A • Bộ ẹ KỸ SINH TRỈIIVG THỮC HAMH ị Chủ biên: PGS TS LẼ THỊ XUÂN ;GHN )284 N H À XU Ấ T’BẢN g iá o d ụ c BỘ Y TẾ ■ GIÁO TRÌNH KÝ SINH TRÙNG THỰC HÀNH (DÙNG CHO ĐÀO TẠỌ c NHÂN XÉT NGHIỆM) MÃ SỐ; DK.01.Z.15 NHÀ XUẤT BẢN GIÁO DỤC H À NỘI - 2008 Chỉ đạo biên soạn: VỤ KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ Chủ biên: PGS TS LÊ THI XUÂN Những người biên soạn: CN VÕ THỊ MỸ DƯNG CN NGUYỄN THỊ HIỆN CN TRỊNH TUYẾT HUỆ CN NGUYỄN HỒ PHƯƠNG LIÊN PGS.TS LÊ THI XUÂN Tham gia tổ chức thảo: ThS PHÍ VĂN THÂM TS NGUYỄN MANH PHA © Bản thuộc Bộ Y tế (Vụ Khoa học Đào tạo) 965 - 2008/CXB/2 - 1917/GD Mã số : 7K789Y8 - DAI LỜI GIỚI THIỆU Thực số điều Luật Giáo dục, Bộ Giáo dục & Đào tạo Bộ Y tế ban hành chvíơng trình khung đào tạo c n h â n xét nghiệm Bộ Y tế tổ chức biên soạn tài liệu dạy - học môn sở chuyên môn theo chương trình nhằm bưốc xây dựng sách đạt chuẩn chuyên môn công tác đào tạo nhân lực y tế Giáo trình KÝ SINH TRÙNG THựC HÀNH biên soạn dựa vào chương trình giáo dục Trường Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh sở chương trình khung phê duyệt Giáo trình PGS.TS Lê Thị Xuân (Chủ biên), CN Võ Thị Mỹ Dung, CN Nguyễn Thị Hiện, CN Trịnh Tuyết Huệ, CN Nguyễn Hồ Phương Liên biên soạn theo phương châm: kiến thức bản, hệ thốhg; nội dung xác, khoa học; cập nhật tiến khoa học, kỹ thuật đại thực tiễn Việt Nam Giáo trình KÝ SINH TRỪNG THựC HÀNH đă Hội đồng chuyên môn thẩm định sách tài liệu dạy - học chuyên ngành c nhân xét nghiệm Bộ Y tế thẩm định năm 2008 Bộ Y tê định ban hành tài liệu dạy - học đạt chuẩn chuyên mơn ngành giai đoạn Trong thòi gian từ đến năm, sách phải chỉnh lý, bổ sung cập nhật Bộ Y tê chân thành cảm ơn tác giả Hội đồng chuyên mơn thẩm định giúp hồn thành sách; cảm ơn PGS.TS Vũ Đức Chính, PGS.TS Hồng Tân Dần đọc phản biện đế sách sớm hoàn thành, kịp thòi phục vụ cho cơng tác đào tạo nhân lực y tế Lần đầu xuất bản, mong nhận ý kiến đóng góp đồng nghiệp, bạn sinh viên độc giả để lần xuất sau sách hoàn thiện VỤ KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO - BỘ Y TẾ LỊI NĨI ĐẦU Giáo trình Ký s in h t r ù n g th ự c h n h biên soạn cho sinh viên khoa Kỹ thuật Y học có mục đích hưống dẫn cho sinh viên học mơn Ký sinh trùng nhằm hồn thiện khả chẩn đốn dựa sô' thông tin lâm sàng xét nghiệm bệnh phẩm cách xem kính hiển vi, cấy Một số kỹ thuật miễn dịch để cập đến Giáo trình gồm có ba phần: P h ầ n m ơt: Phần kỹ thuật trình bày kỹ thuật xét nghiệm bao gồm phương pháp thu thập, bảo quản, xử lý bệnh phẩm P h ầ n hai: Định danh, gồm hình ảnh ký sinh trùng vi nấm gây bệnh thường gặp ỏ nước ta Ngoài việc sinh viên phải nắm vững kỹ thuật giới thiệu, điều quan tâm sinh viên phải biết ưu, nhược điểm phương pháp chọn, phải hiểu ích lợi hạn chế Sinh viên cần phải biết lựa chọn phương pháp chẩn đoán phù hợp vối loại ký sinh trùng loại bệnh phẩm Nội dung kỹ thuật trình bày giáo trình khơng đầy đủ, chứa đựng phương pháp phổ biến đủ dùng cho phòng xét nghiệm lâm sàng nước ta Trong giáo trình này, chúng tơi gắng trình bày điểm đặc trưng hình thể để phân biệt ký sinh trùng giải thích làm để xác định chung P hần ba: Phụ lục, giới thiệu hóa chất thưòng dùng xét nghiệm ký sinh trùng đường ruột; hóa chất, thuốc nhuộm mơi trường xét nghiệm nấm Những hình ảnh minh họa, khơng hoàn chỉnh đầy đủ số lượng chất lượng, cung cấp cách khái quát vể hình thái ký sinh trùng vi nấm kỹ thuật phát chúng Các tác giả người làm việc phòng thí nghiệm nhiều năm qua có kinh nghiệm giảng dạy vê môn Ký sinh trùng, hy vọng cuôn sách cung cấp thơng tin có giá trị cho sinh viên nhằm giúp họ có kiến thức thực tiễn chẩn đốn ký sinh trùng, giúp cho việc phòng, chữa bệnh đạt hiệu Do trình độ thòi gian có hạn, chúng tơi khơng tránh khỏi thiếu sót chun mơn in ấn, mong nhận góp ý sinh viên đồng nghiệp để lần xuất sau giáo trình hoàn thiện Xin chân th ành cảm đn CÁC TÁC GIẢ MỤC LỤC ỉ^òi giới thiệu Lòi nói d ầ u Í^HẨN MỘT KỸ THUẬT Bài Cách sử dụng bảo quản kính hiển v i Bài Cách chuẩn độ kính hiển vi 10 Bài Thu thập bảo quản phân đế xét nghiệm tìm kýsinh trù n g 13 Bài Kỹ thuật xét nghiệm phân tìm ký sinh t r ù n g .22 Bài Kỹ thuật tập trung ký sinh trùng p hân .28 Bài Các kỹ thuật chuyên biệt để phát ký sinh trùng đưòng r u ộ t 36 Bài Cấy phân 41 Bài Các kỹ thuật nhuộm mẫu p h â n 44 Bài ước lượng số giun cách đếm trứng 52 Bài 10 Kỹ thuật tìm mỡ p h â n 59 Bài 11 Kỹ thuật tìm máu phân .61 Bài 12 Kỹ thuật làm máu mỏng giọt máu dày 65 Bài 13 Kỹ thuật nhuộm tiêu máu tìm ký sinh trùng sơt r é t 71 Bài 14 Kỹ thuật khảo sát tiêu m áu 76 Bài 15 Kỹ thuật xét nghiệm tìm giun m u 80 Bài 16 Phưdng pháp chẩn đoán băng kỹ thuật miễn dịch học 82 Bài 17 Phương pháp điểu tra tiết túc 89 Bài 18 Kỹ thuật bảo quản chuyên chở tiết tú c 94 Bài 19 Phương pháp làm tiêu tiết t ú c 97 Bài 20 Kỹ thuật mổ muỗi 103 Bài 21 Đại cương xét nghiệm vi n ấ m 107 Bài 22 Kỹ thuật xét nghiệm tìm n ấ m 112 Bài 23 Kỹ thuật cấy n ấ m 118 PHẨN HAI ĐỊNH DANH 127 Bài Bài Bài Bài Bài 24 25 26 27 28 Hình ấu trùng giun trưởng t h n h 127 Nhận dạng loại sán l .137 Nhận dạng loại sán dải (sán dây) 143 Hình thể trứng giun, sán thường gặp 149 Đơn bào đường r u ộ t 158 Bài Bài Bài Bài íĩài Bài Bài Bài Bài 29, 30 31 32 33 34 35 36 37 Những vật thể tìm thấy phân 171 Hình thể ký sinh trùng sốt rét ỏ người 173 Hình thể tiết túc V học 186 Chẩn đốn vi nấm ngồi d a 207 Chẩn đoán vi nấm ngoại b iên 213 Chẩn đoán vi nấm Candida 215 Chẩn đoán vi nấm Aspergillus 220 Chẩn đoán vi nấm Cryptococcus 222 Vi nấm hoại s i n h 224 PHẦN BA PHỤ LỤ C 232 Phụ lục Các hóa chất thường dùng xét nghiệm ký sinh trùng đường ru ộ t 232 Phụ lục Hóa chất - thuốc nhuộm - môi trường xét nghiệm n ấ m 235 PHẦN MỘT KỸ THUẬT Bài CÁCH SỬ DỤNG VÀ BẢO QUẢN KÍNH HIỂN VI MỤC TIÊU Đa số ký sinh trùng (KST) nhận thấy mắt thưòng mà cần có dụng cụ quang học để phóng đại chúng lên kính lúp, kính hiển vi Tùy theo yêu cầu kỹ thuật, kính hiển vi cần có phụ tùng để đo kích thước KST, tụ quang nển đen, NHẮC LẠI CẤU TRÚC CỦA KÍNH HIỂN VI Kính hiển vi công cụ thường dùng quan trọng phòng xét nghiệm KST Kính hiển vi có hình dạng khác tùy theo mẫu sản xuất, cấu tạo giông nhau, gồm có phận: ® Thị kính thấu kính nằm phía đế mắt nhìn ảnh qua vật kính Có loại thị kính x5, xio , Xl5; loại x i o thường dùng nhiều (D Ơng kính ống mà ánh sáng phải qua từ vật kính đến thị kính có chức giữ thị kính vật kính nằm cách khoảng định @ Đĩa mang vật kính phận có lỗ để gắn vật kính, xoay đưa vật kính cần sử dụng vào ơng kính @ Vật kính: ánh sáng qua vật quan sát đến thấu kính Có loại vật kính, thường dùng loại; - Vật kính xlO: có thị trường lỏn nhất, sau điểu chỉnh dể thấy rõ mẫu vật, vật kính thưòng cách kính mang vật khoảng 16mm Vật kính X 40: có độ phóng đại trung bình, sau điều chỉnh đê thấy rõ mẫu vật, vật kính thường cách kính mang vật khoảng 4mm - - Vật kính xlOO: có độ phóng đại lớn nhất, sau điêu chỉnh để thấy rõ mẫu vật, vật kính thường cách kính mang vật khoảng Imm s dụng vật kính vối dầu soi kính dùng ơ"c vi cấp để điều chỉnh ® Kính tụ quang; tập trung ánh sáng (D Màng chắn ánh sáng: ánh sáng qua nhiều hay để vào vật kính ® Gưđng tròn dùng để lấy ánh sáng, thường có mặt: - Mặt lõm: sử dụng vật kính xio, x40 - Mặt phẳng: sử dụng vật kính xioo Những loại kính dùng ánh sáng bóng đèn gán thân máy khơng có gương (D Tiểu xa: dùng để giữ tiêu gắn vỏi trục có ốc dùng để di chuyến sang trái, sang phải ốc dùng để di chuyển phía trưốc, sau (D Thân kính mang ơng kính, bàn mang mẫu vật, kính tụ quang, ốc vi cấp, ốc thứ cấp gương ® Chân: có chức giữ cho kính đưỢc vững ổn định DTa m a n g v ệ l kirth Vật kính Thân kính Tiểu xa Bàn mang mẫu vật Tụ quang Ốc thứ cấp Ôc vi cấp ốc chỉnh chắn sáng Đèn Ốc di chuyển tiểu xa Chân Dây điện Ốc chỉnh độ sáng Cấu tạo kính hiển vỉ quang học CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI ® Đặt tiêu lên bàn mang tiêu (2) Điều chỉnh ánh sáng với gương tròn, kính tụ quang chắn sáng @ Xoay trục mang vật kính xio vào vị trí ® Vặn ốc thứ cấp để thây rõ vật Nếu cần quan sát với độ phóng đại lớn đổi qua vật kính lớn x40, dùng ốc vi cấp để điều chỉnh đến thấy rõ vật Khi sử dụng vật kính xioo, ta phải dùng dầu soi kính Nhỏ giọt dầu lên tiêu đổi qua vật kính xioo CÁCH BẢO QUẢN KÍNH HIEN VI COĐặt kính hiển vi chỗ, xa nóng chỗ ẩm ướt (D Cầm kính hiển VI thân kính, tay đỡ chân kính Phải để đứng kính hiển vi, khơng để kính nghiêng @ Cẩn thận khơng làm rơi chất ăn mòn hay dung dịch lên bàn kính @ Khơng để tay ướt hay bẩn lên kính hiển vi ® Lau thị kính vật kính giấy lau kính trước sau dùng Khi SOI với vật kính dầu, thâ'm giấy lau kính với giọt xylen để lau vật kính Sau lau với xylen, phải lau khơ giấy lau kính, khơng xylen làm bong thấu kính gắn vật kính ® Trước cất kính hiển vi, đế vật kính nhỏ vị trí quan sát hạ thấp ơ"ng kính ôc lớn Vặn nhẹ nhàng, đừng ấn mạnh ống kính Nếu cẩn thận hơn, hạ tii quanp kính xviơng Nơn tụ qiiang kính hẩn, lan bnng giấy líiii kính khơ © Để gương nghiêng, mặt phẳng phía ngồi để tránh bụi (D Che kính hiển vi bao kính Cất kính vào chỗ kính, để lui vào phía trong, đừng để mâ'p mé phía ngồi CÀU HỎI LƯỢNG GIÁ Trình bày cách sử dụng kính hiển vi đế quan sát mẫu phân tươi Khi sử dụng kính hiển vi để soi lam máu, anh (chị) cần ý đến yếu tố để nhìn thấy rõ KST sơ't rét (KST SR) phết máu nhuộm? Sau soi lam máu tìm KST SR, anh (chị) bảo quản kính hiển vi trước cất vào tủ kính? B ài 22 KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM BẢN TỈM NẤM • ■ MỤC TIÊU Làm kỹ thuật khảo sát trực tiếp nấm Làm phương pháp nhuộm mực tàu, nhuộm Gram, PAS KHẢO SÁT T R ự C T I Ể P Khi q u a n s t m ẫ u n ấ m k í n h h i ể n VI, n ế u t h ấ y đưỢc n ấ m t r o n g t i ê u b ả n nhiễm n ấ m Đ ô i k h i l a có t h ề đ ị n h danh loài nấm ta thấy rõ bào tử cấu trúc đặc biệt khác loại nấm t h ì có t h ế x c đ ị n h n g i b ệ n h n h â n đ ó bị N h i i g k h i SOI t r ự c t i ế p m ộ t m ẫ u b ệ n h p h ẩ m m k h n g t ì m t h ấ y n ấ m , t a loại khả nhiễm nấm Độ nhạy phương pháp thay đổi tùy theo loại bệnh phẩm, vị trí lấy bệnh phẩm, kinh nghiệm người làm xét nghiệm 1.1 K hảo sá t với N aC l 0,85% NaCl 0,85% dược dùng vối bệnh phẩm lỏng huyết tráng, phết họng, Quy t r ì n h kỹ t h u ậ t : CO Pha lỗng bệnh phẩm dung dịch NaCl 0,85% ® Nhỏ giọt bệnh phẩm pha lỗng lên lam kính C3) Đậy kính soi dvtới kính hiển vi với vật kính xio x40 ® Kháo sát với độ sáng khác (kính tụ quang cao, thấp) để tìm vi nấm dạng sỢi hay hạt men 1.2 Với KOH 10% h o ặ c 20% • - Dung dịch KOH NaOH dùng để khảo sát bệnh phẩm rắn đậm dặc (da, tóc, móng, đàm, da, mẩu sinh thiết mô, ) - Dung dịch KOH làm mềm, căng giãn tê bào, tan hạt dầu, mỡ có bệnh phẩm Quy t r ì n h kỷ t h u ậ t : ® Trên lam kính sạch, khơ, nhỏ giọt KOH 10% 20% (D Để mẫu thử vào giọt KOH, dầm nhỏ bệnh phẩm da hay trứng tóc 112 3J Đậy kính Đơ n 15 - 30 phvU; muốn khảo sát ngay, hơ lam kính đèn cồn (khơng cho sơi) ® Khảo sát với vật kính x i o x40 1.3 Khảo sát với dung dịch phẩm xanh Lacto Phenol Coton B lue (LPCB) Thường áp dụng đế khảo sát lứa cấy nấm Acid lactic giữ vững cấu trúc vi nấm, Phenol giết nấm, xanh Coton nhuộm màu vi nấm để dễ quan sát a) Q uy t r ìn h kỹ th u ậ t ® Đật mảnh khuẩn lạc nấm lên lam kính khơ ® Nhỏ - giọt phẩm xanh LPCB @ Dùng kim cấv lấy lứa cấy dầm vào giọt dung dịch phẩm xanh LPCB ® Đậy kính Ẫ) Khảo sát dưối kính hiển vi ® Muốn lưu giữ tiêu bản, viền tiêu keo sơn móng tay Z Vi Nhỏ giọt LPCB Đăt mảnh khuẩn lạc lên !am kính / Dùng kim xé tơi nám thành mảnh nhỏ ^ / Đăt kính lên quan sát kính hiển vi Mơ tả quy trinh kỹ thuật khảo sát nấm với dung dịch phẩm xanh LPCB b) K ết quả: Các cấu trúc vi nấm bắt màu xanh tím Lacto Phenol Cotton blue PHƯƠNG PHÁP NHUỘM 2.1 N h u ộ■ m m ự• c tàu Thường dùng để khảo sát vi nấm có nang, vi nấm Cryptococcus neoformans, mực tàu không thấm vào nang tạo khoảng trơng, trắng chung quanh tế bào vi nấm 113 •-CTKSTTH a) Quy trin h kỹ th u ậ t CDTrên lam kính sạch, khơ, nhỏ giọt mực tàu ® Nhỏ giọt bệnh pham, hay lứa cấv lên giọt mực tàu (3) Đốt kim đê nguội, trộn mực tàu bệnh phẩm ® Đậy kính lên giọt mực tàu hòa với bệnh phẩm (ã) Khảo sát tiêu kính hiển vi Nếu nên mực tàu q đậm làm lỗng bớt giọt nước cất b) Kết qu ả N ế u t r o n g b ệ n h p h ẩ m có Cryptococcus neoformans: t ê b o n ấ m t r ò n h a y bầu dục, bên bao nang lỏn, nang khơng thấm màu, sáng lên đen mực tàu 2.2 N h u ô m G ram t Thường dùng để khảo sát bệnh phẩm dạng lỏng, ướt như: huyết trắng, mủ, đàm, cặn láng nước tiêu, phêt họng, a) Quy tr in h kỹ th u ậ t Kỹ thuật nhuộm giống nhuộm Gram vi trùng © Trải bệnh phẩm lên lam kính, để khơ (D Cố định cách hơ nóng ® Phủ dung dịch tím Gentian phút ® Nhỏ - giọt Na^^COa 10 giây (D ĐỔ bỏ Na^CO, ® Phủ d u n g dịch lo d phúl © Tẩy màu Acetone - giây d) Phủ dung dịch Safranin - giây (D Rửa lại nuớc cất ® Đế khơ, khảo sát kính hiển vi vỏi vậl kính dầu h) Kết Tât vi nấm bắt màu Gram dưđng Tuy nhiên có sơ vi nấm khơng giữ màu tơt, cần dùng phương pháp nhuộm Gram biến đổi 2.3 N h u ô m G ie m sa Chủ yếu nhuộm bệnh phẩm máu ngoại biên, tủy xương để vi nấm tế bào Histoplasma capsulatum, kỹ thuật nhuộm giống nhuộm phết máu bình thường 114 2.4 N h u ộ m k h n g acid Nhuộm kháng acid muốn tìm Norcardia a) Quy tr ìn h kỹ th u ậ t Phết bệnh phẩm lên lam kính, định cách hơ nóng, ® Phủ Carbon fuchsin, đế phút, d! Đơ bó Carbon fuchsin @ Nhỏ Acid sulfuric lên tiêu khơng màu Carbon fuchsin s Phủ xanh Methylen, để phút ® Rửa hong khơ ® Khảo sát với vật kính dầu b) Kết Nocardía sp bắt màu đỏ Carbon fuchsin 2.5 N h u ộ m PAS (P e r io d ic a c id Schiff) Phương pháp thường sử dụng cho mẫu mơ bệnh phẩm tìm vi nấm dạng sỢi tơ hạt men a) Quy tr ìn h kỹ th u ậ t ® Ngâm tiêu cồn ethylic 95° ® Ngâm tiêu PAS ® Ngâm tiêu Basic fuchsin Ilủa bàiig nước thường ^ Lấy tiôu nhỏ vài giọt Light green (D Rửa nước thưồng ® Ngâm vào cồn ethylic 95“ (D Ngâm vào xylen ® Hong khô phút phút phút giây 10 giây phút ® Phủ kính, dán Baumme Canada hay Permount @ Khảo sát dưỏi kính hiển vi b) Kết quả: Vi nấm bắt màu đỏ tím Hiện nay, ngưòi ta dùng chất huỳnh quang để phát nấm thuốc nhuộm Calcifluor trắng phát nấm nhanh, kế Pneumocystis carinii, xanh Toluidine nhuôm đàm để tìm p carinii 115 B ảng tó m tắ t c ác phương p h p n h u ộ m tỉm vi nấm tro n g b ện h phẩm Phương pháp nhuộm Xanh Alcian C hẩn doán Phát Oyptococcus phút neoformans DNT Phát hĩện 12 phút Acíd nhanh Mycobacteria Nocardia sp Calcofluor carinii P h t h ié n nấm p Giemsa Giemsa biến dổi Thời gian N h u ộ m tủ ỵ xương p h ế t m u n g o i bién I ưu điểm Nhược điếm T im th ấ y tro n g D N T , có dùng, độ nhạy không nghĩa tà bị viém màng não cao Phát Nocardia Blastomyces dermatitidis K h ó n h ậ n d a n g n ấ m tro n g phút Phát nhanh nhờ phát huỳnh quang Đòi hỏi kính hiển vi huỳnh quang, Khó nhặn dạng nám dịch âm đạo 15 phút Phát Histoplasma capsulatum N h u ò m đ m v nước 13 p h ú t rửa p h ế q uản mẫu mỏ Thường phát Histoplasma capsulatum b o nang P h t h iệ n th ể h o t đ ò n g Khòng nhuộm Pneumocystis carinii p cannii nhuộm nấm khác P h t h iệ n VI trù n g phút Thường dùng để phát vi trù n g vi nấm Gram T ó t đ ối với m ộ t sỏ n ấ m , m ộ t s ổ n ấ m kh c k h ô n g ăn m u h o ặ c ân m u n h t c neoformans, Nocardia spvật giả giống nấm i Thường c ó m en M ực tàu KOH Phát hiên ũyptncnocus neoíormans ^ n g DNT phút L a m tro n g nấm P h t n h a n h nấm phút h o ặ c P h t h iệ n n ấ m tro n g da X a n h M e th y lc n Methanamin bạc Papanicolaou PAS phút Phát nấm mẫu mô Người làm xét nghiêm phải có kinh nghiệm để nhản dạng nấm Thư ng th ê m K O H đ ể m Mò bị nhuộm tro n q nấm m u xa n h q iú p n h â n d a n q nấm p h t h iệ n n m dê làm cho khó Tốt để phát nấm Cần hóa chất đặc biệt thường khơng có sẳn phòng xét nghiệm ký sinh trùng, Cán hóa chất đăc biệt, nguỡi đọc tiéu phải có kinh nghiệm Phát tế bào ác tính dịch tiết 30 phút Có thể phát nấm Phát nấm nói chung 20- 25 phút Nhuộm nấm tốt, thấy rõ Nocardia khơng ân màu B derm atiiidis biến hinh, có sợi tơ nấm hạt men vật giả nhin giống nấm men Khảng đơn Nhuộm đàm nước 45 phút rửa phế quản Phát dòng gắn huỳnh quang nấm p carinii 16 Đ ộ n h y kh ô n g cao nghĩa bị viém màng não Nhuộm đàm nước 25 phút Xanh Toluidin rửa phế quản Phát nấm, p cariniị Wright Tìm th ấ y tro n g D N T , có Nhuộm tủy xương phút phết máu ngoại blèn Nhuộm bào nang p carinii Không nhuộm nấm khác Phát bào nang p carinịị Đăc hiệu cho p carinii Phát Hĩstoplasma Thường phát capsulatum Histopĩasma capsulatum CÂU HỎI LƯỢNG GIÁ Phương pháp kháo sát trực tiếp áp dụng cho loại bệnh phẩm nào? Anh (chị) cho biết loại bệnh phẩm thường phải dùng KOH để quan sát tác dụng dung dịch KOH Trìnli bày quy trình kỹ thuật làm tiêu nấm soi trực tiếp với KOH, Phương pháp nhuộm Giemsa dùng cho loại bệnh phẩm để chẩn đoán loại nấm nào? Kỹ thuật soi với mực tàu áp dụng cho loại vi nấm nào? Mô tả quy trình nhuộm hình ảnh mầm bệnh tiêu nhuộm Kỹ thuật nhuộm PAS áp dụng cho loại vi nấm nào? Mô tả quy trình nhuộm PAS hình ảnh mầm bệnh tiêu nhuộm Theo anh (chị)) nhuộm Gram có ích chẩn đốn vi nấm? Tại sao? Xét nghiệm n ấ m trực tiếp với KOH stt Yêu cẩu phải đạt Thao tác Dụng cụ hóa chất đủ để làm tiêu Chuẩn bị dụng cụ hóa chất để làm tiêu nấm Nhỏ dung dịch KOH (10 - 20%) lên lam kinh Đặt bệnh phẩm vào giọt dung dịch trẽn lam Để bệnh phẩm ngập dung dịch kính Dầm bệnh phẩm dung dịch àm bộnh phẩm cách hơ tiôu đèn cổn dung dịch bốc Soi tiêu để tìm nấm nấm Khối lượng dung dịch vừa đủ theo quy định Bệnh phẩm bị phá thành mảnh nhỏ da trứng tóc Khơng để sơi cạn khơ Thấy sợi tơ nấm (nếu có) Phương p h p n h u ộ m m ực tà u s tt Thao tác Yèu cẩu phải đạt Chuẩn bị dụng cụ hóa chất để nhuộm tiêu Dụng cụ hóa chất đầy đủ để nhuộm tiêu nấm Nhỏ giọt mực tàu lên iam kính Lam kính phải sạch, khơ Nhỏ giọt bệnh phẩm, hay lứa cấy lên giọt Để bệnh phẩm tan dung dịch mực tàu, trộn Đậy kỉnh lên giot mực tàu hòa với bệnh phẩm Bệnh phẩm khơng tràn chung quanh Khơng có bọt khí Soi tiêu để tìm nấm Thấy nấm hạt men có bao dày (nếu có) _ 17 B ài 23 KỸ THUẬT CẤY NẤM MỤC TIÊU Nêu mục đích cấy nấm Liệt kê loại môi trường cấy nấm thường dùng Chuẩn bị dụng cụ để cấy nấm Trinh bày cách khảo sát khuẩn lạc nấm Làm kỹ thuật cấy nấm thường quy phòng xét nghiệm MỤC ĐÍCH Khảo sát trực tiếp cho ta biết có nấm khơng có nấm bệnh phẩm, thường khơng cho ta biết xác loại vi nấm gây bệnh Ví dụ: - Nấm ngồi da: biết có nấm hay khơng mà - Viêm âm đạo: soi tươi huyết trắng thấy tê bào hạt men, ta biết bệnh nhân bị nhiễm nấm hạt men, tên loại nấm Nếu thấy tế bào hạt men sỢi tơ nấm giả ta biết tên giống Candida sp, không xác định tên loài M u ố i \ b i ế t c h í n h x c b ệ n l i d o l o i v i Iiấiu Iiào p h ù i i g x é t I i g l i i ệ i n p h a i Lliực cấy nấm định danh Khi cấy nấm, ta phải chọn môi trường cấy nấm thích hợp với loại bệnh phàm với loại nấm nghi ngò MƠI TRƯỜNG DÙNG ĐE CAY NÂM Có nhiều loại mơi trưòng, bao gồm mơi trường tự chê có sẵn thị trường Tùy theo loại bệnh phẩm mà ta chọn môi trường thích hỢp: - Mơi trường Sabouraud mơi trường thường sử dụng nhiều nâm Hầu hết nấm có thê mọc môi trường - Môi trường Sabouraud + kháng sinh thưòng sử dụng cho bệnh phẩm da, áp xe mô da Kháng sinh ngăn chặn nhiều vi trùng làm giảm tôc độ mọc nấm loạn nhiễm Kháng sinh thưồng dùng; Chloramphenicol (