KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG MỘT SỐ DƯỢC PHẨM CHỨA HOẠT CHẤT AZITHROMYCIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA - - NGUYỄN VĂN NAM KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG MỘT SỐ DƯỢC PHẨM CHỨA HOẠT CHẤT AZITHROMYCIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CỬ NHÂN HÓA DƯỢC Cần Thơ, 2015 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA - - NGUYỄN VĂN NAM KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG MỘT SỐ DƯỢC PHẨM CHỨA HOẠT CHẤT AZITHROMYCIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG CAO ÁP LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CỬ NHÂN HÓA DƯỢC CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ThS NGUYỄN THỊ DIỆP CHI Cần Thơ, 2015 Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi LỜI CẢM ƠN  Qua thời gian dài học tập, rèn luyện giảng đường đại học Cần Thơ cuối hoàn thành đề tài luận văn, em nhận nhiều quan tâm giúp đỡ q thầy cơ, gia đình bạn bè Để nhận kiến thức kinh nghiệm quý báu làm hành trang cho công việc sau này, với lòng biết ơn sâu sắc: Em xin cảm ơn cô Nguyễn Thị Diệp Chi giúp đỡ, hướng dẫn tận tình em suốt thời gian thực hoàn thành đề tài luận văn Xin cảm ơn đến thầy cô trường đại học Cần Thơ, đặc biệt thầy mơn Hóa – khoa Khoa Học Tự Nhiên dạy dỗ tận tình, truyền đạt cho em kiến thức chuyên môn quý báu Em xin chân thành cảm ơn đến ban Giám đốc Trung tâm Kiểm nghiệm Thuốc, Mỹ phẩm, Thực phẩm Thành phố Cần Thơ với anh chị kiểm nghiệm viên phòng Vật lý – đo lường Em xin gửi lời cảm ơn đến chị Cao Thúy Liễu giúp đỡ em trình thực đề tài cô Lê Thị Cẩm Thúy tạo điều kiện tốt để em hoàn thành đề tài Cuối cùng, xin cảm ơn sâu sắc đến gia đình, tập thể bạn lớp Hóa Dược K38 cô cố vấn học tập Tôn Nữ Liên Hương giúp đỡ, quan tâm em suốt chặng đường đại học vừa qua Xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày tháng năm 2015 Nguyễn Văn Nam SVTH: Nguyễn Văn Nam i Luận văn tốt nghiệp Đại học Trường Đại Học Cần Thơ GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ Mơn Hóa Học Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc  NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Cán hướng dẫn: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Đề tài: “Kiểm tra chất lượng số dược phẩm chứa hoạt chất azithromycin phương pháp sắc ký lỏng cao áp” Sinh viên thực hiện: Nguyễn Văn Nam MSSV: B1203472 Lớp: Hóa Dược – Khóa: 38 Nội dung nhận xét: a) Nhận xét hình thức LVTN: b) Nhận xét nội dung LVTN (đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c) Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d) Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2015 Cán hướng dẫn ThS Nguyễn Thị Diệp Chi SVTH: Nguyễn Văn Nam ii Luận văn tốt nghiệp Đại học Trường Đại Học Cần Thơ Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ Mơn Hóa Học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc  NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN Cán phản biện: …………………………………………………………… Đề tài: “Kiểm tra chất lượng số dược phẩm chứa hoạt chất azithromycin phương pháp sắc ký lỏng cao áp” Sinh viên thực hiện: Nguyễn Văn Nam MSSV: B1203472 Lớp: Hóa Dược – Khóa: 38 Nội dung nhận xét: a) Nhận xét hình thức LVTN: b) Nhận xét nội dung LVTN (đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c) Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d) Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2015 Cán hướng dẫn SVTH: Nguyễn Văn Nam iii Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi TĨM TẮT  Azithromycin kháng sinh có hoạt phổ rộng thuộc nhóm macrolid Thuốc điều trị nhiễm vi khuẩn nội bào tốt đặc biệt tác dụng mạnh vi khuẩn hội bệnh nhân HIV/AIDS Ngày nay, azithromycin sử dụng rộng rãi thị trường có vị trí tin cậy điều trị Mục đích đề tài thẩm định quy trình định lượng hoạt chất azithromycin phương pháp sắc ký lỏng cao áp, bên cạnh tiến hành kiểm tra chất lượng số dược phẩm chứa hoạt chất azithromycin với tiêu: tính chất cảm quan, độ đồng khối lượng, độ hòa tan, định tính định lượng phương pháp sắc ký lỏng cao áp Đề tài nghiên cứu mẫu thuốc lấy thị trường gồm lô thuốc viên nang Azissel công ty Roussel Việt Nam lô thuốc viên nén bao phim Azithromycin công ty Cổ phần Dược Hậu Giang Quy trình định lượng azithromycin phương pháp sắc ký lỏng cao áp với tính tuyến tính tốt (R = 0,9999), độ đạt yêu cầu (tỷ lệ phục hồi 101,3%) độ xác cao (RSD = 0,65%) Kết kiểm tra chất lượng lô thuốc đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn sở công ty SVTH: Nguyễn Văn Nam iv Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC LỜI CAM KẾT Tơi xin cam kết luận văn hồn thành dựa kết nghiên cứu kết nghiên cứu chưa dùng cho luận văn cấp khác Cần Thơ, ngày tháng năm 2015 Nguyễn Văn Nam SVTH: Nguyễn Văn Nam v Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi MỤC LỤC  Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT iv LỜI CAM KẾT v DANH MỤC HÌNH ix DANH MỤC BẢNG x DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xi DANH MỤC PHỤ LỤC xii CHƯƠNG PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan azithromycin 2.1.1 Nguồn gốc, công thức cấu tạo 2.1.2 Tính chất vật lý, tính chất hóa học 2.1.3 Dược động học, chế tác dụng dược lý 2.1.4 Chỉ định, tác dụng không mong muốn 2.1.5 Liều lượng, cách dùng 2.1.6 Dạng bào chế, số chế phẩm 2.2 Một số phương pháp xác định hoạt chất azithromycin 2.2.1 Các phương pháp định tính 2.2.2 Các phương pháp định lượng 2.3 Một số tiêu kiểm nghiệm thuốc viên nén viên nang 13 2.3.1 Tính chất 13 2.3.2 Độ đồng khối lượng 13 SVTH: Nguyễn Văn Nam vi Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi 2.3.3 Phép thử độ hòa tan viên nén viên nang 14 2.3.4 Định tính 16 2.3.5 Định lượng 16 2.4 Thẩm định quy trình phân tích 16 2.4.1 Kiểm tra tính phù hợp hệ thống 17 2.4.2 Tính tuyến tính 18 2.4.3 Giới hạn phát giới hạn định lượng 19 2.4.4 Độ xác 20 2.4.5 Độ 21 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1 Thời gian, địa điểm 23 3.2 Thiết bị, hóa chất 23 3.3 Phương pháp nghiên cứu 25 3.3.1 Phương pháp lấy mẫu 25 3.3.2 Phương pháp phân tích 25 3.3.3 Phương pháp xử lý số liệu 25 3.4 Hoạch định thí nghiệm 26 3.5 Tiến hành thí nghiệm 26 3.5.1 Thử nghiệm tiêu yêu cầu kỹ thuật số dược phẩm chứa hoạt chất azithromycin 26 3.5.1.1 Tính chất cảm quan 26 3.5.1.2 Độ đồng khối lượng 26 3.5.1.3 Độ hòa tan 27 3.5.2 Thẩm định quy trình định lượng hoạt chất azithromycin phương pháp sắc ký lỏng cao áp 31 3.5.2.1 Khảo sát tính phù hợp hệ thống 31 3.5.2.2 Khảo sát tính tuyến tính 32 3.5.2.3 Khảo sát độ 33 3.5.2.4 Khảo sát độ lặp lại 34 SVTH: Nguyễn Văn Nam vii Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi 3.5.3 Định tính, định lượng mẫu dược phẩm chứa hoạt chất azithromycin 35 3.5.3.1 Mục đích 35 3.5.3.2 Thực 35 3.5.3.3 Yêu cầu 37 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 4.1 Kết thử nghiệm tiêu yêu cầu kỹ thuật 38 4.1.1 Tính chất cảm quan 38 4.1.2 Độ đồng khối lượng 38 4.1.3 Độ hòa tan 39 4.2 Thẩm định quy trình định lượng hoạt chất azithromycin phương pháp HPLC 40 4.2.1 Tính phù hợp hệ thống 40 4.2.2 Tính tuyến tính 41 4.2.3 Độ 43 4.2.4 Độ lặp lại 44 4.3 Định tính, định lượng mẫu dược phẩm chứa hoạt chất azithromycin 45 4.3.1 Định tính 45 4.3.2 Định lượng 46 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 5.1 Kết luận 47 5.2 Kiến nghị 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC 50 SVTH: Nguyễn Văn Nam viii Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Mẫu 223 KL 20 viên: 7724,7 mg KL 20 vỏ nang: 1508,1 mg Mức yêu cầu: ± 7,5% (287,5 mg – 334,1 mg) 𝑃̅ = 310,8 mg STT Cả viên Vỏ nang Thuốc 375 71 304 397 77 320 383 70 313 373 80 293 387 78 309 368 76 292 399 77 322 389 78 311 10 387 395 75 74 312 321 STT Cả viên Vỏ nang Thuốc 11 372 71 301 12 385 75 310 13 396 77 319 14 397 79 318 15 381 77 304 16 388 72 316 17 382 74 308 18 386 75 311 19 20 397 392 77 76 320 316 Mẫu: 1597 KL 20 viên: 7744,0 mg KL20 vỏ nang: 1608,9 mg Mức yêu cầu: ± 7,5% (283,8 mg – 329,8 mg) 𝑃̅ =306, mg STT Cả viên Vỏ nang Thuốc 382 82 300 386 81 305 385 84 301 379 79 300 391 81 310 384 83 301 373 78 295 386 82 304 390 78 312 10 402 80 322 STT Cả viên Vỏ nang Thuốc 11 400 80 320 12 380 81 299 13 380 78 302 14 386 77 309 15 392 78 314 16 400 82 318 17 394 79 315 18 379 82 297 19 391 81 310 20 378 77 301 SVTH: Nguyễn Văn Nam 51 Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi PL Kết độ hòa tan Độ hòa tan mẫu 2063 Report Date: 1/10/2015 3:24 File Name: Run Date: Operator: do hoa tan 1/10/2015 3:22 user Instrument Model: Serial Number: ROM Version: U-2900 Spectrophotometer 2J5301 05 Instrument Parameters Measurement Type: Photometry Data Mode: Abs Number of Wavelengths: Wavelength 1: 482.0 nm Slit Width: 1.50 nm Lamp change mode: Auto Auto change wavelength: 340.0 nm Path Length: 10.0 mm (Abs values are corrected to 10 mm path length) Std No / Name Azithromycin Comment: HL: 93.84% mc = 26.2 mg Abs(482.0) Conc(%) diff 0.4971 88.5 Samp No / Name Azithromycin 2063L Azithromycin 2063L Azithromycin 2063L Azithromycin 2063L Azithromycin 2063L Azithromycin 2063L Abs(482.0) Conc(%) 0.6075 108.1 0.6143 109.4 0.6029 107.3 0.6137 109.3 0.5598 99.7 0.5752 102.4 SVTH: Nguyễn Văn Nam 52 RD t 0 Avg Conc [SD] 108.8 0.8602 108.3 1.3543 101 1.9423 Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Độ hòa tan mẫu 1822 Report Date: 2/10/2015 2:03 File Name: Run Date: Operator: do hoa tan 2/10/2015 2:00 user Instrument Model: Serial Number: ROM Version: U-2900 Spectrophotometer 2J5301 05 Instrument Parameters Measurement Type: Photometry Data Mode: Abs Number of Wavelengths: Wavelength 1: 482.0 nm Slit Width: 1.50 nm Lamp change mode: Auto Auto change wavelength: 340.0 nm Path Length: 10.0 mm (Abs values are corrected to 10 mm path length) Std No / Name Azithromycin Comment: HL:93.84% mc = 25.6 mg Abs(482.0) Conc(%) diff 0.4895 86.5 Samp No / Name Azithromycin 1822L Azithromycin 1822L Azithromycin 1822L Azithromycin 1822L Azithromycin 1822L Azithromycin 1822L Abs(482.0) Conc(%) 0.6050 106.9 0.6156 108.8 0.6274 110.9 0.6045 106.8 0.6211 109.8 0.6142 108.5 SVTH: Nguyễn Văn Nam 53 RD t 0 Avg Conc [SD] 107.9 1.3291 108.9 2.8644 109.1 0.862 Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Độ hòa tan mẫu 2062 Report Date: 1/10/2015 3:21 File Name: Run Date: Operator: do hoa tan 1/10/2015 3:19 user Instrument Model: Serial Number: ROM Version: U-2900 Spectrophotometer 2J5301 05 Instrument Parameters Measurement Type: Photometry Data Mode: Abs Number of Wavelengths: Wavelength 1: 482.0 nm Slit Width: 1.50 nm Lamp change mode: Auto Auto change wavelength: 340.0 nm Path Length: 10.0 mm (Abs values are corrected to 10 mm path length) Std No / Name Azithromycin Comment: HL: 93.84% mc = 26.2 mg Abs(482.0) Conc(%) diff 0.4971 88.5 Samp No / Name Azithromycin 1822L Azithromycin 1822L Azithromycin 1822L Azithromycin 1822L Azithromycin 1822L Azithromycin 1822L Abs(482.0) Conc(%) 0.5853 104.2 0.6135 109.2 0.6111 108.8 0.6110 108.8 0.6101 108.6 0.6150 109.5 SVTH: Nguyễn Văn Nam 54 RD t 0 Avg Conc [SD] 106.7 3.5504 108.8 0.0112 109 0.613 Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Độ hòa tan mẫu 2010 Thứ tự mẫu TR (phút) Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn 14.2 14.2 14.1 14.0 14.0 13.9 Thử Thử Thử Thử Thử Thử 13.8 13.8 13.7 13.7 13.7 13.7 Lượng cân P Diện tích pic KẾT QUẢ S (mV*S) (mg) (%) 25.0 100 1192578 1222226.00 25.0 100 1211828 25.0 100 1218191 25.0 100 1228026 25.0 100 1239364 25.0 100 1243369 250 250 250 250 250 250 900 900 900 900 900 900 1507518 1401864 1488340 1397403 1399749 1495919 104.2 96.9 102.8 96.6 96.7 103.4 u cầu: Khơng 75% lượng hoạt chất hòa tan 45 phút Độ hòa tan mẫu 233 Thứ tự mẫu TR (phút) Lượng cân (mg) Diện tích pic S (mV*S) P KẾT QUẢ (%) Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn 4.6 4.6 4.6 4.6 4.6 4.6 25.0 25.0 25.0 25.0 25.0 25.0 100 100 100 100 100 100 93694 92490 92614 92981 93104 93077 92993.36 Thử Thử Thử Thử Thử Thử 4.6 4.6 4.6 4.5 4.6 4.6 250 250 250 250 250 250 900 900 900 900 900 900 97302 99265 105871 106591 104198 105825 88.4 90.0 95.8 96.9 94.6 96.1 Yêu cầu: Khơng 75% lượng hoạt chất hòa tan 45 phút SVTH: Nguyễn Văn Nam 55 Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Độ hòa tan mẫu 1597 Thứ tự mẫu TR (phút) Lượng cân Diện tích pic S (mV*S) P (mg) KẾT QUẢ (%) Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn Chuẩn 9.7 9.7 9.7 9.7 9.7 9.8 50.8 50.8 50.8 50.8 50.8 50.8 200 200 200 200 200 200 157644 157932 159073 157379 159260 158510 158299.77 Thử Thử 9.7 9.7 250 250 900 900 188079 181832 107.9 104.3 Thử Thử Thử Thử 9.7 9.7 9.7 9.7 250 250 250 250 900 900 900 900 182009 179512 177923 174277 104.4 103.0 102.1 100.0 u cầu: Khơng 75% lượng hoạt chất hòa tan 45 phút SVTH: Nguyễn Văn Nam 56 Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi PL Xử lý thống kê tính tuyến tính dựa vào phần mềm Microsoft Excel SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R 0,999294959 R Square 0,998590414 Adjusted R Square 0,998238018 Standard Error 49660,7613 Observations ANOVA df SS 6,98848E+12 9864764851 6,99834E+12 Coefficients -1030,255238 3159674,043 Standard Error 57138,14326 59355,96267 Regression Residual Total Intercept X Variable MS 6,98848E+12 2466191213 F 2833,712976 t Stat -0,018030954 53,23263074 P-value 0,9864777 7,4545E-07 Đường biểu diễn mối quan hệ tuyến tính nồng độ diện tích pic 5000000,00 Diện tích pic 4000000,00 y = 3.106x -1030,3 R² = 0,9986 3000000,00 2000000,00 1000000,00 0,00 0,4 0,8 1,2 Nồng độ chuẩn azithromycin (mg/ml) SVTH: Nguyễn Văn Nam 57 1,6 Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Sau kiểm tra hệ số a,b kiểm tra ý nghĩa phương trình hồi quy thu kết quả: SUMMARY OUTPUT Regression Statistics Multiple R 0,99991109 R Square 0,999822188 Adjusted R Square 0,799822188 Standard Error 44419,74031 Observations ANOVA df SS 5,54733E+13 9865566648 5,54832E+13 3158673,435 Standard Error #N/A 18838,166 Regression Residual Total Coefficients Intercept X Variable SVTH: Nguyễn Văn Nam 58 MS 5,54733E+13 1973113330 F 28114,61994 t Stat #N/A 167,6741481 P-value #N/A 1,43155E-10 Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi PL Sắc ký đồ định tính định lượng mẫu SVTH: Nguyễn Văn Nam 59 Luận văn tốt nghiệp Đại học SVTH: Nguyễn Văn Nam GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi 60 Luận văn tốt nghiệp Đại học SVTH: Nguyễn Văn Nam GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi 61 Luận văn tốt nghiệp Đại học SVTH: Nguyễn Văn Nam GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi 62 Luận văn tốt nghiệp Đại học SVTH: Nguyễn Văn Nam GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi 63 Luận văn tốt nghiệp Đại học SVTH: Nguyễn Văn Nam GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi 64 Luận văn tốt nghiệp Đại học SVTH: Nguyễn Văn Nam GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi 65 ... tháng năm 2015 Nguyễn Văn Nam SVTH: Nguyễn Văn Nam i Luận văn tốt nghiệp Đại học Trường Đại Học Cần Thơ GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên... SVTH: Nguyễn Văn Nam ii Luận văn tốt nghiệp Đại học Trường Đại Học Cần Thơ Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ Mơn Hóa Học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc Lập - Tự... kết nghiên cứu chưa dùng cho luận văn cấp khác Cần Thơ, ngày tháng năm 2015 Nguyễn Văn Nam SVTH: Nguyễn Văn Nam v Luận văn tốt nghiệp Đại học GVHD: ThS Nguyễn Thị Diệp Chi MỤC LỤC  Trang LỜI