khảo sát ảnh hưởng của chế phẩm bio bl và bioplant flora đến sự sinh trưởng, năng suất và chất lượng của cây cải ngọt (brassica integrifolia)

HỒ CHÍ MINH Trần Ngọc Điểm KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM BIO BL VÀ BIOPLANT FLORA ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG, NĂNG SUẤT VÀ CHẤT LƯỢNG CỦA CÂY CẢI NGỌT BRASSICA INTEGRIFOLIA LUẬN VĂN THẠC SĨ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH

Trần Ngọc Điểm

KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM BIO BL VÀ BIOPLANT FLORA ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG, NĂNG SUẤT VÀ CHẤT LƯỢNG CỦA

CÂY CẢI NGỌT (BRASSICA INTEGRIFOLIA)

LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC

Thành Phố Hồ Chí Minh – 2014

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH

Trần Ngọc Điểm

KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM BIO BL VÀ BIOPLANT FLORA ĐẾN SỰ SINH TRƯỞNG, NĂNG SUẤT VÀ CHẤT LƯỢNG CỦA

CÂY CẢI NGỌT (BRASSICA INTEGRIFOLIA)

Chuyên ngành : Vi sinh vật học

LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC

NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC:

TS TRẦN THANH THỦY

Thành Phố Hồ Chí Minh – 2014

LỜI CẢM ƠN

Luận văn này được thực hiện tại phòng thí nghiệm của Bộ môn Vi Sinh ,

Trường Đại học Sư phạm TP Hồ Chí Minh Để hoàn thành được luận văn này tôi

đã nhận được rất nhiều sự động viên, giúp đỡ của nhiều cá nhân và tập thể

Để có được kết quả luận văn này em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc và gửi lời cảm ơn chân thành đến TS TRẦN THANH THỦY, người đã động viên, giúp đỡ, đưa ra phương hướng, mục tiêu, hướng dẫn khoa học cặn kẽ cho em trong suốt quá trình thực hiện luận văn

Em xin gửi lời cảm ơn đến TS VÕ THỊ HẠNH đã giúp đỡ, truyền đạt những kinh nghiệm quý báu cho em trong quá trình thực hiện luận văn

Xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo, người đã đem lại cho em những kiến thức bổ trợ, vô cùng có ích trong những năm học vừa qua

Cũng xin gửi lời cám ơn chân thành tới Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo sau đại học Trường Đại học Sư phạm TP Hồ Chí Minh đã tạo điều kiện cho tôi trong quá trình học tập

Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, những người đã luôn bên tôi, động viên và khuyến khích tôi trong quá trình thực hiện đề tài nghiên cứu của mình

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các số liệu được trình bày trong phần kết quả của luận văn là trung thực và chưa từng được công bố trong bất kỳ công trình nào khác

MỤC LỤC

Trang phụ bìa

Lời cảm ơn

Lời cam đoan

Mục lục

Danh mục các chữ cái viết tắt

Danh mục các bảng

Danh mục các hình vẽ

MỞ ĐẦU 9

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 11

1.1 Chế phẩm sinh học 11

1.1.1 Lịch sử nghiên cứu 11

1.1.2 Đặc điểm của chế phẩm sinh học 12

1.1.3 Đặc điểm của chế phẩm vi sinh 14

1.1.4 Các phương pháp sử dụng chế phẩm vi sinh trong trồng trọt và bảo vệ thực vật 18

1.1.5 Tình hình nghiên cứu, ứng dụng của các chế phẩm sinh học dùng trong nông nghiệp 20

1.2 Chế phẩm Bio BL và Bioplant Flora 22

1.2.1 Chế phẩm Bio BL 22

1.2.2 Chế phẩm Bioplant Flora 27

1.3 Giới thiệu về cây cải ngọt (Brassica integrifolia Willd.) 30

1.3.1 Vị trí phân loại 30

1.3.2 Đặc điểm sinh học của cây cải ngọt 31

1.3.3 Vai trò của cải ngọt trong thực phẩm 31

1.3.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến năng suất, chất lượng của cây cải ngọt 32

Ch ương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34

2.1 Vật liệu 34

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 34

2.1.2 Hóa chất 34

2.1.3 Thiết bị và dụng cụ 34

2.1.4 Các môi trường nghiên cứu sử dụng 34

2.2 Phương pháp nghiên cứu 35

2.2.1 Phương pháp phân lập vi khuẩn 35

2.2.2 Phương pháp quan sát hình thái vi khuẩn 36

2.2.3 Phương pháp xác định số lượng tế bào vi khuẩn 37

2.2.4 Bố trí thí nghiệm 38

2.2.5 Theo dõi các chỉ tiêu sinh trưởng, năng suất, chất lượng của cải ngọt 39

2.2.6 Phương pháp xác định hàm lượng vitamin C và nitrat có trong sản phẩm 40

2.2.7 Phương pháp phân tích hàm lượng dinh dưỡng trong chế phẩm 40

2.2.9 Phương pháp phân tích và xử lí số liệu 41

Chương 3 KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 42

3.1 Khảo sát thành phần vi sinh vật có trong chế phẩm Bio BL 42

3.2 Khảo sát hàm lượng chất dinh dưỡng có trong chế phẩm Bio BL và chế phẩm Bioplant Flora 45

3.3 Ảnh hưởng của chế phẩm Bio BL và Bioplant Flora đến sinh trưởng của cải ngọt 46

3.3.1 Ảnh hưởng của chế phẩm Bio-BL và Bioplant Flora đến số lá cây cải ngọt 47

3.3.2 Ảnh hưởng của chế phẩm Bio-BL và Bioplant Flora đến diện tích lá cây cải ngọt 50

3.3.3 Ảnh hưởng của chế phẩm Bio-BL và Bioplant Flora đến chiều cao cây cải ngọt 52

3.4 Ảnh hưởng của chế phẩm Bio-BL và Bioplant Flora đến năng suất của cây cải ngọt 55

3.5 Ảnh hưởng của chế phẩm Bio-BL và Bioplant Flora đến chất lượng

của cây cải ngọt 57

3.5.1 Ảnh hưởng của chế phẩm Bio-BL và Bioplant Flora đến hàm lượng Vitamin C của cây cải ngọt 57

3.5.2 Ảnh hưởng của chế phẩm Bio-BL và Bioplant Flora đến hàm lượng Nitrat của cây cải ngọt 58

Chương 4 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 61

4.1 Kết luận 61

4.2 Kiến nghị 62

TÀI LIỆU THAM KHẢO 63

PHỤ LỤC

DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1 Thành phần dinh dưỡng trong cây cải ngọt 32

Bảng 2.1 Phương pháp phân tích hàm lượng vitamin C và nitrat trong cải ngọt 40

Bảng 2.2 Phương pháp phân tích hàm lượng chất dinh dưỡng trong chế phẩm Bio BL 40

Bảng 2.3 Phương pháp phân tích hàm lượng chất dinh dưỡng trong chế phẩm Bioplant Flora 41

Bảng 3.1 Đặc điểm hình thái các thành phần vi khuẩn có trong chế phẩm Bio BL 42

Bảng 3.2 Mật độ của các loài VSV có trong chế phẩm Bio BL 44

Bảng 3.3 Thành phần chất dinh dưỡng có trong chế phẩm Bio BL 45

Bảng 3.4 Thành phần chất dinh dưỡng có trong chế phẩm Bioplant Flora 46

Bảng 3.5 Số lá của cây cải ngọt (lá/cây) 47

Bảng 3.6 Diện tích lá của cây cải ngọt (m2 lá/m2đất) 50

Bảng 3.7 Chiều cao của cây cải ngọt (cm) 53

Bảng 3.8 Năng suất của cải ngọt vào thời kì thu hoạch 56

Bảng 3.9 Hàm lượng Vitamin C (mg/kg) của cây cải ngọt vào thời kì thu hoạch 57

Bảng 3.10 Hàm lượng NO3- (mg/kg) của cây cải ngọt vào thời kì thu hoạch 59

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ

Hình 1.1 Số lượng sáng chế liên quan đến chế phẩm sinh học sử dụng trong

nông nghiệp từ năm 1990-2011 11

Hình 1.2 Biểu đồ số lượng các loại thuốc bảo vệ thực vật được đăng ký vào danh mục ở Việt Nam (2000-2009) 12

Hình 1.3 Chế phẩm Bioplant Flora 27

Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 38

Hình 3.1 Hình dạng đại thể và vi thể của vi khuẩn Bacillus sp 43

Hình 3.2 Hình dạng đại thể của vi khuẩn Azotobacter sp 43

Hình 3.3 Hình dạng đại thể và vi thể của vi khuẩn Pseudomonas sp 43

Hình 3.4 Ảnh hưởng của chế phẩm đến số lá của cây cải ngọt ở các công thức so với đối chứng 48

Hình 3.5 Số lá của cải ngọt qua các tuần 49

Hình 3.6 Ảnh hưởng của chế phẩm đến diện tích lá của cây cải ngọt vào thời kì thu hoạch so với đối chứng 51

Hình 3.7 Kích thước lá cải ngọt ở các công thức thí nghiệm vào thời kì thu hoạch 51

Hình 3.8 Chiều cao của cây cải ngọt ở các công thức qua các tuần thay đổi so với đối chứng 53

Hình 3.9 Chiều cao của cây ở các công thức vào thời kì thu hoạch 55

Hình 3.10 Trọng lượng tươi của cây cải ngọt vào thời kì thu hoạch thay đổi so đối chứng 56

Hình 3.11 Năng suất của cải ngọt vào thời kì thu hoạch thay đổi so đối chứng 57

Hình 3.12 Hàm lượng vitamin C của cây cải ngọt vào thời kì thu hoạch thay đổi so đối chứng 58

Hình 3.13 Hàm lượng nitrat của cây cải ngọt vào thời kỳ thu hoạch thay đổi so đối chứng 59

MỞ ĐẦU

1 Lí do chọn đề tài

Trong nông nghiệp đặc biệt là trồng trọt, người nông dân thường dùng thuốc kích thích sinh trưởng và phân hóa học để tăng năng suất cây trồng Biện pháp này mang lại hiệu quả nhanh chóng nhưng lại làm giảm chất lượng đất, gây ô nhiễm môi trường và nguy hại đến sức khỏe con người Thực tế cho thấy, dư lượng các thuốc bảo vệ thực vật, nitrat,…trong các sản phẩm cây trồng là nguyên nhân gây ra các bệnh hiểm nghèo như: ung thư, thần kinh, tiêu hóa, tim mạch,… Những chi phí dành cho thuốc bảo vệ thực vật, phân vô cơ trong sản xuất nông nghiệp đã khiến cho giá thành nông sản cao nhưng vẫn không đảm bảo chất lượng

Sử dụng chế phẩm sinh học phục vụ nông nghiệp là một vấn đề lớn được xã hội quan tâm nhằm tăng năng suất và chất lượng, giảm thiểu ô nhiễm môi trường

và không gây ảnh hưởng đến sức khỏe con người

Xu hướng hiện nay là sử dụng các CPSH có nguồn gốc từ vi sinh vật có bổ sung thêm các chất dinh dưỡng nhằm cung cấp thêm lượng VSV có ích cho đất, cải tạo đất, tăng năng suất và chất lượng cây trồng mà không ảnh hưởng đến sức khỏe con người

Trên thị trường hiện nay có rất nhiều loại CPSH, trong đó CPVS chiếm phần lớn Tuy nhiên, có nhiều chế phẩm cho hiệu quả còn hạn chế so với những thông tin trên bao bì chế phẩm Đây là điều đáng lo ngại của nông dân

Ở Việt Nam, rau là một loại cây trồng có vai trò quan trọng trong đời sống, kinh tế, xã hội Đây là một thành phần hầu như không thể thiếu trong các bữa cơm gia đình Việt Nam Rau chứa nhiều thành phần dinh dưỡng, khóang chất và vitamin; đặc biệt là vitamin C và tiền vitamin A Năng lượng trong rau không cao nhưng hàm lượng vitamin, chất xơ và chất khóang có ý nghĩa rất lớn đối với sức khỏe con người

Cùng với một số loại rau thông dụng khác, cải ngọt Brassica integrifolia là

loại rau dễ trồng, nhanh cho thu hoạch, có thể trồng nhiều vụ trong năm, chi phí

đầu tư thấp, tiêu thụ khá dễ dàng Thêm nữa, cải ngọt được người tiêu dùng ưa chuộng nhờ giá trị dinh dưỡng và giá trị kinh tế cao

Từ những lí do trên chúng tôi quyết định chọn đề tài nghiên cứu: “Khảo sát

ảnh hưởng của chế phẩm Bio-BL và Bioplant Flora đến sự sinh trưởng, năng

suất và chất lượng của cây cải ngọt (Brassica integrifolia)”

2 Mục tiêu

Tìm hiểu vai trò và hiệu lực của 2 CPVS Bio BL và Bioplant Flora đối với sự

sinh trưởng, năng suất và chất lượng của cây cải ngọt (Brassica integrifolia)

3 Nhiệm vụ nghiên cứu

- Xác định thành phần VSV và các chất dinh dưỡng trong 2 chế phẩm Bio BL

và Bioplant Flora

- Nghiên cứu ảnh hưởng của chế phẩm Bio BL và Bioplant Flora đến sự sinh trưởng, năng suất và chất lượng của cây cải ngọt

4 Đối tượng nghiên cứu

- Chế phẩm Bio-BL của công ty trách nhiệm hữu hạn SINH HỌC PHƯƠNG NAM cung cấp

- Chế phẩm Bioplant Flora: sản phẩm nhập từ Liên bang Nga được sản xuất

theo công nghệ nano có thể thay thế hoàn toàn phân hóa học và sử dụng cho nhiều loại cây trồng

- Hạt giống cải ngọt được cung cấp tại Công ty trách hữu hạn giống cây trồng Hoàng Ngân (45 Yết Kêu, huyện Châu Phú, tỉnh An Giang)

5 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

- Thời gian: từ tháng 4/2014 đến 9/2014

- Địa điểm bố trí thí nghiệm: đất trồng rau ở phường 15, quận 8, TP Hồ Chí Minh

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Chế phẩm sinh học

1.1.1 Lịch sử nghiên cứu

CPSH dùng trong nông nghiệp khởi đầu có đăng ký sáng chế từ năm 1917 Theo cơ sở dữ liệu tiếp cận được, từ năm 1917 đến nay có khoảng 5.000 sáng chế, trong đó giai đoạn 1990 – 2011 là giai đoạn phát triển mạnh với 4.528 sáng chế, nhiều nhất là năm 2010 với 382 sáng chế Phân bón sinh học là nhóm chế phẩm có nhiều sáng chế nhất, chiếm tỉ lệ 90,3% trong tổng số các sáng chế về CPSH sử dụng trong nông nghiệp [44]

Hình 1.1 Số lượng sáng chế liên quan đến CPSH sử dụng trong nông nghiệp từ

năm 1990-2011

Trung Quốc là quốc gia có lượng sáng chế về các CPSH cho nông nghiệp nhiều nhất (chiếm tỷ lệ 52%) Các sáng chế tại Trung Quốc tập trung nhiều vào phân bón sinh học và CPSH cải tạo đất Mỹ có nhiều sáng chế về thuốc trừ sâu sinh học Úc tập trung nghiên cứu nhiều về thuốc kích thích tăng trưởng cho cây trồng

Hình 1.2 Biểu đồ số lượng các loại thuốc BVTV được đăng ký vào danh mục ở

Việt Nam (2000-2009)

1.1.2 Đặc điểm của chế phẩm sinh học

Chế phẩm sinh học là sản phẩm của quá trình tái tạo và sử dụng tài nguyên sinh học CPSH bao gồm các vật liệu từ gỗ, giấy, các sản phẩm từ rừng và các chế phẩm có nguồn gốc sinh học như nhiên liệu sinh học, năng lượng sinh học, chất kết dính sinh học, nhựa sinh học, tinh bột, cellulose, ethanol,… CPSH hiện nay được ứng dụng nhiều trong chăn nuôi, trồng trọt và rất được quan tâm ở Việt Nam [44] CPSH dùng trong nông nghiệp có những ưu điểm nổi trội so với các chế phẩm hóa học như:

- Không gây ảnh hưởng tiêu cực đến sức khỏe con người, vật nuôi, cây trồng như các loại thuốc bảo vệ thực vật hóa học

- Cân bằng hệ sinh thái trong môi trường đất nói riêng và môi trường nói chung Ví dụ: phân hữu cơ vừa tăng dinh dưỡng cho đất, vừa tạo điều kiện thuận lợi cho VSV đất hoạt động

- Không làm thoái hóa đất mà còn góp phần tăng độ phì nhiêu của đất

- Cây trồng hấp thu chất dinh dưỡng dễ hơn, góp phần tăng năng suất và chất lượng nông phẩm

- Tiêu diệt côn trùng gây hại, giảm thiểu bệnh hại, tăng khả năng kháng bệnh của cây trồng mà không làm ảnh hưởng đến môi trường như các loại thuốc bảo vệ thực vật có nguồn gốc hóa học Tác dụng của CPSH đến từ từ không nhanh như các loại hóa chất nhưng tác dụng dài lâu

- Có khả năng phân hủy, chuyển hóa các phế thải sinh học, phế thải nông nghiệp, phế thải công nghiệp, góp phần làm sạch môi trường

Các CPSH dùng trong nông nghiệp có thể được chia thành 4 nhóm như sau:

• Nhóm CPSH dùng trong phòng trừ dịch hại cây trồng

Đây là thuốc bảo vệ thực vật nguồn gốc sinh học có thể tiêu diệt hoặc phòng trừ dịch hại Dịch hại là các sinh vật, VSV, các loại sâu hại, các loài gặm nhấm có khả năng gây hại cho các loài cây trồng

• Nhóm CPSH dùng trong sản xuất phân bón hữu cơ sinh học, phân bón vi sinh

Phân hữu cơ sinh học là sản phẩm được tạo ra qua quá trình lên men vi sinh các hợp chất hữu cơ có nguồn gốc khác nhau và chuyển hóa thành mùn; không có yêu cầu chủng vi sinh phải đạt số lượng là bao nhiêu

Phân hữu cơ vi sinh là loại phân bón được sản xuất từ nguyên liệu hữu cơ, có chứa ít nhất một chủng VSV có ích phù hợp với hàm lượng cao (≥1x106

CFU/g) Phân vi sinh là loại phân có chứa hàm lượng VSV có ích cao (≥1x108

CFU/g), thường không có hàm lượng chất dinh dưỡng kèm theo Phân vi sinh được sản xuất

và bón vào đất nhằm tăng lượng VSV có ích cho cây trồng, đặc biệt đối với VSV

cố định đạm

• Nhóm CPSH dùng trong cải tạo đất, xử lý phế thải nông nghiệp

Là các loại chế phẩm có nguồn gốc sinh học được đưa vào đất để cải tạo lý, hóa tính của đất (kết cấu, độ ẩm, hàm lượng hữu cơ, khả năng giữ nước, pH… của đất), hoặc xử lý đất khỏi những yếu tố bất lợi (kim loại nặng, VSV, hóa chất độc hại …) làm cho đất trở nên tốt hơn

• Nhóm điều hòa sinh trưởng cây trồng (hoocmon tăng trưởng)

Ở Việt Nam, hoocmon tăng trưởng thực vật được xếp vào danh mục thuốc bảo

vệ thực vật, chia thành 2 nhóm nhỏ:

- Nhóm các chất kích thích sinh trưởng: các chất có tác dụng kích thích sự sinh trưởng và phát triển của cây Hàm lượng các chất này được quy định chặt chẽ

- Nhóm các chất ức chế sinh trưởng: các chất có tác dụng kìm hãm, ức chế sinh trưởng và phát triển của cây như gây lùn, nhanh chín, gây rụng lá…

1.1.3 Đặc điểm của chế phẩm vi sinh

Hiện nay, CPVS được sản xuất theo nhiều hướng khác nhau, nhiều dạng khác nhau Điều này, phụ thuộc vào điều kiện kinh tế xã hội, khoa học công nghệ, trình

độ dân trí, điều kiện tự nhiên của mỗi nước nhưng đều theo hướng tiện cho người

sử dụng và cho hiệu quả kinh tế cao nhất [24, 37]

1.1.3.1 Chế phẩm sinh học từ vi khuẩn

• Chế phẩm nhân nuôi trên môi trường thạch hoặc trên cơ chất gelatin

Chế phẩm này được sản xuất trong phòng thí nghiệm lớn, dùng môi trường dinh dưỡng của Fred (1932) Chế phẩm sau khi xuất xưởng thường được đựng trong các chai lọ thủy tinh Loại chế phẩm này có ưu điểm là khuẩn lạc VSV thường nhìn thấy được, do đó có thể loại bỏ được ngay tạp khuẩn bằng một số hóa chất có sẵn trong phòng thí nghiệm mà không cần phải chuẩn bị các nguyên liệu đắt tiền

Tuy nhiên, loại chế phẩm vi khuẩn này có các hạn chế: số lượng VSV chuyên tính ít, thời gian bảo quản và sử dụng ngắn, chuyên chở vận chuyển xuống cơ sở sản xuất không tiện do đựng trong chai lọ thủy tinh dễ vỡ Mặt khác, theo Vincent (1970), loại chế phẩm này có độ bám dính trên hạt giống không cao [24, 47]

tiện lợi ở chỗ không cần phải pha hoặc trộn với nước mà có thể trộn luôn vào hạt

giống Cũng có thể ly tâm dịch VK để cô đặc sinh khối nên hạ giá thành sản xuất Tuy nhiên loại chế phẩm dạng lỏng này có những hạn chế: khi nhiễm vào hạt giống độ sống sót và độ bám dính của VK trên hạt giống không cao Chế phẩm luôn phải bảo quản ở trong điều kiện lạnh nên khá tốn kém và không thuận tiện cho vận chuyển; chi phí sản xuất tương đối cao vì dụng cụ chứa đựng đắt tiền Gần đây, một số cơ quan nghiên cứu (Niftal- Hoa Kỳ, Thái Lan, Ấn Độ ) đã nghiên cứu thành công công nghệ sản xuất chế phẩm VK dạng lỏng, trong đó quá trình nhân sinh khối VK gắn liền với việc xử lý sao cho mật độ VK sau lên men luôn đáp ứng yêu cầu của tiêu chuẩn quy định, nghĩa là đạt mức từ hàng trăm triệu đến hàng tỷ

Loại CPVK dạng khô có ưu điểm là cất trữ, vận chuyển rất tiện lợi, dễ dàng, chế phẩm không bị nhiễm tạp, sử dụng trong thời gian dài (> 1 năm) Tuy nhiên, công nghệ sản xuất loại CPVS vật này phức tạp, tốn kém, do đó hiệu quả kinh tế không cao [24]

• Chế phẩm vi khuẩn dạng đông khô

Để sản xuất loại chế phẩm này: sau khi lên men, sinh khối VK được đông khô lại ở nhiệt độ rất thấp (-20o

C đến -40o

C)

Theo đó, chế phẩm có nhiều ưu điểm như ít bị nhiễm tạp ngay cả khi ở nhiệt

độ rất cao, độ sống sót của VK chuyên tính rất cao Tuy vậy, chế phẩm dạng này cũng có hạn chế: tỷ lệ bám dính và độ sống sót của VK trên hạt thấp (Vincent, 1970), sản xuất rất công phu và tốn kém [21, 24, 47]

• Chế phẩm vi khuẩn dạng bột

Hiện nay, hầu hết các nước trên thế giới đều sản xuất loại CPVK trên nền chất mang, trong đó sinh khối VK được tẩm nhiễm vào chất mang là các hợp chất hữu

cơ hoặc không hữu cơ tự nhiên hoặc tổng hợp có tác dụng làm nơi trú ngụ và bảo

vệ VK chuyên tính trong chế phẩm từ khi sản xuất đến lúc sử dụng Chất mang cần

có các đặc điểm sau:

- Khả năng hút nước cao: 150-200%;

- Hàm lượng cacbon hữu cơ cao, tốt nhất > 60%;

- Không chứa các chất độc hại đối với VK tuyển chọn,với đất và cây trồng;

- Hàm lượng muối khóang không vượt quá 1%;

- Kích thước hạt phù hợp với đối tượng sử dụng

Loại chất mang thường được sử dụng nhiều nhất là than bùn Ngoài ra có thể

sử dụng đất sét, vermiculit, than đá, lignin, đất khóang, bã mía, lõi ngô nghiền, vỏ trấu, vỏ cà phê, bột polyacrylamid, phân ủ làm chất mang cho chế phẩm này [24] Tại Hà Lan, người ta người ta sử dụng chất mang từ than đá, than bùn trộn với thân thực vật nghiền nhỏ Ở Liên Xô cũ, người ta sử dụng chất mang là đất hữu cơ Tại một số nước Đông Nam Á, người ta sử dụng chất mang từ bột xenlulô, bột bã mía, lõi ngô, rác thải hữu cơ được nghiền nhỏ Ở Ân Độ, người ta dùng chất mang bằng bentonit trộn với bột cá Gần đây, ở Mỹ người ta sử dụng chất mang từ bột polyacrylamid [20, 21, 24, 47]

Ở Việt Nam, chất mang được sử dụng chủ yếu là than bùn Gần đây một số nhà khoa học đã nghiên cứu chế tạo chất mang từ rác thải hữu cơ, phế thải nông-

công nghiệp sau khi đã xử lý như rác thải sinh hoạt, mùn mía, bùn mía, cám trấu, mùn cưa [21, 24]

Loại chế phẩm trên nền chất mang có ưu điểm là: quy trình sản xuất đơn giản, dễ làm, không tốn kém nhiều dẫn đến giá thành hạ; nguyên liệu sẵn có trong

tự nhiên; mật độ VK chuyên tính trong chế phẩm cao, chuyên chở dễ, tiện sử dụng;

độ bám dính của VK trên đối tượng sử dụng cao Tuy nhiên, chế phẩm dạng chất mang bột cũng có những nhược điểm như: dễ bị tạp nhiễm bởi VK không chuyên tính, chất lượng không ổn định, độ sống sót của VK trong chế phẩm không cao; nếu không sử dụng kịp thời, thì chế phẩm có thể bị loại bỏ hàng loạt vì không đảm bảo mật độ VK chuyên tính [20, 21, 24, 25]

ẩm 40% [24] Để sản xuất chế phẩm nấm rễ nội cộng sinh (Endomycorhiza) người

ta phải nuôi hệ sợi và bào tử nấm trong hệ rễ cây chủ, nghĩa là nhiễm nấm vào đất trồng cây chủ có hệ rễ phát triển như ngô, hay cỏ ba lá, thu hoạch hệ rễ cây chủ cùng đất trồng và sử dụng chúng như một loại chế phẩm Sản phẩm dạng này phải được bảo quản trong điều kiện lạnh cho tới khi sử dụng Ưu điểm của sản phẩm là

dễ làm, ít tốn kém, song không bảo quản được lâu, có nguy cơ tạp nhiễm cao và hiệu lực không ổn định

1.1.3.3 Chế phẩm sinh học từ virus

• Chế phẩm dạng lỏng

Sinh khối virus trong cơ thể ký chủ được thu hồi bằng cách giết ký chủ, nghiền nhỏ, ly tâm loại cặn bã và bổ sung các chất phụ gia (chất chống thối, chất bám dính ), đóng chai và đưa đi sử dụng Sản phẩm loại này dễ làm, song thời gian sử dụng ngắn, dễ tạp nhiễm

• Chế phẩm dạng bột khô

Sau khi bổ sung chất phụ gia như chế phẩm dạng lỏng, dịch virus được làm khô cùng với chất mang rồi đóng gói và mang đi sử dụng Chế phẩm virus dạng bột

có thể bảo quản được lâu hơn chế phẩm dạng lỏng [24]

Nhìn chung, các CPVS nói trên đều có vai trò quan trọng trong sản xuất nông nghiệp Nhờ việc bổ sung các loài VSV có ích nên CPVS góp phần tăng năng suất, chất lượng nông sản; phòng chống sâu bệnh hại; tăng độ phì nhiêu cho đất và góp

phần giảm thiểu ô nhiễm môi trường Vì vậy, việc sử dụng CPSH trong nông

nghiệp có chứa VSV cần được quan tâm và khuyến khích vì phù hợp với xu hướng

nền sản xuất nông nghiệp bền vững gắn với bảo vệ sức khỏe của con người [47]

1.1.4 Cá c phương pháp sử dụng CPVS trong trồng trọt và bảo vệ thực vật

Tùy theo mục đích, đối tượng sử dụng và đặc điểm của từng loại chế phẩm mà phương pháp sử dụng khác nhau Đối với các CPVS vật phục vụ trong trồng trọt và bảo vệ thực vật thường sử dụng các phương pháp sau:

• Phương pháp nhiễm vào hạt giống

Ở một số nước có nền nông nghiệp phát triển, CPVS làm phân bón hoặc

phòng bệnh hại được nhiễm trực tiếp vào hạt thông qua quá trình xử lý hạt giống ở quy mô công nghiệp Ở Việt Nam, CPVS được hoà vào nước sạch tạo thành dung dịch, sau đó trộn đều với hạt giống trước khi gieo Để tăng độ bám dính của VSV vào bề mặt hạt giống, có thể bổ sung các chất keo vào dung dịch trước khi trộn với hạt giống; hoặc trộn hỗn hợp gồm hạt giống + vi sinh + bột mịn (từ đất, phân chuồng hoai mục, bột đá vôi ) để tạo ra lớp vỏ bọc kín hạt giống Công việc trộn có thể thực hiện ngay tại ngoài đồng, chỗ râm mát, tránh ánh nắng trực tiếp Trộn xong đem gieo ngay trong thời gian ngắn nhất

Phương pháp nhiễm trực tiếp vào hạt giống cho hiệu quả cao nhất, nhưng đòi hỏi kỹ thuật cao để tránh làm hạt giống bị sây sát và mất sức nảy mầm Đối với hạt giống đã được xử lý thuốc trừ sâu, diệt nấm bằng hóa chất không nên sử dụng phương pháp này vì hóa chất độc hại sẽ tiêu diệt VSV chuyên tính

• Phương pháp hồ rễ cây

Ngâm rễ cây còn non vào dung dịch CPVS (nếu chế phẩm dạng chất mang, thì phải hoà vào nước sạch) trong thời gian 6 - 24 giờ tuỳ loại chế phẩm và loại cây trồng Cần tiến hành ở nơi râm mát, tránh ánh nắng trực tiếp Chú ý: chỉ ngâm bộ rễ vào chế phẩm để VSV hữu ích nhiễm vào rễ cây

Phương pháp này cho hiệu quả rất cao, nhưng mất nhiều thời gian và không tiện lợi cho người sử dụng Phương pháp này không áp dụng đối với các loại cây rễ cọc, cây ăn quả

• Bón chế phẩm vi sinh vào đất

Theo phương pháp này có thể bón CPVS bằng nhiều cách[20][24]:

+ Trộn đều chế phẩm với đất nhỏ tơi, sau đó đem rắc đều vào luống trước khi gieo, trồng (nếu là ruộng cạn); hoặc rải đều ra mặt ruộng (nếu là ruộng nước) + Có thể đem chế phẩm ủ hoặc trộn với phân chuồng hoai, sau đó rải đều như bón phân

+ Trộn CPVS với đất hoặc với phân chuồng hoai, sau đó đem bón thúc sớm cho cây (càng bón sớm càng tốt)

• Phun, tưới CPVS lên cây hoặc vào đất

Dùng chế phẩm hoà vào nước sạch, tưới hoặc phun trực tiếp vào cây hay vào đất Đối với chế phẩm phân bón VSV cố định nitơ cộng sinh nên tưới phủ sớm ngay khi cây còn non vì vi khuẩn nốt sần cần xâm nhiễm vào rễ non để hình thành nốt sần Các CPVS bảo vệ thực vật được dùng chủ yếu bằng phương pháp này Tuy nhiên, khi sử dụng phương pháp tưới phun lượng chế phẩm cần phải lớn hơn so với các phương pháp khác[20, 24, 47]

có 9 xí nghiệp ở Châu Âu và 1 xí nghiệp ở Tân Tây Lan Từ đó nhiều công trình nghiên cứu được công bố Từ năm 1964, vấn đề cố định nitơ phân tử được coi là một trong hai vấn đề quan trọng nhất của chương trình sinh học quốc tế (IPB) Nhiều nhà khoa học đã ví: ”Mỗi nốt sần ở rễ cây họ Đậu là một nhà máy sản xuất phân đạm tí hon” Nhờ có chương trình trên, nhiều loại CPVS ra đời, được áp dụng trong nhiều lĩnh vực nông nghiệp như: CPVS đồng hóa nitơ phân tử, CPVS đa chức năng, CPVS dùng trong bảo vệ thực vật, CPVS xử lý ô nhiễm môi trường, vacxin phòng chống các loại bệnh cho người, gia súc gia cầm,

Chế phẩm vi khuẩn dạng đông khô được sản xuất từ những năm 1940 - 1960

ở Mỹ, Úc, Nga Năm 1955, Sở nghiên cứu khoa học Đông bắc Trung Quốc đã sản

xuất phân vi sinh chuyển hóa photpho bón cho lúa nước, lúa mì, khoai tây, đều thu

được năng suất cao hơn

Năm 1970 ở Liên Xô đã dùng Bacillus megatheriumvar phosphatcum để

sản xuất chế phẩm Photphobacterin Chế phẩm này được sử dụng rộng rãi ở Liên

Xô và các nước Đông Âu dùng bón cho lúa mì, ngô, lúa nước Kết quả cho thấy sản lượng tăng từ 5-10% so với đối chứng Cùng năm này, Liên Xô xử lý 10% diện tích trồng đậu Ở Mỹ, từ năm 1968 xử lý hơn 70% diện tích trồng đậu bằng CPVS vật

cố định đạm

Năm 1984, ở Mỹ người ta đã tính là trong khoảng 15 triệu đôla cho sản xuất chế phẩm phân vi sinh cố định đạm thì CPVS cho đậu tương chiếm 70%

1.1.5.2 T ại Việt Nam

Ở Việt Nam, nghiên cứu về CPSH được tiến hành từ những năm đầu của thập

kỷ 60, đến sau những năm 80 mới được đưa vào các chương trình khoa học cấp Nhà nước như: ”Sinh học phục vụ nông nghiệp” giai đoạn năm 1982-1900; chương trình ”Công nghệ sinh học” KC.08 giai đoạn 1991-1995; chương trình công nghệ sinh học phục vụ phát triển nông, lâm nghiệp bền vững, bảo vệ môi trường và sức khỏe con người” KHCN.02 giai đoạn 1996-2000 và chương trình ”Nghiên cứu khoa học và phát triển công nghệ sinh học” giai đoạn sau năm 2001 Ngoài ra, các chương trình quốc gia của nhiều bộ, ngành cũng triển khai nhiều đề tài, dự án về vấn đề này

Hiện nay, sự phát triển của nền nông nghiệp nước ta đang đi vào mức độ thâm canh cao với việc sử dụng ngày càng nhiều phân bón hóa học, thuốc bảo vệ thực vật hóa học và hàng loạt các biện pháp như trồng lúa 3 vụ, phá rừng canh tác cà phê, hồ tiêu, điều… với mục đích khai thác, chạy theo năng suất và sản lượng Sự canh tác trên đã làm cho đất ngày càng thóai hóa, dinh dưỡng bị mất cân đối, mất cân bằng hệ sinh thái trong đất, hệ VSV trong đất bị phá hủy, tồn dư các chất độc hại trong đất ngày càng cao, nguồn bệnh tích lũy trong đất càng nhiều dẫn đến phát sinh một số dịch hại không thể dự báo trước

Chính vì vậy, xu hướng quay trở lại nền nông nghiệp hữu cơ với việc tăng cường sử dụng CPSH, phân bón hữu cơ trong canh tác cây trồng đang là xu hướng chung của Việt Nam nói riêng và thế giới nói chung [25]

Theo thông tin từ Bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn, năm 2009, có 344 sản phẩm được đăng ký vào danh mục các loại thuốc bảo vệ thực vật có nguồn gốc

sinh học, trong đó có 221 sản phẩm thuốc trừ sâu và 66 sản phẩm thuốc trừ sinh vật gây hại như ốc, chuột, mối… Số lượng thuốc bảo vệ thực vật có nguồn gốc sinh học được đăng ký gia tăng rất nhanh: năm 2000 chỉ có 2 sản phẩm, nay đã gấp hơn

150 lần Tuy vậy, theo tiết lộ của các nhà kinh doanh thuốc bảo vệ thực vật, dù số lượng các thuốc bảo vệ thực vật sinh học tăng nhanh nhưng doanh số chỉ dưới 5% tổng doanh số thuốc bảo vệ thực vật Nghĩa là hiện nay dù thuốc bảo vệ thực vật sinh học tốt, an toàn môi trường nhưng người nông dân còn ít sử dụng

Hiện nay, CPSH dùng cho sản xuất phân bón hữu cơ sinh học, phân bón vi sinh rất đa dạng về chủng loại và số lượng Theo Cục Trồng trọt, tính đến tháng 8/2012, Việt Nam đã có 1.694 loại phân hữu cơ Tuy nhiên chỉ có một số ít sản phẩm có chất lượng và uy tín, còn lại chất lượng không đảm bảo Điều này đã làm giảm lòng tin của nhà nông vào loại sản phẩm này, làm thiệt thòi cho người sản xuất CPSH nghiêm túc, ảnh hưởng đến xu hướng khuyến khích sử dụng CPSH, nhất là việc dùng phân bón hữu cơ cho cây trồng [48]

Tiềm năng sử dụng các CPSH trong nông nghiệp rất lớn, là hướng đi đúng đắn, hướng tới nền nông nghiệp hữu cơ, sinh thái bền vững và thân thiện với môi trường Dù là một nước nông nghiệp nhưng việc sử dụng CPSH ở Việt Nam hiện nay còn nhiều hạn chế

1.2 Chế phẩm Bio BL và Bioplant Flora

1.2.1 Chế phẩm Bio BL

Chế phẩm Bio BL được tạo thành từ trùn quế tươi phối trộn với hỗn hợp VSV

có ích và một số enzyme lên men tạo mùi trùn, giàu đạm, giàu dinh dưỡng, vi khuẩn hữu ích, Các chủng VSV có ích khi được bổ sung vào đất sẽ có tác dụng cạnh tranh và đối kháng với VSV gây bệnh trong đất, phân giải chất hữu cơ, cố định đạm và hòa tan lân, cải thiện độ màu mỡ cho đất Chế phẩm có thể được bảo quản và lưu trữ trong thời gian dài từ 6-10 tháng

1.2.1.1 Thành phần VSV trong chế phẩm Bio BL

• Vi khuẩn Bacillus sp

Vi khuẩn Bacillus là nhóm vi khuẩn gram dương, có hình que, có chùm tiên mao giúp chúng di chuyển được Các tế bào của Bacillus có thể đứng riêng rẽ, liên

kết thành chuỗi hoặc thành sợi Chúng có khả năng hình thành nội bào tử có hình

oval hoặc hình cầu [33] Đa số Bacillus sinh trưởng ở pH=7.0, một số phù hợp với

pH=9-10 như B.Alcalophillus hay có loài phù hợp với pH=2-6 như

B.Acidocaldrius Một trong những đặc điểm hấp dẫn và lôi cuốn sự chú ý đến vi

khuẩn Bacillus trong lĩnh vực công nghệ sinh học là khả năng chịu nhiệt, chịu lạnh,

chịu axit, chịu kiềm của chúng

Bacillus là những vi khuẩn dị dưỡng hóa năng, thu năng lượng do oxy hóa

các hợp chất hữu cơ Một số vi khuẩn ưa nhiệt tự dưỡng không bắt buộc: (Bacillus

schlegelli) có khả năng phát triển trong môi trường chỉ có CO2 và CO là nguồn

cacbon duy nhất Một số loài Bacillus (Bacillus subtilis) có khả năng sử dụng các chất vô cơ, trong khi một số loài khác (Bacillus sphaericus, Bacillus cereus) cần các hợp chất hữu cơ (vitamin, axit amin) cho sự sinh trưởng Đặc biệt Bacillus gây bệnh côn trùng (Bacillus popilliae, Bacillus lentimorbus) có nhu cầu dinh dưỡng

phức tạp [33]

Phần lớn vi khuẩn Bacillus cư trú trong đất Một số sống hoại sinh, chúng tiết

ra những enzym thủy phân xenlulo, tinh bột, glucan, pectin và protein Đại đa số vi

khuẩn này thuộc nhóm Bacillus subtilis (Bacillus cereus, Bacillus licheniformis,

Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus subtilis) và nhóm Bacillus sphaericus Số lượng vi khuẩn Bacillus quyết định độ phì của đất Thông thường,

đất trồng trọt chứa khoảng 10- 100 triệu CFU/1g

• Vi khuẩn Azotobacter sp

Năm 1901, nhà bác học Beyjeirink đã phân lập được từ đất một loài VSV có

khả năng cố định nitơ phân tử cao, ông đặt tên là Azotobacter [19]

Azotobacter là loại vi khuẩn hiếu khí không sinh bào tử, có khả năng cố định

nitơ phân tử, sống tự do trong đất Khi nuôi cấy Azotobacter trong môi trường nhân

tạo, chúng biểu hiện đặc tính đa hình: khi còn non có dạng trực khuẩn hình que, có

tiên mao, có khả năng di động; khi già, Azotobacter có khả năng di động, tế bào chuyển về dạng hình cầu, xung quanh được bao bởi lớp nhầy Một số Azotobacter

có khả năng hình thành nang xác vỡ, tế bào lại sinh trưởng, phát triển Nang xác là

một hình thức tồn tại của Azotobacter, nó không phải là bào tử Một nang xác có thể bao bọc một số tế bào bên trong Khuẩn lạc của Azotobacter lúc còn non có

màu trắng đục Khi già chuyển thành màu lục hoặc màu nâu

Azotobacter thích hợp nhất với pH từ 7,2 – 8,2 Song chúng có thể phát triển được ở pH từ 4,5 – 9,0 Chúng thích hợp ở nhiệt độ từ 25-30o

C

Vi khuẩn Azotobacter thích ứng ở pH 7,2 – 8,2, ở nhiệt độ 28 – 30oC, độ ẩm

40-60% Azotobacter đồng hóa tốt các loại đường đơn và đường kép

Azotobacter có khả năng phân hóa nhiều loại đường khác nhau, nhất là các sản phẩm phân giải xenlulozơ Bởi vậy, đất có bón phân xanh, rơm rạ, rác rưởi rất

tốt cho sự phát triển của Azotobacter Ngoài ra, Azotobacter còn có khả năng tiết ra

một số vitamin thuộc nhóm B như B1, B6…, một số acid hữu cơ như: acid nicotinic, acid pentotenic, biotin, auxin Các loại chất kháng sinh thuộc nhóm anixomyxin [19] Xử lý vi khuẩn Azotobacter cho hạt giống trước khi gieo sẽ làm

tăng hoạt lực các enzym ascocbinoxydaza, peroxydaza, catalaza và thể hiện mạnh

nhất trong thời kỳ sinh trưởng đầu tiên của cây Bón Azotobacter cho đất đã làm

tăng hoạt lực polyphenoloxydaza trong cây Những loại emzym này là chỉ tiêu quan trọng đánh giá cường độ oxy hóa khử của cây, liên quan trực tiếp đến tính

chống chịu của cây đối với nhiều loại nấm bệnh (Fusarium, Alternaria)

• Vi khuẩn Pseudomonas sp

Chi vi khuẩn Pseudomonas có hơn 140 loài, phần lớn thuộc nhóm hoại sinh

Vi khuẩn Pseudomonas thường là vi khuẩn Gram (–), hình que, có chiên mao ở cực

nên có khả năng di chuyển tốt trong nước, không có khả năng tạo bào tử

Pseudomonas là vi khuẩn sống tự do, chúng hiện diện ở khắp mọi nơi như trong đất, nước không khí, động vật, thực vật, một số làm hư hỏng thực phẩm Chúng có khả năng hô hấp hiếu khí hay kị khí, nhiệt độ thích hợp để chúng phát triển là 30-

37oC Tuy nhiên, một số chủng Pseudomonas lại có thể sống tốt ở 40o

C

Pseudomonas có thể được nuôi trong môi trường đơn giản và pH trung tính Một vài chủng có thể tạo huỳnh quang dưới ánh sáng có bước sóng 254nm

Một số chủng Pseudomonas có ảnh hưởng quan trọng đến sinh trưởng và phát

triển của thực vật Chúng tổng hợp chất kích thích tố sinh trưởng ở thực vật như auxin, cytokinin, kích thích sự phát triển của bộ rễ cây làm gia tăng khả năng hấp

thu chất dinh dưỡng ở trong đất ở một số loài: Pseudomonas putida, Pseudomonas

flourescens, Pseudomonas syringae Một số loài Pseudomonas có thể hoà tan lân khó tan thành lân dễ tan giúp cây trồng dễ hấp thụ như Pseudomonas chlorophis,

Pseudomonas putida, Pseudomonas flourescens, hay kháng một số VSV gây hại

cho cây trồng Đặc biệt một số loài Pseudomonas còn có khả năng cố định nitơ trong không khí như Pseudomonas stutzeri [21]

1.2.1.2 Thành phần chất dinh dưỡng

Ngoài thành phần VSV, chế phẩm Bio BL còn bổ sung thêm các chất dinh

dưỡng như đạm, kali và photpho với hàm lượng như sau: đạm 25%, kali 88 %,

photpho 0,14%

• Đạm (N)

Đạm là chất dinh dưỡng có vai trò rất quan trọng đối với cây trồng Hàm lượng đạm trong đất rất ít vì vậy cây trồng thường thiếu đạm Đạm amin là tổng lượng đạm dưới dạng acid amin

Đạm giữ vai trò quan trọng đối với việc hình thành bộ rễ, thúc đẩy nhanh quá trình đẻ nhánh, nảy chồi và cần thiết cho sự sinh trưởng và phát triển thân lá Thiếu đạm cây sinh trưởng còi cọc, trên lá già xuất hiện màu xanh lợt đến vàng nhạt, bắt đầu từ chóp lá, tiếp đó bị chết hoặc rụng tùy mức độ thiếu Tùy theo mức độ thiếu đạm mà năng suất giảm nhiều hay ít Trong trường hợp có triệu chứng thiếu đạm thì chỉ cần bổ sung phân đạm là cây sinh trưởng và phát triển bình thường Nếu

thừa đạm cây thường có màu xanh xẫm, lá nhiều nhưng số rễ hạn chế, phát triển kém

• Kali (K2 O)

Kali là một trong những nguyên tố cần thiết nhất trong dinh dưỡng khóang thực vật Kali giúp cây quang hợp tốt hơn, thúc đẩy hình thành lignin, xellulo làm cây cứng cáp, chống chịu tốt hơn với sâu bệnh hại Tăng tỷ lệ hạt chắc, hạn chế rụng quả, tăng độ lớn của quả, củ, tăng năng suất, độ ngọt và chất lượng nông sản Thiếu kali cây bị úa vàng dọc mép lá, chóp lá chuyển màu nâu, các triệu chứng lan dần vào phía trong, từ chóp lá trở xuống Cây phát triển chậm, còi cọc, thân yếu dễ

bị đổ ngã khi không cung cấp đầy đủ yếu tố này [15, 29]

• Lân (P2 O 5 )

Photpho là thành phần cấu tạo của của axit nucleic, adenozinphotphat, các polyphotphat, hợp chất chứa năng lượng của tế bào sống (ADP, ATP) trong cây Photpho còn tham gia vào các quá trình tổng hợp hydratcacbon, protein và lipit Photpho tác dụng mạnh khi cây rau còn nhỏ, kích thích sinh trưởng của rễ bằng việc tăng cường quá trình tổng hợp nên nhiều hợp chất hữu cơ quan trọng, tăng cường quá trình hút nước, tăng cường sự phát dục làm cây ra hoa kết trái sớm Photpho cấu tạo nên nhiều hợp chất quan trọng và giúp tăng tính chịu lạnh của cây trồng [12, 15, 29]

Thiếu photpho, lá thường có màu xanh tối, quả hạt lâu già, lâu chín.Thời kỳ đầu có màu tím do trong lá hình thành nhiều sắc tố antoxian, đôi khi có màu đồng xỉn, màu nâu, hệ thống rễ phân nhánh kém, cây sinh trưởng chậm, thời gian kéo dài cây bị chết, năng suất và phẩm chất rau giảm Trong đất lân ít ở dạng dễ tiêu cho cây do bị kìm giữ và ít di động, nên bón gần rễ Dạng phân lân sử dụng tốt nhất cho rau là lân super vì nó dễ tiêu, hàm lượng lân cao [12]

1.2.1.3 Cách sử dụng chế phẩm Bio BL

Chế phẩm Bio BL được sử dụng cho cây trà ô long, cây cảnh, và các loại cây hoa màu

Lưu ý: Nên phun vào sáng sớm hoặc trời mát, tránh trời mưa

• Bảo quản: Để nơi khô ráo, thóang mát, tránh ánh nắng trực tiếp.Thời gian

bảoquản là 6 tháng

1.2.2 Chế phẩm Bioplant Flora

Bioplant Flora là chế phẩm có xuất xứ từ Liên bang Nga Chế phẩm Bioplant Flora được các nhà khoa học hàng đầu của Nga đánh giá là “cuộc cánh mạng trong nông nghiệp” và sử dụng tại nhiều nước trên thế giới Đây là sản phẩm an toàn sinh thái, được sản xuất từ nền hữu cơ, bổ sung các nguyên tố vi lượng và hoạt chất sinh học bằng công nghệ hiện đại để thu được các tổ hợp nano khóang hữu cơ Sản phẩm đã được khảo nghiệm tại Việt Nam và được Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn (Cục trồng trọt) đưa vào danh mục sử dụng thông thường tại Quyết định

số 432/QĐ-TT-ĐPB, ngày 8/9/2011

Hình 1.3 Chế phẩm Bioplant Flora (Nguồn: Agriviet.com)

1.2.2.1 Hàm lượng chất dinh dưỡng trong chế phẩm Bioplant Flora

Chế phẩm Bioplant Flora dưới dạng dung dịch keo, phần tử có kích thước

40-100 nm siêu nhỏ Thành phần của chế phẩm Bioplant Flora bao gồm: N, P2O5,

K2O, Mg, Mn, Fe, Cu, Co , Zn , Mo

- Magiê (Mg): Mg là thành phần quan trọng của phân tử diệp lục nên nó quyết định hoạt động quang hợp của cây Đây cũng là chất hoạt hóa của nhiều enzym rất quan trọng đối với quá trình hô hấp và trao đổi chất của cây Mg rất cần đối với các cây ngắn ngày như lúa, ngô, đậu, khoai tây [28] Mg sẽ làm tăng hàm lượng tinh bột trong sản phẩm Thiếu Mg làm chậm quá trình ra hoa, cây thường bị vàng lá do thiếu diệp lục Triệu chứng điển hình là các gân lá còn xanh trong khi phần thịt lá đã biến vàng, xuất hiện các mô hoại tử thường từ các lá phía dưới, lá trưởng thành lên lá non Vì Mg là nguyên tố linh động nên cây có thể dùng lại từ các lá già [3, 28, 36]

- Đồng (Cu): Đồng cần thiết cho sự hình thành diệp lục và làm xúc tác cho một số phản ứng khác trong cây Những cây họ hòa thảo thiếu Cu có thể không trổ hoa hoặc không hình thành được hạt Khi thiếu Cu, lá thiếu sức trương, rũ xuống, màu xanh chuyển sang quầng màu da trời tối trước khi trở nên bạc lá, biến cong và cây không ra hoa được

- Sắt (Fe): Fe là chất xúc tác để hình thành nên diệp lục và hoạt động như một chất mang oxy Thiếu Fe, gây ra hiện tượng bạc lá Vì Fe không được vận chuyển giữa các bộ phận trong cây nên biểu hiện thiếu Fe trước tiên xuất hiện ở các

lá non gần đỉnh sinh trưởng của cây Thiếu Fe nặng có thể chuyển toàn bộ cây thành màu vàng tới trắng nhạt Sự thiếu Fe có thể xảy ra do sự thiếu cân bằng với các kim loại khác như Mo, Cu hay Mn Một số yếu tố khác cũng có thể gây thiếu

Fe như quá thừa Lân trong đất; do pH cao kết hợp với đất giàu Ca; thiếu do hàm

lượng chất hữu cơ trong đất thấp,… [29]

- Mangan (Mn): Mn là thành phần của các hệ thống men (enzyme) trong cây

Mn hoạt hóa một số phản ứng trao đổi chất quan trọng trong cây và có vai trò trực tiếp trong quang hợp (tổng hợp diệp lục) Mn tăng cường sự chín và sự nẩy mầm

của hạt Cũng như Fe, Mn không được tái sử dụng trong cây nên hiện tượng thiếu

sẽ bắt đầu từ những lá non Khi thiếu Mn, giữa gân lá có màu vàng, đôi khi xuất hiện nhiều đốm nâu đen Ở những cây họ hòa thảo khi thiếu Mn thường xuất hiện những vùng màu xám ở gần cuống lá non Hiện tượng thiếu Mn thường xảy ra rõ nét khi gặp điều kiện thời tiết lạnh, hoặc trên đất giàu chất hữu cơ, đất ngập úng Triệu chứng sẽ mất đi khi thời tiết ấm trở lại và đất khô ráo [3, 29]

- Molipden (Mo): Mo cần cho sự tổng hợp và hoạt động của men khử Nitrat Loại men này khử Nitrat thành NH3 trong cây Mo cần thiết cho việc chuyển hóa lân từ dạng vô cơ sang hữu cơ trong cây Khi thiếu Mo, cây có biểu hiện chung như vàng lá và đình trệ sinh tưởng Sự thiếu hụt Mo có thể gây ra triệu chứng thiếu đạm bởi vì vi sinh vật đất cần có Mo để cố định nitơ từ không khí Mo trở nên hữu dụng nhiều khi pH tăng, điều đó ngược lại với đa số vi lượng khác Chính vì điều này nên hiện tượng thiếu thường xảy ra ở đất chua Đất nhẹ thường dễ bị thiếu Mo hơn

- Coban (Co): Co là nguyên tố rất cần thiết cho quá trình cố định đạm của cây Thiếu Co, quá trình cố định đạm bị ngưng trệ Khi bón lượng đạm thấp, cây trồng có nhu cầu cao về Co Co có mặt trong men cobamide coenzyme cần thiết cho các phản ứng oxy hóa khử và trao đổi chất trong cây Khi thiếu Co, cây còi cọc, chậm phát triển, lá chuyển vàng đặc biệt là các lá non,… [29]

Cách bón: Sau 10 ngày gieo tiến hành phun chế phẩm Bioplant Flora , phun lặp lại sau 15 ngày Liều lượng: pha 1lít Bioplant Flora/500lít nước/1ha/1 lần

1.3 Giới thiệu về cây cải ngọt (Brassica integrifolia Willd. )

1.3.1 Vị trí phân loại

Cải ngọt thuộc bộ màn màn Bộ gồm những cây nhỏ, hoặc thân cây cỏ Bộ này xuất phát từ nhưng đại diện nguyên thủy của bộ hoa tím (Họ mùng quân) Nó không chỉ gần gũi với bộ hoa tím về cấu tạo bộ nhụy, mà còn ở nhiều dấu hiệu khác như tuyến mật cũng từ đế hoa phát triển lên, noãn cấu tạo giống nhau Bộ gồm 5

họ, ở nước ta gặp đại diện của 3 họ, trong đó hay gặp là họ thập tự (họ cải) [40]

Họ thập tự (Brassicaceae): Cây thân cỏ, sống hằng năm, rất hiếm khi là cây

nửa bụi hoặc cây bụi Lá đơn, mọc cách, không có lá kèm Hoa tập hợp thành cụm hoa chùm đơn hay chùm kép, hoặc hình ngù, không có lá bắc Hoa thường nhỏ, đều, mẫu 2, đài 4 mảnh, xếp thành 2 vòng chéo chữ thập Qủa thuộc loại quả cải (quả do hai noãn dính với nhau thành bầu 1 ô, nhưng bị ngăn đôi thành 1 vách giả, làm thành cái khung mang hạt Khi chín mở bởi 4 kẻ nứt dọc theo 2 khung bên này

để tách thành 2 mảnh vỏ loại quả này đặc trưng cho các cây họ cải [9, 40]

Họ cải là một họ lớn với hơn 350 chi và khoảng 3000 loài phân bố chủ yếu ở Bắc bán cầu, đặc biệt ở vùng Địa Trung Hải và Trung Á Ở nước ta có 6 chi và độ

20 loài [40]

1.3.2 Đặc điểm sinh học của cây cải ngọt

Cải ngọt được nhận biết do màu lá xanh nhạt, hoa màu vàng, chiều cao cây từ 50-100cm, cây thảo, thân tròn, không lông, lá hình có phiến xoan ngược màu xanh nhạt hoặc xanh thẫm, đầu tròn hay tù, gốc từ từ hẹp, mép nguyên không nhăn, mập, gân 2 bên 5-6 đôi, cuống dài và tròn Chùm hoa như ngù ở ngọn, hoa vàng tươi, quả cài từ 4-11cm, có mỏ, hạt tròn Cây bắt đầu có hoa khi có từ 7-8 lá Rễ chùm sâu khoảng 12cm và bán kính khoảng 12cm Đường kính chum lá khoảng 15-45cm Cải ngọt được trồng quanh năm, vụ chính là vụ đông xuân, thời gian sinh trưởng từ 35-45 ngày [9]

Cải ngọt có khả năng chịu đựng cao với khí hậu nóng ẩm Trong mùa đông cải

ngọt sinh trưởng nhanh và cho năng suất cao Cải ngọt là cây cho khối lượng thân

lá lớn, tuy nhiên bộ rễ của cải ngọt nhỏ, ăn nông, cây sinh trưởng ngắn ngày do đó

rất cần nước và yêu cầu được giữ ẩm thường xuyên trong suốt quá trình sinh trưởng Cải ngọt yêu cầu đất có độ pH từ 5.5 – 6.5, đất giữ mùn và thóat nước nhanh Về các nguyên tố khóang cải ngọt cần đạm và kali hơn lân

1.3.3 Vai trò của cải ngọt Brassica integrifolia Willd trong thực phẩm

Theo Đông y, cải ngọt có tính ôn, có tác dụng thông lợi trường vị, làm đỡ tức ngực, tiêu thực hạ khí…có thể dùng để chữa các chứng ho, táo bón, ăn nhiều giúp cho việc phòng ngừa bệnh trĩ và ung thư ruột kếtvà cũng giúp chống suy nhược thần kinh, giảm đau nhức, phòng chống các bệnh tim mạch [45]

Ở Ấn Độ, hạt được dùng làm thuốc trị bệnh co thắt, chứng đau dây thần kinh

và đau khớp Dầu của hạt được dùng chườm đắp tại vị trí phát ban da và mụn nhọt

Ở Trung Quốc, hạt được dùng trị sốt cao, co giật, mất tiếng; toàn cây được dùng làm thuốc thanh nhiệt [45]

Ngồng cải và lá non được dùng làm salad, xào hoặc luộc trong các bữa ăn hàng ngày Cải ngọt rất giàu carotene (tiền vitamin A), canxi, chất xơ, ka li và đặc biệt là axit folic (1 ngồng cải ngọt có thể cung cấp khoảng 80 microgam folate) rất tốt cho phụ nữ mang thai [4]

Bảng 1.1 Thành phần dinh dưỡng trong cây cải ngọt

(Trích từ cuốn: "Bảng thành phần hóa học thức ăn Việt Nam, NXB Y học,1972)

1.3.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến năng suất, chất lượng của cây cải ngọt

- Nhiệt độ: Trong sản xuất rau, nhiệt độ là yếu tố hạn chế rất lớn đến sự sinh trưởng của cây rau Đây là yếu tố khó khống chế được Nhìn chung các nhóm cải

ưa thích khí hậu ôn hoà, mát mẻ Nhiệt độ thích hợp cho cải ngọt là 10 – 270

C Do phạm vi nhiệt độ rộng nên có thể trồng gần như quanh năm Cải trồng mùa nắng cho năng suất cao hơn mùa mưa nhưng phải tưới đủ nước [3, 13]

- Ánh sáng: Ánh sáng là yếu tố rất quang trọng và cần thiết cho rau Như chúng ta biết, 90-95% năng suất cây trồng là do quang hợp Chất lượng ánh sáng và cường đọ ánh sáng ảnh hưởng đến quang hợp, hô hấp, dinh dưỡng, khóang, do đó ảnh hưởng đến sinh trưởng và phát triển của cây Cải ngọt yêu cầu cường độ chiếu sáng và thời gian chiếu sáng vừa phải, có khả năng chịu bóng râm hơn các cây rau khác Do đó, việc bố trí mùa vụ cũng như sắp xếp các cây trồng xen, trồng gối tạo ánh sáng thích hợp để cây sinh trưởng tốt, tạo năng suất cao nhất [13]

- Nước: Hàm lượng nước trong rau rất lớn, chiếm từ 75-95%, các quá tình hoạt động trong cây đều có sự tham gia của nước Vì vậy có thể nói nước là nguyên nhân hạn chế lớn nhất đối với năng suất, chất lượng cây rau hơn bất kì yếu tố nào Rau cần rất nhiều nước và yêu cầu tưới nước đầy đủ trong quá trình sinh trưởng và phát triển Các giống cải xanh có hệ rễ cạn, lá nhiều và lớn vì vậy cần độ ẩm thường xuyên trong thời gian sinh trưởng Cải sau khi trồng cần tưới nước ngay, mỗi ngày 1 lần, mùa khô nên tưới phun 2 lần/ngày Nên tưới đủ nước và trực tiếp vào gốc cho đến khi cây bén rễ hồi xanh, để cây sinh trưởng phát triển tốt, sau đó chỉ tưới khi đất thiếu ẩm Độ ẩm đất từ 70 - 85% và độ ẩm không khí cao sẽ có lợi

cho sự sinh trưởng thân lá [2, 3, 13]

- Gió: Gió cũng là yếu tố gây trở ngại lớn đến rau Gió phá vỡ mô thực vật, rửa trôi dinh dưỡng, Sức gió mạnh không chỉ làm xói mòn đất mà còn làm cho đất

bị nhỏ vụn, làm giảm dinh dưỡng lớp đất mặt Tuy vậy, gió cũng có tác dụng tích cực với cây như: giảm độ ẩm không khí, điều hoà sự trao đổi CO2 dưới tán cây, tăng sự thóat hơi nước, giảm nhiệt độ, tăng độ thông thóang, [13]

- Dịch hại: Sâu bệnh và cỏ dại xuất hiện ở mọi lúc mọi nơi Chúng sinh sôi nảy nở ở những nơi có nhiều chất dinh dưỡng Những yếu tố thời tiết như sương, mưa bão, ngập lụt, và những sinh vật gây hại ảnh hưởng rất nhiều đến năng suất

và chất lượng của rau

- Chất dinh dưỡng: Trong quá trình sinh trưởng và phát triển, cây rau hấp thụ 70% N (đạm), 20% P (lân) và 80% K (kali) bón vào đất trong suốt vụ trồng Cải ngọt là loại rau có thời gian sinh trưởng ngắn, tốc độ sinh trưởng nhanh, hàm lượng dinh dưỡng phong phú vì vậy chúng cần nhiều loại chất dinh dưỡng trong quá trình sinh trưởng và phát triển Bên cạnh các nguyên tố đa lượng như N, P, K thì các nguyên tố vi lượng như Mo, Zn, Mn, cây trồng cần ít nhưng lại không thể thiếu [13, 29]

- pH: pH thích hợp cho cải ngọt là từ 5,5-6,5 Ở pH này cây hấp thụ N, P, K thuận lợi, vi sinh vật đất hoạt động tốt

Ngoài ra, trong quá trình sản xuất thâm canh cây rau, bên cạnh mức gia tăng

về số lượng, chủng loại giảm về chất lượng thì ngành trồng rau nước ta hiện nay đang bộc lộ nhiều mặt yếu kém như: việc sử dụng ồ ạt thuốc bảo vệ thực vật, phân hóa học, chưa ứng dụng triệt để các tiến bộ khoa học công nghệ nên đã gây ô nhiễm môi trường

Qua kết quả nghiên cứu của các chuyên gia trên lĩnh vực nông nghiệp, từ năm

1990 trở lại đây, cho thấy có các nguyên nhân gây mất an toàn trong sản xuất rau như sau: mất an toàn do bón quá nhiều phân đạm làm tăng hàm lượng Nitrat (NO-

3) trong rau, do dư lượng thuốc bảo vệ thực vật, kim loại nặng, vi sinh vật gây bệnh cho người và động vật Chính sự mất an toàn này đã làm giảm rất nhiều đến chất lượng của cây cải ngọt và sức khỏe con người

Ch ương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Vật liệu

2.1.1 Đối tượng nghiên cứu

- Chế phẩm Bio-BL của công ty trách nhiệm hữu hạn SINH HỌC PHƯƠNG NAM cung cấp

- Chế phẩm Bioplant Flora: sản phẩm nhập từ Liên bang Nga được sản xuất theo công nghệ nano có thể thay thế hoàn toàn phân hóa học và sử dụng cho nhiều loại cây trồng

- Hạt giống cải ngọt được cung cấp tại Công ty trách hữu hạn giống cây trồng Hoàng Ngân (45 Yết Kêu, huyện Châu Phú, tỉnh An Giang)

2.1.2 Hóa chất

Cao thịt, NaCl, pepton, Agar, MgCl2; K2SO4; Irgasan; K2HPO4; MgSO4; CaCl2; Na2MoO4; Glucose; nước cất,…

2.1.3 Thiết bị và dụng cụ

Bộ dụng cụ và hóa chất chuyên dùng trong thí nghiệm vi sinh Ngoài ra còn

có các thiết bị dùng trong các thí nghiệm sau: Nồi hấp cao áp ALP (Nhật Bản), tủ sấy Memmert (Đức), kính hiển vi quang học, máy chụp hình kỹ thuật số Olympus 5.1 (Nhật Bản), máy đo pH Pometer KL-009(II) (Trung Quốc), máy li tâm (Rotina, Đức), tủ cấy vô trùng Box laminer (Việt Nam), tủ lạnh (National- Nhật Bản), tủ giữ mẫu (Sanyo- Nhật Bản), máy lắc (Gerhardt- Đức), cân điện (Sartorius -Đức), cân 2

kg có độ chính xác 10 gam, thước dây, lưới che,

Dụng cụ thí nghiệm: que cấy (que cấy vòng, que cấy nhọn), bình tam giác, ống nghiệm, ống đong, đèn cồn, diêm quẹt, que trang, đĩa Petri, thước đo, giấy lọc, khăn lọc, bông mỡ, bông thấm nước, lame, lamel, đầu tipe các loại,…

2.1.4 Các môi trường nghiên cứu sử dụng

 Môi trường MPA: mục đích phân lập, nuôi cấy vi khuẩn Bacillus sp

Pepton: 5g Cao thịt: 5g

NaCl: 5g

Agar: 20g

Nước cất: 1000ml

 Môi trường Pseudomonas Isolation Agar (PIA): mục đích phân lập, nuôi

cấy vi khuẩn Pseudomonas sp

Pepton: 20g MgCl2: 1,4g K2SO4: 10g Irgasan: 0,025g Agar: 13,6g Nước cất: 1000ml

Na2MoO4: 0,001g Gluocose: 10g Agar: 20g Nước cất: 1000ml

2.2 Phương pháp nghiên cứu

2.2.1 Phương pháp phân lập vi khuẩn

Nguyên tắc: Làm giảm nồng độ VSV và tách rời các tế bào VSV Sau đó

nuôi cấy các chúng trên môi trường dinh dưỡng đặc trưng để tạo thành các khuẩn

lạc tách biệt nhau

Cách tiến hành:

+ Chế phẩm (1g hoặc 1ml) pha trộn với 9ml nước cất tạo được dịch pha loãng nồng độ 10-1

+ Hút 1 ml dung dịch nồng độ 10-1

cho vào ống nghiệm chứa 9ml nước cất vô trùng, ta được dịch pha loãng 10-2

+ Cứ tiếp tục pha loãng như thế được dịch pha loãng 10-3

, 10-4, 10-5, 10-6+ Từ mật độ pha loãng thích hợp, nhỏ 1 giọt vào đĩa petri có sẵn môi trường đặc trưng

+ Dùng que trang trải đều dung dịch khắp bề mặt thạch, tiếp tục sử dụng que trang đó trải tiếp 2 đĩa tiếp theo (mỗi nồng độ 3 đĩa)

+ Lật ngược đĩa petri, gói vào giấy báo, ủ ở nhiệt độ phòng trong 24 h

+ Chọn những khuẩn lạc riêng rẽ cấy vào ống thạch nghiêng

2.2.2 Ph ương pháp quan sát hình thái vi khuẩn

• Quan sát đại thể: quan sát màu sắc, bề mặt, mép, kích thước khuẩn lạc

• Quan sát vi thể: bằng phương pháp nhuộm Gram [14]

Nguyên tắc: Dựa trên khả năng bắt màu của tế bào chất và màng tế bào với

thuốc nhuộm tím kết tinh và iot Khi xử lý bằng cồn, VSV gram dương vẫn giữ nguyên màu của thuốc nhuộm, VSV gram âm không giữ được màu của thuốc nhuộm nên mất màu và bắt màu của thuốc nhuộm bổ sung

Cách tiến hành

- Chuẩn bị vết bôi: dùng que cấy vô trùng lấy một ít vi khuẩn từ thạch (sau khi

cấy 24 giờ) hòa vào 1 giọt nước cất ở giữa phiến kính, làm khô trong không khí

- Cố định tế bào: hơ nhanh vết bôi trên ngọn lửa đèn cồn 2-3 lần

- Nhuộm bằng dung dịch tím kết tinh trong 1 phút, rửa nước, thấm khô

- Nhuộm lại bằng dung dịch Iod trong 1 phút, rửa nước, thấm khô

- Nhỏ dịch tẩy màu, giữ khoảng 30 giây (cho đến khi vừa thấy mất màu), rửa

màu đỏ

2.2.3 P hương pháp xác định số lượng tế bào vi khuẩn

Bằng đếm số khuẩn lạc trên môi trường thạch

Nguyên tắc: mỗi khuẩn lạc được hình thành từ 1 tế bào Số khuẩn lạc chính là

số tế bào trong một đơn vị thể tích mẫu

Cách tiến hành [14, 26, 27]:

- Pha loãng mẫu để có độ pha loãng 10-1

, 10-2, 10-3,,10-4, 10-5

- Chuẩn bị môi trường đặc trưng và hấp khử trùng

- Đổ môi trường vào hộp petri vô khuẩn (mỗi hộp khoảng 20-30ml), để nguội Dùng pipet vô trùng hút 0,1ml dịch mẫu pha loãng cho lên bề mặt hộp petri Sau đó dùng que gạt vô trùng gạt đều khắp bề mặt thạch sao cho bề mặt thạch thật khô Các thao tác được thực hiện gần ngọn lửa đèn cồn trong tủ cấy để tránh nhiễm VSV Bao gói, lật úp đĩa petri, ủ ở nhiêt độ 300

C trong 2-3 ngày Chọn 3 nồng độ pha loãng liên tiếp, mỗi nồng độ cấy 3 hộp petri

Cách đếm: Khi kết thúc thời gian ủ, đếm số khuẩn lạc phát triển trên môi

trường thạch như sau:

- Lấy bút chì kẻ 2 đường vuông góc dưới đáy đĩa Petri và đánh dấu thứ tự từng vùng I, II, III, IV

- Đếm số khuẩn lạc từng vùng Nhớ đánh dấu các khuẩn lạc đã đếm

- Số lượng tế bào VSV trog 1ml mẫu được tính theo công thức sau đây:

Trong đó:

N: số tế bào VSV trong 1ml mẫu

n – số khuẩn lạc trung bình trong 1 đĩa Petri ở một độ pha loãng nhất định

v – thể tích dịch mẫu đem cấy (bằng 0,1ml đối với phương pháp cấy gạt và 1ml đối với phương pháp đổ đĩa

D – hệ số pha loãng

2.2.4 Bố trí thí nghiệm

- Xử lý giống: hạt giống ngâm trong nước từ 3-4 giờ, sau đó vớt ra ủ ẩm trong

1 đêm rồi đem gieo

- Mật độ gieo trồng: 15-20cm/cây; khoảng cách hàng 20cm, lượng giống là 300-500gr/1000m2

- Phải đảm bảo tưới nước đầy đủ, sau khi gieo tưới nước ngày 2 lần vào sáng sớm và chiều mát, sau đó 1 ngày tưới nước 1 lần

- Chuẩn bị đất: dọn cỏ, làm đất kỹ cho tơi nhỏ, phơi ải đất từ 8-10 ngày, bón 5-6kg vôi bột/100m2

luống cao 10cm, rãnh rộng 25 cm

+ Bón lót: 300kg phân chuồng hoai mục + 1,5kg super lân + 4kg Kali clorua /100m2

+ Bón thúc: sau 10 ngày tiến hành bón thúc cho các công thức thí nghiệm:

Chế phẩm vi sinh Bio BL: Pha 10 -20 g Bio BL vào 8 lít nước/100m2

phun đều hai mặt lá Từ 15-20 ngày/1 lần

Chế phẩm Bioplant Flora: pha 1lít Bioplant Flora/500lít nước/1ha/1 lần

CT5 CT4

CT3 CT2

CT4

CT5 CT3

25cm