Xây dựng phương pháp định lượng lansoprazol trong huyết tương chó

TÀI LIỆU THAM KHẢO Agilent Technologies (2010), Ultron ẼS-OVM: Method development Protocol Astec (2002), Cydobond Handbook, sixth edition, Advanced Separation Technologies, Inc Chrom Tech (2011 ), Separation of chiral compounds on Chiral-AGP, Chiral-HSA, Chiral-CBH, second edition Huang J, Sun J, Zhou X, You T (2007), "Determination of atenolol and metoprolol by capillary electrophoresis with tris(2,2'-bipyridyl) ruthenium(ii)electrochemiluminescence detection", Analytical Sciences, Vol 23(2):183-8 Ana Rita Ribeiro, Carlos Magalhães Afonso, Paula M L Castro, Maria Elizabeth Tiritan (2013), "Enantioselective HPLC analysis and bio­ dégradation of atenolol, metoprolol and fluoxetine”, Environmental Chemistry Letters ,Vo\ ^1 Issue 1, p.83 Santoro M.l, Cho H.s (2000), "Enantiomeric separation and quantitative determination of atenolol in tablets by chiral high-perfor­ mance liquid chromatography", Drug development industrial pharmacy, Vol 26(10), p 1107-1110 Sonia Morante-Zarcero, Isabel Sierra (2012), “Simultaneous Enantiomeric Determination of Propranolol, Metoprolol, Pindolol, and Atenolol in Natural Waters by HPLC on New Polysaccharide-Based Stationary Phase using a Highly Selective Molecuiarly Imprinted Polymer Extraction", Chirality, Volume 24, Issue 10, pages 860-866 Stoschitzky K., et al (1993), "Stereoselective features of (R)- and (S)-atenolol: Clinical pharmacological, pharmacokinetic, and radioli­ gand binding studies", Chirality, Vol 5(1 ), p 15-19 9.Torul H, Tamer u (2011), "Determination of enantiomers of atenolol and propranolol in pharmaceutical formulations by HPIC", Jour­ nal ofAOAC International, Vol 94(3):833-8 Xây dựng phương pháp định lượng Lansoprazol huyết tương chó Vũ Ngọc Thắng', Nguyễn Ngọc Chiếng Trẩn Nguyên Hà^ Lương Quang Anh^ ’ Trung tâm Kiểm nghiệm Nghiên cứu Dược Quân đội - Cục Quâny, ^Trường Đợi học Dược Hà Nội, ^Khoa Dược - Viện Bỏng Quốc gia SUMMARY A method was proposed to determine lansoprazole concentrations in dog plasma Following a single - step liquid - liquid extraction with tert-butyl methyl ether, lansoprazole and internal standard (pantoprazole) were separated using an isocratic mobile phase o f 0.01 M phosphate buffer (pH 8.0 adjusted with triethylamine)/acetonitrile (65:35, v/v) on reversed phase Waters symmetry column, ultraviolet detection at 285 nm Linearity range was 0.05 - 3.0 ụg/mì (r > 0.9990 o f the regression line), the lower limit o f quantitation was 50 ng/ml, mean percentage recoveries were from 97.67% to 101.02% This method was validated with inter-day and intra-day precision o f 2.27% - 5.96% and 3.79% - 4.82%, respectively; accuracy was from 97.50% to 101.68% The method was successfully applied to determine lansoprazole concentrations in dog plasma samples Từ khóa Lansoprazol, HPLC, huyết tương chó, thẩm định phương pháp Đặt Vấn đề pháp khác để định lượng LPZ huyết tương phổ biến phương pháp sác Lansoprazol (LPZ) chất ức chế tiết acid dịch ký lỏng hiệu cao [2-4, 6], Việt Nam chưa vị, dùng để điểu trị viêm loét dày tá tràng có nghiên cứu định lượng LPZ huyết tương triệu chứng trào ngược dày, thực quản [1], Các công bố Vì để góp phán nghiên cứu sinh tác dụng điểu trị LPZ phụ thuộc vào nổng độ khả dụng viên nang LPZ, tiến thuốc huyết tương (HT) Có nhiều phương hành xây dựng phương pháp định lượng LPZ huyết tương chó với mục tiêu xây dựng phương pháp định lượng LPZ huyết tương đáp ứng yêu cẩu phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học trước dùng từ dung dịch chuẩn gốc với MeOH Điều kiện sốc ký Cột sắc ký Symmetry C18 Waters (150 X 4,6 mm, Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu |jm bảo vệ cột loại 20 X 3,9 mm, um) Detec­ tor u v 285 nm, tốc độ dòng 1,0 ml/phút, pha động Nguyên liệu Các nguyên liệu hoá chất sau: Viên nang Lansoprazol TEVA santé 30 mg - Lô H006, hạn dùng 03/2015 - Pháp Chất chuẩn Lansoprazol - Viện Kiểm hỗn hợp gồm dung dịch KHjPO^ 0,01 M điểu chỉnh pH tới 8,0 triethylamin (Pha động A) MeCN (65:35; tt/tt), nhiệt độ buóng cột 35°c, thể tích tiêm mẫu 50 Ịjl Quy trình xử lý mẫu huyết tương nghiệm thuốc Trung ương (hàm lượng 99,5%, SKS: Thêm 50 nl dung dịch IS có nồng độ 40 |ag/ml vào 0106203), chuẩn Pantoprazol - Viện Kiểm nghiệm 500 ụl huyết tương, lắc xoáy 30 giây, thêm ml TBME, thuốc thành phố Hổ Chí Minh (hàm lượng 93,87%, SKS QT219 011212); methanol (MeOH), acetonitril lắc xoáy phút, ly tâm 20°c 10 phút với (MeCN) loại dùng cho HPLC; kali dihỵdrophosphat; tốc độ 4500 vòng/phút, lấy ml lớp dung môi hữu cơ, bốc tới khô máy cô quay chân không 30°c, triethỵlamin; tert-butyl methyl ether (TBME) loại tinh cắn thu hoà tan 80 |jl MeCN, thêm 120 nl khiết phân tích - Merck (Đức) Huyết tương trắng thu từ chó đực khoẻ pha động A, trộn đểu Thẩm định phương pháp phân tích mạnh, cân nặng từ 10 -1 kg Thẩm định phương pháp phân tích theo hướng Trang thiết bị Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Shimadzu 1OAvp, autosampler - Nhật Cân phân tích Mettler - Toledo xs 204 độ xác 0,1 mg, máy đo pH Thermo Orion 420A plus - Thụy Sỹ; máy ly tâm Eppen­ dẫn quan quản lý thuốc thực phẩm Hoa Kỳ (FDA) [5] với tiêu chí: tính chọn lọc, đặc hiệu; độ tuyến tính; độ đúng, độ xác (trong ngày ngày); hiệu suất chiết; độ ổn định giới hạn định lượng (LLOQ) dorf Centrifuge 5804R - Đức; máy lắc vortex Heidolph - Đức; máy cô quay chân không miVAC - Anh Các thiết bị hiệu chuẩn định kỳ theo quy định GLP Phương pháp nghiên cứu Chuẩn bị dung dịch chuẩn chuẩn nội Dung dịch chuẩn gốc: Cân xác pha riêng biệt lượng LPZ chuẩn Pantoprazol (IS) chuẩn, hòa tan MeOH dung dịch chuẩn gốc có nồng độ khoảng mg/ml Các dung dịch chuẩn làm việc pha loãng Kết nghiên cứu Khảo sát phương pháp xử lý mấu huyết tương Các phương pháp xử lý mẫu huyết tương khác nhau: Tủa protein MeOH; chiết lỏng - lỏng hỗn hợp gổm diethyl ether (DE) dicloromethan (DC) (7:3); chiết lỏng - lỏng TBME tiến hành để lựa chọn phương pháp xử lý mẫu phù hợp Kết thu sau: Bảng l Két (Ịuá hiệu suất chiểtcùo phương pháp xừlỷ màu huyết tương (n - 61 Nóng độ 2,0 |jg/ml Nóng độ 1,0 |jg/ml P(%) RSD% P(%) RSD% Tủa protein MeOH 112,03 7,75 108,44 5,32 Chiết DE- DC 104,92 6,74 101,82 7,17 Chiết TBME 101,02 4,85 97,67 3,19 Ghi chú: p=Hiệu suát chiết trung bình BÀI NGHIÊN CỨU Các sắc ký đổ thể hình sau: 7V - A Hlnh ì Sác kỷ đố tầ hLP I ưong Hỉ xửlỷ bâng: a) Ịùa píotein bầiig MeOH; b) Clìièt báng hỗn hợp đeĩhỵl ethei-đidoromethíin, c) ChiẾt bẵng ĨBMF: vò lĩìàu tiỉậm g chìèi băng ĨBMt (d) Kết bảng cho thấy phương pháp xử lý mẫu HT khảo sát đểu có hiệu suất chiết cao hành tiêu chí; tương đối ổn định Phương pháp chiết TBME cho kết xác lặp lại tốt hai phương sánh thời gian lưu LPZ IS sắc ký đổ HT trắng, HT trắng có thêm IS LPZ Độ tuyến pháp chiết lại Trên sắc ký đổ mẫu chiết TBME cho pic cân đối sắc nét, không xuất pic tính phương pháp xác định với điểm tạp gần chất phân tích chuẩn nội, nển mẫu đáp ứng LPZ sắc đổ cao hơn, Vì Độ biểu thị giá trị tìm so với giá trị chiết LPZ TBME lựa chọn phương pháp xử lý mẫu HT Thầm định phương pháp phán tích hành lô mẫu LQC, MQC HQC có nồng độ LPZ tương ứng 0,2; 1,5 2,5 ụg/ml; làm lặp lại iẩn mức nồng độ Giới hdn định lượng xác định nổng độ 0,05 Kết trinh bày Thẩm định phương pháp phân tích tiến bảng sau: Xác định tính đặc hiệu chọn lọc cách so nồng độ LPZ khoảng từ 0,05 đến 3,0 [íg/ml thực độ xác biểu thị RSD tiến Bòng ĩóm tầ két í]uá ¡hổm định phương pháp phân ấ h Tiêu chí lính tương thiih hệ thống linh dạc hiệu, chọn lọc Độ tuyến tính 22 Ó Yêu cáu Kết thẩm định RSDtủa thời gian lưu (tR)< 1,0% 0,06% VỚI IS 0,005% với LPZ RSD tỷ iệ diện tích pic < 2,0% 1,2 % Hệ sỗ bát đói xứng 0,998 r = 0,9999 Nghiên Cứu duọc Thống tlnthuõc Số 6/2013 ề Độ diitig Cộ xac LQCỞ0,2|jg/tnl;8ũ-120% RSD ... tuyến tính xây dựng rộng từ 0,05 - 3,0 ụg/ml, phù hợp với nồng độ thực tế LPZ huyết tương chó cho uống liều đơn LPZ 30 mg Kết luận Đã xây dựng phương pháp định lượng LPZ huyết tương chó với thành.. .huyết tương chó với mục tiêu xây dựng phương pháp định lượng LPZ huyết tương đáp ứng yêu cẩu phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học trước dùng... Các kết thẩm định cho thấy phương pháp phân tích đáp ứng yêu cầu phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học theo quy định FDA ơng dụng định lượng LPZ huyết tương chó Chó đực khoẻ mạnh cân nặng