Sử dụng một số chỉ thị phân tử trong nghiên cứu tiến hóa các loài mang (muntiacinae) ở việt nam nhằm phục vụ bảo tồn

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  NGUYỄN VĂN THÀNH SỬ DỤNG MỘT SỐ CHỈ THỊ PHÂN TỬ TRONG NGHIÊN CỨU TIẾN HÓA CÁC LOÀI MANG (MUNTIACINAE) Ở VIỆT NAM NHẰM PHỤC VỤ BẢO TỒN LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC HÀ NỘI - 2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  NGUYỄN VĂN THÀNH SỬ DỤNG MỘT SỐ CHỈ THỊ PHÂN TỬ TRONG NGHIÊN CỨU TIẾN HÓA CÁC LOÀI MANG (MUNTIACINAE) Ở VIỆT NAM NHẰM PHỤC VỤ BẢO TỒN Chuyên ngành : Di truyền học Mã số : 60420121 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Cán hướng dẫn: TS Lê Đức Minh PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân HÀ NỘI - 2015 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành tốt luận văn này, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Lê Đức Minh PGS TS Nguyễn Thị Hồng Vân, người trực tiếp hướng dẫn nhiệt tình bảo suốt trình học tập nghiên cứu Thầy cô cho nhiều kiến thức chuyên môn bồi đắp niềm đam mê, tính sáng tạo trình nghiên cứu Bên cạnh đó, muốn bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới thầy cô giáo Bộ môn Di truyền học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên tạo điều kiện thuận lợi động viên trình học tập môn, tạo điều kiện thuận lợi trang thiết bị sở vật chất cho trình học tập thực luận văn Đồng thời gửi lời cám ơn chân thành tới cán thuộc Trung tâm Nghiên cứu Tài nguyên Môi trường, Đại học Quốc gia Hà Nội; bạn đồng nghiệp giúp thu thập, phân loại mẫu vật quý giá để sử dụng nghiên cứu Cuối cùng, muốn gửi lời cám ơn chân thành tới gia đình, người thân, bạn bè, người bên cổ vũ động viên vượt qua khó khăn trình học tập nghiên cứu Hà Nội, tháng 06 năm 2015 Học viên Nguyễn Văn Thành MỤC LỤC: DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC CÁC HÌNH ii DANH MỤC CÁC BẢNG iii MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan nhóm Mang 1.1.1 Nhóm Mang giới 1.1.2 Nhóm Mang Việt Nam Xây dựng phát sinh chủng loại dựa thị phân tử 2.1 Phương pháp phân tử đánh giá đa dạng di truyền loài Mang sử dụng nghiên cứu 2.2 Các phương pháp sử dụng để xây dựng loài phát sinh 10 2.3 Phân tích thời gian tiến hóa 13 2.4 Gen thị sử dụng phân tích 13 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu nghiên cứu 16 16 1.1 Mẫu vật nghiên cứu 16 1.2 Hóa chất sử dụng nghiên cứu 16 1.3 Các cặp mồi sử dụng cho phản ứng PCR 17 1.4 Các thiết bị sử dụng cho nghiên cứu: 23 Phương pháp nghiên cứu 23 2.1 Tách chiết ADN tổng số 23 2.2 Phản ứng PCR 24 2.3 Điện di, tinh giải trình tự gen 26 2.4 Xây dựng phát sinh chủng loại phân tích thời gian tiến hóa 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 Kết tách chiết ADN tổng số 31 Kết khuyếch đại gen phản ứng PCR 32 Kết giải trình tự 34 Kết xây dựng phát sinh chủng loại 35 4.1 Nhánh A - Nhánh Mang Ấn Độ 36 4.2 Nhánh B 36 Kết phân tích thời gian tiến hóa KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 45 KẾT LUẬN 45 KIẾN NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT 47 TÀI LIỆU TIẾNG ANH 47 DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt ADN Deoxyribo nucleic acid Axit deoxyribonucleic bp base pair Cặp bazơ nitơ EDTA Ethylen Diamine Tetraacetic Acid Axit ethylen diamin tetraaxetic kb kilobase(=1000bp) Kilo bazơ ML Maximum Likelyhood Hợp lý tối đa MP Maximum Parsimony Tiết kiệm tối đa mtDNA mitochondrial DNA Hệ gen ty thể OD Optical Density Mật độ quang học PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp rcf relative centrifugal force Lực ly tâm tương đối nR Number of root tree Số có gốc nU Number of unroot tree Số không gốc unweighted pair group with unweighted pair group with arithmetic mean arithmetic mean UPGMA i DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Mang Ấn Độ (M vaginalis) Hình Mang Vũ Quang (M vuquangensis) Hình Mang Trường Sơn (M truongsonensis) Hình Bản đồ địa điểm khu bảo tồn tiến hành thu mẫu 22 Hình Ảnh điện di ADN tổng số số mẫu xương gel Agarose 1%, Marker 1kb Hình Ảnh điện di ADN tổng số số mẫu da khô gel Agarose 1%, Marker 1kb Hình Ảnh điện di số sản phẩm nhân phân đoạn gen cyt-b-1 (450bp) gel Agarose 1%, marker 100bp Hình Ảnh điện di số sản phẩm nhân phân đoạn gen cyt-b-2 (450bp) gel Agarose 1%, marker 100bp Hình Ảnh điện di số sản phẩm nhân phân đoạn gen ND4 (450bp) gel Agarose 1%, marker 100bp Hình 10 Ảnh điện di số sản phẩm nhân phân đoạn gen G-fib (450bp) gel Agarose 1%, marker 100bp Hình 11 Ảnh điện di sản phẩm PCR lần lần Hình 12 Tín hiệu bị nhiễu nucleotide đầu phản ứng giải trình tự Hình 13 Cây phát sinh chủng loại thu dựa liệu gen cytochrome b (1140bp) sử dụng phương pháp Bayesian Hình 14 31 31 32 32 33 33 33 34 38 Cây phát sinh chủng loại dựa liệu kết hợp gen ty thể gen nhân (gồm 2431 bp, 218 vị trí có giá trị 41 thông tin) sử dụng phương pháp Bayesian, MP, ML Hình 15 Cây phát sinh chủng loại thể thời gian tiến hóa nhóm Mang ii 44 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Danh sách loài Mang giới Bảng Số lượng không gốc có gốc với số lượng taxa 10 từ - 10 Bảng Danh sách thông tin mồi sử dụng cho nghiên cứu 17 Bảng Thông tin mã số ngân hàng gen trình tự tên 18 mẫu, địa điểm thu mẫu Bảng Thành phần phản ứng PCR 25 Bảng Chu trình nhiệt phản ứng PCR 25 Bảng Khoảng cách di truyền mẫu Mang 40 Roosevelt dựa liệu kết hợp gen Cyt-b, ND4, 16S, G - fibrinogen Bảng Khoảng cách di truyền mẫu Mang lớn 42 Bảng Địa điểm thu mẫu Mang lớn 42 Bảng 10 Khoảng thời gian tiến hóa vị trí tiến 43 hóa iii MỞ ĐẦU Việt Nam biết đến đất nước đa dạng cao hệ sinh thái, sông ngòi, hệ thống loài động thực vật Các vùng tự nhiên Việt Nam có nhiều loài nhiều số không tìm thấy nơi khác giới Các nghiên cứu nhằm tìm kiếm loài mới, đánh giá chi tiết mức độ đa dạng hệ thống động thực vật Việt Nam tiếp tục thu hút quan tâm nhà nghiên cứu Tuy nhiên, nhiều loài Việt Nam chưa nghiên cứu chi tiết nhiều khó khăn gặp phải trình nghiên cứu Cụ thể, 15 năm trở lại đây, năm loài Mang (Muntiacus) tìm thấy Việt Nam dạng loài xác nhận có nước [7 , 12 , 42] Mặc dù vậy, chưa có nghiên cứu chi tiết, đánh giá phân bố, đa dạng di truyền quan hệ tiến hóa loài Mang lãnh thổ Việt Nam Điều phần tính quý hiếm, khó bắt gặp tập tính nhút nhát loài Mang Ngoài ra, chúng xếp vào hạng mục thiếu liệu, nguy cấp nguy cấp sách đỏ giới Do đó, việc điều tra sử dụng phương pháp truyền thống không đánh giá xác mức độ đa dạng nhóm này, mẫu thu từ điều tra thực địa không cho phép thực nghiên cứu so sánh kỹ lưỡng mặt hình thái Trong đó, với phát triển sinh học phân tử năm gần đây, phương pháp sử dụng ADN dần trở thành công cụ hữu hiệu để điều tra tổng thể loài khó bắt gặp giúp làm sáng tỏ mối quan hệ tiến hóa loài nghiên cứu Trong hoàn cảnh này, việc nhận dạng sử dụng phương pháp thu mẫu không trực tiếp dựa, thị phân tử ADN mẫu Mang hứa hẹn có hiệu cao Vì vậy, thực đề tài “Sử dụng số thị phân tử nghiên cứu tiến hóa loài Mang (Muntiacinae) Việt Nam nhằm phục vụ bảo tồn” với mục đích đánh giá cụ thể mức độ đa dạng, phân bố, mối quan hệ tiến hóa loài Mang Việt Nam CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan nhóm Mang 1.1.1 Nhóm Mang giới Mang nhóm loài thú móng guốc thuộc họ hươu nai Cervidae, phân họ Muntiacinae, giống Muntiacus; nhóm giới nay, dựa theo liệu thu sách đỏ giới (The IUCN red list of threatended species) xác định có 13 loài (Bảng 1) Mang có thể nhỏ, sống đơn độc theo nhóm nhỏ, môi trường sống chúng thường khu rừng xanh nhiệt đới châu Á với độ cao tương đối lớn Rất nhiều loài Mang bị đe dọa tình trạng săn bắn bất hợp pháp, tình trạng dần môi trường sống chúng [20 , 30] Hiện nay, vài loài Mang Mang đen (Muntiacus crinifrons), Mang Reeve (Muntiacus reevesi) tập trung nghiên cứu, đánh giá [11 , 31 , 35] Tuy nhiên, phần lớn loài Mang khác chưa có nghiên cứu cụ thể Do đó, thông tin loài ít, chí số loài Mang không phát cuối kỷ 20, đầu kỷ 21 (như Mang Roosevelt Việt Nam - Lào, Mang Ghongshan tây nam Trung Quốc, Mang lớn vùng biên giới Việt Nam Lào) [30] Loài Mang Roosevelt (M rooseveltorum) từ sau khhi mô tả năm 1932 bắt gặp, năm 1999 tái phát trở lại tại Lào, mẫu tìm thấy mẩu xương nhỏ sọ [7]; từ thời điểm 1999 chưa có công bố nghiên cáo cho thấy xuất loài Loài Mang Putao (M putaoensis) mô tả năm 1999 [6] có vùng phân bố phía Bắc Myanmar có quan hệ gần với loài Mang khác có khu phân bố dãy Trường Sơn Mang Trường Sơn (M truongsonensis) Mang Roosevelt (M rooseveltorum) Ba loài có hình thái nhỏ nhiều đặc điểm giống kể quan hệ di truyền [6 , 23] Mang vàng Borneo (Muntiacus TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Đinh Đoàn Long, Đỗ Lê Thăng (2009) Cơ sở di truyền học phân tử tế bào, Nhà xuất Đại học Quốc Gia Hà Nội Lê Đức Minh (2008), “Thuyết trình đề cương : Nghiên Cứu Tiến Hóa Bảo Tồn Loài Mang (Cervidae: Muntiacinae) Việt Nam Phương Pháp Sinh Học Phân Tử”, pp 1-15 Lê Đức Minh, Dương Thúy Hà, Nguyễn Văn Thành, Nguyễn Mạnh Hà, Đinh Đoàn Long, Đỗ Tước, Nguyễn Đình Hải (2013), “Phương pháp chiết tách nhân dòng DNA từ mẫu mô động vật có chất lượng DNA thấp phục vụ nghiên cứu đa dạng sinh học ”, Tạp chí Sinh học 35 pp 116 - 124 Lê Đức Minh, Nguyễn Văn Thành, Dương Thúy Hà, Nguyễn Mạnh Hà, Nguyễn Thị Hồng Vân, Nguyễn Đình Hải, Phạm Anh Tám, Đỗ Trọng Tước (2014), “Đánh giá đa dạng di truyền loài mang (Cervidae: Muntiacus) khu bảo tồn thiên nhiên Xuân Liên”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ, 30(4S), pp 117-123 TÀI LIỆU TIẾNG ANH 10 11 Alexandre, H., Frederic, D., Anne, R., Catrin, H (2011), “Pattern and timing of diversification of Cetartiodactyla (Mammalia, Laurasiatheria), as revealed by a comprehensive analysis of mitochondrial genomes”, Biologies, 335, pp 32-50 Amato, G., Egan, M G., Rabinowitz, A (1999), “A new species of muntjac, Muntiacus putaoensis (Artiodactyla: Cervidae) from northern Myanmar”, Animal Conservation, 2, pp 1-7 Amato, G., Egan, M G., Schaller, G B., Barker, R H., Rosenbaum, H C., and Robichaud, W G (1999), “Rediscovery of Roosevelts's Barking Deer (Muntiacus roosevelttorum)”, Journal of Mammalogy, 80, pp 639-643 Birks, S M and Edwards, S.V (2002), “A phylogeny of the megapodes (Aves: Megapodiidae) based on nuclear and mitochondrial DNA sequences”, Molecular Phylogenetics and Evolution, 23(3), pp 408-421 Brandley, M.C., Schmitz, A., Reeder, T.W (2005 ), “Partitioned Bayesian analyses, partition choice, and the phylogenetic relationships of scincid lizards ”, Syst Biol , 54, , pp 373–390 Chau, B (1997), “Another new discovery in Vietnam”, Vietnam Economic News, 47, pp 46-47 Chen, M., Guo, G P., Wu, P J., Zhang, E D (2007), “Identification of black muntjac (Muntiacus crinifrons) in Tibet, China, by cytochrome b analysis”, Conservation Genetics 47 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Do, T., D, Vu., Dawson, S., Arctander, P., Mackinnon, J (1994), “Introduction of a new large mammal species in Vietnam”, Science and Technology News, 1994, pp 4-13 Drummond, A J., Ho, S Y., Phillips, M J., Rambaut, A (2006), “Relaxed phylogenetics and dating with confidence”, PLoS Biol, 4(5), pp e88 Drummond, A J., Rambaut, A (2007), “BEAST: Bayesian evolutionary analysis by sampling trees”, BMC Evol Biol, 7, pp 214 Edwards A W F., Cavalli, S L L (1963), “The reconstruction of evolution ”, Heredity 18:553 Egan, M G (2000), “The identification of species by diagnostic molecular characters and the phylogenetic relationships of muntjac”, Ph.D Dissertation, Fordham University, New York Evans, T (1995), “Spotlight on Laos”, Wildlife Conservation, 98, pp 52-57 Felsenstein, J (1985), “Confidence limits on phylogenies: an approach using the bootstrap”, Evolution 39, pp 783-791 George, B S., Elisabeth, S V (1996), “Description of the giant muntjac (Megamuntiacus vuquangensis) in Laos”, Journal of Mammalogy, 77, pp 675-683 Gilbert, C., Ropiquet, A., Alexandre, H (2006), “Mitochondrial and nuclear phylogenies of Cervidae (Mammalia, Ruminantia): Systematics, morphology, and biogeography”, Molecular Phylogenetics and Evolution, 40, pp 18 Hillis, D M., Bull, J J (1993), “An Empirical Test of Bootstrapping as a Method for Assessing Confidence in Phylogenetic Analysis”, Systematic biology, 42(2), pp 182-192 Huelsenbeck, J P., Ronquist, F (2001), “MRBAYES: Bayesian inference of phylogenetic trees”, Bioinformatics, 17(8), pp 754-755 James, J., Ramakrishnan, U., Datta, A (2007), “Molecular evidence for the occurrence of the leaf deer Muntiacus putaoensis in Arunachal Pradesh, north-east India”, Conservation Genetics, 9(4), pp 927-931 Jose, C (2001), “Cytochrome b Phylogeny and the Taxonomy of Great Apes and Mammals”, Molecular Biology and Evolution, 18(4), pp 465-471 Kumar S., A J F (2001), “Molecular Phylogeny Reconstruction”, Encyclopedia of life sciences,(Macmillan Publishers) Le, M., Duong, T H., Dinh, D L., Nguyen, Q T., Pritchard, P.C.H (2014), “A phylogeny of softshell turtles (Testudines: Trionychidae) with reference to the taxonomic status of the critically endangered, giant softshell turtle, Rafetus swinhoei”, Organisms Diversity & Evolution, 14(3), pp 279-293 Le, M., Mccord, W.P., and Iverson, J B (2007), “On the paraphyly of the genus Kachuga (Testudines: Geoemydidae)”, Mol Phylogenet Evolution, 45(1), pp 398-404 Le, M., Nguyen, V T., Duong, T H., Nguyen, M H., Dinh, D L., Do, T., Nguyen, D H., and Amato, G (2014), “Discovery of the Roosevelt’s 48 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 Barking Deer (Muntiacus rooseveltorum) in Vietnam”, Conservation Genetics, 15(4), pp 993-999 Le, M., Raxworthy, C.J., Mccord, W.P., and Mertz, L (2006), “A molecular phylogeny of tortoises (Testudines: Testudinidae) based on mitochondrial and nuclear genes”, Mol Phylogenet Evolution, 40(2), pp 517-531 Mattioli, S., Family Cervidae (Deer), in Hoofed Mammals 2011 Mc Cullough, D R., Pei, K C J., Wang, Y (2000), “Home range, activity patterns, and habitat relations of Reeves' muntjacs in Taiwan”, Journal of Wildlife Management, 64, pp 430-441 Nylander, J A., Ronquist, F., Huelsenbeck, J P., and Nieves-Aldrey, J L (2004), “Bayesian phylogenetic analysis of combined data”, Systematic biology, 53(1), pp 47-67 Osgood, W.H (1932), “Mammals of the Kelley-Roosevelts and Delacour Asiatic expeditions Field Museum of Natural History Publications 312”, Zoological Series, 18, pp 192-339 Page, R D M., Holmes, E C (1998), Molecular Evolution: Aphylogenetic Approach, Blackwell Publishing Ltd Pei-Yi Chang, C C L., Shu-Ju Liao, Lie-Jiau Hsieh, Shuan-Yow Li, MingChieh Chao, Yueuh-Chun Li (2004), “Genetic analysis of two subspecies of Reeves's Muntjac (Cervidae: Muntiacus reevesi) by karyotyping and satellite DNA analyses”, Zoological Studies, 43, pp 749-758 Pham, M G., Do, T., Vu, V D., Geoge, A (1998), “Description of Muntiacus truongsonensis, a new species of muntjac (Artiodactyla: Muntiacidae) from central Vietnam and implication for conservation”, Animal Conservation, 1, pp 61-68 Posada D and Crandall, K (1998), “MODELTEST: testing the model of DNA substitution”, Bioinformatics, 14(817-818) Scott, K (1994), “Vietnam explosion”, BBC wildlife, 12, pp 12 Swofford, D L (2001), “Phylogenetic Analysis Using Parsimony (*and other methods), version 4”, Sinauer Associates, Massachusetts Evans, T., Timmin, R J (1994), “News from Laos”, Oryx, 29, pp 3-4 Timmins, R J., Duckworth, J W (2012), “Muntiacus In: 2012 IUCN Red List of Threatened Species[...]...TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT 1 2 3 4 Đinh Đoàn Long, Đỗ Lê Thăng (2009) Cơ sở di truyền học phân tử và tế bào, Nhà xuất bản Đại học Quốc Gia Hà Nội Lê Đức Minh (2008), “Thuyết trình đề cương cơ bản : Nghiên Cứu Tiến Hóa và Bảo Tồn của các Loài Mang (Cervidae: Muntiacinae) ở Việt Nam bằng Phương Pháp Sinh Học Phân Tử , pp 1-15 Lê Đức Minh, Dương Thúy Hà, Nguyễn Văn... 1 Cây phát sinhloài cho nhánh Mang Roosevelt dựa trên dữ liệu gen 16S Cây phát sinh chủng loại cho nhánh Mang Roosevelt dựa trên dữ liệu gen 16S (gồm 567 bp, trong đó 22 vị trí có giá trị thông tin) Hình dáng cây được dựa trên cây của phân tích MP Các chỉ số phía trên nhánh lần lượt là giá trị bootstrap của phân tích MP và ML, chỉ số phía dưới là giá trị xác suất hậu nghiệm thu được ở phương pháp Bayesian... “Phương pháp chiết tách và nhân dòng DNA từ các mẫu mô động vật có chất lượng DNA thấp phục vụ nghiên cứu đa dạng sinh học ”, Tạp chí Sinh học 35 pp 116 - 124 Lê Đức Minh, Nguyễn Văn Thành, Dương Thúy Hà, Nguyễn Mạnh Hà, Nguyễn Thị Hồng Vân, Nguyễn Đình Hải, Phạm Anh Tám, Đỗ Trọng Tước (2014), “Đánh giá đa dạng di truyền các loài mang (Cervidae: Muntiacus) tại khu bảo tồn thiên nhiên Xuân Liên”, Tạp chí Khoa... ML, chỉ số phía dưới là giá trị xác suất hậu nghiệm thu được ở phương pháp Bayesian Dấu * tương ứng với giá trị đạt 100% Với các thông tin của cây MP như sau: chiều dài cây = 43, 5 0chỉ số chắc chắn = 0.86, chỉ số duy trì = 0.84 Taxon được đánh dấu đỏ là mẫu gen 16S chuẩn cho loài Mang Roosevelt ... discovery in Vietnam”, Vietnam Economic News, 47, pp 46-47 Chen, M., Guo, G P., Wu, P J., Zhang, E D (2007), “Identification of black muntjac (Muntiacus crinifrons) in Tibet, China, by cytochrome b analysis”, Conservation Genetics 47 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Do, T., D, Vu., Dawson, S., Arctander, P., Mackinnon, J (1994), “Introduction of a new large mammal species in Vietnam”, Science... of Muntiacus truongsonensis, a new species of muntjac (Artiodactyla: Muntiacidae) from central Vietnam and implication for conservation”, Animal Conservation, 1, pp 61-68 Posada D and Crandall, K (1998), “MODELTEST: testing the model of DNA substitution”, Bioinformatics, 14(817-818) Scott, K (1994), “Vietnam explosion”, BBC wildlife, 12, pp 12 Swofford, D L (2001), “Phylogenetic Analysis Using Parsimony... H., Nguyen, M H., Dinh, D L., Do, T., Nguyen, D H., and Amato, G (2014), “Discovery of the Roosevelt’s 48 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 Barking Deer (Muntiacus rooseveltorum) in Vietnam”, Conservation Genetics, 15(4), pp 993-999 Le, M., Raxworthy, C.J., Mccord, W.P., and Mertz, L (2006), “A molecular phylogeny of tortoises (Testudines: Testudinidae) based on mitochondrial and nuclear... Tước (2014), “Đánh giá đa dạng di truyền các loài mang (Cervidae: Muntiacus) tại khu bảo tồn thiên nhiên Xuân Liên”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên và Công nghệ, 30(4S), pp 117-123 TÀI LIỆU TIẾNG ANH 5 6 7 8 9 10 11 Alexandre, H., Frederic, D., Anne, R., Catrin, H (2011), “Pattern and timing of diversification of Cetartiodactyla (Mammalia, Laurasiatheria), as revealed by a comprehensive analysis