõn, ủỏm tiểu cầu nằm tụ lại dễ nhầm với thể phõn liệt.
– Hồng cầu nhân nhầm với thể tư dưỡng già, giao bào P.vivax.
– Bạch cầu ủa nhõn trung tớnh thoỏi húa nhõn dễ lầm với thể phõn liệt, tư dưỡng già P.vivax.
– Bạch cầu ủơn nhõn, bạch cầu ỏi toan và lympho bào khụng ăn màu nhõn dễ nhầm với thể giao bào P.
vivax.
4. CÁCH TÍNH MẬT ðỘ KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT
Mật ủộ KST là số lượng KST ủếm ủược trong một vi trường hoặc một thể tớch mỏu nhất ủịnh. Biết ủược mật ủộ nhiễm KST là rất cần thiết vỡ gúp phần tiờn lượng bệnh, ủỏnh giỏ hiệu quả của ủiều trị. Cú 2 phương phỏp dựng ủể tớnh mật ủộ KST SR:
– ðếm số lượng KST SR trong 1 microlit (1ml) máu.
– Hệ thống dấu (+).
4.1. ðếm số KST SR trong 1àl mỏu
– Tổ chức Y tế thế giới ủó lấy số bạch cầu = 8000/àl mỏu làm chuẩn.
– ðếm KST SR trong 1àl mỏu tức là ủếm KST SR trờn 8000 bạch cầu (BC) trờn giọt mỏu dày, sau ủú tớnh ra số lượng KST SR trong 1àl mỏu.
– ðể kỹ thuật ủếm ủược chớnh xỏc, cần cú cỏc ủiều kiện sau:
+ Tiờu bản nhuộm ủẹp.
+ Chọn vựng ủếm: BC rải ủều, KST SR bắt màu ủẹp.
+ Nờn sử dụng 2 mỏy ủếm.
+ Nờn ủếm 2 – 3 lần ủể lấy số trung bỡnh.
– Nếu sau khi ủếm ủược 200 BC, số KST SR ủếm ủược = 10, thỡ ngừng ủếm và tớnh số lượng KST SR /200 BC.
– Nếu sau khi ủếm ủược 200 BC, số KST SR ủếm ủược = 10 thỡ tiếp tục ủếm KST SR cho ủủ 500 BC và tính số lượng KST SR /500 BC.
Công thức tính:
– Số KST SR ủếm ủược trờn 200 BC = N.
– BC/àl mỏu = 8000
4.2. Tớnh mật ủộ KST SR theo hệ thống dấu cộng
đánh giá mật ựộ nhiễm bằng dấu cộng (+) là một cách ựếm KST SR trên giọt dày ựơn giản hơn nhưng
khụng chớnh xỏc bằng cỏch ủếm KST SR/l mỏu.
ðếm KST SR trên tiêu bản giọt máu dày:
5. CÁCH TRẢ LỜI KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM TÌM KÝ SINH TRÙNG SỐT RÉT – Nếu tìm thấy KST SR thì ghi kết quả theo thứ tự như sau:
Tên loài KST SR:
Cỏc thể ủó gặp:
Mật ủộ nhiễm:
– Nếu tìm không thấy KST thì ghi:
Tìm không thấy KST SR, hay ghi KST SR âm tính.
CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ
1. Anh (chị) chỳ ý ủến những yếu tố nào khi sử dụng kớnh hiển vi ủể quan sỏt tiờu bản mỏu nhuộm?
2. Cho biết trình tự khảo sát tiêu bản máu nhuộm.
3. Tại sao phải xem giọt máu dày trước rồi mới xem giọt máu mỏng?
4. Anh (chị) cho biết những vật gì có thể gây nhầm lẫn KST SR với trên tiêu bản máu nhuộm?
5. Theo anh (chị), việc đếm KST SR trong tiêu bản máu cĩ cần thiết cho chẩn đốn bệnh sốt rét? Tại sao?
6. Cú mấy cỏch ủếm KST SR? Cỏch nào thường ủược dựng nhất?
7. Anh (chị) ghi những nội dung nào vào phiếu trả lời kết quả? Tại sao cần phải ghi ủầy ủủ những nội dung kể trên?
Bài 15