CÁC KỸ THUẬT NHUỘM MẪU PHÂN
1. KỸ THUẬT LÀM PHẾT DÀY KATO–KATZ
Phết dày Kato–Katz ủược xem là một kỹ thuật tốt ủể phỏt hiện bệnh sỏn mỏng Schistosoma mansoni và một số giun, sỏn khỏc rất hiệu quả, hiện ủang ủược Tổ chức Y tế thế giới chọn làm phương phỏp chuẩn ủể phỏt hiện trứng giun, sỏn trong phõn, ủặc biệt là giun ủũa, giun múc, giun túc. Phương phỏp này khụng dựng ủể tỡm ấu trựng, trứng giun kim hoặc ủơn bào.
Phết dày Kato–Katz là một kỹ thuật cú tớnh chất ủịnh tớnh và ủịnh lượng do thể tớch phõn ủược xỏc ủịnh.
Lượng phân dùng lớn nên dễ tìm thấy trứng giun, sán hơn xét nghiệm phân trực tiếp.
1.1. Nguyờn tắc: Phõn ủược ủịnh lượng bằng hố ủong cú kớch thước chuẩn, trải lờn lam kớnh và ủược làm trong bởi lá kính bằng giấy cellophane thấm glycerin.
1.2. Dụng cụ – Kính hiển vi – Que gỗ
– Lưới kim loại hoặc plastic (60 – 105 mắt lưới)
– Hố ủong phõn bằng kim loại khụng gỉ hoặc bằng plastic hay bỡa cứng ủể ủược một thể tớch phõn nhất ủịnh
– Que gạt phân bằng nhựa – Lam kính
– Giấy cellophane thấm nước dày 40 – 50m, cắt thành từng miếng có kích thước 22 x 35mm – Lọc cú nắp ủỏy bằng
– Kẹp
– Giấy vệ sinh hoặc giấy thấm – Găng tay.
1.3. Hóa chất
– Xanh Malachit.
– Glycerin.
– Nước cất.
a) Pha chế dung dịch xanh Malachit 1%
Bảo quản trong lọ sậm màu, nút kín.
b) Dung dịch sử dụng – Thành phần:
Trộn ủều hỗn hợp núi trờn.
– Có thể thay thế xanh Malachit 1% bằng xanh Methylen 3%.
– Cỏc mảnh giấy cellophane ủược ngõm vào dung dịch này 24 giờ trước khi sử dụng.
1.4. Quy trình kỹ thuật
ðặt một mẫu phân nhỏ trên giấy báo (hình 9.1a).
Ấn lưới lên mẫu phân sao cho phân lọc qua lưới và tụ lên phía trên (hình 9.1b).
ðặt tấm hố ủong lờn lam kớnh (hỡnh 9.1c).
Dựng que gạt lấy phõn ở phớa trờn lưới cho phõn ủầy vào hố ủong, gạt phần phõn thừa trờn hố.
Nhấc tấm hố ủong ra sao cho phõn ở trong hố ủược giữ lại trờn lam kớnh.
Phủ lờn phõn một miếng giấy cellophane ủó ủược ngõm dung dịch glycerin màu, lau khụ glycerin cũn trên mặt giấy cellophane (hình 9.1d).
Lật ỳp tấm lam kớnh lờn một mặt phẳng cứng, ấn xuống nhẹ nhàng ủể phõn ủược trải mỏng ủều (hỡnh 9.1e).
Nhấc cẩn thận tấm lam kính bằng cách trượt nhẹ nhàng về một bên, tránh làm rách hoặc làm tách mảnh giấy cellophane.
ðể yờn từ 30 – 60 phỳt ủể phết phõn trong (nếu muốn làm trong tiờu bản nhanh cú thể ủể lam phõn vào tủ ấm 40oC hoặc dưới ánh sáng mặt trời trong vài phút).
Khảo sát tiêu bản dưới kính hiển vi.
1.5. ðọc kết quả
– Mẫu phân sẽ trong, trứng KST không bị trong sẽ thấy rõ trên nền màu xanh.
– Phương pháp này quan sát dễ dàng các loại trứng giun.
Lưu ý:
– Trứng giun múc, trứng sỏn mỏng (Schistosoma sp) vỡ vỏ mỏng nờn dễ bị làm trong và dễ vỡ nếu ủể lõu. Trứng mất vỏ chỉ cũn phụi khú nhận dạng. Do ủú nờn quan sỏt sau khi phủ giấy cellophane 30 phỳt.
– Phương pháp này không áp dụng cho phân lỏng.
– Kỹ thuật này sử dụng phân tươi, cẩn thận khi làm xét nghiệm.
1.6. ðếm trứng
Tớnh số trứng ủếm ủược trong 1g phõn:
– Gọi n là số trứng trong X (mg) phân.
– Gọi N là số trứng có trong 1g phân = 1000mg.
– Số trứng ủếm ủược trong 1g phõn:
Ví dụ:
Hố ủong cú thể tớch: X = 50mg, n = 20.
Số trứng ủếm ủược trong 1g phõn là:
– Trờn thực tế, kớch thước hố ủong phõn ủó ủược tớnh toỏn ủể cú thể chứa một lượng nhất ủịnh (X (mg) phân):
+ ðường kính 9mm dày 1mm chứa 50mg phân.
+ ðường kính 6mm dày 1,5mm chứa 41,7mg phân.
+ ðường kính 6,5mm dày 0,5mm chứa 20mg phân.
Như vậy chỉ cần nhõn số lượng trứng ủếm ủược trong X (mg) phõn với hệ số (1000mg/X (mg)) sẽ cú ủược số trứng trong 1 gram phõn.
1.7. ðánh giá
– Kỹ thuật này ủơn giản, nhanh, chớnh xỏc, cú thể tiến hành hàng loạt trong ủiều tra và nghiờn cứu. Tuy nhiờn, việc ước lượng số giun ký sinh chỉ cú một giỏ trị hết sức tương ủối vỡ giun, sỏn khụng ủẻ theo nhịp ủộ ủều ủặn, trứng khụng ủược phõn bố ủều trong phõn. Phõn cú thể ủặc hay lỏng, lượng phõn thải ra hằng ngày có thể nhiều hay ít.
Ờ đánh giá cường ựộ nhiễm của giun ựũa, giun tóc, giun móc theo số lượng giun ký sinh và số trứng ủếm ủược trong 1 gram phõn theo quy ước của Tổ chức Y tế thế giới (bảng 9.1).
Bảng 9.1
Loại giun
Nhiễm nhẹ Nhiễm trung bình Nhiễm nặng
Số lượng giun
Số trứng
/g phân Số lượng
giun Số trứng /g phân Số lượng
giun
Số trứng /g phân