Ký sinh trùng thực hành dùng cho đào tạo cử nhân xét nghiệm

Nội dung các kỹ th u ậ t trình bày trong giáo trình này có thể không được đầy đủ, nhưng nó cũng chứa đựng các phương pháp phổ biến nhất và đủ dùng cho các phòng xét nghiệm lâm sàng ở nướ

Chỉ đạo biên soạn:

VỤ KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ

Chủ biên:

PGS TS LÊ THI XUÂN

Những người biên soạn:

TS NGUYỄN MANH PHA

© Bản quyển thuộc Bộ Y tế (Vụ Khoa học và Đào tạo)

LỜI GIỚI THIỆU

Thực hiện một số điều của Luật Giáo dục, Bộ Giáo dục & Đào tạo và Bộ Y tế

đã ban hành chvíơng trình khung đào tạo c ử n h â n x é t nghiệm Bộ Y tế tổ chức biên soạn tài liệu dạy - học các môn cơ sở và chuyên môn theo chương trình trên nhằm từng bưốc xây dựng bộ sách đạt chuẩn chuyên môn trong công tác đào tạo nhân lực y tế

Giáo trình KÝ SINH TRÙNG THựC HÀNH được biên soạn dựa vào chương trình giáo dục của Trường Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh trên cơ sở chương trình khung đã được phê duyệt Giáo trình được PGS.TS Lê Thị Xuân (Chủ biên),

CN Võ Thị Mỹ Dung, CN Nguyễn Thị Hiện, CN Trịnh Tuyết Huệ,

CN Nguyễn Hồ Phương Liên biên soạn theo phương châm: kiến thức cơ bản, hệ thốhg; nội dung chính xác, khoa học; cập nhật các tiến bộ khoa học, kỹ thuật hiện đại và thực tiễn Việt Nam

Giáo trình KÝ SINH TRỪNG THựC HÀNH đă được Hội đồng chuyên môn thẩm định sách và tài liệu dạy - học chuyên ngành c ử nhân xét nghiệm của Bộ Y

tế thẩm định năm 2008 Bộ Y tê quyết định ban hành tài liệu dạy - học đạt chuẩn chuyên môn của ngành trong giai đoạn hiện nay Trong thòi gian từ 3 đến 5 năm, sách phải được chỉnh lý, bổ sung và cập nhật

Bộ Y tê chân thành cảm ơn các tác giả và Hội đồng chuyên môn thẩm định đã giúp hoàn thành cuốn sách; cảm ơn PGS.TS Vũ Đức Chính, PGS.TS Hoàng Tân Dần

đã đọc và phản biện đế cuốn sách sớm hoàn thành, kịp thòi phục vụ cho công tác đào tạo nhân lực y tế

Lần đầu xuất bản, chúng tôi mong nhận được ý kiến đóng góp của đồng nghiệp, các bạn sinh viên và các độc giả để lần xuất bản sau sách được hoàn thiện hơn

VỤ KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ

LÒI NÓI ĐẦU

Giáo trình Ký s in h t r ù n g t h ự c h à n h được biên soạn cho sinh viên khoa

Kỹ thuật Y học có mục đích hưống dẫn cho những sinh viên học môn Ký sinh trùng nhằm hoàn thiện khả năng chẩn đoán dựa trên một sô' thông tin lâm sàng cơ bản và xét nghiệm bệnh phẩm bằng cách xem kính hiển vi, cấy Một số

kỹ thuật miễn dịch cũng được để cập đến

Giáo trình gồm có ba phần:

P h ầ n m ôt: Phần kỹ thuật trình bày những kỹ th uật xét nghiệm cơ bản bao

gồm phương pháp thu thập, bảo quản, xử lý bệnh phẩm

P h ầ n hai: Định danh, gồm các hình ảnh các ký sinh trùng và vi nấm gây

bệnh thường gặp ỏ nước ta

Ngoài việc các sinh viên phải nắm vững các kỹ th u ậ t được giới thiệu, điều chúng tôi quan tâ m hơn nữa là sinh viên phải biết được ưu, nhược điểm của các phương pháp được chọn, phải hiểu ích lợi và hạn chế của nó Sinh viên cần phải biết lựa chọn các phương pháp chẩn đoán phù hợp vối từng loại ký sinh trùng

và từng loại bệnh phẩm

Nội dung các kỹ th u ậ t trình bày trong giáo trình này có thể không được đầy

đủ, nhưng nó cũng chứa đựng các phương pháp phổ biến nhất và đủ dùng cho các phòng xét nghiệm lâm sàng ở nước ta

Trong cuốn giáo trình này, chúng tôi đã cô gắng trình bày những điểm đặc trưng về hình thể để phân biệt ký sinh trùng và giải thích làm th ế nào để xác định chung

P h ầ n ba: Phụ lục, giới thiệu các hóa chất thưòng dùng trong xét nghiệm ký sinh

trùng đường ruột; các hóa chất, thuốc nhuộm và môi trường trong xét nghiệm nấm.Những hình ảnh minh họa, mặc dù không hoàn chỉnh nhưng cũng khá đầy

đủ về số lượng và chất lượng, cung cấp một cách khái quát vể hình thái của ký sinh trùng và vi nấm cùng như các kỹ thuật phát hiện chúng

Các tác giả là những người làm việc ở phòng thí nghiệm trong nhiều năm qua

và có kinh nghiệm giảng dạy vê môn Ký sinh trùng, hy vọng rằng cuôn sách này sẽ cung cấp những thông tin có giá trị cho sinh viên nhằm giúp họ có kiến thức về thực tiễn chẩn đoán ký sinh trùng, giúp cho việc phòng, chữa bệnh đạt hiệu quả

Do trình độ và thòi gian có hạn, chúng tôi không tr ánh khỏi những thiếu sót về chuyên môn cũng như in ấn, rất mong nhận được sự góp ý của các sinh viên và đồng nghiệp để lần xuất bản sau giáo trình được hoàn thiện hơn

Xin chân th à n h cảm đn

CÁC TÁC GIẢ

MỤC LỤC

ỉ^òi giới thiệu 3

Lòi nói d ầ u 4

Í^HẨN MỘT KỸ THUẬT 7

Bài 1 Cách sử dụng và bảo quản kính hiển v i 7

Bài 2 Cách chuẩn độ kính hiển vi 10

Bài 3 Thu thập và bảo quản phân đế xét nghiệm tìm ký sinh tr ù n g 13

Bài 4 Kỹ thuật xét nghiệm phân tìm ký sinh t r ù n g 22

Bài 5 Kỹ thuật tập trung ký sinh trùng trong p h â n 28

Bài 6 Các kỹ thuật chuyên biệt để phát hiện ký sinh trùng đưòng r u ộ t 36

Bài 7 Cấy p h ân 41

Bài 8 Các kỹ th uật nhuộm mẫu p h â n 44

Bài 9 ước lượng số giun bằng cách đếm trứng 52

Bài 10 Kỹ thuật tìm mỡ trong p h â n 59

Bài 11 Kỹ thuật tìm máu trong phân 61

Bài 12 Kỹ thuật làm làn máu mỏng và giọt máu dày 65

Bài 13 Kỹ thuật nhuộm tiêu bản máu tìm ký sinh trùng sôt r é t 71

Bài 14 Kỹ thuật khảo sát tiêu bản m á u 76

Bài 15 Kỹ thuật xét nghiệm tìm giun chỉ trong m á u 80

Bài 16 Phưdng pháp chẩn đoán băng kỹ thuật miễn dịch học 82

Bài 17 Phương pháp điểu tra tiết tú c 89

Bài 18 Kỹ thuật bảo quản và chuyên chở tiết t ú c 94

Bài 19 Phương pháp làm tiêu bản tiết t ú c 97

Bài 20 Kỹ thuật mổ muỗi 103

Bài 21 Đại cương xét nghiệm vi n ấ m 107

Bài 22 Kỹ thuật xét nghiệm cơ bản tìm n ấ m 112

Bài 23 Kỹ thuật cấy n ấ m 118

PHẨN HAI ĐỊNH DANH 127

Bài 24 Hình thế ấu trùng và giun trưởng t h à n h 127

Bài 25 Nhận dạng các loại sán l á 137

Bài 26 Nhận dạng các loại sán dải (sán dây) 143

Bài 27 Hình thể trứng giun, sán thường g ặ p 149

Bài 28 Đơn bào đường r u ộ t 158

Bài 29, Những vật thể có thể tìm thấy trong p h ân 171

Bài 30 Hình thể ký sinh trùng sốt rét ỏ người 173

Bài 31 Hình thể tiết túc V học 186

Bài 32 Chẩn đoán vi nấm ngoài d a 207

íĩài 33 Chẩn đoán vi nấm ngoại b iê n 213

Bài 34 Chẩn đoán vi nấm C andida 215

Bài 35 Chẩn đoán vi nấm Aspergillus 220

Bài 36 Chẩn đoán vi nấm Cryptococcus 222

Bài 37 Vi nấm hoại s i n h 224

PHẦN BA PHỤ LỤ C 232

Phụ lục 1 Các hóa chất thường dùng trong xét nghiệm ký sinh trùng đường r u ộ t 232

Phụ lục 2 Hóa chất - thuốc nhuộm - môi trường trong xét nghiệm n ấ m 235

1 NHẮC LẠI CẤU TRÚC CỦA KÍNH HIỂN VI

Kính hiển vi là một công cụ thường dùng và quan trọng nh ấ t của một phòng xét nghiệm KST Kính hiển vi có thể có những hình dạng khác nhau tùy theo mẫu sản xuất, nhưng cấu tạo cơ bản giông nhau, gồm có những bộ phận:

® Thị kính là một thấu kính nằm ở phía trên đế mắt nhìn ảnh qua vật kính Có 3 loại thị kính x5, x i o , Xl5; loại x i o thường được dùng nhiều nhất.(D Ông kính là một ống mà ánh sáng phải đi qua từ vật kính đến thị kính và

có chức năng giữ thị kính và vật kính nằm cách nhau một khoảng nh ất định

@ Đĩa mang vật kính là một bộ phận có 4 lỗ để gắn vật kính, khi xoay sẽ đưa vật kính cần sử dụng vào ông kính

@ Vật kính: ánh sáng đi qua vật quan sát rồi đến thấu kính này Có 4 loại vật kính, nhưng thường dùng 3 loại;

- Vật kính xlO: có thị trường lỏn nhất, sau khi điểu chỉnh dể thấy rõ mẫu vật, vật kính này thưòng cách kính mang vật khoảng 16mm.

- Vật kính X 40: có độ phóng đại trung bình, sau khi điều chỉnh đê thấy rõ mẫu vật, vật kính này thường cách kính mang vật khoảng 4mm

- Vật kính xlOO: có độ phóng đại lớn nhất, sau khi điêu chỉnh để thấy rõ mẫu vật, vật kính này thường cách kính mang vật khoảng Imm s ử dụng vật kính vối dầu soi kính và dùng ô"c vi cấp để điều chỉnh

® Kính tụ quang; tập trung ánh sáng

(D Màng chắn ánh sáng: để cho ánh sáng qua nhiều hay ít để vào vật kính

® Gưđng tròn dùng để lấy ánh sáng, thường có 2 mặt:

- Mặt lõm: khi sử dụng vật kính x i o , x40

- Mặt phẳng: khi sử dụng vật kính x ioo

Những loại kính dùng ánh sáng của bóng đèn gán trong thân máy không có gương.(D Tiểu xa: dùng để giữ tiêu bản được gắn vỏi một trục có một ốc dùng để di chuyến sang trái, sang phải và một ốc dùng để di chuyển phía trưốc, về sau.(D Thân kính mang ông kính, bàn mang mẫu vật, kính tụ quang, ốc vi cấp,

ốc thứ cấp và gương

® Chân: có chức năng giữ cho kính đưỢc vững và ổn định

DTa m a n g v ệ l kirth

Vật kính Tiểu xa Bàn mang mẫu vật

Tụ quang

ốc chỉnh màn chắn sáng.

Đèn Chân

2 CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI

® Đặt tiêu bản lên bàn mang tiêu bản

(2) Điều chỉnh ánh sáng với gương tròn, kính tụ quang và màn chắn sáng

@ Xoay trục mang vật kính xio vào đúng vị trí

® Vặn ốc thứ cấp để thây rõ vật

Nếu cần quan sát với độ phóng đại lớn thì đổi qua vật kính lớn hơn x40, dùng ốc vi cấp để điều chỉnh đến khi thấy rõ vật Khi sử dụng vật kính xioo, ta phải dùng dầu soi kính Nhỏ 1 giọt dầu lên tiêu bản rồi đổi qua vật kính xioo

3 CÁCH BẢO QUẢN KÍNH HIEN VI

CO Đặt kính hiển vi đúng chỗ, xa hơi nóng và chỗ ẩm ướt

(D Cầm kính hiển VI bằng thân kính, tay kia đỡ chân của kính Phải để đứng kính hiển vi, không được để kính nghiêng

@ Cẩn thận không làm rơi chất ăn mòn hay bất cứ một dung dịch nào lên bàn kính

@ Không được để tay ướt hay bẩn lên kính hiển vi

® Lau thị kính và vật kính bằng giấy lau kính trước và sau khi dùng Khi SOI với vật kính dầu, thâ'm giấy lau kính với một giọt xylen để lau vật kính Sau khi lau với xylen, phải lau khô ngay bằng giấy lau kính, nếu không xylen có thể làm bong những thấu kính gắn trong vật kính

® Trước khi cất kính hiển vi, đế vật kính nhỏ ở vị trí quan sát và hạ thấp ô"ng kính bằng ôc lớn Vặn nhẹ nhàng, đừng ấn mạnh ống kính Nếu cẩn thận hơn, hạ tii quanp kính xviông Nôn tụ qiiang kính hẩn, lan bnng giấy líiii kính khô

© Để gương nghiêng, mặt phẳng ra phía ngoài để trá n h bụi

(D Che kính hiển vi bằng bao của kính Cất kính vào đúng chỗ của kính, để lui vào phía trong, đừng để mâ'p mé phía ngoài

CÀU HỎI LƯỢNG GIÁ

1 Trình bày cách sử dụng kính hiển vi đế quan sát một mẫu phân tươi

2 Khi sử dụng kính hiển vi để soi lam máu, anh (chị) cần chú ý đến yếu tố nào để có thể nhìn thấy rõ KST sô't rét (KST SR) trên phết máu nhuộm?

3 Sau khi soi lam máu tìm KST SR, anh (chị) bảo quản kính hiển vi như th ế nào trước khi cất vào tủ kính?

B à i 2

CÁCH CHUẨN ĐỘ KÍNH HIỂN VI

MỤC TIÊU

• r

1 Trình bày được quy trình chuẩn độ kính hiển vi.

2 Đo được kích thước của mẫu vật bằng thước trắc vi.

Xác định loài KST cần dựa vào nhiều tiêu chuẩn, trong đó có tiêu chuẩn kích thước của KST Ta có thể ước lượng kích thước KST bằng cách so sánh vối một vật đã biết kích thước trước như hồng cầu, nhưng cách này không cho ta kết quả chính xác Đe đo được chính xác kích thước KST, ta dùng thưâc trắc vi đặt trong thị kính

1 DỤNG CỤ

- Kính hiển vi 2 mát với các vật kính X 10, X 40, X 100

- Dầu

- Giấy lau kính

- Thưốc trắc vi thị kính (chia thành 50 đơn vỊ)

- Thước trắc vi nền với 2 độ chia 0,1 và 0,01mm

2 QUY TRÌNH KỶ THUẬT

® Tháo thị kính ra và đặt thước trắc vi thị kính vào (mặt khắc vạch hưống xuông dưới) Đặt thị kính trở lại vị trí cũ

@ Đặt thưỏc trắc vi nền lên bàn kính hiển vi

® Di chuyển bàn kính sao cho 2 thưóc nằm chồng lên nhau, vạch 0 trên thước trắc vi thị kính trù ng với vạch 0 trên thước trắc vi nền

® Nhìn phía bên phải vạch 0 của thước trắc vi nền để tìm điểm mà 1 vạch củathước trác vi thị kính trùng với 1 vạch của thưốc trắc vi nền, điểm trùng này gọi làđiểm Y Khoảng cách sẽ thay đổi tùy theo các vật kính sử dụng (xio, x40, xlOO).

(ẵ) Đếm số vạch chia trên thưỏc trắc vi thị kính, từ số 0 đến vạch trùng lắp (Y), Đếm số vạch chia (0,lmm) trên thước trắc vi nền từ vạch 0 đến vạch trùng lắp (Y), Tính đoạn đếm được trên thước trắc vi thị kính theo công thức sau:

- Z—-L— = đơn vi thi kính (m)

n x l m m

N = Số vạch đếm được trên thước trắc vi nền (mm)

n = Số vạch đếm được trên thước trắc vi thị kính (mm).

Hình 2.2 Cách đặt thước trắc vi thị kính và tắc vi nến

Ví dụ: Đo chiều dài của trứng giun kim.

Đặt tiêu bản lên bàn kính, quan sát trứng vói vật kính x i o , chiều dài của trứng giun kim tương ứng vối 8 khoảng chia của thước trắc vi thị kính

Ta đã có đơn vị thị kính ỏ vật kính x i o là 7,5|im, chiều dài của trứng giun

k i n sẽ là 7,5|im X 8 = 60f.im

L ư u ý:

- Mỗi độ phóng đại của vật kính (xio, x40 và xlOO) có đơn vị thị kính khác

11

nhau, vì mỗi vạch của thưỏc trác vi nền sẽ thay đổi kích thước trong khi vạch của thước trắc vi thị kính vẫn duy trì kích thước cù Vì vạy, cần phải chuẩn độcho từng loại vật kính và ghi lại các đơn vị này lôn kính hoặc tờ giấy dán gầnkính để dễ tra cứu.

- Khi muôn có sô đo của KST thì chỉ cần nhân sô vạch đo được với đơn vị thị kính để có kích thước thật

- Sau khi mỗi vật kính đã được chuẩn độ, ta không trao đổi thị kính chứa thước trắc vi và những vật kính của kính hiển vi này vói thị kính hoặc vật kính của kính hiển vi khác Phải sử dụng vật kính và thị kính đã được chuẩn độ

- Nên chuẩn độ định kỳ để bảo đảm tính chính xác

CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ

1 Tạo sao cần phải biết kích thưốc của KST?

2 Trình bày cách tính đơn vị thị kính

3 Làm th ế nào để đo kích thước của trứng giun đũa?

B à i 3

THU THẬP VÀ BẢO QUẢN PHÂN

ĐỂ XÉT NGHIỆM TÌM KÝ SINH TRÙNG■

- Thuốc: Bismuth, Magnesium, Kaolin, Baryte, thuoc đặt vào hậu môn có dầu, mõ

- Thực phẩm nhiều cặn bă: ngũ cốc, bắp cải, salad, quả có nhiều hạt nhỏ, nhiều chất béo, dầu, mỡ

Bệnh nhân nên ăn chê độ ít chất bã như: bánh, đồ ăn loãng, trứng, sữa, gan,

+ Có dán nhãn để ghi họ, tên, tuổi, địa chỉ của bệnh nhân và ghi ngày, giờ lây bệnh phẩm.

- C á c h lấy phân:

+ Có thể lấy bất cứ chỗ nào của khuôn phân dể tìm trứng giun, sán Nhưng

đê phát hiện đơn bào, nên làV phân ở chỗ bất thường như máu, nhày, lỏng, bọt hoặc lấy phân ngay trong trực tràng

+ Không được lấy phân lẫn với nước tiểu, dầu, các chất muối Mg, Al, Ba, Bi,

Fe vì các chất đó làm biến dạng đơn bào

+ Nếu cho bệnh nhân uô"ng thuôc xổ, chỉ nên cho uô’ng sulfat natri và sẽ lấyphân khi bệnh nhân đi ngoài lần thứ hai hay thứ ba sau khi uống thuốc

- LưỢng phân cần lấy:

+ Thay đổi tùy theo mục đích và kỹ thuật xét nghiệm, thường chỉ cần khoảng

5 - 1 0 gam phân (khoảng bằng hạt lạc) để có thể đủ làm nhiều phương pháp

+ Trong một sô trường hỢp như tìm giun, đôt sán, các bệnh về bộ tiêu hoá

phải lấy toàn bộ sô' lượng phân được thải ra để có thể thấy được KST và màng

nhày hay mô bì bị tróc ra cùng với phân

- Không được giữ ở nhiệt độ lạnh quá

- Nếu ở xa: giữ hộp phân trong nước ấm 37°c và đồng thòi lấy một chút

phân cho vào luộl trong uhữiig dung dịch cố dịnh;

+ MIF: Merthiolate lod Formol,

PVA: Polyvinyl Alcohol

F2AM; Formol + Phenol + Alcool + Xanh Methylene

2 HÓA CHẤT BẢO Q ư ẢN p h â n

- Để bảo quản hình thể và ngăn sự phát triển tiếp tục của trứng và ấu trùng giun, sán, phân được đựng trong chất bảo quản ngay lập tức sau khi lấy (bệnh nhân lấy) hoặc khi phòng xét nghiệm nhận bệnh phẩm

- Một số chất cố định đvíỢc ưa dùng là: formol, sodium acetat-acetic acid- formol (SAP), dung dịch Schaudinn, polyvinyl alcohol (PVA)

- Khi chọn phương pháp cô định, phải đảm bảo chất cố định được chọn phù

hỢp vối kỹ th u ậ t xét nghiệm sẽ làm Vì mỗi chất cô’ định có tính chất riêng, không thể dùng cho tấ t cả các loại kỹ thuật xét nghiệm

G hi chú: Formaldehyd bán thị trường thưồng chỉ 37 - 40% HCHO, tuy

nhiên vẫn được xem là 100%

Bào nang đơn bào, trứng nang của trùng bào tử, trứng giun, sán và ấu trùng được bảo quản lâu dài trong formol 10% Formol nóng (60'’C) có thể dùng đối vói bệnh phẩm có trứng giun, sán (vì trong formol lạnh, một vài loại trứng dày sẽ tiếp tục phát triển, gây nhiễm và sông trong một thời gian dài)

Lấy vài gram phân trộn kỹ trong dung dịch formol 5 - 10%

ư u điểm:

- Cô định toàn bộ phân

- Pha chế dễ, bảo quản lâu

- Cặn lắng có thể làm thử nghiệm miễn dịch

Nhược điểm:

- Không bảo quản thể hoạt động

- Hình dạng KST không đẹp trên phết nhuộm cô" định

2.2 S o d iu m a c e t a t - a c e t i c a c id fo r m o l (SAF)

SAF được dùng để bảo quản trứng và ấu trùng giun, sán, bào nang và thể

hoạt động đdn bào, trứng nang trùng bào tử và bào tử Microsporidỉa.

15

Bệnh phẩm cô định trong SAP" đêu dùng được vỏi phương pháp tập trung phân và làm phết nhuộm cô định Khi làm phết phân để nhuộm, nên trộn thêm albumin vào phân để tăng độ dính của bệnh phẩm vào lam kính,

SAF được coi là chất cố định mềm hơn thủy ngân clorua Hình dạng KST sẽ không sắc nét bằng khi cô’ định trong dung dịch có thủy ngân clorua Kết hỢp cố định SAF với nhuộm hematoxylin sắt cho hình dạng tôt hơn nhuộm Trichrome

ư u điểm:

- Dùng cho tiêu bản tập trung và cố định.

- Không có hỢp chất thủy ngân

- Dễ pha chế, bảo quản lâu

- Cặn lắng có thể làm kỹ th uật miễn dịch men

Dung dịch cố định Schaudinn (dung dịch mẹ):

+ Dung dịch thủy ngân clorua bão hòa 600ml

Thêm 5ml acid acetic lạnh vào lOOml dung dịch mẹ ngay khi sử dụng

ưu điểm:

- Cố định tiêu bản từ mẫu phân tươi hoặc niêm mạc ruột

- Bảo quản tô't thể hoạt động và bào nang đơn bào

Nhược diểm:

- Không khuyên cáo dùng trong phương pháp tập trung

- Dung dịch có chứa thủy ngân clorua, nên đặt ra vấn đề xử lý nưốc thải

- It dính với bệnh phẩm lỏng hoặc nhày

2.4 P o ly v in y l a lc o h o l (PVA)

PVA là một nhựa dẻo phối hỢp vâi dung dịch cố định Schaudinn Bột PVA được dùng như chất dính cho bệnh phẩm phân khi hỗn hỢp phân - PVA đưỢc trải trên lam kính, còn việc cố định vẫn là dung dịch Schaudinn

Dung dịch cố định PVA được dùng để bảo quản tất cả các thế của KST đưòng ruột, nhất là bào nang và thể hoạt động đơn bào cho những kỹ thuật chuyên sâu.PVA cũng được dùng để cô định bệnh phẩm cần gửi qua bưu điện đến những phòng thí nghiệm chuyên sâu, rất tôt với bệnh phẩm lỏng và pha theo tỷ

lệ 3 phần PVA với 1 phần phân,

Cách pha chế:

+ Dung dịch thủy ngân clorua bão hòa 125ml

Trộn các dịch lỏng vào cốc 500ml, thêm bột PVA vào (không khuấy) Đậy cốc

bằng đĩa Petri lớn, giấy sáp hoặc lá kim loại, để qua đêm Đun từ từ cỉến 75”C, lấy côc ra và khuấy trong khoảng 30 phút đến khi có dung dịch đồng nhất như sữa

ư u điểm:

- Có thể làm tiêu bản cố định và phương pháp tập trung

- Bảo quản tô’t bào nang và thể hoạt động đđn bào

- Bảo quản lâu (hàng năm) trong lọ kín ở nhiệt độ phòng

- Bệnh phẩm có thể gửi bằng bưu điện đến phòng thí nghiệm chuyên sâu

- Trứng Trichuris trichura và bào nang Giardia lam bia trong phương pháp

tập trung dễ nhận ra như trong phương pháp formol-ether

Nhược điểm:

- Hình dạng ấu trùng Strongyloides stercoraỉis không đẹp như cô’ định bằng formol Trứng nang Isospora belli có thể không quan sát đưỢc (forn^I tốt hờn).

- Dung dịch có chứa thủy ngân, nên đặt ra vấn đề xử lý nước thải.

- Có thể trở nên trắng và sệt do mất nước hay do làm lạnh

- Khó pha chế trong phòng thí nghiệm

- Không thể dùng tiêu bản để làm kỹ thuật miễn dịch men

2.5 PVA c ả i t iế n

PVA được cải tiến không chứa thủy ngân, mà thay vào đó người ta dùng sulfat đồng hoặc sulfat kẽm Sulfat đồng không cho kết quả tốt như thủy ngân clorua Sulfat kẽm được dùng trong nhuộm Trichrome

ư u điểm:

- Dùng được cho phết nhuộm cô’ định và phương pháp tập trung

- Không chứa thủy ngân

- Cô" định bằng sulfat kẽm cho kết quả tôt hơn vì th ế nhiều người thích dùng PVA có chứa sulfat kẽm hơn sulfat đồng

NhưỢc điểm:

- Hình dạng của bào nang và thể hoạt động đơn bào khó thấy khi cố định

bằng sulfat đồng, đặc biệt khi so sánh với thủy ngân clorua

- Đặc điểm cấu tạo của đơn bào khi nhuộm không ổn định: có thể rõ, có thể không rõ Vì vậy, việc định danh có thể gặp khó khăn, đặc biệt đối vối những

bào nang của đơn bào nhỏ như Endolim ax nana.

Giũ bệiih phẩm ở 40"C, có thể giữ dưỢc trứng giun, sán và bào naug đoii bào nhiều ngày, nhiều tuần mà vẫn có thể định danh được dễ dàng Muôn giữ lâu phải dùng dung dịch định hình

3.1 T rứ ng, â*u t r ù n g g iu n , sá n và b à o n a n g đ ơ n b à o

a) L ư u g iữ trên tiề u b ả n là m từ p h â n ướt

- Đề tránh loang phải dùng lam kính sạch, rửa sạch mõ trong dung dịch

- Quy trình thực hiện:

® Cho phân vào dung dịch cô' định theo thể tích:

1 thể tích phân + 3 thể tích dung dịch bảo quản

® Nghiền đều, lược qua lưối kim loại để loại những cặn bã lốn

@ Để 1 phút ỏ bình thủy tinh có chân để loại trừ những phần tử nặng

® Đổ phần trên vào chai có nút và có nhãn

(D Ghi KST có trong mẫu, ngày lấy mẫu, nồng độ dung dịch cố định

+ KST được giữ tôt ở cặn lắng trong chai

+ Đê làm giảm sự bốc hơi của formol, thêm vào dung dịch bảo quản 10% glycerine

Đôi với dạng hoạt động của amíp

+ Dùng dung dịch cô định và lưu giữ kề trên, dung dịch formol 10% chỉ giữ

Đối vối dạng hoạt động của trùng roi đưòng ruột:

Những cách kể tr ên đều dùng được nhưng không tốt vì những dạng hoạt động thường thu tròn lại, không thấy được như khi quan sát trực tiêp Dung dịch tương đôi tốt là MIF, F2AM

3.2 G iun, s á n t r ư ở n g th à n h

a) Giun, sá n tìm th ấ y đ ã ch ết tro n g p h â n

- ít có giá trị vì chúng thường đã bị hủy hoại

- Hóa chất thường dùng là formol 5% hoặc cồn ethylic 70°

19

b) Giun, sá n còn số n g tro n g p h â n

- Rửa bằng nước muối sinh lý

- Phương thức cô’ định thay đổi tùy theo loại giun, sán:

+ Giun:

* Lấy giun ra khỏi nưốc rửa đế’ trong hộp Petri hay bát sử

* Đổ ngay cồn ethylic 70° sôi (đun sôi cồn trong bình Erlenmeyer có khuấy từ) Cách cô định này làm giãn giun ngay lập tức

* Giữ trong bình thủy tinh có nút mài Không đậy bằng nút bấc hay cao

su vì sẽ làm hư mẫu mau chóng

L ư u ý:

* Không cô định bằng cồn lạnh.

* Không làm chết giun trong NaCl 0,85%

* Không dùng dung dịch formol

+ Sán dây và sán lá:

* Kẹp sán giữa 2 lam kính ở trạng thái trải rộng, để cả trong hộp Petri lớn

* Cho dung dịch cô định;

- Phải dán nhãn, viết ngày bằng bút mực tàu, bút mỡ

- Để cả lô vào bình có nắp, dưói lót bông thấm nước, đổ đầy cồn ethylic 70°, đậy nắp Tránh cồn bay hơi (nắp phải có vòng cao su)

3.3 N h ữ n g đ iể u c ầ n b iế t k h i lưu g iữ KST lâ u d à i

- Giun mất độ trong và màu tự nhiên: khi bị cô định trở nên đục và hđi trắng nhưng giữ đưỢc rất lâu trong cồn

- Trứng giun, sán thì dễ nhận nhưng không giông hệt như trong phân tưđi Vài loại trứng như trứng giun đũa, trứng giun móc sẽ bị phân bào nêu dung dịch

cô định không đủ nồng độ (dạng phân bào không bao giờ gặp trong phân tươi)

- Bào nang đơn bào ở dạng tươi thì nhân có màu kém Sau một thòi gian lưu, những nhân này không nhuộm màu nhưng lại rõ hơn là ở trạng thái tươi.

- Dạng hoạt động của amíp mất nhanh chóng độ chiết quang trong dung

dịch formol

- Trong MIF, amíp không bị ly giải, nhận ra dễ Ngược lại, sau khi để trên lam kính và đậy bằng lá kính, màu của chúng biến mất, không thể dùng làm mẫu để lâu dài trên lam kính và lá kính

CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ

1 Thế nào là thu thập phân đúng quy cách?

2 Đối vối anh (chị), điều gì quan trọng trong khâu thu thập phân?

3 Theo anh (chị) hiện nay, các phòng xét nghiệm trong nước ta có chú trọng đến việc lấy bệnh phẩm? và kết quả của việc có/không chú trọng đến việc lấy bệnh phẩm là gì?

4 Bảo quản bệnh phẩm có ích lợi gì?

5 Nêu tên những hóa chất bảo quản phân thường được dùng, cho biết ưu và nhược điểm của từng hóa chất bảo quản được nêu

6 Cách bảo quản đơn bào khác với cách bảo quản giun, sán như thê nào?

7 Hóa chất bảo quản có ảnh hưởng gì đến KST khi KST được ngâm trong thòi gian lâu dài?

21

B à i 4

KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM PHÂN TÌM KÝ SINH TRÙNG ■ •

MỤC TÍÊU

Ị Mồ tậ ậựợc quy trình xét nghiệm phân.

2 Lầm được xét nghiệm phân bằng phương pháp trực tiếp.

I ĐẠ I CƯƠNG

Trong phòng xét nghiệm, khi nhận được bệnh phẩm, nếu là phân tươi không có chất bảo quản, chúng ta cần quan sát bằng mắt (đại thể) trưổc để có được những n h ậ n xét sơ bộ về mẫu phân, ghi nhận những đặc tính của mẫu phân, phân loại bệnh phẩm để xét nghiệm: mẫu phân lỏng, có chất nhày, máu phải xét nghiệm ngay

Không nên đế phân ngoài trời, không có nắp đậy; không nên để lọ phân trên phiếu xét nghiệm hoặc để dồn mẫu vào cuôi buổi mối xét nghiệm

Đôi vái phân được bảo quản trong dung dịch cố định thì quan sát đại thể không thực hiện được

Để phát hiện được KST chúng ta cần phải dùng kính hiển vi để quan sát (vi thể)

I.3 Các c h ấ t la

- Chất nhày: thường đục, có thể kết thành sỢi, hình dáng giống như ký sinh trùng Chất này được xem xét cẩn thận đề tìm các đơn bào, các trứng Schistosoma.

- Mô liên kết: màu tráng như xà cừ Xem dưói kính hiển vi sau khi làm

trong với acid acetic sẽ thấy những sỢi dài

- Máu: chỉ cần ghi nhận sự hiện diện máu tươi hoặc đã được tiêu hóa làm

phân có màu đen đều

- Mủ: gồm có nhiều bạch cầu đã biến dạng.

- Các cặn bã thực vật chưa tiêu hóa, thường dưói hình thức sỢi

2 QUAN SÁT VI THỂ

Quan sát vi thể có thể được thực hiện vối kỹ t h u ậ t xét nghiệm phân trực tiếp, tập trung KST trong phân, kỹ thuật chuyên biệt, cấy và nhuộm cố định

II KỸ TH U Ậ T X É T NGHIỆM PHÂN TRựC TIẾ P• • •

Kỹ thuật xét nghiệm phân trực tiếp sử dụng phân hòa ta n trong nưóc muối cho phép phát hiện sự di động của thể hoạt động đơn bào, trứng giun, sán, ấu trùng giun và các vật thể bất thưòng ti-ong phân (hồng cầu, bạch cầu, ),

- Cho kết quả nhanh chóng và chính xác

- Không đòi hỏi dụng cụ, hóa chất đắt tiền

3 QUY TRÌNH LÀM TIÊU BAN PHÂN

® Lấy một tấm lam kính sạch, khô Dùng viết chì sáp chia lam kính ra làm

3 phần Ghi tên bệnh nhân vào ô nhỏ ở đầu lam kính

® Nhỏ lên lam kính 1 giọt NaCl 0,85% vào ô giữa, 1 giọt Lugol ở ô cuối.

(D Dùng que gỗ lấy một ít phân bằng đầu que diêm, hòa tan phân vào giọt NaCl 0,85%

® Lấy phân lần thứ hai rồi hòa tan phân vào giọt Lugol

® Bỏ que gỗ vào dung dịch sát trùng.

® Đậy lá kính lên 2 giọt phân

® Khảo sát tiêu bản dưói kính hiển

- Không quá mỏng: ít phân quá sẽ không tìm thấy KST, trừ khi chúng quá nhiều.

- Tiêu bản có dộ dày vừa phải khi thấy được chữ in trên tờ báo đặt dưối tiêu bản

- Tiêu bản không có bọt khí, dung dịch phân không trà n ra quanh lá kính

5 KHẢO SÁT TIÊU BẢN DƯỚI KÍNH HIỂN VI

- Khảo sát tiêu bản phân bằng vật kính xio, khi muốn nhìn rõ chi tiết thì

- Nên để ánh sáng vừa phải.

- Mẫu phân được xét nghiệm càng sớm càng to't, để lâu KST sẽ chết hoặc thay đổi hình dạng, khó xác định

- Mẫu phân tìm trứng giun, sán: không để quá 10 giò

- Mẫu phân tìm đđn bào; không để quá 2 giđ,

6 NHỮNG SAI LẨM NÊN TRÁNH

- Phết phân không đều, chỗ dày, chỗ mỏng

- Nếu phết phân loãng quá hoặc đặc quá, nên bỏ đi, làm lại phết phân khác

- Đậy lá kính làm tiêu bản có bọt khí

- Dung dịch phân tràn ra xung quanh lá kính

- Quên không đặt lá kính lên phết phân thì phết phân sẽ chóng khô, vật kính bị bẩn và màu nhuộm sẽ nh ạt rất nhanh

- Dùng nưỏc thưòng để hòa tan phân thay vì dùng dung dịch NaCl 0,85%, nước thường sẽ làm biến dạng hay hủy hoại thể hoạt động của đơn bào

- Dùng nhiều ánh sáng quá Nên đế tụ kính gần vối bàn kính Giảm ánh sáng bằng cách đóng bớt màng chắn sáng hay dùng kính lọc màu xanh da tròi lấy ánh sáng

25

7 CÁCH TRẢ LỜI KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM PHÂN

Trên phiếu trả lòi kết quả xét nghiệm phân, phải ghi các nội dung sau:

- Đặc tính của phân: phân cứng, mềm, nhão, có khuôn, lỏng,

- Màu sắc của phân: vàng, xanh, nâu, đen,

- Các yêu tô bất thường thấy được bằng mắt: chất nhày, máu, đôt sán,

- Kỹ thuật sử dụng: soi trực tiếp, kỹ th u ật tập trung Willis,

- Kết quả;

+ Âm tính; tìm không thấy trứng và bào nang của KST đường ruột

+ Dưdng tính, viết ra các chi tiết sau;

* Tên tiếng Việt và tên khoa học của KST

* Trứng, thể hoạt động, bào nang, ấu trùng

* Mật độ nhiễm trên tiêu bản:

8.2 D ụ n g cụ

- Lam kính; cho vào dung dịch sát trùng, hấp khử trùng, rửa nưốc thường cho sạch, ngâm vào xà bông, rửa sạch, ngâm trong dung dịch acid sulfochromic

24 giờ Rửa lại bằng nưóc thường, tráng lại bằng nước cất, sấy khô

- Lá kính; rửa tương tự như lam kính nhưng chỉ sấy khô ở 60°c.

CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ

1 Mô tả kỹ th u ật làm tiêu bản phân để soi trực tiếp tìm KST

2 Nêu những sai lầm có thể gặp khi làm tiêu bản phân soi trực tiêp

3 Trình bày cách ghi phiếu trả lời kết quả xét nghiệm phân

trên phiếu xét nghiệm.

giọt Lugol.

Lượng dung dịch vừa đủ, 2 giọt nước không quá gần hoặc quá xa.

không quá dày, không quá mỏng.

không quá dày, không quá mỏng.

6 Đậy lá kính. Không có bọt khí, bọt nước Dung dịch phân

không tràn ra mép lá kính.

27

B à i 5

MỤC TIÊU

1 Nêu được ý nghĩa và nguyên lý của các phương pháp tập trung phân,

2 Làm đúng quy trinh tập trung K ST trong phân bằng kỹ thuật lắng cặn với formal - ether, làm nổi với nước muôi bão hòa (Willis) và với sulfat kẽm.

3 Nhận biết được những sai sót trong thao tác làm tập trung K ST trong phân.

Tập trung KST trong phân là một phương pháp thường quy để chẩn đoán bệnh nhiễm KST, cho phép phát hiện thêm một sô mầm bệnh mà xét nghiệm trực tiếp không phát hiện được

Kỹ thuật tập trung KST trong phân có mục đích là tách KST ra khỏi các chất cặn bã Có 2 cách; làm nổi KST và làm láng KST xuông đáy ống nghiệm

Kỹ thuật này có thể sử dụng phân tưđi hoặc cố định, độ phóng đại thấp (100

và 400 lần) để quan sát tiêu bản, phát hiện được trứng và ấu trùng giun, sán, bào nang đơn bào, trứng nang của trùng bào tử

1 PHƯƠNG PHÁP LÀM NỔI

Trong phương pháp làm nổi, dùng một dung dịch hoăc hỗn hdp có tỷ trone cao hơn tỷ trọng của các bào nang, trứng giun, sán làm cho chúng nôi lên mặt nước, chất bã lắng xuông đáy ống nghiệm Tiêu bản soi sạch, ít cặn, nhưng có một sô trứng giun, sán không nôi mà chìm xuông đáv như trứng giun đũa, trứng

có nắp Vì vậy, với phương pháp làm nổi, cần soi luôn cặn dế không bỏ sót KST

1.1 Kỷ t h u ậ t d ù n g n ư ớ c m u ô i b â o h ò a (P h ư ơ n g p h á p W illis)

- Phương pháp này được dùng đế tìm trứng các loại giun, sán trong phân: trứng giun móc (rất tốt), giun đũa, giun tóc, trứng sán dải (dây) và sán dải (dây)

Hymenolepis sp.

- Không dùng đê tìm trứng sán iá, sán máng, ấu trùng giun lươn, bào nang

và thể hoạt dộng của dơn bào

a) N guyên tắc

Phân được hòa tan trong nước muối bão hòa Trứng giun, sán có tỷ trọng nhẹ hđn tỷ trọng của nước muối bão hòa nên nổi trên mặt nước, dính vào thủy tinh (lá kính) và được lấy ra để quan sát dưới kính hiển vi

Hoặc cho muôi vào trong nưâc cho đến khi muối không còn tan được nữa, ta

có dung dịch nưỏc muôi bão hòa,

+ Dung dịch cồn — ether

Cồn ethylic 95° lOml

* Rửa lá kính sạch dầu, mỡ bằng cồn - ether :

® Đổ dung dịch cồn — ether vào hộp Petri

® Cho lá kính từng chiếc vào hộp Petri, ngâm trong 10 phút.

@ Lấy ra lau khô từng chiếc và cất trong hộp Petri đế dùng dần

d) Quy tr ìn h kỹ th u ậ t

© Cho khoảng 5g phân vào lọ penicilin hoặc ô’ng nghiệm

@ Đổ vào lọ một ít nước muôi bão hòa, khoảng 1/3 lọ

(D Dùng que khuấy tan phân trong nước muôi

® Cho thêm nước muôi bão hòa vào đến khi mực nưốc ngang miệng lọ.(I) Vốt bỏ các cặn bã nổi lên mặt nước

® Nhỏ thêm vài giọt nước muôi bão hòa vào lọ cho đến khi mặt nưóc congvồng lên (không để nước muối tràn miệng lọ)

® Đậv lá kính lên miệng lọ, tránh có bọt khí giữa lá kính và mặt nước

29

(D Để yên trong khoảng 10 phút.

® Nhấc thảng lá kính lên (lá kính mang theo giọt nước muôi ở mặt dưới) và đặt lên lam kính

® Khảo sát tiêu bản dưới kínhrhiển vi

Hỉnh 5.1 Mô tả các bước chính của quy trình tập trung kỷ sinh trùng trong phân

bằng kỹ thuật dừng nước muối bão hòa

L ư u ý:

- Nếu thời gian để ngắn quá trứng sẽ chưa nổi lên.

- Nếu để lâu quá trứng sẽ ngấm nước muôi và chìm xuông đáy

- Thời gian dài hay ngắn tùy theo độ cao của ông nghiệm hoặc chai lọ khi sử dụng Tốt nhất nên thử thòi gian trứng nổi vỏi ống nghiệm và chai lọ khác nhau

a) N guyên tắc

Phân được hòa tan trong dung dịch sulfat kẽm bão hòa, có tỷ trọng 1,18 Trứng giun, sán có tỷ trọng nhẹ hđn nên nổi trên mặt nước và đưỢc vót ra để quan sát dưối kính hiển vi

Dung dịch Sulfat kẽm bão hoà;

- Sulfat kẽm (ZnSO^) 330g (garcia)

d) Q uy tr ìn h kỹ th u ậ t

® Hòa tan 5g phân với 2 - 3ml nưốc trong ô"ng nghiệm

® Thêm nước cho đủ lOml

d) Lọc dung dịch trên qua tấm gạc vào ống ly tâm

® Ly tâm 2000 vòng/phút trong 2 phút, đổ bỏ phần nước trong bên trên

® Cho vào ống ly tâm một ít dung dịch Sulfat kẽm, khuấy đều, tiếp tục cho thêm dung dịch Sulfat kẽm vào ông cho đến cách miệng ống nghiệm khoảng 2 - 3cm

31

2.1 P h ư ơ n g p h á p lắ n g t r ọ n g lực

a) N guyền tắc

- Mẫu phân được hòa tan với nước và để lắng tự nhiên Trong cặn lắng có

chứa tất cả KST có trong phân

- Phương pháp này cho phép phát hiện các loại trứụg giun, ấu trùng và trứng sán máng (trong trường hỢp nước có pha glycerin)

® Dùng nước hoặc nước có pha glycerin 0,5%

@ Khuấy đểu phân trong ly có chân

@ Đe lắng khoảng 1 giò

® Đổ bỏ phần nưốc nổi bên trên

<ề) Thêm nước, khuấy đểu, đế lắng 1 giờ, gạn bỏ phần nước nổi.

® Lập lại nhiều lần cho đến khi nước bên trên trong hẳn

- Ong nghiệm ly tâm 15ml

® Dùng que gỗ lấy khoảng 5g phân cho vào trong ông ly tâm

@ Cho 7ml dung dịch formol 10% vào ống ly tâm

® Hòa tan phân và lọc phân qua lưối lọc vào ông ly tâm khác hoặc vào cốc có mỏ.

® Ly tâm 2000 vòng/phút trong 1 - 2 phút Hút bỏ phần nước nổi Có thể lặp lại nhiều lần cho đến khi phần nước nổi trong

'ế) Cho lOml dung dịch formol 10% và 3ml ether vào trong ông ly tâm.

® Đậy ống nghiệm bằng nút cao su, trộn đều bằng cách lắc mạnh trong vòng 10 giây

@ Mở nắp cao su, cho ông nghiệm vào máy ly tâm, quay 2000 vòng/phút trong 1 — 2 phút

® Lấy Ống nghiệm ra khỏi máy ly tâm, chất dịch trong ống nghiệm đưỢc chia

Ether, ethyl acetat hoặc xăng là dung môi rấ t dễ bay hơi và dễ cháy nên đế

xa nguồn điện, nguồn lửa Bảo quản các chất này trong bình hoặc chai lọ rộng,

để nơi thoáng mát Không đặt các bình chứa Ether vào tủ lạnh, hơi Ether sẽ thoát ra và gây nổ

33

Hình 5.2 Mô tả 8, 9 của quy trình tập trung ký sinh ỉrùng bằng phương pháp ly tâm

CÀU HỎI LƯỢNG GIÁ

1 Mục đích của phương pháp tập trung KST trong phân là gì?

2 Có bao nhiêu phương pháp làm tập trung KST trong phân?

3 Nêu ưu và nhưỢc điểm của kỹ th u ậ t Willis và kỹ th u ậ t dùng formol-ether

4 Anh (chị) sẽ chọn kỹ th u ậ t nào để làm tập trung phân? Cho biết lý do của

sự chọn lựa uày

x ẻ t n g h iệm p h ả n theo p h ư ơ n g p h á p tậ p tr u n g W ills

bản phân.

Dụng cụ và hóa chất đầy đủ để làm tiêu bản phân.

Không có bọt khí, bọt nước Dung dịch phân tiếp xúc với lá kính ở vị trí cân đối trong thời gian 15 phút.

Xét n g h iệ m p h â n theo p h ư ơ n g p h á p tậ p tr u n g fo rm o l-e th e r

bản phân.

Dụng cụ và hóa chất đầy đủ để làm tiêu bản phân.

với formol và ether.

Nắp phải đậy kín và lắc mạnh ống nghiệm

trong 10 giây.

phút Lấy ống nghiệm ra khỏi máy ly tâm.

Lấy cẩn thận, không làm xáo trộn các lớp dịch trong ống nghiệm.

nguyên vẹn, không bị nát vụn.

nhanh ống nghiệm xuống.

Sau khi đổ bỏ phần nước nổi, cặn không bị xáo trộn.

35

B à i 6

CÁC KỸ THUẬT CHUYÊN BIỆT■ ■

ĐỂ PHÁT HIỆN KÝ SINH TRÙNG ĐƯỜNG RUỘT

MỤC TIÊU

1 Nêu được nguyên tắc của kỹ thuật chẩn đoán bệnh giun kim.

2 Làm được kỹ thuật Graham (băng dính) tim trứng giun kim.

3 Làm được kỹ thuật Baermann đ ể tìm ấu trùng giun lươn.

Trong một số trường hỢp, do đặc điểm sinh học riêng biệt của một số loại giun, sán, đơn bào mà các phương pháp xét nghiệm thông thường không thể hoậc thỉnh thoảng mới phát hiện mầm bệnh trong phân

Để khắc phục tình trạng này, người ta đã nghiên cứu đưa ra các phương pháp xét nghiệm đặc thù phù hdp với những đặc điểm sinh học của từng loại KST

1 XÉT NGHIỆM TÌM TRỨNG GIUN KIM

1.1 P h ư ơ n g p h á p GRAHAM (P h ư ơ n g p h á p b ă n g d ín h tr o n g )

a) N guyên tắc

Trứng giun kim thường được tìm thấy ở các nếp nhăn hậu môn, rất hiếm khi tìm thấy trong phân Vì vậv, phêt hậu môn bằng kco dính được dùng để thu thập trứng giun kim Kỹ thuật này phải dược thực hiện buổi sáng sớm trước khi trẻ làm vệ sinh hậu môn

- Băng keo trong

- Cây đè lưỡi hoặc muỗng dài lOcm

- Bông sạch

- Găng tay

® Giữ chặt tất cả bằng bàn tay phải.

(ế) Tay trái vạch hậu môn của trẻ, tay phải cầm cây đè lưỡi có dán băng keo

án nhẹ, lật qua lật lại cây đè lưỡi chung quanh rìa hậu môn

® Dán miếng băng keo lên mặt lam kính, dùng bông khô và sạch chà nhẹ miết chặt miếng băng keo xuông mặt lam kính

© Khảo sát tiêu bản dưới kính hiển vi

C hú ý: Phải luôn mang găng tay trong suôt quá trình thao tác, tr á n h bị

37

- Que tăm bông

- Nước muôi NaCl 0,85%

- Găng tay

b) Quy tr in h k ỹ th u ậ t

0 Dùng que tăm bông xoay chung quanh nếp nhăn hậu môn

® Cho que tàm bông vào trong ông nghiệm có chứa 0,5ml NaCl 0,85%, rửa

kỹ que tăm bông vào trong dung dịch nưốc muôi

@ Dùng ông hút Pasteur hút nưóc muối ra lam kính, đậy lá kính và khảo sát dưối kính hiển vi

C hú ý: Phải luôn mang găng tay trong suô”t quá trình thao tác, tránh bị

nhiễm KST

® S au khi thu th ập trứng, cho tâm bổng và o ống nghíộm

(3) Lấy 1 giọt từ Ống n ghiệm nhồ lén lam kính, soi dưới kính hiẩn vi Hình 6.2 Phương pháp GRAHAM biến đổi

(Nguồn: Manual of Basic techniques for a health laboratory - 2""^ edition WHO)

2 TÌM ẤU TRÙNG GIUN LƯƠN (PHƯƠNG PHÁP BAERMANN)

2.1 N g u y ê n tắ c

Àu trùng giun lươn có ái tính với nhiệt độ và ẩm độ cao và bị thu hút vê nơi

có nưốc ấm

2.2 D ụ n g cụ

- 1 giá được gắn với thanh kim loại

trên chân vững chắc (loại chân thường

dùng để gắn buret)

- Phễu thủy tinh hoặc plastic

- Lưỏi lọc kim loại

- 1 ôVig cao su mềm lắp vừa vào phễu

© Đặt phễu thủy tinh hoặc plastic lên giá

(D Đặt lưới kim loại lên phễu

® Lắp Ống cao su vào phễu

® Kẹp chặt ông cao su lại

b) T h a o tác

® Trên lưỏi kim loại đặt 2 miếng gạc

(D Nếu phân lỏng, lót dưới miếng gạc 2 lốp giấy thấm,

d) Đổ khoảng 150g phân tươi lên miếng gạc trên phễu

® Đổ vào phễu nưóc ấm 45“C sao cho nước vừa sấp miệng phễu và ngập phân (D Dùng bóng đèn rọi vào phễu đê giữ nhiệt độ của nưâc

© Để yên từ 1 - 3 giò

0 Mở kẹp khóa ống cao su hứng nưốc vào cốc thủy tinh

(D Dùng ống h ú t Pasteur hút nước vào ống ly tâm

39