Thẩm định phương pháp định lượng hoạt chất amlodipin besilat trong viên nang apitim 5 bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp

Đề tài được thực hiện với các mục tiêu sau: - Thẩm định phương pháp định lượng hoạt chất Amlodipin besilat trong viên nang Apitim 5 bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp HPLC.. Các yếu tố

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN

BỘ MÔN HÓA

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

HOẠT CHẤT AMLODIPIN BESILATE

TRONG VIÊN NANG APITIM 5 BẰNG PHƯƠNG PHÁP

SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP

ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Võ Mĩ Trinh

MSSV:2072115

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN

Năm học 2010 - 2011

THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG

HOẠT CHẤT AMLODIPIN BESILATE TRONG VIÊN

NANG APITIM 5 BẰNG PHƯƠNG PHÁP

SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP

Lời cam đoan

Cần Thơ, ngày tháng năm 2011 Võ Mĩ Trinh Luận văn đại học ngành Hóa học Chuyên ngành: Hóa Học Mã số: 204 Đã bảo vệ và được duyệt Hiệu trưởng:………

Trưởng khoa:………

Trưởng chuyên ngành Cán bộ hướng dẫn ……… ………

 Quý thầy, cô trường Đại học Cần Thơ nói chung và Bộ môn Hóa, khoa Khoa

Học Tự Nhiên nói riêng – những thầy, cô đã tận tình truyền đạt cho tôi những kiến thức quý báu và bổ ích

 Cô Nguyễn Thị Diệp Chi - giảng viên hướng dẫn tôi hoàn thành luận văn tốt

nghiệp, cô đã giúp đỡ, chỉ bảo tôi trong thời gian tôi thực hiện đề tài luận văn

 Xin chân thành gửi lời cảm ơn đến Ban TGĐ công ty Cổ phần Dược Hậu Giang đã tạo điều kiện cho tôi thực hiện đề tài này

 Cô Nguyễn Ngọc Diệp, chú Nguyễn Thanh Tùng và các anh chị phòng Kiểm

Nghiệm công ty Cổ phần Dược Hậu Giang đã tạo mọi điều kiện tốt nhất và đã hết lòng giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn tốt nghiệp này

 Cô Lê Thị Bạch - cố vấn học tập, đã dạy dỗ truyền đạt những kiến thức quý báu và tạo điều kiện để tôi thực hiện hoàn thành luận văn này

 Cha, mẹ - người đã sinh thành, nuôi dưỡng và tất cả người thân - tạo mọi điều

kiện thuận lợi về vật chất và tinh thần để tôi yên tâm học tập đến ngày nay

 Cuối cùng, tôi xin cảm ơn những người bạn, tập thể lớp Hóa Học – K33, đã động viên, khích lệ và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian qua

Xin chân thành cảm ơn!

Sinh viên thực hiện

Võ Mĩ Trinh

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Độc lập - Tự do - Hạnh phúc

BỘ MÔN HÓA HỌC -

-NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN 1 Cán bộ hướng dẫn: Ths NGUYỄN THỊ DIỆP CHI 2 Đề tài: THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG HOẠT CHẤT AMLODIPIN BESILAT TRONG VIÊN NANG APITIM 5 BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP 3 Sinh viên thực hiện: VÕ MĨ TRINH - MSSV: 2072115 4 Lớp: Cử nhân Hóa Học - Khóa 33 5 Nội dung nhận xét: a Nhận xét về hình thức LVTN:

b Nhận xét về nội dung của LVTN (Đề nghị ghi chi tiết và đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực hiện của đề tài:

 Những vấn đề còn hạn chế:

c Nhận xét đối với từng sinh viên tham gia thực hiện đề tài (Ghi rõ từng nội dung chính do sinh viên nào chịu trách nhiệm thực hiện nếu có):

d Kết luận, đề nghị và điểm:

Cần Thơ, ngày tháng năm 2011

Cán bộ hướng dẫn

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Độc lập - Tự do - Hạnh phúc

BỘ MÔN HÓA HỌC -

-NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 1 1 Cán bộ phản biện 1:

2 Đề tài: THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG HOẠT CHẤT AMLODIPIN BESILAT TRONG VIÊN NANG APITIM 5 BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP 3 Sinh viên thực hiện: VÕ MĨ TRINH MSSV: 2072115 4 Lớp: Cử nhân Hóa Học - Khóa 33 5 Nội dung nhận xét: a Nhận xét về hình thức LVTN:

b Nhận xét về nội dung của LVTN (Đề nghị ghi chi tiết và đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực hiện của đề tài:

 Những vấn đề còn hạn chế:

c Nhận xét đối với từng sinh viên tham gia thực hiện đề tài (Ghi rõ từng nội dung chính do sinh viên nào chịu trách nhiệm thực hiện nếu có):

d Kết luận, đề nghị và điểm:

Cần Thơ, ngày tháng năm 2011

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ CỘNG HÕA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM

KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN Độc lập - Tự do - Hạnh phúc

BỘ MÔN HÓA HỌC -

-NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 2 1 Cán bộ phản biện 2:

2 Đề tài: THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG HOẠT CHẤT AMLODIPIN BESILAT TRONG VIÊN NANG APITIM 5 BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP 3 Sinh viên thực hiện: VÕ MĨ TRINH MSSV: 2072115 4 Lớp: Cử nhân Hóa Học - Khóa 33 5 Nội dung nhận xét: a Nhận xét về hình thức LVTN:

b Nhận xét về nội dung của LVTN (Đề nghị ghi chi tiết và đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực hiện của đề tài:

 Những vấn đề còn hạn chế:

c Nhận xét đối với từng sinh viên tham gia thực hiện đề tài (Ghi rõ từng nội dung chính do sinh viên nào chịu trách nhiệm thực hiện nếu có):

d Kết luận, đề nghị và điểm:

Cần Thơ, ngày tháng năm 2011

Cán bộ phản biện 2

DANH MỤC BẢNG

Trang

Bảng 2.1: Phân loại tăng huyết áp (1) 3

Bảng 2.2: Phân loại tăng huyết áp (2) 3

Bảng 2.3: Hiệu quả của việc thay đổi lối sống trong điều trị tăng huyết áp 7

Bảng 4.1: Kết quả khảo sát tính phù hợp hệ thống của mẫu chuẩn Amlodiopin (HPLC) .29

Bảng 4.2: Chuẩn bị mẫu khảo sát tính tuyến tính của Amlodipin (HPLC) 30

Bảng 4.3: Kết quả khảo sát tính tuyến tính của Amlodipin (HPLC) 31

Bảng 4.4: Khảo sát giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của phương pháp 32

Bảng 4.5: Kết quả khảo sát tính đặc hiệu của Amlodipin (HPLC) 33

Bảng 4.6: Kết quả khảo sát độ lặp lại (độ chính xác) của Amlodipin (HPLC) 35

Bảng 4.7: Chuẩn bị mẫu khảo sát độ đúng 36

Bảng 4.8: Kết quả khảo sát độ đúng (độ phục hồi) của Amlodipin (HPLC) .37

Bảng 4.9: Thời gian lưu của Amlodipin besilat trong Apitim 5 so với chuẩn 39

Bảng 4.10: Kết quả hàm lượng của Amlodipin trong Apitim 5 ở các lô 40

DANH MỤC HÌNH

Trang

Hình 2.1: Công thức cấu tạo dạng phẳng của Amlodipin besilat 9

Hình 2.2: Công thức cấu tạo dạng không gian 9

Hình 2.3: Một số dạng thuốc chứa hoạt chất Amlodipin 12

Hình 2.4 : Sơ đồ máy HPLC 14

Hình 2.5: Đồ thị phương pháp ngoại chuẩn 17

Hình 2.6: Đồ thị phương pháp nội chuẩn 18

Hình 3.1: Máy HPLC của Merck Hitachi 25

Hình 3.2: Cân điện tử AB204-S của Mettler Toledo 25

Hình 3.3: Bể siêu âm hòa tan Branson 26

Hình 3.4: Pipet chính xác 10 ml và bình định mức 100 ml, 50 ml 26

Hình 3.5:Viên nang Apitim 5 27

Hình 3.6: Chất chuẩn Amlodipin besilat 27

Hình 4.1: Đường tuyến tính và phương trình hồi quy của Amlodipin (HPLC) 31

Hình 4.2: Sắc ký đồ mẫu trắng khảo sát tính đặc hiệu (HPLC) 32

Hình 4.3: Sắc ký đồ mẫu chuẩn Amlodipin khảo sát tính đặc hiệu (HPLC) 32

Hình 4.4: Sắc ký đồ mẫu thử Amlodipin khảo sát tính đặc hiệu (HPLC) 33

Hình 4.5: Sắc ký đồ mẫu chuẩn Amlodipin khảo sát độ lặp lại (HPLC) 35

Hình 4.6: Sắc ký đồ mẫu thử Amlodipin khảo sát độ lặp lại (HPLC) 35

MỤC LỤC

Trang

Lời cảm ơn ii

Danh mục bảng vi

Danh mục hình vii

Chương 1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 2 TỔNG QUAN 2

2.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ BỆNH TĂNG HUYẾT ÁP 2

2.1.1 Tăng huyết áp[3] 2

2.1.1.1 Khái niệm huyết áp 2

2.1.1.2 Khái niệm về tăng huyết áp 2

2.1.2 Nguyên nhân tăng huyết áp [3] 4

2.1.2.1 Tăng huyết áp vô căn 4

2.1.2.2 Tăng huyết áp thứ phát 4

2.1.3 Triệu chứng tăng huyết áp[3] 5

2.1.4 Cơ chế hình thành tăng huyết áp[3] 5

2.1.5 Biến chứng của bệnh tăng huyết áp[3] 6

2.1.6 Điều trị bệnh tăng huyết áp[4] 6

2.1.6.1 Mục tiêu của điều trị 6

2.1.6.2 Cách điều trị bệnh tăng huyết áp 7

2.2 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ AMLODIPIN BESILAT 9

2.2.1 Tính chất, công thức và danh pháp[1] 9

2.2.1.1 Tính chất của amlodipin besilat 9

2.2.1.2 Công thức và danh pháp 9

2.2.2 Dược lý, cơ chế tác dụng, dược động học[2] 10

2.2.2.1 Dược lý, cơ chế tác dụng 10

2.2.2.2 Dược động học 11

2.2.3 Chỉ định và chống chỉ định 11

2.2.3.1 Chỉ định 11

2.2.3.1 Chống chỉ định 11

2.2.4 Liều lượng 11

2.2.6 Một số dạng thuốc chứa hoạt chất Amlodipin besilat trên thị trường

[9],[10],[11] 12

2.3 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP (HPLC) [1],[6],[7] 13

2.3.1 Nguyên tắc,cấu tạo máy sắc ký lỏng cao áp 13

2.3.2 Các yếu tố và thông số đặc trưng của máy sắc ký lỏng cao áp 13

2.3.2.1 Các yếu tố trong sắc ký lỏng cao áp 14

2.3.2.2 Các thông số đặc trưng trong sắc ký lỏng cao áp 15

2.3.3 Định tính và định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp 15

2.3.3.1 Định tính 15

2.3.3.2 Định lượng 16

2.3.4 Ứng dụng của sắc ký lỏng cao áp 19

2.4 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH [8] 20

2.4.1 Tầm quan trọng của việc thẩm định 20

2.4.2 Nội dung thẩm định 20

2.4.2.1 Tính tuyến tính (linearity) 21

2.4.2.2 Tính đặc hiệu (specificity) 22

2.4.2.3 Độ lặp lại (repeatability) 22

2.4.2.4 Độ đúng (accuracy) 23

2.4.2.5 Giới hạn phát hiện (LOD) (limit of detection) 24

2.4.2.6 Giới hạn định lượng (LOQ) (limit of quantition) 24

Chương 3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25

3.1 ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN THỰC HIỆN 25

3.1.1 Địa điểm thực hiện 25

3.1.2 Thời gian thực hiện 25

3.2 PHƯƠNG TIỆN THỰC HIỆN 25

3.2.1 Thiết bị và dụng cụ 25

3.2.2 Chuẩn bị hóa chất, dung môi 26

3.3 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 26

3.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27

3.5 HOẠCH ĐỊNH THÍ NGHIỆM 28

3.5.1 Thẩm định quy trình định lượng Amlodipin besilat bằng HPLC 28

HPLC 28

Chương 4 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 29

4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát tính phù hợp hệ thống (HPLC) 29

4.1.1 Mục đích 29

4.1.2 Thực hiện 29

4.1.3 Kết quả 29

4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát khoảng tuyến của nồng độ Amlodipin bằng phương pháp HPLC 30

4.2.1 Mục đích 30

4.2.2 Thực hiện 30

4.2.3 Kết quả 31

4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát tính đặc hiệu của Amlodipin bằng phương pháp HPLC 32

4.3.1 Mục đích 32

4.3.2 Thực hiện 32

4.3.3 Kết quả 32

4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát độ lặp lại của Amlodipin bằng phương pháp

HPLC 33

4.4.1 Mục đích 33

4.4.2 Thực hiện 34

4.4.3 Kết quả 34

4.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát độ đúng của Amlodipin bằng phương pháp HPLC 36

4.5.1 Mục đích 36

4.5.2 Thực hiện 36

4.5.3 Kết quả 37

4.6 Thí nghiệm 6: Áp dụng phương pháp để định lượng Amlodipin trong viên nang Apitim 5 ở 3 lô do Cty Cổ phần Dược Hậu Giang sản xuất 38

4.6.1 Mục đích 38

4.6.2 Thực hiện 38

4.6.3 Kết quả 39

Chương 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41

5.1 KẾT LUẬN 41

5.2 KIẾN NGHỊ 41

TÀI LIỆU THAM KHẢO 43

PHỤ LỤC 44

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Trong đời sống công nghiệp hiện nay, bệnh tăng huyết áp ngày càng trở nên

phổ biến và gia tăng theo tuổi thọ, cùng với các yếu tố thuận lợi như: béo phì, stress, ít

vận động…Tần suất bệnh thay đổi theo chủng tộc, tuổi, giới, tình trạng kinh tế xã hội

và lối sống Trên thế giới hiện nay khoảng 1,6 tỷ người có bệnh tăng huyết áp Tăng

huyết áp là bệnh lý gây tử vong và di chứng thần kinh nặng nề như liệt nửa người, hôn

mê với đời sống thực vật, đồng thời có thể thúc đẩy suy tim, thiếu máu cơ tim làm ảnh

hưởng nhiều đến chất lượng sống Do đó, điều trị tăng huyết áp là vấn đề cần lưu ý

trong cộng đồng vì những hậu quả to lớn của nó

Để điều trị tăng huyết áp cũng như phòng ngừa các tai biến do tăng huyết áp

gây ra, các nhà sản xuất dược phẩm đã đưa ra nhiều sản phẩm thuốc nhưng chúng ta

phải biết dùng liều cho phù hợp với từng người bệnh Nói chung, khởi đầu với liều

bình thường là 5 mg Vì vậy, sản phẩm Apitim 5 của Công ty Cổ phần Dược Hậu

Giang đã đáp ứng được yêu cầu đó Với thành phần chứa hoạt chất Amlodipin besilat

Việc xác định chính xác hàm lượng hoạt chất Amlodipin besilat trong thuốc là

điều rất cần thiết cho người sử dụng Và hiện nay, cũng có nhiều phương pháp để xác

định hàm lượng hoạt chất này Nhưng phương pháp HPLC là khá phổ biến và với điều

kiện của phòng Kiểm Nghiệm thì rất phù hợp Nên chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu

đề tài “Thẩm định phương pháp định lượng hoạt chất Amlodipin besilat trong

viên nang Apitim 5 bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp” nhằm đáp ứng nhu cầu

kiểm tra chất lượng tại Phòng Kiểm Nghiệm Công ty Cổ Phần Dược Hậu Giang

Đề tài được thực hiện với các mục tiêu sau:

- Thẩm định phương pháp định lượng hoạt chất Amlodipin besilat trong viên nang

Apitim 5 bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC)

- Áp dụng định tính và định lượng hoạt chất Amlodipin besilat ở 3 lô của viên nang

Apitim 5 do Công ty Cổ phần Dược Hậu Giang sản xuất bằng phương pháp HPLC

GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa Học K33

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN

2.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ BỆNH TĂNG HUYẾT ÁP

2.1.1.1 Khái niệm huyết áp

Huyết áp là áp lực máu đo ở động mạch Có hai áp lực máu khác nhau, khi đo

huyết áp tối đa đo vào thời kỳ tâm thu và huyết áp tối thiểu đo vào thời kỳ tâm trương

Huyết áp thể hiện bằng hai chỉ số:

- Huyết áp tối đa (còn gọi là huyết áp tâm thu hoặc ngắn gọn là số trên)

- Huyết áp tối thiểu (còn gọi là huyết áp tâm trương hoặc ngắn gọn là số dưới)

Ở trên cùng một người, trị số huyết áp đã có những thay đổi theo giờ trong ngày

(trị số huyết áp thường có xu hướng cao vào buổi sáng và thấp về đêm) Theo phản

ứng của cơ thể như lúc ngủ, khi có stress, sau ăn no…

Ngoài ra huyết áp còn thay đổi theo giới tính, chủng tộc, tuổi…Vì vậy, khó có tiêu

chuẩn cho từng cá thể (phù hợp dân tộc, giới tính, lứa tuổi, xã hội họ đang sinh hoạt)

Khái niệm về trị số huyết áp bình thường và cao được chấp nhận dựa trên thống kê

học

2.1.1.2 Khái niệm về tăng huyết áp

 Định nghĩa tăng huyết áp:

Trước kia người ta chia huyết áp thành hai mức:

 Phân loại tăng huyết áp:

Có hai cách phân loại tăng huyết áp sau đây được sử dụng phổ biến nhất:

Theo Ủy ban liên quốc gia về dự phòng, phát hiện, đánh giá và điều trị tăng huyết áp

(Joint National Committee on Prevention, Detection, Evaluation, and Treatment of

High Blood Pressure), (JNC VII- 2003) được trình bày theo bảng 2.1 và bảng 2.2

Bảng 2.1: Phân loại tăng huyết áp (1)

Mức độ Huyết áp tâm thu

(mmHg)

Huyết áp tâm trương (mmHg) Huyết áp bình thường < 120 <80

Tiền tăng huyết áp 120 – 139 80 – 89

Tăng huyết áp độ 1 140 – 159 90 – 99

Tăng huyết áp độ 2 ≥ 160 ≥ 100

Bảng 2.2: Phân loại tăng huyết áp (2)

Phân loại Huyết áp tâm thu

GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa Học K33

Với tần suất bệnh vào khoảng 18 – 20% dân số và tỷ lệ kiểm soát huyết áp thành

công còn khiêm tốn (vào khoảng < 30%, ngay cả ở các nước phát triển), tăng huyết áp

nay là vấn đề của y học cộng đồng Cho dù bệnh học tăng huyết áp được biết đến khá

rõ nhưng hơn 90% bệnh tăng huyết áp là vô căn, người ta ghi nhận một số yếu tố thuận

lợi dễ dẫn đến bệnh, trên thực tế các yếu tố này thường tác động lẫn nhau

- Rối loạn chuyển hóa lipit

- Sự quá cân (béo phì)

- Chế độ ăn nhiều muối, ít kali và canxi

- Uống rượu nhiều

- Chế độ sinh hoạt (làm việc, giải trí, nghỉ ngơi…)

- Đời sống kinh tế và các áp lực tâm lý

Chúng ta có thể chia nguyên nhân của bệnh tăng huyết áp ra hai loại:

- Tăng huyết áp vô căn

- Tăng huyết áp thứ phát

2.1.2.1 Tăng huyết áp vô căn

Tăng huyết áp vô căn là dạng tăng huyết áp không tìm được rõ nguyên nhân

Người ta xem đó là bệnh đa yếu tố, trong đó có sự tương tác giữa yếu tố di truyền và

môi trường

Tính di truyền được xác định là yếu tố quan trọng trong tăng huyết áp qua các

nghiên cứu di truyền quần thể, nghiên cứu trên trẻ sinh đôi cũng như phân tích gia hệ

Di truyền có thể do đa yếu tố hay do một số khuyết tật các gen

Các yếu tố môi trường cũng được đề cập đến trong tăng huyết áp vô căn như ăn

mặn, béo phì, uống rượu, stress…

2.1.2.2 Tăng huyết áp thứ phát

Dù chiếm tỷ lệ nhỏ, nhưng việc xác định nguyên nhân là quan trọng vì có thể

điều trị khỏi cho bệnh nhân

Các nguyên nhân tăng huyết áp có thể xếp thành các nhóm chính:

- Tăng huyết áp do thuốc

- Do hẹp eo động mạch chủ

- Do thận

- Do nội tiết

Các nguyên nhân khác

Bệnh tăng huyết áp có diễn tiến chậm, khi tăng huyết áp chưa có biến chứng lên

các cơ quan, thường bệnh nhân không có triệu chứng Việc phát hiện bệnh có thể qua

các lần khám sức khỏe hay bệnh nhân đến khám vì một bệnh khác

Các triệu chứng nếu có của tăng huyết áp được xếp thành 3 nhóm triệu chứng:

- Nhóm triệu chứng do huyết áp tăng: như nhức đầu vùng chẩm vài buổi sáng sau

khi thức dậy, hay hết sau vài giờ, chóng mặt, hồi hộp, mau mệt mỏi

- Nhóm triệu chứng mạch máu do tăng huyết áp: như chảy máu mũi, nhìn lóa do

tổn thương võng mạc, đau ngực do bóc tách động mạch chủ ngực, chóng mặt tư thế

- Nhóm triệu chứng do bệnh căn bản của tăng huyết áp thứ phát: như nhức đầu

từng cơn kèm hồi hộp đánh trống ngực, đỏ bừng mặt (trong tăng huyết áp do u tủy

thượng thận) yếu liệt cơ do hạ kali máu (bệnh Cohn)

Huyết áp phụ thuộc vào cung lượng tim và sức cản ngoại biên (SCNB)

Cung lượng tim phụ thuộc vào nhịp tim và thể tích thất trái

Sức cản ngoại biên là lực chống lại dòng máu phụ thuộc vào: chiều dài động

mạch và độ quánh động mạch

Ta có công thức:

Trong đó:

BP: Blood pressure (huyết áp)

CO: Cardiac Output (cung lượng tim)

PR: Peripheral Resitance (sức cản ngoại biên)

Tăng huyết áp xảy ra khi có sự tăng cung lượng tim hoặc tăng sức cản ngoại biên,

hoặc cả hai cùng tăng

BP = CO x PR

GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa Học K33

Tăng huyết áp có thể gây tử vong hay để lại những di chứng nặng nề do ảnh

hưởng của nó lên các cơ quan

 Tại tim:

Các biến chứng của tăng huyết áp lên tim có thể quan sát được là:

Phì đại thất trái: chẩn đoán phì đại thất trái có thể dựa trên những xét nghiệm đơn giản

như điện tâm đồ, siêu âm tim 85% phì đại thất trái đồng tâm, 15% là không đồng tâm

Nó là tổn thương hay gặp nhất trong tăng huyết áp Sự hiện diện của nó làm tăng tỉ lệ

nhồi máu cơ tim gấp 3 lần, suy tim gấp 4 lần và đột qụy gấp 6 lần so với tăng huyết áp

chưa có phì đại thất trái

Suy tim: tăng huyết áp là nguyên nhân thứ hai gây suy tim sau bệnh mạch vành Lúc

đầu suy tim tâm trương, sau đó sẽ ảnh hưởng đến chức năng tâm thu

Bệnh mạch vành: bệnh cơ tim thiếu máu cục bộ hay nhồi máu cơ tim

 Thần kinh:

Tăng huyết áp là yếu tố nguy cơ chính trong đột qụy, 85% là nhồi máu não, 10% xuất

huyết não Có thể gặp cơn thoáng thiếu máu não hoặc bệnh não do tăng huyết áp

 Thận:

Sau đái tháo đường tăng huyết áp là nguyên nhân hay gặp ở bệnh nhân suy thận mạn

giai đoạn cuối Các biến chứng của tăng huyết áp lên vi thể do tổn thương cầu thận hay

2.1.6.1 Mục tiêu của điều trị

Quan điểm điều trị tăng huyết áp có thay đổi, việc điều trị không đơn thuần là hạ

trị số huyết áp để đạt mục tiêu mà còn làm giảm các yếu tố nguy cơ tim mạch Quan

điểm toàn diện này giúp cho việc điều trị có hiệu hơn trong phòng ngừa các biến cố

tim mạch

Mục tiêu điều trị là duy trì:

- Huyết áp < 140/90 mmHg

- Huyết áp < 130/80 mmHg đối với bệnh nhân đái tháo đường, bệnh thận mạn

Để đạt được mục tiêu của việc điều trị cần xác định được nguyên nhân tăng huyết áp

(nếu có) để điều trị nguyên nhân vì có liên quan đến việc chọn lựa cách không dùng

thuốc hoặc dùng thuốc để điều trị cho bệnh nhân

2.1.6.2 Cách điều trị bệnh tăng huyết áp

 Điều trị tăng huyết áp không dùng thuốc (điều chỉnh lối sống)

Áp dụng cho mọi bệnh nhân bao gồm những biện pháp sau:

- Giảm cân nếu thừa cân

- Gia tăng hoạt động thể lực (30 phút/ngày)

- Ngưng thuốc lá

- Giảm ăn mặn: Na < 100 mmol/ngày (2,4 g Na hay 6 g NaCl/ngày)

- Giảm thức ăn có mỡ bão hòa và nhiều Cholesterol

- Hạn chế rượu

- Ăn đủ Potassium, Calcium và Mg+ +

Bảng 2.3: Hiệu quả của việc thay đổi lối sống trong điều trị tăng huyết áp

Thay đổi Khuyến cáo Huyết áp tâm thu giảm

Giảm cân Duy trì cân nặng bình thường

(BMI 185,5 – 24,9 kg/m2)

5 – 20 mmHg/10 kg cân nặng giảm Thực hiện chế độ ăn để

điều trị tăng huyết áp

Ăn nhiều trái cây, rau và chế phẩm bơ sữa ít béo với lượng

4 – 9 mmHg

Tiết chế rượu 30 mL ethanol/ngày 2 – 4 mmHg

GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa Học K33

Để giảm nguy cơ tim mạch toàn bộ ngừng hút thuốc lá

Hiệu quả của việc áp dụng các thay đổi trên phụ thuộc thời gian và liều lượng, và có

thể rất tốt cho một số người

 Điều trị dùng thuốc

Cao huyết áp không nên tự mua thuốc điều trị hoặc qua giới thiệu của bạn bè,

không khám bác sĩ, tự ý thay đổi liều lượng…mà chúng ta phải đến gặp bác sĩ để điều

trị cho hợp lý và sử dụng thuốc theo chỉ dẫn của bác sĩ Và luôn phối hợp với điều trị

không dùng thuốc

Hiện nay có khoảng 300 loại thuốc chữa tăng huyết áp khác nhau và thầy thuốc

sẽ căn cứ bệnh trạng cụ thể mà lựa chọn thuốc phù hợp nhất cho từng người Và với sự

tiến bộ về kỹ thuật chẩn đoán (máy đo huyết áp phổ biến rộng rãi) việc điều trị đã

mang đến cho bệnh nhân sự cải thiện chất lượng cuộc sống, giảm đáng kể tử vong và

các di chứng (liệt nửa người, suy tim) do cao huyết áp gây nên

Năm nhóm thuốc được điều trị đầu tay trong tăng huyết áp: lợi tiểu, ức chế

calci, ức chế bêta, ức chế men chuyển và ức chế thụ thể

Nhóm lợi tiểu: ba nhóm lợi tiểu được sử dụng trong điều trị tăng huyết áp là:

thiazide, nhóm lợi tiểu quai và lợi tiểu tiết kiệm

Thuốc ức chế thụ thể bêta giao cảm (Thuốc ức chế bêta):

Cơ chế tác động: thuốc ức chế cạnh tranh với tác dụng của catecholamine ở thụ

thể bêta gây giảm nhịp tim và giảm co bóp cơ tim Đây là thuốc được sử dụng trong

điều trị tăng huyết áp như là thuốc đầu tay, đặc biệt khi có kèm mạch nhanh, bệnh lý

+ Nhóm Dihydopyridine (DHP): có hoạt tính mạnh trên mạch máu ngoại vi,

ít tác dụng lên sự co bóp, tính dẫn truyền tim, không tác dụng lên nút xoang và nút

nhĩ – thất

+ Nhóm Non Dihydopyridine thì ngược lại, tác dụng lên nút xoang và nút

nhĩ – thất

Thuốc ức chế men chuyển: thuốc làm dãn động mạch lẫn tĩnh mạch thông qua

ức chế All và ngăn giáng hóa bradykinin

Thuốc ức chế thụ thể: có hiệu quả hạ huyết áp tốt đối với trẻ lẫn người già Có

hiệu quả tương đương với thuốc ức chế men chuyển, chẹn calci, chẹn bêta, lợi tiểu

nhưng được dung nạp tốt hơn vì không có tác dụng phụ ho khan của ức chế men

chuyển, không gây phù ngoại vi như chẹn calci, không gây mệt mỏi và rối loạn cương

như bêta…

Tóm lại, bệnh tăng huyết áp tương đối phổ biến, ảnh hưởng lên sức khỏe cộng

đồng Vì vậy, việc tầm soát và phát hiện từ giai đoạn sớm sẽ giúp điều trị có hiệu quả

và tránh được các biến chứng do cao huyết áp gây ra

2.2 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ AMLODIPIN BESILAT

GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa Học K33

Amlodipin besilat (Amlodipin) là dẫn chất của dihydropyridin có tác dụng chẹn

calci qua màng tế bào Amlodipin ngăn chặn kênh calci loại L phụ thuộc điện thế, tác

động trên các mạch máu ở tim và cơ

Amlodipin có tác dụng chống tăng huyết áp bằng cách trực tiếp làm giảm cơ trơn

quanh động mạch ngoại biên và ít có tác dụng hơn trên calci cơ tim Vì vậy, thuốc

không làm dẫn truyền nhĩ thất ở tim kém đi và cũng không làm ảnh hưởng xấu đến lực

co cơ Amlodipin cũng có tác dụng tốt là giảm sức cản mạch máu thận, do đó làm tăng

lưu lượng máu ở thận và cải thiện chức năng thận Vì vậy, thuốc cũng có thể dùng để

điều trị cho người bệnh suy tim còn bù

Amlodipin không có ảnh hưởng xấu đến nồng độ lipit trong huyết tương hoặc

chuyển hóa glucose, do đó có thể dùng amlodipin để điều trị tăng huyết áp ở người

bệnh đái tháo đường

Amlodipin có thể dùng phối hợp với thuốc chẹn bêta, cùng với thiazide hoặc thuốc

lợi tiểu quai và cùng với thuốc ức chế enzym chuyển đổi angiotensin

Amlodipin có tác dụng tốt cả khi đứng, nằm cũng như ngồi và trong khi làm việc

Vì Amlodipin tác dụng chậm, nên ít có nguy cơ hạ huyết áp cấp hoặc nhịp tim nhanh

phản xạ

Tác dụng chống đau thắt ngực: Amlodipin làm giãn các tiểu động mạch ngoại biên, do

đó làm giảm toàn bộ lực cản ở mạch ngoại biên (hậu gánh giảm) Vì tần số tim không

bị tác động, hậu gánh giảm làm công của tim giảm, cùng với giảm nhu cầu cung cấp

oxy và năng lượng cho cơ tim Điều này làm giảm nguy cơ đau thắt ngực Ngoài ra,

amlodipin cũng gây giãn động mạch vành cả trong khu vực thiếu máu cục bộ và khu

vực được cung máu bình thường Sự giãn mạch này làm tăng cung cấp oxy cho người

bệnh đau thắt ngực thể co thắt (đau thắt ngực kiểu Prinzmetal) Điều này làm giảm nhu

cầu nitroglycerin và bằng cách này, nguy cơ kháng nitroglycerin có thể giảm Thời

gian tác dụng chống đau thắt ngực kéo dài 24 giờ

 Nửa đời trong huyết tương đạt từ 30 – 40 giờ

 Nồng độ ổn định trong huyết tương đạt được 7 đến 8 ngày sau khi uống

thuốc mỗi ngày một lần

 Thể tích phân bố xấp xỉ 21 lit/kg thể trọng và thuốc liên kết với protein-

huyết tương cao (trên 98%)

 Độ thanh thải trong huyết tương tới mức bình thường vào khoảng

7 mL/phút/kg thể trọng do bài tiết chủ yếu thông qua chuyển hóa trong gan Các chất

chuyển hóa mất hoạt tính và bài tiết qua nước tiểu

 Không dùng cho người suy tim chưa được điều trị ổn định

 Mẫn cảm với dẫn xuất dihydropyridin

 Thận trọng với người giảm chức năng gan, hẹp động mạch chủ, suy tim sau

nhồi máu cơ tim cấp

2.2.4 Liều lượng

Trong điều trị cao huyết áp lẫn đau thắt ngực, có thể dùng:

 Liều khởi đầu: uống 5 mg x 1 lần / ngày, sau đó tăng dần

GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa Học K33

 Không cần điều chỉnh liều khi phối hợp với các thuốc lợi tiểu thiazide, thuốc

chẹn bêta hoặc thuốc ức chế men chuyển

2.2.5 Tương tác thuốc

 Amlodipin có thể dùng phối hợp với thuốc chẹn bêta cùng với thiazid hoặc

thuốc lợi tiểu quai và cùng với thuốc ức chế enzym chuyển đổi angiotensin

 Các thuốc gây mê làm tăng tác dụng của Amlodipin và có thể làm huyết áp

giảm mạnh hơn Dùng Lithium cùng với Amlodipin có thể gây độc thần kinh, buồn

nôn, nôn, tiêu chảy

 Thuốc kháng viêm không steroid, đặc biệt là Indomethacin có thể làm giảm

tác dụng của Amlodipin

 Dùng thận trọng các thuốc liên kết cao với protein huyết tương (như dẫn chất

coumarin, hydantoin ) với Amlodipin vì Amlodipin cũng liên kết cao với protein nên

nồng độ của các thuốc trên ở dạng tự do (không liên kết) có thể thay đổi trong huyết

Amlodipin 5mg dạng viên nang

Cty CP Dược Hậu Giang

Amlodipin 5mg dạng viên nang

Cty CP Dược phẩm

Trung ương 1– pharbaco

2.3 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP (HPLC)[1],[6],[7]

HPLC là chữ viết tắt của 04 chữ cái đầu bằng tiếng Anh của phương pháp sắc

ký lỏng hiệu năng cao (High Performance Liquid Chromatography), trước kia gọi là

phương pháp sắc ký lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography)

Phương pháp này ra đời từ năm 1967 – 1968 trên cơ sở phát triển và cải tiến từ phương

pháp sắc ký cột cổ điển

Sắc ký lỏng cao áp là một phương pháp tách hóa lý dựa vào ái lực khác nhau

của các chất khác nhau với hai pha luôn tiếp xúc và không trộn lẫn, một pha động và

một pha tĩnh Trong đó pha động là chất lỏng chảy qua cột với một tốc độ nhất định và

pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một

chất lỏng phủ lên một chất mang rắn, hay một chất mang đã được biến đối bằng liên

kết hóa học với các nhóm chức hữu cơ Quá trình sắc ký lỏng dựa trên cơ chế hấp phụ,

phân bố, trao đổi ion hay phân loại theo kích cỡ (rây phân tử)

2.3.1 Nguyên tắc, cấu tạo máy sắc ký lỏng cao áp

Để thực hiện việc tách một hỗn hợp chất bằng kỹ thuật phân tích HPLC, chúng ta

phải có hệ thống trang bị về kỹ thuật này Hệ thống trang bị của HPLC đơn giản và đủ

để làm việc được theo kỹ thuật HPLC bao gồm các bộ phận chính sau:

* Bơm: có nhiệm vụ đẩy pha động vào trong cột sắc ký, rửa giải chất tan ra khỏi cột

sắc ký Bơm có hai loại: bơm một piston và bơm hai piston, bơm một piston áp suất có

xung, bơm hai piston áp suất không có xung

* Bộ phận tiêm mẫu: để bơm mẫu phân tích vào cột tách theo những lượng mẫu nhất

định không đổi trong một quá trình sắc ký Có thể tiêm mẫu bằng tay hay tiêm mẫu tự

động (autosampler) Tiêm mẫu bằng tay thì độ lặp lại thường không tốt, phụ thuộc rất

nhiều vào kỹ thuật tiêm mẫu của người sử dụng, tiêm mẫu tự động độ lặp lại tốt hơn

nhiều

* Cột sắc ký: là cột chứa pha tĩnh, nó là một yếu tố quyết định hiệu quả sự tách sắc ký

của một hỗn hợp chất mẫu Cột được làm bằng thép không rỉ, chiều dài thường từ

10–30 cm, đường kính trong từ 4–10 mm, cỡ hạt pha tĩnh từ 3–10 µm Thường dùng

cột dài 15cm, 25cm, đường kính trong 4,6 mm, cỡ hạt 5 µm Hiện nay, có cột dài

5–10 cm, đường kính trong 1–4,6 mm, cỡ hạt 1,7 µm

GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa Học K33

* Đầu dò (detector): khi chất phân tích đi qua đầu dò tạo tín hiệu điện, tín hiệu này

được đọc trên máy ghi, tín hiệu điện tỉ lệ với lượng chất phân tích đi qua đầu dò

Đầu dò phải đạt các yêu cầu về: phát hiện nhanh và lặp lại, độ nhạy cao, không làm

thay đổi độ phân giải, không làm hỏng chất phân tích

Hiện nay, có nhiều loại đầu dò như: đầu dò UV-Vis, đầu dò huỳnh quang, đầu dò

DAD, đầu dò khúc xạ kế vi sai (RI), đầu dò điện hóa (ECD), đầu dò đo độ dẫn (CD),

đầu dò ghép khối phổ,

*Trang bị chỉ thị kết quả: có nhiều loại, nhưng đơn giản và phổ biến nhất là các máy

tự ghi (recorder) để ghi tín hiệu đo dưới dạng các peak của các chất, rồi đến bộ tích

phân kế (Intergrator), sau đó máy tính và máy in kèm theo để xử lý kết quả và in kết

quả

2.3.2 Các yếu tố và thông số đặc trưng của máy sắc ký lỏng cao áp

2.3.2.1 Các yếu tố trong sắc ký lỏng cao áp

- Pha tĩnh thường là silicagel gắn các nhóm phân cực (-diol, -amine, -cyano,…), ít

hay không phân cực (-C18, -C8, -phenyl,…)

- Pha động là dung môi hay hệ dung môi (trong HPLC), là khí mang như Nitrogen,

heli, argon (trong GC)

- Trong HPLC chia làm 2 loại: pha thường hay pha thuận có pha tĩnh là phân cực,

pha động không phân cực; pha đảo thì ngược lại, pha tĩnh ít hay không phân cực, pha

động thì phân cực

Hình 2.4: Sơ đồ máy HPLC

- Dung môi:

+ Các dung môi dùng cho HPLC đều phải lọc qua màng lọc có kích thước lỗ là

0,45µm hay 0,22µm (trừ một dung môi mà sản xuất đã lọc trước: acetonitril,

methanol,…)

+ Dung môi là nước hoặc hệ đệm trong nước thì dùng màng lọc cellulose acetat

hay nitrat, hỗn hợp dung môi hữu cơ và nước thì dùng màng lọc polyamid hay nylon,

dung môi hữu cơ lọc qua màng lọc teflon

2.3.2.2 Các thông số đặc trưng trong sắc ký lỏng cao áp

- Thời gian chết (to): là thời gian cần thiết để pha động chạy qua hệ thống tách

- Thời gian lưu (tR): là thời gian cần thiết để từ khi chất được bơm vào cột cho đến

khi đạt nồng độ cực đại trên detector

- Thời gian lưu thực (tR’): tR’ = (tR - to)

- Hệ số dung lượng (k’): k’ = tR/to – 1 hệ số dung lượng tốt nhất là 1<k’<8

- Hệ số chọn lọc (α): α = KB/KA = k’B/k’A = tR’B/tR’A B lưu giữ mạnh hơn A nên

α > 1 Hệ số chọn lọc tốt nhất là 1,05 < α < 2

- Số điã lý thuyết (N): N = 16×(tR/W)2 với W là chiều rộng đáy peak

- N tốt nhất khi N gần bằng Nmax với Nmax = 4000 × (L/dr) với L là chiều dài cột

(cm), dr là đường kính hạt pha tĩnh (µm)

- Độ phân giải (R): độ phân giải giữa hai peak A và peak B được tính theo công

thức: R = 2[(tR)B - (tR)A]/(WA + WB)

Theo DĐVN3, BP, USP30 thì R = 1,5 là hai peak tách nhau hoàn (chỉ xen phủ

0,3%) Vậy độ phân giải giữa hai peak tốt nhất là R ≥ 1,5

- Hệ số đối xứng (AS): AS = Wx/2A Hệ số đối xứng tốt nhất là 0,8<AS<1,2

2.3.3 Định tính và định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng cao áp

2.3.3.1 Định tính

Nguyên tắc của phân tích định tính là: so sánh thời gian lưu của các peak sắc ký

trong mẫu phân tích với thời gian lưu của các peak sắc ký trong mẫu chuẩn Từ đó sẽ

xác định trong mẫu phân tích có những chất nào, nếu chúng có thời gian lưu giữ đúng

như thời gian lưu giữ của các peak trong mẫu chuẩn

GVHD: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Luận văn tốt nghiệp – Hóa Học K33

2.3.3.2 Định lượng

Nguyên tắc

Tất cả các phương pháp định lượng bằng sắc ký đều dựa trên nguyên tắc: nồng

độ của chất tỷ lệ với chiều cao hoặc diện tích peak của nó

Phương pháp định lượng

Sau khi hòa tan thuốc, dung dịch hòa tan được lấy ra, đem lọc, pha loãng (nếu

cần), lọc qua màng lọc Milipore 0,45µm, tiến hành chạy sắc ký để định lượng

Có 4 phương pháp định lượng trong sắc ký: phương pháp ngoại chuẩn, phương

pháp nội chuẩn, phương pháp thêm chuẩn và phương pháp chuẩn hóa diện tích

Trong điều kiện tiến hành luận văn ở phòng Kiểm Nghiệm, định lượng tiến hành

theo phương pháp ngoại chuẩn

 Phương pháp ngoại chuẩn

Phương pháp ngoại chuẩn là phương pháp định lượng cơ bản, trong đó cả hai

mẫu chuẩn và thử đều được tiến hành sắc ký trong cùng điều kiện

So sánh diện tích (hoặc chiều cao) peak của mẫu thử với diện tích (hoặc chiều

cao) peak của mẫu chuẩn sẽ tính được nồng độ của các chất trong mẫu thử

Có thể sử dụng phương pháp chuẩn hóa một điểm hoặc nhiều điểm

a Chuẩn hóa một điểm: chọn nồng độ của mẫu chuẩn xấp xỉ nồng độ của mẫu

thử

Tính nồng độ mẫu thử theo công thức:

Cx: nồng độ mẫu thử

Cs: nồng độ chất chuẩn

Sx: diện tích (hoặc chiều cao) peak của mẫu thử

Ss: diện tích (hoặc chiều cao) peak của mẫu chuẩn

b Chuẩn hóa nhiều điểm:

Chuẩn bị một dãy chuẩn với các nồng độ tăng dần rồi tiến hành sắc ký Các đáp

ứng thu được là các diện tích hoặc chiều cao peak ở mỗi điểm chuẩn

Vẽ đồ thị chuẩn biểu diễn sự tương quan giữa diện tích S (hoặc chiều cao H) của

peak với nồng độ của chất chuẩn (C)

Cx= Cs

s

x

S S