Nhân Giống Cây Ba Kích Tím (Morinda Officinalis How) Bằng Phương Pháp Nuôi Cấy Mô Tế Bào Tại Quảng Ninh

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM *** BÙI THỊ HƯƠNG PHÚ NHÂN GIỐNG CÂY BA KÍCH TÍM (Morinda officinalis How) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO TẠI QUẢNG NINH CHUYÊN NGÀNH: LÂM HỌC MÃ SỐ: LUẬN VĂN THẠC SĨ LÂM SINH NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS TRẦN THỊ THU HÀ THÁI NGUYÊN, NĂM 2012 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc LỜI CAM ĐOAN Tên là: Bùi Thị Hương Phú Học viên cao học khóa 18 Chuyên ngành: Lâm học khóa 2010 - 2012 Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên - Đại học Thái Nguyên Đến hoàn thành luận văn nghiên cứu cuối khóa học Tôi xin cam đoan: - Đây công trình nghiên cứu thực - Số liệu kết nêu luận văn trung thực, khách quan - Các kết luận khoa học luận văn chưa công bố nghiên cứu khác - Các thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm lời cam đoan Thái Nguyên, ngày tháng năm 2012 Người làm cam đoan Bùi Thị Hương Phú NHỮNG TỪ VIẾT TẮT CT - Công thức TN- Thí nghiệm ĐHST – Điều tiết sinh trưởng MS – Murashinge and Skoog, 1962 BAP – 6- benzylaminopurine Kinetin – 6- furfurylaminopurine NAA - ɑ- Napahlene axetic acid IBA - Indol – 3- butyric acid HSNC – Hệ số nhân chồi TLCHH – Tỷ lệ chồi hữu hiệu -1- MỤC LỤC CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu chung 1.2.2.Mục tiêu cụ thể 1.3 Ý nghĩa đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 10 2.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.2 Cơ sở khoa học phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.2.1 Tính toàn tế bào 10 2.2.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 11 2.3 Các nhân tố ảnh hưởng tới trình nhân giống phương pháp nuôi cấy mô tế bào 13 2.3.1 Môi trường nuôi cấy 13 2.3.2 Chất điều hòa sinh trưởng 18 2.3.3 Môi trường vật lý 20 2.3.4 Điều kiện vô trùng 21 2.4 Các giai đoạn trình nhân giống 21 2.5 Những ưu điểm hạn chế vi nhân giống 23 2.6 Những nghiên cứu nuôi cấy mô tế bào 25 2.6.1 Trên giới 25 2.6.2 Ở Việt Nam 26 2.7 Tổng quan Ba kích 27 2.7.1 Đặc điểm thực vật học 27 -2- 2.7.2 Đặc điểm sinh lý, sinh thái 28 2.7.3 Giá trị kinh tế giá trị sử dụng 31 2.7.4 Nhân giống Ba kích 32 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 34 3.2 Nội dung nghiên cứu 34 3.3 Phương pháp nghiên cứu 35 3.4 Bố trí thí nghiệm 41 3.5 Thu thập số liệu xử lý số liệu 41 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 43 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng tới tỷ lệ sống mẫu cấy 43 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng H2O2 đến tỷ lệ sống mẫu cấy 43 4.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng Clolox đến tỷ lệ sống mẫu cấy 45 4.1.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng thủy ngân chlorua đến tỷ lệ sống mẫu cấy 46 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến hệ số nhân chồi tỷ lệ chồi hữu hiệu 49 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng BAP đến hệ số nhân chồi tỷ lệ chồi hữu hiệu 50 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng Kinetin đến hệ số nhân chồi tỷ lệ chồi hữu hiệu 53 -3- 4.2.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng phối hợp chất điều tiết sinh trưởng BAP Kinetin đến hệ số nhân chồi tỷ lệ chồi hữu hiệu 56 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng đến khả rễ chồi Ba kích 60 4.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng NAA đến khả rễ chồi Ba kích 60 4.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều tiết sinh trưởng IBA đến khả rễ chồi Ba kích tím 64 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến tỷ lệ sống sinh trưởng chiều cao Ba kích tím giai đoạn vườn ươm 68 CHƯƠNG KẾT LUẬN, TỒN TẠI VÀ KIẾN NGHỊ 72 5.1 Kết luận 72 5.2 Tồn 72 5.3 Kiến nghị 72 TÀI LIỆU THAM KHẢO 74 PHỤ LỤC 77 -4- DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hưởng chất khử trùng H2O2 đến tỷ sống mẫu cấy Bảng 4.2 Ảnh hưởng chất khử trùng Clolox tới tỷ lệ sống mẫu cấy Bảng 4.3 Ảnh hưởng chất khử trùng HgCl2 tới tỷ lệ sống mẫu cấy Bảng 4.4 Ảnh hưởng BAP đến HSNC TLCHH sau tuần nuôi cấy Bảng 4.5 Ảnh hưởng Kinetin đến hệ số nhân chồi tỷ lệ chồi hữu hiệu chồi hữu hiệu Bảng 4.6 Ảnh hưởng 2mg/lBAP + Kinetin đến hệ số nhân chồi tỷ lệ Bảng 4.7 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA đến rễ chồi Ba kích Bảng 4.8 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng IBA đến khả rễ chồi Ba kích Bảng 4.9 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện đến tỷ lệ sống chiều cao giai đoạn vườn ươm DANH MỤC ĐỒ THỊ Đồ thị 4.1 Ảnh hưởng chất khử trùng H2O2 đến tỷ sống mẫu cấy Đồ thị 4.2 Ảnh hưởng chất khử trùng Clolox tới tỷ lệ sống mẫu cấy Đồ thị 4.3 Ảnh hưởng chất khử trùng HgCl2 tới tỷ lệ sống mẫu cấy Đồ thị 4.4 Ảnh hưởng BAP đến hệ số nhân chồi Đồ thị 4.5 Ảnh hưởng BAP đến tỷ lệ chồi hữu hiệu Đồ thị 4.6 Ảnh hưởng Kinetin đến đến hệ số nhân chồi Đồ thị 4.7 Ảnh hưởng Kinetin đến tỷ lệ chồi hữu hiệu Đồ thị 4.8 Ảnh hưởng 2mg/l BAP + kinetin đến hệ số nhân chồi Đồ thị 4.9 Ảnh hưởng 2mg/l BAP + Kinetin đến tỷ lệ chồi hữu hiệu Đồ thị 4.10 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA tới tỷ lệ chồi -5- rễ Đồ thị 4.11 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA tới số rễ trung bình (rễ/cây) Đồ thị 4.12 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA tới chiều dài trung bình rễ (cm) Đồ thị 4.13 Ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng IBA tới tỷ lệ chồi rễ Đồ thị 4.14 Ảnh hưởng IBA tới số rễ trung bình (rễ/cây) Đồi thị 4.15 Ảnh hưởng IBA tới chiều dài trung bình rễ Đồ thị 4.16 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện tới tỷ lệ sống giai đoạn vườn ươm Đồ thị 4.17 Ảnh hưởng thời gian huấn luyện tới chiều cao trung bình giai đoạn vườn ươm DANH MỤC ẢNH Hình 4.1 Nuôi cấy khởi đầu Hình 4.2 Chồi nuôi cấy môi trường MS có bổ sung BAP Hình 4.3 Chồi nuôi môi trường MS có bổ sung Kinetin Hình 4.4 Chồi nuôi môi trường MS có bổ sung 2mg/l BAP+ Kinetin Hình 4.5 Chồi nuôi cấy môi trường có bổ sung NAA Hình 4.6 Chồi nuôi cấy môi trường có bổ sung IBA Hình 4.7 Chồi Ba kích nuôi cấy mô sinh trưởng giá thể vườn ươm -6- LỜI CẢM ƠN Luận văn thực hoàn thành theo chương trình đào tạo thạc sĩ lâm nghiệp trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Nhân dịp hoàn thành luận văn, tác giả bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Thị Thu Hà Người bồi dưỡng kiến thức quý báu dành tình cảm tốt đẹp cho tác giả từ hình thành, phát triển ý tưởng, xây dựng đề cương, tổ chức triển khai hoàn thiện luận văn Sau thời gian học tập hoàn thành luận văn tốt nghiệp này, nhận quan tâm giúp đỡ tận tình Trường đại học Nông Lâm Thái Nguyên, đặc biệt khoa sau đại học, thầy cô giáo trực tiếp giảng dạy Xin trân trọng cảm ơn tập thể cán phòng công nghệ sinh học trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên tư vấn, góp ý trình hoàn thiện luận văn Đối với địa phương, tác giả chân thành cảm ơn cán công nhân viên phòng công nghệ sinh học Trường Cao đẳng Nông lâm Đông Bắc Nơi tác giả tiến hành nghiên cứu, thu thập số liệu để hoàn thiện luận văn Xin cảm ơn bạn bè đồng nghiệp, gia đình khuyến khích, giúp đỡ tác giả trình học tập thực luận văn Mặc dù làm việc nghiêm túc với tất nỗ lực, song luận văn không tránh khỏi thiếu sót định Tác giả mong nhận ý kiến đóng góp quý báu Thầy, Cô giáo, nhà khoa học, bạn bè đồng nghiệp xin chân thành tiếp thu ý kiến đóng góp Xin trân trọng cảm ơn! Tác giả BÙI THỊ HƯƠNG PHÚ -7- CHƯƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Với mục tiêu phát triển nghành Lâm nghiệp Việt Nam giai đoạn 2010 2020 nâng cao tỷ lệ che phủ rừng chất lượng rừng trồng Do loài trồng không lấy gỗ lâu năm phù hợp với hoàn cảnh đất trồng rừng mà phải đảm bảo có suất cao, chu kỳ kinh doanh ngắn có nhiều tác dụng đáp ứng nhu cầu cấp thiết đặt Đặc biệt năm gần việc trồng lâm sản gỗ tán rừng xem chiến lược lớn nhằm đáp ứng hiệu kinh tế đơn vị diện tích trồng rừng cải thiện môi trường tính đa dạng sinh học rừng Một loài dược liệu có giá trị kinh tế cao đưa vào trồng xen tán rừng Ba Kích Cây Ba kích có loại Ba kích trắng Ba kích tím Cây Ba kích tím sử dụng nhiều hàm lượng dược liệu có củ tốt so với Ba kích trắng Cây Ba kích tím (Morinda officinalis How) thuộc họ cà phê Rubioceae Cây Ba kích tím xem địa tỉnh Quảng Ninh loài dược liệu quý có nhiều công dụng Nước Ba kích sắc có tác dụng hạ huyết áp, tăng sức dẻo dai, tăng cường đề kháng thể, chống viêm, chữa thận hư, tráng dương, phụ nữ khó thụ thai, tay chân đau nhức, chữa gân xương yếu… có giá trị xuất cao Ngoài củ Ba kích dùng ngâm rượi loại đặc sản Quảng Ninh Những năm gần Ba kích mọc tự nhiên rừng bị khai thác cạn kiệt dẫn đến diện tích bị thu hẹp, nguồn giống cạn dần Hiện nhiều hộ gia đình tiến hành phát triển trồng Ba kích Song từ trước đến chủ yếu dùng giống nhân từ hạt hom Việc nhân giống hạt -74- TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TRONG NƯỚC Ngô Xuân Bình Nguyễn Thị Thúy Hà (2000), Giáo trình công nghệ sinh học Bộ KHCN&MT Sách đỏ Việt Nam NXBKHKT, Hà Nội 1996 Lê Văn Chi, (1992), Cách sử dụng chất điều hoà sinh trưởng vi lượng hiệu cao, NXB Khoa học - Kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Chiều (2001), Báo cáo nghiệm thu đề tài cấp Bộ KHYD 02-21RViện Dược liệu Nguyễn Chiều (1999), Nghiên cứu sản xuất giống Ba kích từ hạt Tạp chí Dược học số 7/1999, trang 18-19 Nguyễn Chiều (2001), Kết bước đầu nghiên cứu trồng Ba kích Phú Thọ, Tạp chí Dược học, số 1/2001, trang 6-8 Nguyễn Chiều, Lê Thanh Sơn (2002), Nghiên cứu trồng Ba kích mô hình vườn gia đình, vườn trang trại, Tạp chí Dược học, số 10/2002, trang 8-10 Nguyễn Chiều, Nguyễn Tập (2007), Ba kích, Dự án hỗ trợ chuyên ngành lâm sản gỗ Việt Nam.NXB lao động Dược điển Việt Nam (in lần thứ 3) NXB Y học – Hà Nội, trang 310-311 10 Lê Đình Khả, Đoàn Thị Mai (2002), “Một số phương thức nhân giống sinh dưỡng sản xuất lâm nghiệp”, Công nghệ nhân sản xuất giống trồng, giống lâm nghiệp giống vật nuôi, Nhà xuất Lao động xã hội (Chủ biên: Ngô Thế Dân, Lê Hưng Quốc) Hà Nội (2002) 11 Lê Đình Khả cộng (2003), chọn tạo nhân giống cho số loài trồng rừng chủ yếu Việt Nam, NXB nông nghiệp, Hà Nội -75- 12 Đỗ Tất Lợi (2003), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, tr 742-744 13 Hoàng Thanh Lộc (2004), Tài liệu nhân giống sinh dưỡng trồng 14 Dương Mộng Hùng, Lê Đình Khả (2003), Giống rừng, NXB Nông nghiệp Hà Nội 15 Đặng Ngọc Hùng, Ngô Xuân Bình, Nguyễn Thị Minh Trâm nhân giống Ba kích tím phương pháp nuôi cấy mô tế bào Tạp chí Đại học nông lâm Thái Nguyên 16 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật - Nghiên cứu ứng dụng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 17 Nguyễn Quang Thạch (1995), Công nghệ sinh học thực vật, NXB nông nghiệp Hà Nội 18 Nhiều tác giả (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập NXB Khoa học kỹ thuật- Hà Nội 19 Vũ Thị Huệ, Nguyễn Thị Hồng Ngấm (2008), giảng Vi nhân giống lâm nghiệp quan trọng Đại học lâm nghiệp 20 Đỗ Năng Vịnh (2005), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng NXB nông nghiệp 21 Đỗ Năng Vịnh (2002), CNSH trồng NXB nông nghiệp 22 Vũ Văn Vụ, Lê Hồng Điệp (2006), Công nghệ sinh học NXB giáo dục 23 Vũ Văn Vụ (1994), Sinh lý thực vật NXB khoa học kỹ thuật Hà Nội 24 Viện nghiên cứu nguyên liệu giấy Giáo trình công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật 2003 TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI -76- 24.Animal Biotechnology: Science-based Concerns 2002 The National Academies Press Washington 25.Murashige T.and SkoogF (1962) “A resied medium for rapid growth and bioassays wirh tobacoo tissue cultures”.physiol Pant 26 Ban huấn luyện đào tạo cán dược liệu Trung Quốc(1965) Kỹ thuật nuôi trồng chế biến dược liệu NXB Y học Bắc Kinh Bản dịch Nguyễn Văn Lam, Đỗ Tất Lợi Nguyễn Văn Thạch NXB Nông nghiệp 27 Sharma J K (1994), Pathological investigations in forest nurseries and plantions in Vietnam, FAO VIE/92/022 Hanoi, Vietnam 28 Steet (1974) Plant tissue and cell culture, Bormonogrvol, Black well scient, London 29 Trindate, H Ferreina, J G pais, M.S Aloni, R (1990), The role of Cytokinin and auxin in rapid multiplication of shoots of Eucalaptus globolus grown in vitro, Aust For -77- PHỤ LỤC Phụ lục 01 Thành phần môi trường môi trường MS Nhóm khoáng chất đa lượng Hóa chất Hàm lượng chất khoáng 1L môi trường (mg) KNO3 1900 NH4NO3 1650 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 CaCl2 332 Ghi Pha chung Pha riêng Nhóm khoáng chất vi lượng Hóa chất Hàm lượng chất khoáng 1L môi trường (mg) ZnSO4 8.6 H3BO3 6.2 Na2MoO4 0.25 CuSO4 0.025 CoCl2 0.25 KI 0.83 MnSO4.H2O 16.9 FeSO4.7H2O 27.84 Na2EDTA 37.24 Vitamins Ghi Pha chung Pha chung -78- Hóa chất 1L môi trường (mg) Thiamin HCl 0,1 Pyridxyl HCl 0,5 Nicotinic acid 0,5 Glyxin Myo- inoslol Ghi Pha chung 100 Pha riêng -79- PHẦN XỬ LÝ SỐ LIỆU SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE BANG 19/ 8/** 10:50 PAGE NGHIEN CUU ANH HUONG CUA CLOLOX DEN TY LE SONG CUA CHOI BKT ANOVA FOR SINGLE EFFECT - MS -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB CT 3.0000 0.00000 0.00 0.000 NL 0.30000 1.0833 0.28 0.909 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG 19/ 8/** 10:50 PAGE NGHIEN CUU ANH HUONG CUA CLOLOX DEN TY LE SONG CUA CHOI BKT MEANS FOR EFFECT MS MS 11 12 13 NOS 2 CT 1.00000 2.00000 2.00000 4.00000 4.00000 3.00000 NL 2.00000 1.00000 2.50000 2.00000 2.00000 2.00000 SE(N= 2) 0.000000 0.735980 5%LSD 6DF 0.000000 2.54587 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG 19/ 8/** 10:50 PAGE NGHIEN CUU ANH HUONG CUA CLOLOX DEN TY LE SONG CUA CHOI BKT F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE (N= NO OBS CT 12 NL 12 GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |MS 12) SD/MEAN | | BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 2.5000 1.1677 0.00000 0.0 0.0000 2.0000 0.85280 1.0408 52.0 0.9093 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLS FILE 1/ 1/** 0:20 PAGE nghien cuu anh huong cua H2O2 den ty le song cua Ba Kich VARIATE V003 TLS | -80- LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 927.909 309.303 272.52 0.000 * RESIDUAL 9.07989 1.13499 * TOTAL (CORRECTED) 11 936.989 85.1808 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 1/ 1/** 0:20 PAGE nghien cuu anh huong cua H2O2 den ty le song cua Ba Kich MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLS 0.000000 12.2333 23.3333 18.8667 SE(N= 3) 0.615084 5%LSD 8DF 2.00573 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 1/ 1/** 0:20 PAGE nghien cuu anh huong cua H2O2 den ty le song cua Ba Kich F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLS 12 13.608 9.2293 1.0654 7.8 0.0000 | BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLS FILE 1/ 1/** 0:26 PAGE anh huong cua thuy ngan den ty le song choi ba kich VARIATE V003 TLS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3781.91 1260.64 ****** 0.000 * RESIDUAL 3.63258 454072 - -81- * TOTAL (CORRECTED) 11 3785.54 344.140 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 1/ 1/** 0:26 PAGE anh huong cua thuy ngan den ty le song choi ba kich MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLS 0.000000 22.7667 50.0000 21.1333 SE(N= 3) 0.389047 5%LSD 8DF 1.26864 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 1/ 1/** 0:26 PAGE anh huong cua thuy ngan den ty le song choi ba kich F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLS 12 23.475 18.551 0.67385 2.9 0.0000 | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 1/ 1/** 0: PAGE Anh huong cua BAP đến HSNC TLCHH VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.21193 403978 228.67 0.000 * RESIDUAL 141332E-01 176665E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.22607 111461 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLCHH FILE 1/ 1/** 0: PAGE Anh huong cua BAP den HSNC TLCHH -82- VARIATE V004 TLCHH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 422.854 140.951 37.39 0.000 * RESIDUAL 30.1547 3.76933 * TOTAL (CORRECTED) 11 453.009 41.1826 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 1/ 1/** 0: PAGE Anh huong cua BAP den HSNC TLCHH MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNC TLCHH 1.00333 29.8267 1.39333 43.4300 1.88000 41.4333 1.27000 31.5933 SE(N= 3) 0.242669E-01 1.12091 5%LSD 8DF 0.791321E-01 3.65518 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 1/ 1/** 0: PAGE Anh huong cua BAP den HSNC TLCHH F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 12 1.3867 0.33386 0.42032E-01 3.0 0.0000 TLCHH 12 36.571 6.4174 1.9415 5.3 0.0001 | BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 1/ 1/** 0:14 PAGE Anh huong cua Kinetin den hieu qua nhan choi VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER -83- SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 302292 100764 134.35 0.000 * RESIDUAL 599997E-02 749997E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 308292 280265E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLCHH FILE 1/ 1/** 0:14 PAGE Anh huong cua Kinetin den hieu qua nhan choi VARIATE V004 TLCHH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 311.457 103.819 39.93 0.000 * RESIDUAL 20.8000 2.60000 * TOTAL (CORRECTED) 11 332.257 30.2051 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 1/ 1/** 0:14 PAGE Anh huong cua Kinetin den hieu qua nhan choi MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNC TLCHH 1.00333 24.3333 1.24667 32.9000 1.42333 37.8667 1.35000 35.3667 SE(N= 3) 0.158114E-01 0.930949 5%LSD 8DF 0.515592E-01 3.03573 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 1/ 1/** 0:14 PAGE Anh huong cua Kinetin den hieu qua nhan choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 12 1.2558 0.16741 0.27386E-01 2.2 0.0000 | -84- TLCHH 12 32.617 5.4959 1.6125 4.9 0.0001 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE 1/ 1/** 0:20 PAGE Anh huong cua BAP + Kinetin den hieu qua nhan choi VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 16.5529 5.51762 ****** 0.000 * RESIDUAL 540267E-02 675333E-03 * TOTAL (CORRECTED) 11 16.5583 1.50530 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLCHH FILE 1/ 1/** 0:20 PAGE Anh huong cua BAP + Kinetin den hieu qua nhan choi VARIATE V004 TLCHH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 987.151 329.050 87.80 0.000 * RESIDUAL 29.9814 3.74767 * TOTAL (CORRECTED) 11 1017.13 92.4666 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 1/ 1/** 0:20 PAGE Anh huong cua BAP + Kinetin den hieu qua nhan choi MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNC TLCHH 1.01667 25.6767 4.05333 49.8667 2.09333 34.4767 1.37000 42.9167 SE(N= 3) 0.150037E-01 1.11769 5%LSD 8DF 0.489255E-01 3.64466 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 1/ 1/** 0:20 PAGE -85- Anh huong cua BAP + Kinetin den hieu qua nhan choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | HSNC 12 2.1333 1.2269 0.25987E-01 1.2 0.0000 TLCHH 12 38.234 9.6160 1.9359 5.1 0.0000 SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE BANG 19/ 8/** 10:56 PAGE NGHIEN CUU ANH HUONG CUA NONG DO NAA DEN TY LE CHOI RA RE VA CHIEU DAI RE BKT ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CRR -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB CT 1.4444 1.0000 1.44 0.471 NL 0.44444 2.0000 0.22 0.956 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CDR -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB CT 1.0000 1.4000 10 0.71 0.422 NL 0.00000 0.80000 10 0.00 1.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG 19/ 8/** 10:56 PAGE NGHIEN CUU ANH HUONG CUA NONG DO NAA DEN TY LE CHOI RA RE VA CHIEU DAI RE BKT MEANS FOR EFFECT CRR -CRR NOS CT NL 1.00000 1.00000 1.00000 3.00000 1.00000 2.00000 15 2.00000 1.00000 16 2.00000 2.00000 18 3.00000 2.00000 19 4.00000 2.00000 20 4.00000 3.00000 24 3.00000 2.00000 25 3.00000 2.00000 SE(N= 1) 1.00000 1.41421 5%LSD 2DF 6.00073 8.48631 MEANS FOR EFFECT CDR CDR NOS CT NL -86- 2.33333 3.00000 2.00000 2.00000 SE(N= 6) 0.483046 0.365148 5%LSD 10DF 1.52210 1.15060 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG 19/ 8/** 10:56 PAGE NGHIEN CUU ANH HUONG CUA NONG DO NAA DEN TY LE CHOI RA RE VA CHIEU DAI RE BKT F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE (N= NO OBS CT 12 NL 12 GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CRR 12) SD/MEAN | | | BASED ON BASED ON % | | | TOTAL SS RESID SS | | | 2.5000 1.1677 1.1832 47.3 0.4712 0.4221 2.0000 0.85280 0.89443 44.7 0.9562 1.0000 |CDR | SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE BANG 19/ 8/** 10:38 PAGE NGHIEN CUU ANH HUONG CUA NONG DO IBA DEN CHOI RA RE VA CHIEU DAI RE CUA BKT ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CRR -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB CT 1.8750 0.00000 0.00 0.000 NL 0.68750 0.83333 0.83 0.633 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CDR -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB CT 0.00000 1.5000 10 0.00 1.000 NL 0.00000 0.80000 10 0.00 1.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BANG 19/ 8/** 10:38 PAGE NGHIEN CUU ANH HUONG CUA NONG DO IBA DEN CHOI RA RE VA CHIEU DAI RE CUA BKT MEANS FOR EFFECT CRR CRR 22 24 25 27 NOS CT 1.00000 1.00000 1.00000 4.00000 4.00000 4.00000 2.00000 NL 3.00000 2.00000 1.00000 3.00000 1.00000 2.00000 2.50000 -87- 28 30 2.00000 3.00000 1.00000 2.00000 SE(N= 1) 0.000000 0.912871 5%LSD 3DF 0.000000 4.09091 MEANS FOR EFFECT CDR CDR 6 NOS CT NL 2.50000 2.00000 2.50000 2.00000 SE(N= 6) 0.500000 0.365148 5%LSD 10DF 1.57552 1.15060 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BANG 19/ 8/** 10:38 PAGE NGHIEN CUU ANH HUONG CUA NONG DO IBA DEN CHOI RA RE VA CHIEU DAI RE CUA BKT F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE (N= NO OBS CT 12 NL 12 GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CRR 12) SD/MEAN | | | BASED ON BASED ON % | | | TOTAL SS RESID SS | | | 2.5000 1.1677 1.2247 49.0 0.0000 1.0000 2.0000 0.85280 0.89443 44.7 0.6333 1.0000 |CDR | BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLS FILE 1/ 1/** 2: PAGE Nghien cuu anh huong cua thoi gian hua luyen den ty le song va chieu cao cay VARIATE V003 TLS LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ERư CT$ 3108.08 1036.03 ****** 0.000 2============================================================================= * RESIDUAL 3.79985 474981 * TOTAL (CORRECTED) 11 3111.88 282.898 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCC FILE 1/ 1/** 2: PAGE Nghien cuu anh huong cua thoi gian hua luyen den ty le song va chieu cao cay VARIATE V004 CCC -88- LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 28.4146 9.47154 ****** 0.000 * RESIDUAL 846466E-02 105808E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 28.4231 2.58392 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 1/ 1/** 2: PAGE Nghien cuu anh huong cua thoi gian hua luyen den ty le song va chieu cao cay MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLS 49.0333 71.9333 93.4333 63.3000 CCC 6.46667 6.26000 9.87000 6.24000 SE(N= 3) 0.397903 0.187801E-01 5%LSD 8DF 1.29752 0.612402E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 1/ 1/** 2: PAGE Nghien cuu anh huong cua thoi gian hua luyen den ty le song va chieu cao cay F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLS 12 69.425 16.820 0.68919 1.0 0.0000 CCC 12 7.2092 1.6075 0.32528E-01 0.5 0.0000 | [...]... tố ảnh hưởng tới quá trình nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào Môi trường nuôi cấy là điều kiện tối cần thiết, là yếu tố quyết định cho sự phân hóa tế bào và cơ quan nuôi cấy 2.3.1 Môi trường nuôi cấy Trong nuôi cấy mô và tế bào, môi trường nuôi cấy và môi trường xung quanh là hai vấn đề chính quyết định đến sự thành bại của quá trình nuôi cấy Môi trường nuôi cấy là nguồn cung cấp các chất... công kỹ thuật nhân giống cây Ba kích bằng phương pháp nuôi cấy mô, nhằm góp phần phục vụ công tác duy trì và sản xuất giống cây Ba kích bằng phương pháp nuôi cấy mô trên địa bàn tỉnh Quảng Ninh 1.2.2.Mục tiêu cụ thể -9- - Nghiên cứu ảnh hưởng của chất khử trùng tới hiệu quả khử trùng mẫu cây Ba kích - Nghiên cứu ảnh hưởng một số chất điều tiết sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh của chồi Ba kích - Nghiên... rừng trồng, cây trồng có sức sinh trưởng và phát triển cao có tuổi thọ lớn Cây con được tạo ra từ công nghệ nuôi cấy mô tế bào sẽ khắc phục được những nhược điểm của việc tạo cây con từ hạt và giâm hom Để góp phần giải quyết các tồn tại trên, chúng tôi tiến hành đề tài “Nghiên cứu nhân giống vô tính cây Ba kích tím (Morinda officinalis How) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào tại Quảng Ninh 1.2 Mục... Minh Trâm Bộ môn Công nghệ tế bào – viện khoa học sự sống – Đại học nông lâm Thái Nguyên Nghiên cứu nhân giống cây Ba Kích bằng phương pháp nuôi cấy mô với các giai đoạn nhân nhanh cho HSNC 1,68 lần với môi trường MS* + 4mg/l BAP + 2mg/l Kinetin + 0,3 mg/l NAA Và tỷ lệ chồi ra rễ 75% với 0,2mg/l IBA + MS*[14] Những cơ sở hiện nay đang nhân giống bằng nuôi cấy mô, tế bào ở quy mô lớn trong lâm nghiệp nước... triển của thị trường hiện nay cần một lượng cây giống có chất lượng cao rất lớn Để giải quyết nhu cầu cây giống hiện nay và tương lai việc nhân giống cây Ba kích bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào là một hướng đi cần thiết bởi có thể nhân số lượng cây lớn trong thời gian ngắn để cung cấp thị trường mặt khác cây nuôi cấy mô mang nhiều ưu điểm, có sức trẻ hóa cao, cây con mang đuợc toàn bộ tiềm năng di truyền... vật từ mức độ tế bào đến cấu trúc mô Nuôi cấy mô tế bào thực vật được xem là một trong những giải pháp công nghệ mới có ý nghĩa khoa học trong công nghệ sinh học Trên các môi trường nhân tạo, từ các mô hay tế bào thực vật sẽ phân chia, phân hóa và phát triển thành cây hoàn chỉnh Đây là một kỹ thuật sinh học hiện đại và là một phương pháp nhân giống hữu hiệu nhất trong các phương pháp nhân giống vô tính... NAA, IBA tới khả năng ra rễ của chồi Ba kích - Xác định ảnh hưởng của thời gian huấn luyện tới tỷ lệ sống và sinh trưởng chiều cao cây con ở giai đoạn vườn ươm 1.3 Ý nghĩa của đề tài * Ý nghĩa khoa học: - Kết quả nghiên cứu sẽ đưa ra được một biện pháp kỹ thuật nhân giống cây Ba kích bằng phương pháp nuôi cấy mô Đánh giá được tác động của một số chất điều tiết sinh trưởng trong nhân giống cây Ba kích. .. culture): Là phương pháp sản xuất hàng loạt cây con (bản sao) từ các bộ phận của cây (các cơ quan, mô, tế bào) bằng cách nuôi cấy chúng trong ống nghiệm ở điều kiện vô trùng có môi trường thích hợp và được kiểm soát (Ngô Xuân Bình, 2000) [1] Vật liệu để nhân giống có thể là các cơ quan của cây: rễ, thân, lá, hoa, quả, các tế bào được phát sinh từ các bộ phận của cây (mô sẹo - callus) hoặc các tế bào đơn... trong nhân giống vô tính, tạo giống cây trồng và dòng chống chịu.[25] Tính toàn năng của tế bào mà Haberlandt nêu ra chính là cơ sở lý luận của phương pháp nuôi cấy mô và tế bào thực vật Cho đến nay con người đã hoàn toàn chứng minh được khả năng tái sinh một cơ thể thực vật hoàn chỉnh từ một tế bào riêng rẽ 2.2.2 Sự phân hóa và phản phân hóa của tế bào Quá trình phát sinh hình thái trong nuôi cấy mô. .. vấn đề nhân giống là một tồn tại, cản trở việc mở rộng diện tích trồng Ba kích Cây trồng sau 15 tháng mới có 3,5 - 5% số cây ra hoa và sau 22 tháng mới có 1,5% số cây đậu quả Sau 3 năm tỷ lệ này cũng chỉ đạt khoảng 45 50% và hệ số nhân giống bằng hạt chỉ đạt 1,1 năm Ba kích cũng có thể nhân giống bằng giâm cành, nhưng hệ số nhân của phương pháp này chỉ đạt 0,61/năm, mặc dù đã sử dụng các chất kích thích