Đồ án phân tích thực phẩm nguyên liệu súp lớ xanh

MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN 5 LỜI MỞ ĐẦU 6 Chương I: TỔNG QUAN VỀ NGUYÊN LIỆU SÚP LƠ XANH 7 1. Nguồn gốc và sự phân bố của cây súp lơ xanh 7 2. Giá trị của súp lơ 8 3. Đặc điểm của cây súp lơ xanh 9 4. Thành phần hoá học 9 5. Tình hình sản xuất và tiêu thụ súp lơ trong nước và trên thế giới. 12 Chương II: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 14 I. TCVN 50002007: súp lơ – hướng dẫn bảo quản và vận chuyển lạnh 14 II. TCVN 48852007: rau quả điều kiện vật lý trong kho lạnh – định nghĩa và phép đo 18 III. TCVN 53041991: rau quả. Nguyên tắc và kỹ thuật của phương pháp bảo quản trong môi trường khống chế 21 IV. TCVN 90162011: rau tươi – phương pháp lấy mẫu trên ruộng sản xuất 34 V. TCVN 6543 1999: rau, quả tươi – cách sắp xếp các kiện hàng hình hộp trong những xe vận tải đường bộ 53 VI. TCVN 8118 2009: rau quả và sản phẩm rau quả phân hủy chất hữu cơ trước khi phân tích phương pháp tro hóa 59 VII. TCVN 8117 2009: Rau quả và sản phẩm rau quả phân hủy chất hữu cơ trước khi phân tích phương pháp ướt 63 VIII. TCVN 5245 1990 : phương pháp xác định hàm lượng axit dễ bay hơi 70 IX. TCVN 8120 2009: rau quả và sản phẩm rau quả xác định độ kiềm của tro tổng số và của tro tan trong nước 89 X. TCVN 53691991: rau quả hướng dẫn bao gói sẵn 95 XI. TCVN 7766 2007: rau, quả và sản phẩm rau, quả xác định hàm lượng chì phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử không ngọn lửa 105 XII. TCVN 77681:2007: rau, quả và sản phẩm rau, quả xác định hàm lượng cadimi 112 PHẦN 1: phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử dùng lò graphit 112 phẦn 2: phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử ngọn lửa 119 XIII. TCVN 8319 2010: rau quả xác định đa dư lượng thuốc bảo vệ thực vật – phương pháp sắc kí khí 127 XIV. Phương pháp chính thức của AOAC 972.25: Chì trong thực phẩm phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử 136 XV. Phương pháp AOAC chính thức 973.34:Cadium trong thực phẩm Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử 139 PHỤ LỤC 143 Phụ lục 1: 143 Phụ lục 2: 146 Phụ lục 3: 149 Phụ lục 4: 152 Phụ lục 5: 156 Phụ lục 6: 165 Phụ lục 7: 180 Phụ lục 8: 185 Phụ lục 9: 188 Phụ lục 10: 195 Phụ lục 11: 209 Phụ lục 12: 214 Phụ lục 13: 221 Phụ lục 14: 228 Phụ lục 15: 233 Phụ lục 16: 240 Tài liệu tham khảo 247   DANH MỤC VIẾT TẮT TCVN Tiêu Chuẩn Việt Nam AOAC Association of Official Analytical Chemists (Hiệp hội các nhà phân tích hóa học Mỹ) VV Thể tích Thể tích mmH20 (Pa) milimet cột nước ha hecta (1 ha = 0,01 km2 = 10.000m2  LỜI CẢM ƠN Saumột thời gian tìm hiểu và tham khảo em cũng đã hoàn thành bài đồ án học phần với đề tài “ nguyên liệu súp lơ xanh” của mình, dưới sự hướng dẫn tận tình của giáo viên cô Hồ Thị Mỹ Hương. Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc và chân thành nhất của em với giáo viên hướng dẫn vì đã giúp đỡ em hoàn thành bài đồ án, cũng như giúp cho em có thêm được nhiều kiến thức hơn về rau, củ, quả để có thể áp dụng trong quá trình học cũng như trong cuộc sống hằng ngày. Trong quá trình làm bài không thể không có những thiếu sót đáng kể, e mong cô và các giáo viên trong khoa công nghệ thực phẩm đóng góp và cho em thêm nhiều nhận xét để em có thể hoàn thiện mình hơn cũng như hoàn thiện tốt các bài báo cáo sau này. Em xin chân thành cảm ơn các thầy, cô ạ LỜI MỞ ĐẦU Ngày nay, kinh tế xã hội ngày càng phát triển, cuộc sống con người ngày một nâng cao thì vấn đề an toàn lương thực càng được coi trong. Trong lịch sử phát triển của loài người đã khẳng định “lương thực, thực phẩm là vấn đề sống còn của mỗi quốc gia. Lương thực thực phẩm cung cấp một phần đáng kể Gluxit, Protit, Lipit và các loại vitamin….cho con người và nâng cao đời sống cho người trực tiếp sản xuất.” Trong các loại rau, súp lơ xanh là loại rau giàu chất dinh dưỡng, chứa nhiều acid amin tự do rất cần thiết cho cơ thể người như triptophan, felanin, metonin, hispidin, Acginin...và các vitamin A, B, C, E... trong đó nhiều nhất là vitamin C. Ngoài ra chúng còn chứa các nguyên tố khoáng Ca, K, Na P, S... Do súp lơ xanh dễ chế biến, dễ nấu nướng, dễ ăn lại chứa nhiều chất dinh dưỡng, có thể đóng gói nên hiện nay các nước phát triển có khuynh hướng trồng súp lơ xanh thay thế cải bắp. Súp lơlà một loại cải ăn được, thuộc loàiBrassica oleracea, họ Cải, mọc quanh năm, gieo giống bằng hạt. Phần sử dụng làm thực phẩm của súp lơ là toàn bộ phần hoa chưa nở, phần này rất mềm, xốp nên không chịu được mưa nắng. Phần lá và thân thường chỉ được sử dụng làm thức ăn cho gia súc. Hiệp hội chống ung thư Hoa Kỳ khuyến cáo nên ăn súp lơ xanh và các loại rau thuộc họ cải, vì chúng có chứa chất phytochemicals chống ung thư. Các nghiên cứu dịch tễ học cho thấy, một chế độ ăn có nhiều súp lơ xanh sẽ giúp cơ thể chống lại một số bệnh ung thư như ung thư vú, ung thư ruột kết và ung thư phổi Ngoài ra, súp lơ xanh là loại thực phẩm giàu axít folic giúp ngăn ngừa khuyết tật thần kinh ở thai nhi như tật nứt đốt sống. Trong suốt thai kỳ, các bà mẹ thường xuyên phải bổ sung axít folic, vì vậy, để đảm bảo sức khỏe thai nhi hãy thường xuyên ăn súp lơ xanh. Vì những vấn đề trên, em sẽ cùng tìm hiểu và nghiên cứu xem bên trong nguyên liệu súp lơ xanh gồm những chất gì mà có những tác dụng tốt như trên. Chương I: TỔNG QUAN VỀ NGUYÊN LIỆU SÚP LƠ XANH 1. Nguồn gốc và sự phân bố của cây súp lơ xanh Súp lơ xanh tên tiếng Anh:Broccoli. Tên khoa học: Brassica oleracea var. italica Plenck. Thuộc họ thập tù : Cruciferaceae Súplơlàloạicâynằmtrong nhómItalica, nólà loại câytồntạiởvùng Caribênhưmộtcâybảnđịa.CâynàyđượcdunhậpvàoBắcMỹtừnhững ngườinhậpcư.Italialànướcđầutiênsửdụngsúplơxanhlàmraukhoảng2000 nămvềtrước.NótrởthànhloạirauthôngdụngởMỹsaukhigiốngsúplơxanh thươngmạiđầutiênđượcthuhoạchởBroocklyn, NewYork.Ngàynay,nóđược trồngnhiềuởAnh,ChâuÂu, ChâuÁ. Ngày nay súp lơ đã được trồng rộng khắp các khu vực ôn đới và cũng dần thích hợp với khí hậu nhiệt đới nóng ẩm. Các nước trồng súp lơ phổ biến hiện nay là các nước ở Châu Âu, Địa Trung Hải, Nga, Ấn Độ, Nhật Bản, Mỹ, Trung Quốc, Đài Loan, Thái Lan, Hàn Quốc, Việt Nam... Súp lơ xanh  Súp lơ xanh (Broccoli) còn được gọi là giống súp lơ kép (giống sớm) hoa có màu xanh từ chùm tới cuống. Cây cao, lá thưa. Súp lơ xanh có hàm lượng chất dinh dưỡng cao nhưng năng suất thấp và khó bảo quản. Gồm các giống địa phương và các giống nhập nội có nguồn gốc từ Thái Lan, Đài Loan. Các giống này chịu được nhiệt độ cao, ít phản ứng với độ dài chiếu sáng trong ngày, hoa có kích thước trung bình, mỏng, chất lượng tốt.  Ngày nay từ các giống trên con người đã lai tạo ra rất nhiều giống súp lơ khác nhau chonăng suất cao. Trong đó có giống súp lơ xanh laiBI 15 do công ty Syngenta lai tạo năm 2001 đáng được quan tâm. Giống này cho năng suất cao, thời gian sinh trưởng 90 đến 95 ngày. Không đẻ chồi ở nách lá, khả năng chống chịu bệnh tốt, không bị đổ ngã. Năng suất 1,5 2 kgcây,tức là khoảng 37 48 tấnha. Có thể trồng quanh năm, nên trồng thâm canh cao, không cần tỉa các chồi bên. 2. Giá trị của súp lơ Giá trị dinh dưỡng Giá trị kinh tế Giá trị y học Cung cấp chất xơ, muối khoáng như canxi, magie, vitamin C, tiền vitamin A, những chất này có tác dụng rất tốt đến sức khoẻ của con người. Là nguyên liệu quan trọng cho ngành công nghiệp chế biến như dạng súp lơ sấy. Súp lơ mang lại lợi ích kinh tế và triển vọng cho xuất khẩu ở nhiều nước trên thế giới Súp lơ không những được dùng để cung cấp vitamin, chất khoáng mà còn có nhiều tác dụng về mặt y học, nó còn có khả năng phòng chống một số bệnh ung thư, giúp bảo vệ da.   Thành phần dinh dưỡng của súp lơ xanh Thành phần hoá học (g%) Muối khoáng (mg%) Vitamin (mg%) Calo cho 100g Nước Protid Gluxit xenlulo Tro Ca P Fe B1 B2 A+ C 90,9 2,5 4,9 0,9 0,8 26 51 1,4 0,11 0,1 0,05 70 30 3. Đặc điểm của cây súp lơ xanh Cây súp lơ xanh sản phẩm sử dụng là chùm hoa còn non chưa phát dục, có màu xanh từ chùm tới cuống hoa, súp lơ xanh có hàm lượng chất dinh dưỡng cao hơn súp lơ trắng. Bộ phận sử dụng được làm thực phẩm là các chất hữu cơ dự trữ được tích luỹ từ lá. Do vậy, hoa chỉ được hình thành khi thân cây có từ 15 đến 20 lá phát triển. Để tăng khả năng phát triển của bộ lá và hình thành hoa, cần nhiệt độ khí hậu dịu mát. Nhiệt độ thích hợp cho sinh trưởng, phát triển là từ 15ºC đến 18ºC. Nhiệt độ lớn hơn 25ºC hoặc nhỏ hơn 10ºC, cây sinh trưởng chậm, lá nhỏ, hoa nhỏ và mau già. Súp lơ thuộc loại cây ưa ẩm, nhưng nếu độ ẩm đất, không khí quá cao (hơn 90%), cây dễ bị bệnh, giá trị thương phẩm kém, độ ẩm thích hợp là 60% đến 80%. Đất trồng súp lơ phải nhẹ, nhiều mùn, pH = 6. Lượng phân bón thường phải cao hơn các cây cùng họ thập tự. Hơn 70% lượng chất dinh dưỡng tập trung vào thời kì hình thành hoa, nên việc bón thúc rất có hiệu quả. 4. Thành phần hoá học Thành phần hoá học của súp lơ cũng như rau quả nói chung bao gồm các chất vô

MỤC LỤC 247 DANH MỤC VIẾT TẮT TCVN Tiêu Chuẩn Việt Nam AOAC Association of Official Analytical Chemists (Hiệp hội nhà phân tích hóa học Mỹ) V/V .Thể tích/ Thể tích mmH20 (Pa) .milimet cột nước hecta (1 = 0,01 km2 = 10.000m2 Đồ án phân tích thực phẩm Trang LỜI CẢM ƠN Sau thời gian tìm hiểu tham khảo em hồn thành đồ án học phần với đề tài “ nguyên liệu súp lơ xanh” mình, hướng dẫn tận tình giáo viên Hồ Thị Mỹ Hương Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc chân thành em với giáo viên hướng dẫn giúp đỡ em hồn thành đồ án, giúp cho em có thêm nhiều kiến thức rau, củ, để áp dụng trình học sống ngày Trong q trình làm khơng thể khơng có thiếu sót đáng kể, e mong giáo viên khoa cơng nghệ thực phẩm đóng góp cho em thêm nhiều nhận xét để em hồn thiện hồn thiện tốt báo cáo sau Đồ án phân tích thực phẩm Trang Em xin chân thành cảm ơn thầy, cô ạ!LỜI MỞ ĐẦU Ngày nay, kinh tế xã hội ngày phát triển, sống người ngày nâng cao vấn đề an tồn lương thực coi Trong lịch sử phát triển loài người khẳng định “lương thực, thực phẩm vấn đề sống quốc gia Lương thực thực phẩm cung cấp phần đáng kể Gluxit, Protit, Lipit loại vitamin….cho người nâng cao đời sống cho người trực tiếp sản xuất.” Trong loại rau, súp lơ xanh loại rau giàu chất dinh dưỡng, chứa nhiều acid amin tự cần thiết cho thể người triptophan, felanin, metonin, hispidin, Acginin vitamin A, B, C, E nhiều vitamin C Ngồi chúng cịn chứa ngun tố khống Ca, K, Na P, S Do súp lơ xanh dễ chế biến, dễ nấu nướng, dễ ăn lại chứa nhiều chất dinh dưỡng, đóng gói nên nước phát triển có khuynh hướng trồng súp lơ xanh thay cải bắp Súp lơ loại cải ăn được, thuộc loài Brassica oleracea, họ Cải, mọc quanh năm, gieo giống hạt Phần sử dụng làm thực phẩm súp lơ toàn phần hoa chưa nở, phần mềm, xốp nên không chịu mưa nắng Phần thân thường sử dụng làm thức ăn cho gia súc Hiệp hội chống ung thư Hoa Kỳ khuyến cáo nên ăn súp lơ xanh loại rau thuộc họ cải, chúng có chứa chất phytochemicals chống ung thư Các nghiên cứu dịch tễ học cho thấy, chế độ ăn có nhiều súp lơ xanh giúp thể chống lại số bệnh ung thư ung thư vú, ung thư ruột kết ung thư phổi Ngoài ra, súp lơ xanh loại thực phẩm giàu axít folic giúp ngăn ngừa khuyết tật thần kinh thai nhi tật nứt đốt sống Trong suốt thai kỳ, bà mẹ thường xun phải bổ sung axít folic, vậy, để đảm bảo sức khỏe thai nhi thường xuyên ăn súp lơ xanh Đồ án phân tích thực phẩm Trang Vì vấn đề trên, em tìm hiểu nghiên cứu xem bên nguyên liệu súp lơ xanh gồm chất mà có tác dụng tốt Chương I: TỔNG QUAN VỀ NGUYÊN LIỆU SÚP LƠ XANH Nguồn gốc phân bố súp lơ xanh Súp lơ xanh tên tiếng Anh: Broccoli Tên khoa học: Brassica oleracea var italica Plenck Thuộc họ thập tù : Cruciferaceae Súp lơ loại nằm nhóm Italica, loại tồn vùng Caribê địa Cây du nhập vào Bắc Mỹ từ người nhập cư Italia nước sử dụng súp lơ xanh làm rau khoảng 2000 năm trước Nó trở thành loại rau thơng dụng Mỹ sau giống súp lơ xanh thương mại thu hoạch Broocklyn, New York Ngày nay, trồng nhiều Anh, Châu Âu, Châu Á Ngày súp lơ trồng rộng khắp khu vực ôn đới dần thích hợp với khí hậu nhiệt đới nóng ẩm Các nước trồng súp lơ phổ biến nước Châu Âu, Địa Trung Hải, Nga, Ấn Độ, Nhật Bản, Mỹ, Trung Quốc, Đài Loan, Thái Lan, Hàn Quốc, Việt Nam Súp lơ xanh Đồ án phân tích thực phẩm Trang − Súp lơ xanh (Broccoli) gọi giống súp lơ kép (giống sớm) hoa có màu xanh từ chùm tới cuống Cây cao, thưa Súp lơ xanh có hàm lượng chất dinh dưỡng cao suất thấp khó bảo quản Gồm giống địa phương giống nhập nội có nguồn gốc từ Thái Lan, Đài Loan Các giống chịu nhiệt độ cao, phản ứng với độ dài chiếu sáng ngày, hoa có kích thước trung bình, mỏng, chất lượng tốt − Ngày từ giống người lai tạo nhiều giống súp lơ khác cho suất cao Trong có giống súp lơ xanh lai BI 15 công ty Syngenta lai tạo năm 2001 đáng quan tâm Giống cho suất cao, thời gian sinh trưởng 90 đến 95 ngày Không đẻ chồi nách lá, khả chống chịu bệnh tốt, không bị đổ ngã Năng suất 1,5 - kg/cây,tức khoảng 37 - 48 tấn/ha Có thể trồng quanh năm, nên trồng thâm canh cao, không cần tỉa chồi bên Giá trị súp lơ Giá trị dinh dưỡng Cung cấp chất xơ, muối khoáng canxi, magie, vitamin C, tiền vitamin A, chất có tác dụng tốt đến sức khoẻ người Giá trị kinh tế Là nguyên liệu quan trọng cho ngành công nghiệp chế biến dạng súp lơ sấy Súp lơ mang lại lợi ích kinh tế triển vọng cho xuất nhiều nước giới Đồ án phân tích thực phẩm Trang Giá trị y học Súp lơ dùng để cung cấp vitamin, chất khống mà cịn có nhiều tác dụng mặt y học, cịn có khả phòng chống số bệnh ung thư, giúp bảo vệ da Thành phần dinh dưỡng súp lơ xanh Thành phần hoá học (g%) Muối khoáng Vitamin (mg%) (mg%) Calo Nước Protid Gluxit xenlulo Tro cho Ca 90,9 2,5 4,9 0,9 0,8 26 P Fe B1 B2 A+ C 100g 51 1,4 0,11 0,1 0,05 70 30 Đặc điểm súp lơ xanh Cây súp lơ xanh sản phẩm sử dụng chùm hoa non chưa phát dục, có màu xanh từ chùm tới cuống hoa, súp lơ xanh có hàm lượng chất dinh dưỡng cao súp lơ trắng Bộ phận sử dụng làm thực phẩm chất hữu dự trữ tích luỹ từ Do vậy, hoa hình thành thân có từ 15 đến 20 phát triển Để tăng khả phát triển hình thành hoa, cần nhiệt độ khí hậu dịu mát Nhiệt độ thích hợp cho sinh trưởng, phát triển từ 15ºC đến 18ºC Nhiệt độ lớn 25ºC nhỏ 10ºC, sinh trưởng chậm, nhỏ, hoa nhỏ mau già Súp lơ thuộc loại ưa ẩm, độ ẩm đất, khơng khí q cao (hơn 90%), dễ bị bệnh, giá trị thương phẩm kém, độ ẩm thích hợp 60% đến 80% Đất trồng súp lơ phải nhẹ, nhiều mùn, pH = Lượng phân bón thường phải cao họ thập tự Hơn 70% lượng chất dinh dưỡng tập trung vào thời kì hình thành hoa, nên việc bón thúc có hiệu Thành phần hoá học Thành phần hoá học súp lơ rau nói chung bao gồm chất vơ hữu hình thành nên rau Có thành phần bản: nước chất khơ a Nước: Đồ án phân tích thực phẩm Trang Trong súp lơ xanh nước chiếm khoảng 90,9% trọng lượng Nước chứa chất dinh dưỡng vận chuyển chất từ quan sang quan khác tổ chức tế bào rau Khi lượng nước giảm súp lơ bị héo nhanh bị vàng hoa, rút ngắn thời hạn bảo quản b Gluxit Gluxit súp lơ bao gồm: + Các loại đường đơn, đường kép: saccarit, fructoza, glucoza, maltoza, galactoza… + Các polysaccarit: tinh bét, xenluloza, hemixenluloza… − Các loại đường: Lượng đường tổng súp lơ khoảng 5,2% Chủ yếu đường fructoza, glucoza, saccaroza − Tinh bột: Lượng tinh bột súp lơ không nhiều khoảng 0,1% Dưới tác dụng mơi trường axít enzym tinh bột bị phân giải thành dextrin, maltoza cuối glucoza − Xenluloza: Trong súp lơ có khoảng 0,9% xenluloza Chúng phân bố khắp quan súp lơ nhiều líp vỏ cuống hoa Lượng xenluloza súp lơ nhiều hoa già, chất lượng thấp − Chất xơ: Chất xơ súp lơ bao gồm xenluloza, hemixenluloza, pectin… chúng chiếm khoảng 2,5% Khả liên kết xơ hoa súp lơ xanh khoảng 5,9g nước/g xơ c Các axít hữu Đồ án phân tích thực phẩm Trang Hàm lượng axit hữu súp lơ hầu hết rau thường nhỏ 1%, chúng cịn có khả hạn chế tốc độ hoạt động enzym gây biến màu sản phẩm cắt d Các hợp chất Nitơ: Hợp chất nitơ rau chủ yếu dạng protit đơn giản gọi protein dạng amin tự Trong súp lơ xanh protit chiếm khoảng 2,5 % khối lượng Protein rau dễ bị thuỷ phân nhiệt độ cao tạo axit amin tù do, chất dễ bị thuỷ phân thành nitơ tự Vì trình gia nhiệt lâu dài hoàn toàn bất lợi cho bảo toàn protein e Các chất màu: Màu hoa súp lơ tạo thành từ sắc tố khác thuộc nhóm clorofyl, carotinoid, flavonoid… Clorofyl: màu xanh tạo sắc tố clorofyl bao gồm chủ yếu là: clorofyl a clorofyl b Clorofyl a: (C32H30O4Mg)(COOCH3)(COOC20H39) Clorofyl b: (C32H28O2N4Mg)(COOCH3)(COOC20H39) Carotinoid bao gồm carotin, licopin, xantofyl Carotin (tiền vitamin A) có màu vàng, bao gồm α- carotin β-carotin [4] f Các vitamin Trong súp lơ xanh có nhiều loại vitamin nhiều vitamin C gọi axít ascorbic, tồn dạng: dạng tự axít ascorbic; dạng oxy hóa dehydro ascorbic dạng liên kết với protit ascorbigen Vitamin C bền vững môi trường axit dễ bị thuỷ phân môi trường kiềm, O2 , ánh sáng, nhiệt độ cao Vitamin C chất quý có rau tiêu đánh giá hiệu biện pháp bảo quản, chế biến Hàm lượng vitamin súp lơ xanh Đồ án phân tích thực phẩm Trang A+ 150μg β-caroten 920μg E++ 1,3mg B1 0,07mg B2 0,12mg PP 0.6mg B6 0,16mg C 83mg g Các chất khoáng Các hợp chất khống hồ tan hay khơng hồ tan nước, không phân ly thành ion kim loại Hàm lượng số chất khống có súp lơ xanh (mg/%) Na K 385 Ca 48 P 66 Mg 23 F 0,9 Zn 0,4 Cu 0,03 Mn 0,53 h Các enzym Các enzym súp lơ có ảnh hưởng lớn đến thời hạn bảo quản súp lơ, điển hình số enzym pholyphenoloxydaza (PPO Ngồi phải kể đến enzym ascorbinaza xúc tiến trình oxy hoá vitamin C làm chất lượng súp lơ giảm sút Tình hình sản xuất tiêu thụ súp lơ nước giới Đồ án phân tích thực phẩm Trang 10 Khi phân hủy hồn tồn, lọc dung dịch mẫu, pha lỗng với vài mililít nước, qua giấy lọc khơng tro (5.4) mà tráng trước axit clohydric nước Thu dịch lọc vào bình định mức vạch 50 ml (5.2), rửa bình đáy trịn (5.1) giấy lọc vài mililít nước thu nước rửa vào bình định mức Lắc, để nguội, pha loãng đến vạch Trộn cách lắc 7.4 Phép thử trắng Tiến hành phép thử trắng việc lặp lại trình phân hủy (7.3), thay phần mẫu thử 10 ml nước 7.5 Xác định 7.5.1 Đặt chương trình cho lị graphit Đặt chương trình lị graphit để đáp ứng ba q trình vận hành sau đây: a) làm khơ dung dịch; b) phân hủy nhiệt; c) nguyên tử hóa; d) tăng nhiệt độ tối đa để làm lò Các điều kiện đưa sau: - làm khô 100 oC 25 s; - chuyển tới giai đoạn phân hủy nhiệt 450 oC 30 s; - nguyên tử hóa s 1900 oC, sau tăng nhanh đến nhiệt độ qui định Trong suốt giai đoạn này, thiết bị phải ghi hấp thụ tối đa thay đổi trình hấp thụ Khoảng thời gian mà ngun tử tồn lị tăng lên cách giảm tốc độ dòng nitơ (“vi dịng”) cách (“dừng khí”); - tăng nhiệt độ đến tối đa (2700 oC) để làm lò khí nitơ vào lúc kết thúc q trình phân hủy 7.5.2 Dựng đường chuẩn μg/l μg/l μg/l Chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn có nồng độ cadimi , 10 20 việc pha lỗng thích hợp dung dịch cadimi chuẩn (4.10) Bơm vào lò, chương trình hóa theo 7.5.1, micropipet (5.8) lắp khít với đầu tip, 50 μl cho dung dịch hiệu chuẩn Xác định độ hấp thụ từ chiều cao pic ghi lại Tính tốn độ hấp thụ trung bình từ kết ba lần bơm vào μg lò Độ hấp thụ xác định tương ứng với 0,00025 Đồ án phân tích thực phẩm Trang 230 , 0,0005 μg μg 0,001 cadimi Dựng đường chuẩn có trục tung giá trị độ hấp thụ trục hoành nồng độ cadimi tương ứng 7.5.3 Xác định dung dịch thử Dùng micropipet (5.8) có lắp đầu tip bơm ba lần vào lò, đặt chương trình theo 7.5.1, thể tích tương ứng dung dịch mẫu phân hủy thu 7.3 Ghi lại độ hấp thụ tương ứng Tính tốn giá trị hấp thụ trung bình từ μl đường chuẩn đọc lượng cadimi có 50 dịch thử bơm vào 7.5.4 Xác định dung dịch thử trắng Dùng micropipet (5.8) có lắp dầu tip bơm ba lần vào lị, đặt chương trình theo 7.5.1, thể tích tương ứng dung dịch thử trắng (7.4) Độ hấp thụ phải không (zero) nhỏ 0,005 Nếu cần, loại giá trị trung bình ba giá trị độ hấp thụ dịch thử trắng từ độ hấp thụ trung bình dịch thử xác định 7.5.3 trước sử dụng đường chuẩn (7.5.2) để thu nhận hàm lượng cadimi dung dịch Biểu thị kết 8.1 Phương pháp tính cơng thức 8.1.1 Sản phẩm dạng lỏng Hàm lượng cadimi mẫu, biểu thị miligam lít sản phẩm, tính theo cơng thức sau đây: m1 x 100 (1) m1 khối lượng cadimi thu thể tích phần mẫu thử bơm vào, đọc từ đường chuẩn, tính microgam 8.1.2 Sản phẩm dạng rắn bán rắn Hàm lượng cadimi mẫu, biểu thị miligam kilogam sản phẩm, tính cơng thức sau đây: m1 × 1000 m0 (2) m0 khối lượng phần mẫu thử (7.2.2), tính gam; m1 khối lượng cadimi thu thể tích phần mẫu thử bơm vào, đọc từ đường chuẩn, tính gam 8.2 Phương pháp khác để biểu thị kết Đồ án phân tích thực phẩm Trang 231 Để biểu thị hàm lượng cadimi theo chất khô cần thay đổi cơng thức tính cho phù hợp Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ độc lập, thu sử dụng phương pháp vật liệu thử giống hệt phòng thử nghiệm người thực sử dụng thiết bị thực khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp lớn 10 % trung bình cộng hai kết 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử nghiệm dùng với viện dẫn tiêu chuẩn này; d) chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn điều coi tùy ý cố mà ảnh hưởng đến kết quả; e) kết thử nghiệm thu đáp ứng yêu cầu độ lặp lại ghi kết cuối thu Phụ lục 15: TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 7768-2:2007 RAU, QUẢ VÀ SẢN PHẨM RAU, QUẢ - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CADIMI PHẦN 2: PHƯƠNG PHÁP ĐO PHỔ HẤP THỤ NGUYÊN TỬ NGỌN LỬA Fruits, vegetables and derived products – Determination of cadmium content Part 2: Method using flame atomic absorption spectrometry Lời nói đầu TCVN 7768-2:2007 hồn tồn tương đương với ISO 6561-2:2005; TCVN 7768-2:2007 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn TCVN/TC/F10 Rau sản phẩm rau biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN 7768:2007 (ISO 6561:2005) Rau, sản phẩm rau, - Xác định hàm lượng cadimi, bao gồm phần sau đây: - Phần 1: Phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử dùng lò graphit; - Phần 2: Phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử lửa Đồ án phân tích thực phẩm Trang 232 RAU, QUẢ VÀ SẢN PHẨM RAU, QUẢ - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CADIMI PHẦN 2: PHƯƠNG PHÁP ĐO PHỔ HẤP THỤ NGUYÊN TỬ NGỌN LỬA Fruits, vegetables and derived products – Determination of cadmium content Part 2: Method using flame atomic absorption spectrometry Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp xác định hàm lượng cadimi rau, sản phẩm rau, đo phổ hấp thụ nguyên tử lửa CHÚ THÍCH: Phương pháp dùng để xác định cadimi rau, sản phẩm rau, dựa phương pháp phân tích thức AOAC [1] Nguyên tắc Phương pháp dựa việc phá hủy chất hữu HNO 3, H2SO4 H2O2, chiết cadimi dithizon-CHCl3 pH 9, xác định cadimi quang phổ hấp thụ nguyên tử lửa Thuốc thử Các thuốc thử sử dụng phải loại tinh khiết phân tích nước sử dụng phải nước cất hai lần thiết bị cất thủy tinh bo silicat tối thiểu nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có qui định khác 3.1 Axit nitric, đậm đặc (p20 = 1,38 g/ml) 3.2 Axit sulfuric, đậm đặc (p20 = 1,84 g/ml) 3.3 Axit clohydric, loãng, 0,2 mol/l Cho 16,5 ml axit clohydric đậm đặc (p20 = 1,19 g/ml) vào bình định mức vạch dung tích 000 ml pha loãng nước đến vạch Trộn 3.4 Hydro peroxit, đậm đặc (50 %) 3.5 Axit xitric ngậm phân tử nước 3.6 Natri hydroxit, dung dịch 0,05 mol/l 3.7 Chỉ thị xanh thymol Nghiền 0,1 g chất thị xanh thymol cối mã não với 4,3 ml dung dịch natri hydroxit (3.6) Pha loãng nước đến 200 ml bình cầu 3.8 Dung dịch amoniac, dung dịch 28 % đến 30 % 3.9 Cloroform 3.10 Dithizon, dung dịch 1,0 mg/ml Đồ án phân tích thực phẩm Trang 233 Cho 0,2 g dithizon vào bình định mức 200 ml thêm cloroform đến vạch 3.11 Dithizon, dung dịch 0,2 mg/ml Pha lỗng thể tích dung dịch dithizon (3.10) với thể tích cloroform (3.9) Chuẩn bị dung dịch ngày sử dụng 3.12 Dung dịch cadimi chuẩn, tương đương với nồng độ cadimi 1,0 mg/ml Thiết bị, dụng cụ Dụng cụ thủy tinh sử dụng phải rửa trước axit nitric mol/l, sau tráng kỹ nước Đậy cốc có mỏ mặt kính đồng hồ suốt trình thao tác Sử dụng thiết bị, dụng cụ phịng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 4.1 Máy nghiền cơ, có lớp lót lưỡi dao bên làm từ polytetraflorơetylen (PTFE) 4.2 Bình đáy trịn, dung tích 500 ml 4.3 Cốc có mỏ, dung tích 400 ml 4.4 Bình định mức vạch, dung tích 50 ml, 100 ml 000 ml 4.5 Pipet, dung tích thích hợp 4.6 Dụng cụ phân tách, dung tích 125 ml 250 ml 4.7 Máy đo quang phổ hấp thụ nguyên tử, có đầu đốt khơng khí/axetylen (10 cm), thích hợp để xác định bước sóng 228,8 nm 4.8 Đầu đốt măng xơng đốt 4.9 Bếp điện 4.10 Cân phân tích Lấy mẫu Điều quan trọng mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện không bị hư hỏng biến đổi suốt trình vận chuyển bảo quản Việc lấy mẫu khơng quy định tiêu chuẩn Nếu khơng có tiêu chuẩn quy định riêng cho sản phẩm bên có liên quan cần thỏa thuận vấn đề Cách tiến hành 6.1 Chuẩn bị mẫu thử Trộn kỹ mẫu phòng thử nghiệm Nếu cần, trước hết loại vỏ hạt, vỏ cứng hạt cho mẫu phòng thử nghiệm qua máy nghiền (4.1) Cho sản phẩm lạnh đơng lạnh đơng sâu tan băng bình kín chuyển tồn nước tan vào máy trộn Đồ án phân tích thực phẩm Trang 234 6.2 Phần mẫu thử Cân 50 g mẫu thử (6.1), xác đến 0,01 g, cho vào bình cầu đáy trịn 500 ml (4.2) 6.3 Phân hủy Nếu phần mẫu thử có chứa etanol, trước tiên phải loại bỏ hết etanol cách làm bay Thêm vài mảnh hạt chống trào cẩn thận thêm 25 ml axit nitric (3.1) Đậy nắp làm ấm nhẹ sử dụng đầu đốt măng xông đốt (4.8) để phản ứng bắt đầu Khi phản ứng giảm, thêm 25 ml axit nitric (3.1), làm ấm trở lại tiếp tục tiến hành bổ sung hết 100 ml axit nitric (3.1) Hoặc là, cẩn thận chuyển 100 ml axit nitric (3.1) vào phần mẫu thử lần để yên nhiệt độ phòng qua đêm Đun nóng phần lớn khói NO thoát hết; kiểm soát tránh tạo bọt mức cách làm lạnh làm giảm nóng nước từ bình rửa Thêm 20 ml axit sulfuric đậm đặc (3.2) vào dung dịch Pha loãng đến xấp xỉ 300 ml nước làm bay sử dụng đầu đốt măng xông đốt (4.8) bắt đầu than hóa Khi than hóa xảy mãnh liệt, cẩn thận thêm hydro peroxit (3.4), 1ml cho lần thêm Để phản ứng giảm trước thêm phần chất oxi hóa tiếp theo, khơng thêm q ml cho lần Tiếp tục thêm hydro peroxit thu dung dịch không màu Đun mạnh tạo khói SO3, thêm nhiều hydro peroxit (3.4) cần, để loại bỏ than Đun mạnh để đuổi hết hydro peroxit cịn sót lại Làm lạnh dịch phân hủy khơng màu đến nhiệt độ phịng 6.4 Phép thử trắng Tiến hành phép thử trắng, sử dụng trình phân hủy 6.3, thay phần mẫu thử lượng nước thích hợp tùy thuộc vào lượng mẫu thử lấy để phân tích 6.5 Chiết CẢNH BÁO – Phương pháp mô tả phần yêu cầu sử dụng cloroform, chất độc giải phóng khí ozon Tránh hít phải tiếp xúc với dung mơi Tiến hành tủ hút làm việc với dung môi dung dịch Cần loại bỏ cloroform thải dung dịch phương thức thích hợp Thêm g axit xitric (3.5) vào dung dịch phân hủy mẫu dung dịch thử trắng làm lạnh pha loãng cẩn thận nước đến khoảng 25 ml Thêm ml chất thị xanh thymol (3.7) làm lạnh bể đá điều chỉnh pH đến 8,8 cách từ từ bổ sung dung dịch amoni (3.8), dung dịch Đồ án phân tích thực phẩm Trang 235 chuyển từ màu xanh vàng sang màu xanh lục Chuyển lượng vào dụng cụ phân tách (4.6) pha loãng nước đến khoảng 150 ml Làm lạnh dung dịch chiết dung dịch dithizon đậm đặc (3.10) hai lần lần ml, lắc đến cho lần thêm Tiếp tục chiết dung dịch dithizon loãng (3.11) lần ml dịch chiết dithizon không đổi màu Trộn dịch chiết dithizon dụng cụ phân tích 125 ml (4.6); rửa 50 ml nước, chuyển dung môi vào dụng cụ phân tácch 125 ml khác Chiết nước rửa ml cloroform (3.9) chuyển vào dịch chiết dithizon Thêm 50 ml axit clohydric loãng (3.3) vào dịch chiết dithizon trộn lẫn, lắc kỹ để phân lớp; loại bỏ dithizon Rửa dịch lỏng ml cloroform (3.9) loại bỏ cloroform Chuyển hết lượng dịch lỏng vào cốc có mỏ 400 ml (4.3), thêm vài mảnh chống trào làm bay cẩn thận bếp điện (4.9) khô hẳn Tráng rửa cẩn thận mặt cốc có mỏ 10 ml đến 20 ml nước để bay tiếp khơ Hịa tan phần cặn khô 5,0 ml dung dịch axit clohydric (3.3) 6.6 Xác định 6.6.1 Xây dựng đường chuẩn Pha loãng dung dịch cadimi chuẩn (3.12) axit clohydric (3.3) để thu μg/ml bốn dung dịch có nồng độ cadimi 0,1 μg/ml , 0,5 μg/ml , 1,0 μg/ml 2,0 Phun dung dịch vào lửa máy quang phổ (4.7) sử dụng lần đến 10 lần thang mở rộng để thu giá trị hấp thụ tối đa cho dung dịch có μg/ml nồng độ cadimi 2,0 Sử dụng axit clohydric (3.3) làm mẫu trắng Cẩn thận giữ tốc độ phun khơng đổi suốt q trình phun dịch chuẩn Dập tắt đầu đốt nước sau lần đo Ghi lại giá trị tương ứng độ hấp thụ vẽ đồ thị đường chuẩn (độ hấp thụ theo nồng độ cadimi tính theo microgam mililít) 6.6.2 Đo quang phổ Đặt dụng cụ đo vào điều kiện tối ưu đặt trước, sử dụng lửa oxi hóa khơng khí-axetylen bước sóng cộng hưởng 228,8 nm Phun vào lửa quang phổ kế (4.7) dung dịch thử (6.5) dung dịch trắng (6.4) với tốc độ phun cách tiến hành để xây dựng đường chuẩn (6.6.1) Ghi lại độ hấp thụ tương ứng Đồ án phân tích thực phẩm Trang 236 Nếu độ hấp thụ dung dịch thử lớn độ hấp thụ lớn dung dịch chuẩn sử dụng để xây dựng đường chuẩn (6.6.1), pha lỗng dung dịch thử axit clohydric (3.3) đo độ hấp thụ Tính tốn Hàm lượng cadimi mẫu, biểu thị miligam kilogam, tính theo cơng thức sau đây: xF (1) đó: c nồng độ cadimi dung dịch thử đọc từ đường chuẩn, tính microgam mililít; ctrắng nồng độ cadimi dung dịch mẫu trắng đọc từ đường chuẩn, tính microgam mililít; m khối lượng phần mẫu thử, tính gam; F hệ số pha loãng, cần Độ chụm Độ chụm phương pháp kiểm chứng nghiên cứu kết hợp việc xác định cadimi rau diếp khoai tây; xem tài liệu tham khảo [2] Các thông số thống kê tính tốn theo TCVN 6910 (ISO 5725); xem tài liệu tham khảo [3] Đồ án phân tích thực phẩm Trang 237 Bảng – Kết độ lặp lại Loại mẫu Rau diếp Khoai tây Hàm cadimi lượng s rb mg/kg mg/kg mg/kg 0,1 0,04 0,01 0,5 0,17 0,06 1,5 0,26 0,09 0,05 0,009 0,003 0,2 0,05 0,02 1,0 0,09 0,03 a r giới hạn lặp lại b sr độ lệch chuẩn độ lặp lại Bảng – Kết độ tái lập Loại mẫu Rau diếp Khoai tây Hàm cadimi lượng Ra s Rb mg/kg mg/kg mg/kg 0,1 0,05 0,02 0,5 0,17 0,06 1,5 0,29 0,10 0,05 0,025 0,09 0,2 0,07 0,02 1,0 0,19 0,07 a R giới hạn tái lập b sR độ lệch chuẩn độ tái lập Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử nghiệm dùng với viện dẫn tiêu chuẩn này; Đồ án phân tích thực phẩm Trang 238 d) chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn điều coi tùy ý cố mà ảnh hưởng đến kết quả; e) kết thu được, đáp ứng yêu cầu độ lặp lại nêu kết cuối thu Thư mục tài liệu tham khảo [1] AOAC Offical Methods of Analysis (1995) AOAC 973.64 Cadmium in Food [2] Gajan R.J., Gould J.H., Watts J.O., Fiorino J.A Collaborative study of a method for the atomic absorption spectrophotometric and potarographic determination of cadmium in food J Assoc Off Anal Chem., 56, No 4, 1973 pp 876-881 [3] ISO 5725:1986 Precision of test methods – Detemination of repeatability and reproducibility for a standard test method by interlaboratory tests [nay hủy] [4] TCVN 6910-1:2001 (ISO 5725-1:1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo Phần 1: Nguyên tắc định nghĩa chung [5] TCVN 6910-2:2001 (ISO 5725-2:1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo Phần 2: Phương pháp xác định độ lặp lại độ tái lập phương pháp đo tiêu chuẩn Phụ lục 16: TCVN 8319 : 2010 RAU QUẢ - XÁC ĐỊNH ĐA DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT – PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ KHÍ Vegetables and fruits – Determination of pesticide multiresidues – Gas chromatographic method Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định đồng thời dư lượng thuốc bảo vệ thực vật (BVTV) rau quả, bao gồm acephate, chlorpyriphos, diazinon, dimethoate, fenitrothion, profenophos, methidathion, trichlorfon, α-endosulfan, βendosulfan, iprodion, cyfluthrin, cypermethrin, fenvalerate, λ-cyhalothrin, permethrin, difenoconazole, propiconazole, chlorothalonil, fipronil indoxacarb sắc kí khí Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) Đồ án phân tích thực phẩm Trang 239 TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng để phân tích phịng thí nghiệm – Yêu cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Dư lượng thuốc BVTV mẫu thử chiết hỗn hợp dung môi axeton xác định thiết bị sắc kí khí với detector quang hóa lửa (FPD) detector cộng kết điện tử (ECD) Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích, nước loại TCVN 4851 (ISO 3696), trừ có quy định khác 4.1 Axeton, tinh khiết phân tích 4.2 Diclometan, tinh khiết phân tích 4.3 Ete dầu mỏ, nhiệt độ sôi từ 40 oC đến 60 oC 4.4 Toluen, tinh khiết phân tích 4.5 Hỗn hợp dung mơi, chứa η-hexan toluen với tỉ lệ thể tích : 4.6 Natri sulfat khan, hoạt hóa 130 oC h, để nguội bình hút ẩm, bảo quản bình kín 4.7 Các chất chuẩn acephate, chlorpyriphos, diazinon, dimethoate, fenitrothion, profenophos, methidathion, trichlorfon, α-endosulfan, β-endosulfan, iprodion, cyfluthrin, cypermethrin, fenvalerate, λ-cyhalothrin, permethrin, difenoconazole, propiconazole, chlorothalonil, fipronil indoxacarb, biết độ tinh khiết 4.8 Dung dịch chuẩn gốc, nồng độ 000 µg/ml Dùng cân phân tích (5.7) cân 0,01 g chất chuẩn (4.7), xác đến 0,01 mg, cho vào bình định mức dung tích 10 ml (5.1), thêm toluen đến vạch trộn 4.9 Dung dịch 4.9.1 Dung dịch chuẩn trung gian chuẩn trung gian Dùng micropipet (5.3) lấy 500 µl dung dịch chuẩn gốc acephate, chlorpyriphos, diazinon, dimethoate, fenitrothion, profenophos, methidathion, dùng pipet (5.2) lấy ml dung dịch chuẩn gốc trichlorfon cho vào bình định mức dung tích 50 ml (5.1), thêm hỗn hợp dung môi (4.5) đến vạch trộn Trong dung dịch chuẩn trung gian 1, hoạt chất acephate, chlorpyriphos, diazinon, dimethoate, fenitrothion, profenophos, methidathion có nồng độ 10 µg/ml, hoạt chất trichlorfon có nồng độ 40 µg/ml 4.9.2 Dung dịch chuẩn trung gian Dùng micropipet (5.3) lấy 500 µl dung dịch chuẩn gốc difenoconazole permethrin; 400 µl dung dịch chuẩn gốc cyfluthrin, cypermethrin, fenvalerate, Đồ án phân tích thực phẩm Trang 240 indoxacarb iprodion; 200 µl dung dịch chuẩn gốc chlorothalonil, λcyhalothrin, α-endosulfan, β-endosulfan, fipronil, propiconazole cho vào bình định mức dung tích 50 ml (5.1), thêm hỗn hợp dung mơi (4.5) đến vạch trộn Trong dung dịch chuẩn trung gian 2, hoạt chất difenoconazole permethrin có nồng độ 10 µg/ml, hoạt chất cyfluthrin, cypermethrin, fenvalerate, indoxacarb iprodion có nồng độ µg/ml, hoạt chất chlorothalonil, λ-cyhalothrin, αendosulfan, β-endosulfan, fipronil propiconazole có nồng độ µg/ml 4.10 Dung dịch chuẩn làm việc Pha loãng liên tục dung dịch chuẩn trung gian 1(4.9.1) dung dịch chuẩn trung gian (4.9.2) để thu dung dịch chuẩn làm việc với mức nồng độ sau: - Dung dịch chuẩn làm việc 1: hoạt chất acephate, chlorpyriphos, diazinon, dimethoate, fenitrothion, profenophos, methidathion có nồng độ µg/ml, hoạt chất trichlorfon có nồng độ µg/ml; - Dung dịch chuẩn làm việc 2: hoạt chất acephate, chlorpyriphos, diazinon, dimethoate, fenitrothion, profenophos, methidathion có nồng độ 0,5 µg/ml, hoạt chất trichlorfon có nồng độ µg/ml; - Dung dịch chuẩn làm việc 3: hoạt chất acephate, chlorpyriphos, diazinon, dimethoate, fenitrothion, profenophos, methidathion có nồng độ 0,02 µg/ml, hoạt chất trichlorfon có nồng độ 0,08 µg/ml; - Dung dịch chuẩn làm việc 4: hoạt chất difenoconazole permethrin có nồng độ µg/ml, hoạt chất cyfluthrin, cypermethrin, fenvalerate, indoxacarb iprodion có nồng độ 1,6 µg/ml, hoạt chất chlorothalonil, λ-cyhalothrin, αendosulfan, β-endosulfan, fipronil propiconazole có nồng độ 0,8 µg/ml; - Dung dịch chuẩn làm việc 5: hoạt chất difenoconazole permethrin có nồng độ 0,4 µg/ml, hoạt chất cyfluthrin, cypermethrin, fenvalerate, indoxacarb iprodion có nồng độ 0,32 µg/ml, hoạt chất chlorothalonil, λ-cyhalothrin, αendosulfan, β-endosulfan, fipronil propiconazole có nồng độ 0,16 µg/ml; - Dung dịch chuẩn làm việc 6: hoạt chất difenoconazole permethrin có nồng độ 0,025 µg/ml, hoạt chất cyfluthrin, cypermethrin, fenvalerate, indoxacarb iprodion có nồng độ 0,02 µg/ml, hoạt chất chlorothalonil, λ-cyhalothrin, αendosulfan, β-endosulfan, fipronil propiconazole có nồng độ 0,01 µg/ml; Các dung dịch chuẩn làm việc bảo quản oC có thời hạn sử dụng tháng 4.11 Khí ni tơ, có độ tinh khiết khơng nhỏ 99,999 % 4.12 Khí hydro, có độ tinh khiết không nhỏ 99,999 % Đồ án phân tích thực phẩm Trang 241 4.13 Khơng khí nén dùng cho thiết bị sắc kí khí Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phịng thử nghiệm sau: 5.1 Bình định mức, dung tích 10 ml, 50 ml 100 ml 5.2 Pipet, dung tích ml, ml 10 ml, chia vạch đến 0,1 ml 5.3 Micropipet, dung tích từ 50 µl đến 200 µl từ 200 µl đến 000 µl 5.4 Cốc ly tâm, dung tích 250 ml 5.5 Ống đong, dung tích 50 ml 5.6 Ống nghiệm, dung tích 15 ml 5.7 Xyranh, dung tích 10 µl, chia vạch đến µl 5.8 Cân phân tích, cân xác đến 0,01 mg 5.9 Cân kỹ thuật, cân xác đến 0,01 g 5.10 Thiết bị đồng hóa Ultra-Turrax, tốc độ khơng nhỏ 13 500 r/min 5.11 Thiết bị thổi khí nitơ 5.12 Máy nghiền mẫu 5.13 Máy ly tâm, tốc độ khơng nhỏ 000 r/min, có ống ly tâm dung tích 250 ml 5.14 Thiết bị sắc ký khí 1, trang bị sau: - Buồng bơm mẫu chia dịng khơng chia dịng; - Detector quang kế lửa, kính lọc phospho (FPD/P); - Cột mao quản DB-5, có chiều dài 30 m, đường kính 0,32 mm, chiều dày pha tĩnh 0,25 µm, loại tương đương; - Máy vi tính 5.15 Thiết bị sắc ký khí 2, trang bị sau: - Buồng bơm mẫu chia dịng khơng chia dịng; - Detector cộng kết điện tử (ECD); - Cột mao quản DB-5, có chiều dài 30 m, đường kính 0,32 mm, chiều dày pha tĩnh 0,25 µm, loại tương đương; - Máy vi tính Lấy mẫu Đồ án phân tích thực phẩm Trang 242 Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 5139:2008 (CAC/GL 33-1999) Phương pháp khuyến cáo lấy mẫu để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phù hợp với giới hạn dư lượng tối đa (MRL) Cách tiến hành 7.1 u cầu chung Tồn quy trình phân tích cần thực ngày Nếu khơng phân tích ngày phải bảo quản dịch mẫu oC 7.2 Chuẩn bị mẫu Mẫu thử nghiền máy nghiền mẫu (5.12) đến đồng 7.3 Chuẩn bị phần mẫu thử Dùng cân (5.9) cân khoảng 20 g mẫu thử (m) đồng (xem 7.2), xác đến 0,01g, vào cốc ly tâm dung tích 250 ml (5.4) Thêm vào cốc 40 ml axeton, đồng hóa 30 s thiết bị Ultra-Turrax (5.10) với tốc độ 13 500 r/min, thêm 40 ml ete dầu mỏ, 40 ml diclometan, g natri sulfat khan, đồng hóa 30 s thiết bị Ultra-Turrax (5.10) với tốc độ 13 500 r/min, sau ly tâm thiết bị ly tâm (5.13) với tốc độ 000 r/min 10 min, thu tồn dịch chiết ghi lại thể tích (V1) Dùng pipet dung tích 10 ml (5.2) lấy xác ml (V2) dịch lỏng thu cho vào ống nghiệm (5.6) thổi khơ hồn tồn thiết bị thổi khí nitơ (5.11) Hịa tan phần cặn với ml (VE) hỗn hợp dung môi (4.5) để thu phần mẫu thử 7.4 Chuẩn bị phần mẫu trắng Mẫu trắng mẫu biết khơng có dư lượng acephate, chlorpyriphos, diazinon, dimethoate, fenitrothion, profenophos, methidathion, trichlorfon, α-endosulfan, βendosulfan, iprodion, cyfluthrin, cypermethrin, fenvalerate, λ-cyhalothrin, permethrin, difenoconazole, propiconazole, chlorothalonil, fipronil indoxacarb, chuẩn bị theo quy trình 7.3 7.5 Chuẩn bị phần mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi Dùng cân (5.9) cân khoảng 20 g mẫu trắng đồng theo 7.2, xác đến 0,01 g, vào cốc ly tâm dung tích 250 ml (5.4) Dùng micropipet (5.3) thêm 200 µl dung dịch chuẩn trung gian 200 µl dung dịch chuẩn trung gian 2, để yên nhiệt độ phòng tối thiểu 15 Tiếp tục thực theo 7.3 7.6 Điều kiện phân tích 7.6.1 Thiết bị sắc ký khí Nhiệt độ buồng bơm mẫu: 240 oC; Thể tích bơm mẫu: µl, khơng chia dịng; Nhiệt độ cột tách: Nhiệt độ ban đầu 80 oC giữ min, Đồ án phân tích thực phẩm Trang 243 tăng 40 oC/min đến nhiệt độ 160 oC, tăng oC/min đến 250 oC, tăng 10 o C/min đến nhiệt độ cuối 280 oC giữ 10 min; Tốc độ khí mang (N2): ml/min; Nhiệt độ detector FPD: 220 oC; Tốc độ khí hydro (H2): 75 ml/min; Tốc dộ dịng khơng khí: 100 ml/min; Tốc độ nitơ bổ trợ: 60 ml/min 7.6.1 Thiết bị sắc ký khí Nhiệt độ buồng bơm mẫu: 240 oC; Thể tích bơm mẫu: µl, khơng chia dòng; Nhiệt độ cột tách: Nhiệt độ ban đầu 80 oC giữ min, tăng 40 oC/min đến nhiệt độ 160 oC, tăng oC/min đến 250 oC, tăng 10 o C/min đến nhiệt độ cuối 280 oC giữ 10 min; Tốc độ khí mang (N2): ml/min; Nhiệt độ detector ECD: 300 oC; Tốc độ nitơ bổ trợ: 60 ml/min 7.7 Dựng đường chuẩn Dựng đường chuẩn thuốc BVTV (tương quan diện tích/chiều cao píc nồng độ chất chuẩn) điểm có nồng độ tương ứng dung dịch chuẩn làm việc 1, dung dịch chuẩn làm việc dung dịch chuẩn làm việc thiết bị sắc ký (5.14) Dựng đường chuẩn thuốc BVTV (tương quan diện tích/chiều cao píc nồng độ chất chuẩn) điểm có nồng độ tương ứng dung dịch chuẩn làm việc 4, dung dịch chuẩn làm việc dung dịch chuẩn làm việc thiết bị sắc ký (5.15) 7.8 Xác định Bơm dung dịch mẫu trắng (7.4), dung dịch mẫu thử (7.3), dung dịch mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi (7.5) vào thiết bị sắc kí khí (5.14) thiết bị sắc kí khí (5.15) Xác định nồng độ mẫu thử mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi Đồ án phân tích thực phẩm Trang 244