2. Đề tài: THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG HOẠT CHẤT
2.3.1 Nguyên tắc,cấu tạo máy sắc ký lỏng cao áp
Để thực hiện việc tách một hỗn hợp chất bằng kỹ thuật phân tích HPLC, chúng ta phải có hệ thống trang bị về kỹ thuật này. Hệ thống trang bị của HPLC đơn giản và đủ để làm việc đƣợc theo kỹ thuật HPLC bao gồm các bộ phận chính sau:
* Bơm: có nhiệm vụ đẩy pha động vào trong cột sắc ký, rửa giải chất tan ra khỏi cột sắc ký. Bơm có hai loại: bơm một piston và bơm hai piston, bơm một piston áp suất có xung, bơm hai piston áp suất không có xung.
* Bộ phận tiêm mẫu: để bơm mẫu phân tích vào cột tách theo những lƣợng mẫu nhất định không đổi trong một quá trình sắc ký. Có thể tiêm mẫu bằng tay hay tiêm mẫu tự động (autosampler). Tiêm mẫu bằng tay thì độ lặp lại thƣờng không tốt, phụ thuộc rất nhiều vào kỹ thuật tiêm mẫu của ngƣời sử dụng, tiêm mẫu tự động độ lặp lại tốt hơn nhiều.
* Cột sắc ký: là cột chứa pha tĩnh, nó là một yếu tố quyết định hiệu quả sự tách sắc ký của một hỗn hợp chất mẫu. Cột đƣợc làm bằng thép không rỉ, chiều dài thƣờng từ 10–30 cm, đƣờng kính trong từ 4–10 mm, cỡ hạt pha tĩnh từ 3–10 µm. Thƣờng dùng
cột dài 15cm, 25cm, đƣờng kính trong 4,6 mm, cỡ hạt 5 µm. Hiện nay, có cột dài 5–10 cm, đƣờng kính trong 1–4,6 mm, cỡ hạt 1,7 µm.
* Đầu dò (detector): khi chất phân tích đi qua đầu dò tạo tín hiệu điện, tín hiệu này đƣợc đọc trên máy ghi, tín hiệu điện tỉ lệ với lƣợng chất phân tích đi qua đầu dò. Đầu dò phải đạt các yêu cầu về: phát hiện nhanh và lặp lại, độ nhạy cao, không làm thay đổi độ phân giải, không làm hỏng chất phân tích.
Hiện nay, có nhiều loại đầu dò nhƣ: đầu dò UV-Vis, đầu dò huỳnh quang, đầu dò DAD, đầu dò khúc xạ kế vi sai (RI), đầu dò điện hóa (ECD), đầu dò đo độ dẫn (CD), đầu dò ghép khối phổ,...
*Trang bị chỉ thị kết quả: có nhiều loại, nhƣng đơn giản và phổ biến nhất là các máy tự ghi (recorder) để ghi tín hiệu đo dƣới dạng các peak của các chất, rồi đến bộ tích phân kế (Intergrator), sau đó máy tính và máy in kèm theo để xử lý kết quả và in kết quả.