khảo sát ảnh hưởng của ánh sáng lên hoạt động quang hợp và hô hấp của vi tảo skeletonema subsalsum (a cleve) bethge

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH  Trần Thị Vẻ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA ÁNH SÁNG LÊN HOẠT ĐỘNG QUANG HỢP VÀ HÔ HẤP CỦA VI TẢO SKELETONEMA SUBSALSUM (A.CLEVE) BETHGE LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC TP Hồ Chí Minh, 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH  Trần Thị Vẻ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA ÁNH SÁNG LÊN HOẠT ĐỘNG QUANG HỢP VÀ HÔ HẤP CỦA VI TẢO SKELETONEMA SUBSALSUM (A.CLEVE) BETHGE Luận văn thạc sĩ Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã ngành: 60.42.30 Người hướng dẫn khoa học: TS Lê Thị Trung TP Hồ Chí Minh, 2011 LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành luận văn này, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến:  Giảng viên hướng dẫn TS Lê Thị Trung Cô tận tâm dạy, truyền đạt kinh nghiệm quý báu thực hành thí nghiệm sống tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành luận văn  Các quý thầy cô giảng viên tận tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức khoa học, tư vấn hướng để tự tin bước vào trình nghiên cứu hoàn thành luận văn  Thầy Nguyễn Văn Thuận Ban Giám Hiệu, quý đồng nghiệp trường THPT Trịnh Hoài Đức, thị xã Thuận An, Bình Dương tạo điều kiện thuận lợi công tác để an tâm theo học hoàn thành tốt chương trình đào tạo sau đại học trường Đại Học Sư Phạm Thành Phố Hồ Chí Minh  Cô Phạm Thị Hiền Hoa, chuyên viên phòng Thông tin tư liệu, Thư viện trường Đại Học Sư Phạm, Thành Phố Hồ Chí Minh Cô tận tình hướng dẫn cách tìm kiếm cung cấp nguồn tài liệu tham khảo quý giá suốt trình học tập thực đề tài  ThS Nguyễn Tấn Đại, ThS Nguyễn Thị Kim Ánh góp ý, chia sẻ kinh nghiệm, cung cấp tài liệu quý phương pháp nghiên cứu phòng thí nghiệm  Anh Trương Trọng Chương, kĩ sư điện tử tư vấn thiết kế lắp đặt tủ nuôi vi tảo - khâu quan trọng để hoàn thành luận văn  CN Hồ Thị Mỹ Linh – phòng thí nghiệm Sinh lý thực vật Trường Đại học Sư Phạm Thành Phố Hồ Chí Minh, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian làm việc phòng  Các anh, chị, bạn học viên, em sinh viên làm luận văn phòng thí nghiệm Sinh lý thực vật Trường Đại học Sư Phạm Thành Phố Hồ Chí Minh giúp đỡ, động viên, chia sẻ trình thực đề tài  Tập thể lớp cao học khóa 20 học tập nghiên cứu, giúp đỡ lẫn nhau, chia sẻ kinh nghiệm quý báu để hoàn thành tốt công việc  Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc chân thành đến Cha, Mẹ, Em gia đình, theo sát, động viên, ủng hộ mặt, chỗ dựa vững để tự tin vững bước sống Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến Anh – nửa tôi, Anh quan tâm, chăm sóc, chia sẻ lúc khó khăn, giúp thêm nghị lực, niềm tin để bước tiếp chặng đường mai sau i Mục lục Chương T T T T T Sơ lược chi tảo Skeletonema 1.2 T T Sơ lược vi tảo biển 1.1 T TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 T T T 1.2.1 T T 1.2.2 T T 1.2.3 T T 1.2.4 T T 1.2.5 T T T Phân loại, đặc điểm sinh thái T T Hình thái T T Cấu tạo tế bào T T Đặc điểm sinh trưởng T T Các hình thức sinh sản T T 1.2.5.1 Sinh sản sinh dưỡng .10 T T T T 1.2.5.2 Sinh sản hữu tính 10 T T T Hoạt động quang hợp – hô hấp vi tảo 12 1.3 T T T T 1.3.1 T T T Quang hợp vi tảo 12 T T 1.3.1.1 Hệ quang hoá PS I 14 T T T T 1.3.1.2 Hệ quang hoá PS II 14 T T 1.3.2 T T T T Sắc tố quang hợp 17 T T 1.3.2.1 Chlorophyll 17 T T T T 1.3.2.2 Carotenoid 18 T T T T 1.3.2.3 Phycobilin 20 T T 1.3.3 T T T T Vai trò ánh sáng quang hợp .20 T T 1.3.3.1 Đặc tính ánh sáng 20 T T T T 1.3.3.2 Ánh sáng quang hợp .22 T T T T 1.3.3.3 Ảnh hưởng cường độ ánh sáng thấp cao 23 T T T T 1.3.3.4 Ảnh hưởng chất lượng ánh sáng đến quang hợp 26 T T Chương T T 2.1 T T 2.2 T T T T VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP 29 T T Vật liệu 29 T T Phương pháp 29 T T ii Định danh 29 2.2.1 T T T T 2.2.1.1 Định danh qua quan sát hình thái 29 T T T T 2.2.1.2 Định danh phương pháp sinh học phân tử 29 T T 2.2.2 T T T T T T 2.2.5 T T T T T T Đo cường độ quang hợp cường độ hô hấp vi tảo .34 2.2.8 T T T Khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên hoạt động vi tảo35 2.2.9 T T Đo hàm lượng diệp lục tố 33 2.2.7 T T Khảo sát mật độ khởi đầu thích hợp 32 2.2.6 T T Khảo sát chọn môi trường nuôi thích hợp 31 T T T Xác định hệ số pha loãng 31 2.2.4 T T Đếm số lượng tế bào 30 2.2.3 T T Quan sát hình thái tế bào .30 T T T T T T 2.2.10 Khảo sát ảnh hưởng ánh sáng đơn sắc cường độ 20 µmol photon.m-2.s-1 lên tăng trưởng vi tảo 36 T T T P P P P T 2.2.11 Khảo sát ảnh hưởng ánh sáng đơn sắc cường độ 50 µmol photon.m-2.s-1 lên tăng trưởng vi tảo 38 T T T P P P P T 2.2.12 Phân tích thống kê số liệu 39 T T Chương T T T KẾT QUẢ - THẢO LUẬN 40 T T Kết 40 3.1 T T T T 3.1.1 T T 3.1.2 T T T Định danh 40 T T Khảo sát chọn môi trường nuôi thích hợp 44 T T 3.1.2.1 Hình thái tế bào 44 T T T T 3.1.2.2 Đường cong tăng trưởng 47 T T 3.1.3 T T T T Khảo sát mật độ khởi đầu thích hợp 49 T T 3.1.3.1 Hình thái tế bào màu sắc dịch nuôi 50 T T T T 3.1.3.2 Đường cong tăng trưởng 57 T 3.1.4 T T T T T Ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên hoạt động vi tảo .59 T T 3.1.4.1 Màu sắc dịch nuôi 59 T T T T 3.1.4.2 Hình thái tế bào 60 T T T T 3.1.4.3 Đường cong tăng trưởng 64 T T T T iii 3.1.4.4 Cường độ quang hợp – cường độ hô hấp .66 T T T T 3.1.4.5 Hàm lượng diệp lục tố 69 T T 3.1.5 T T T T Ảnh hưởng ánh sáng đơn sắc cường độ 20 µmol photon.m-2.s-1 lên sinh trưởng S subsalsum (A.Cleve) Bethge 73 T P P P P T 3.1.5.1 Màu sắc dịch nuôi 73 T T T T 3.1.5.2 Hình thái tế bào 74 T T T T 3.1.5.3 Đường cong tăng trưởng 77 T T T T 3.1.5.4 Cường độ quang hợp – cường độ hô hấp .79 T T T T 3.1.5.5 Hàm lượng diệp lục tố 83 T T 3.1.6 T T T T Khảo sát ảnh hưởng ánh sáng đơn sắc cường độ 50 µmol photon.m-2.s-1 lên sinh trưởng S subsalsum (A.Cleve) Bethge .88 T P P P P T 3.1.6.1 Màu sắc dịch nuôi 88 T T T T 3.1.6.2 Hình thái tế bào 88 T T T T 3.1.6.3 Đường cong tăng trưởng 92 T T T T 3.1.6.4 Cường độ quang hợp – cường độ hô hấp .94 T T T T 3.1.6.5 Hàm lượng diệp lục tố 97 T T 3.2 T T T Thảo luận 100 T T 3.2.1 T T T Khảo sát môi trường nuôi thích hợp cho tăng trưởng Skeletonema subsalsum (A.Cleve) Bethge 100 T T 3.2.2 T T 3.2.3 T T Khảo sát mật độ khởi đầu thích hợp 101 T T Ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên tăng trưởng Skeletonema subsalsum (A.Cleve) Bethge 102 T T 3.2.5 T T Ảnh hưởng chất lượng ánh sáng cường độ 20 µmol photon.m-2.s-1 lên tăng trưởng Skeletonema subsalsum (A.Cleve) Bethge .104 T P P P P T 3.2.6 T T Ảnh hưởng chất lượng ánh sáng cường độ 50 µmol photon.m-2.s-1 lên tăng trưởng Skeletonema subsalsum (A.Cleve) Bethge .107 T P P P P T Chương T T 4.1 T T KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 109 T T Kết luận .109 T T iv 4.2 T T Đề nghị 110 T T Tài liệu tham khảo 111 Phụ lục Phụ lục Phụ lục Phụ lục Phụ lục Phụ lục Phụ lục v Danh mục ảnh Ảnh 2.1: Các ngăn tủ thí nghiệm gắn LED cho phổ ánh sáng đơn sắc khác TU T U .37 Ảnh 3.1: Hình thái chuỗi tế bào vi tảo kính hiển vi quang học (X40) 40 TU T U Ảnh 3.2: Chuỗi tế bào hình thành từ vị trí bị đứt chuỗi cũ 41 TU T U Ảnh 3.3: Chuỗi tế bào giảm hồi phục kích thước 41 TU T U Ảnh 3.4: Bào tử vi tảo kính hiển vi quang học (mũi tên) 42 TU T U Ảnh 3.5: Kết giải trình tự gen 18S ribosom Skeletonema sp 43 TU T U Ảnh 3.6: Kết giải trình tự gen 16S ribosom Skeletonema sp 43 TU T U Ảnh 3.7: Hình thái S subsalsum (A.Cleve) Bethge môi trường f/2 44 TU T U Ảnh 3.8: Hình thái S subsalsum (A.Cleve) Bethge môi trường Aquil* 45 TU T U Ảnh 3.9: Hình thái S subsalsum (A.Cleve) Bethge môi trường DAM từ ngày TU đến ngày 46 T U Ảnh 3.10: Hình thái S subsalsum (A.Cleve) Bethge môi trường ESAW .47 TU T U Ảnh 3.11: Hình thái tế bào S subsalsum (A.Cleve) Bethge mật độ khởi đầu TU 14.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .50 T U Ảnh 3.12: Màu sắc dịch nuôi S subsalsum (A.Cleve) Bethge với mật độ khởi đầu TU 14.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .51 T U Ảnh 3.13: Hình thái tế bào S subsalsum (A.Cleve) Bethge mật độ khởi đầu TU 18.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .51 T U Ảnh 3.14: Màu sắc dịch nuôi S subsalsum (A.Cleve) Bethge với mật độ khởi đầu TU 18.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .52 T U Ảnh 3.15: Hình thái tế bào S subsalsum (A.Cleve) Bethge mật độ khởi đầu TU 22.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .52 T U vi Ảnh 3.16: Màu sắc dịch nuôi S subsalsum (A.Cleve) Bethge với mật độ khởi đầu TU 22.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .53 T U Ảnh 3.17: Hình thái tế bào S subsalsum (A.Cleve) Bethge mật độ khởi đầu TU 26.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .53 T U Ảnh 3.18: Màu sắc dịch nuôi S subsalsum (A.Cleve) Bethge với mật độ khởi đầu TU 26.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .54 T U Ảnh 3.19: Hình thái tế bào S subsalsum (A.Cleve) Bethge mật độ khởi đầu TU 30.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .55 T U Ảnh 3.20: Màu sắc dịch nuôi S subsalsum (A.Cleve) Bethge với mật độ khởi đầu TU 30.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .55 T U Ảnh 3.21: Hình thái tế bào S subsalsum (A.Cleve) Bethge mật độ xuất phát TU 34.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .56 T U Ảnh 3.22: Màu sắc dịch nuôi S subsalsum (A.Cleve) Bethge với mật độ khởi đầu TU 34.000 tb/ml từ ngày thứ đến ngày .56 T U Ảnh 3.23: Màu sắc dịch nuôi S subsalsum (A.Cleve) Bethge môi trường TU Aquil* cường độ chiếu sáng khác từ ngày thứ đến .60 T U Ảnh 3.24: Hình thái tế bào S subsalsum (A.Cleve) Bethge tối từ ngày đến TU T U .61 Ảnh 3.25: Hình thái tế bào S subsalsum (A.Cleve) Bethge môi trường Aquil* TU cường độ chiếu sáng khác 63 T U Ảnh 3.26: Dịch trích diệp lục tố S subsalsum (A.Cleve) Bethge cường TU độ chiếu sáng khác từ ngày thứ đến 70 T U Ảnh 3.27: Màu sắc dịch nuôi S subsalsum (A.Cleve) Bethge nuôi môi TU trường Aquil* điều kiện chiếu sáng đơn sắc khác .73 T U Ảnh 3.28: Hình thái tế bào S subsalsum (A.Cleve) Bethge ảnh hưởng TU ánh sáng đơn sắc khác 76 T U FeCl 6H O R R R R Na EDTA.2H O R R R R 3,15 g 2,33 x 10-5 4,36 g 2,34 x 10-5 P P  Dung dịch IV (dung dịch vitamin) • Dung dịch vitamin sơ cấp Lượng dùng Thành phần (g/l H O) R Biotin R 0,1 g Cyanocobalamin 1g • Dung dịch vitamin thứ cấp Thành phần Lượng dùng pha stock sơ cấp (g/l H O) Lượng dùng pha stock thứ cấp/1000 ml nước cất Nồng độ dung dịch cuối (M) 0,1 g 10ml 4,09 x 10-9 1g 1ml 7,38 x 10-10 0,20 5,93 x 10-7 R Biotin Cyanocobalamin R Thiamine-HCl P P P  Pha dung dịch DAM hoàn chỉnh Bổ sung dung dịch stock pha với lượng bảng bên dưới, thêm nước cho đủ 1l dung dịch hoàn chỉnh Thành phần Dung dịch I Lượng dùng Thành phần muối 15 ml NaCl Lượng dùng 20,570 g Dung dịch II NaH PO -H O ml NaNO ml R R R R R R Na SO R R R Na SiO -9H O R R R R R R R 3,067 g R ml Dung dịch III ml CaCl 2H O 1,150 g Dung dịch IV ml MgCl 6H O 11,100 g R R R R R R R R Phụ lục Môi trường ESAW (Harrison cs,1980, Berges cs, 2001) Môi trường thiết kế cho thực vật phù du gần bờ xa bờ Muối anhydrous muối hydrous hòa tan riêng hấp vô trùng riêng rẽ Kết hợp chúng lại sau nguội hoàn toàn pH = 8,2  Pha chế stock khoáng đa lượng: Lượng đề nghị 50 ml loại muối đa lượng Lượng dùng/ 50 ml nước cất Lượng dùng pha dung dịch hoàn chỉnh 46,67 g 2,3335 g 1ml Nồng độ dung dịch cuối (M) 5,49 x 10-4 M NaH PO H 3,094 g 0,1547 g 1ml 2,24 x 10-5 M Na SiO 9H O 15 g 0,7500 g 2ml 1,06 x 10-4 M Nồng độ (g/l H O) Thành phần R NaNO R R R R R R R R R R R R R R P P P  Pha dung dịch stock Fe – EDTA: • Pha stock sơ cấp (50 ml): Thành phần Nồng độ (g/l H O) Lượng dùng/ 50 ml nước cất 1,77 g ml R FeCl 6H O R R R R R Nồng độ dung dịch cuối (M) 6,55 x 10-6 M P P • Pha stock thứ cấp Fe-EDTA(50 ml): Nồng độ (g/l H O) Thành phần R R Lượng dùng/ 50 ml nước cất Nồng độ dung dịch cuối (M) Na EDTA.2H O 2,44 g 0,122 g 6,56 x 10-6 FeCl 6H O 1,77 g 50 μl 6,55 x 10-6 R R R R R R R R P P P P P  Pha chế dung dịch khoáng vi lượng: • Pha stock sơ cấp (50 ml): Nồng độ (g/l H O) Lượng dùng/ 50 ml nước cất Na MoO 2H O 1,48 g 0,074 g Na SeO 0,173 g 0,00865 g 1,49 g 0,0745 g Thành phần R R R R R R R R R R NiCl 6H O R R R R R • Pha stock thứ cấp (50 ml): Nồng độ (g/l H O) Thành phần R Na EDTA.2H O ZnSO 7H O CoSO 7H O MnSO 4H O Na MoO 2H O Na SeO NiCl 6H O R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R 3,09 g 0,073 g 0,016 g 0,54 g R R R R R R Lượng dùng/ 50 ml nước cất Nồng độ dung dịch cuối (M) 8,30 x 10-6 M 0,1545 g 0,00365 g 2,54 x 10-7 M 0,0008 g 5,69 x 10-8 M 0,027 g 2,42 x 10-6 M ml 6,12 x 10-9 M ml 1,00 x 10-9 M ml 6,27 x 10-9 M P P P P P P P P P P P P P P  Pha chế dung dịch vitamin: • Pha stock sơ cấp (50 ml): Thành phần Nồng độ (g/l H O) R Biotin (vitamin H) Cyanocobalamin (vitamin B 12 ) R R R 1,0 g 2,0 g Lượng dùng/ 50 ml nước cất 0,05 g 0,1 g Nồng độ dung dịch cuối (M) 4,09 x 10-9 M P P 1,48 x 10-9 M P P • Pha stock thứ cấp (50 ml): Thành phần R Biotin (vitamin H) Cyanocobalamin (vitamin B 12 ) Thiamine · HCl (vitamin B ) R Lượng dùng/ 50 ml nước cất Nồng độ (g/l H O) R 50µl 50µl Nồng độ dung dịch cuối (M) 4,09 x 10-9 M P P 1,48 x 10-9 M P P R R 0,1 g 0,005 2,96 x 10-7 M P P R  Pha dung dịch muối I (Anhydrous salts): Pha với 600 ml nước cất Thành phần Lượng sử dụng (g/lit H O) Nồng độ cuối (M) 21,194 g 3,550 g 0,599 g 0,174 g 0,0863 g 0,0230 g 0,0028 g 3,63 x 10-1 2,50 x 10-2 8,03 x 10-3 2,07 x 10-3 7,25 x 10-4 3,72 x 10-4 6,67 x 10-5 R NaCl Na SO KCl NaHCO KBr H BO NaF R R R R R R R R P P P P P P P  Pha dung dịch muối II (hydrous salts): Pha với 300 ml nước cất Thành phần Lượng sử dụng (g/l H O) Nồng độ cuối (M) 9,592 g 1,344 g 0,0218 g 4,71 x 10-2 M 9,14 x 10-3 M 8,18 x 10-5 M R MgCl 6H O CaCl 2H O SrCl 6H O R R R R R R R R R R R R R P P P P P P Chú ý: Dung dịch muối I II phải hấp vô trùng riêng rẽ, để nguội hoàn toàn sau hợp chúng lại  Pha 1000 ml dung dịch ESAW hoàn chỉnh: Hoà tan đều: 600 ml dung dịch I + 300 ml dung dịch II + ml NaNO + ml R R NaH PO H O + ml Na SiO 9H O + ml Fe-EDTA + ml vi lượng + ml R R R R R R R R R R R R Vitamin + 93 ml nước cất vô trùng = 1000 ml Phụ lục ĐO CƯỜNG ĐỘ QUANG HỢP VÀ CƯỜNG ĐỘ HÔ HẤP BẰNG MÁY HANSATECH (PHA LỎNG) Chuẩn bị hóa chất: Na S O bão hòa, KCl 1M, KHCO (NaHCO ) 1M R R R R R R R R R R Chuẩn bị điện cực Nhỏ giọt dung dịch KCl 1M lên đầu điện cực Cathode (Pt) giọt vào rãnh chứa anode (Ag) Đặt giấy thấm kích thước (1,5 cm x 1,5 cm) lên đầu điện cực Pt, đặt tiếp màng thấm oxy S4 (kích thước tương tự) lên Hình: Cách đặt màng giấy đệm vào điện cực Giấy đệm dùng làm cầu nối dẫn điện nên phải tiếp xúc điện cực A B Hình: giấy đệm (A) màng điện cực (B) Sau dùng dụng cụ kèm theo máy để đặt vòng đệm cao su bao lấy vòm điện cực làm căng giấy đệm màng bán thấm Đặt vòng đệm cao su bên điện cực lắp điện cực vào đáy buồng Hình : Cách dùng dụng cụ cố định màng giấy đệm vào điện cực nhờ vòng cao su Cách lắp điện cực vào buồng đo tương tự lắp vào buồng đo pha khí Chuẩn điện cực: A B C Hình: cá từ (A), nắp đậy buồng đo pha lỏng (B), đặt buồng đo lên máy (C) Cho cá từ (hình 4A) vào buồng đo pha lỏng đậy nắp lại (hình 4B) đặt buồng đo lên máy Hansatech (hình 4C) - Chuẩn điện cực Khôi phục cài đặt gốc: Trên giao diện phần mềm, chọn Configure  U U Control box Đánh dấu chọn Auto calibrate nhấn nút Default setting chọn OK Bắt đầu chuẩn điện cực: Nhấn nút Calibrate (hoặc Calibrate  Oxygen  U U New) Khai báo nhiệt độ buồng đo: Nhập giá trị nhiệt độ buồng đo (đọc nhiệt U U kế, ví dụ 25oC), chọn pha lỏng (liquid phase) chọn OK P P • Bước 1: Khi xuất bảng Oxygen calibration lần đầu (có U U khuyến cáo chương trình: Establish “air line” in chamber): cho khoảng 1,5 ml nước cất vào buồng đo Mở nắp cho cá từ quay (nhấp nút stirres, chọn tốc độ quay 5) Lưu ý: Bước chương trình ghi nhận lượng oxy buồng U U đo (cũng lượng oxy bên không đậy nắp buồng đo) Chờ đường biểu diễn O ổn định (đường thẳng song song với trục hoành) chọn R R Stop • Bước 2: Khi xuất bảng Oxygen calibration lần 2, rút nước cất U U cho vào khoảng 1,5 ml Na S O bão hòa (trường hợp dung dịch Na S O bão R R R R R R R R R R R R hòa pha xong bổ sung 2, giọt vào 1,5 ml nước cất trước cho vào buồng đo để tránh làm trơ điện cực), đậy nắp buồng đo, không khuấy cá từ Chọn OK Sau chờ cho đường biểu diễn ổn định chọn STOP Lưu ý: Bước chương trình ghi nhận lượng oxy buồng đo bão hòa • Bước 3: Khi xuất bảng Oxygen calibration lần (có khuyến U U cáo chương trình: Establish “air line” in chamber tương tự bước 1), rút hết Na S O rửa nhiều lần buồng đo nước cất Sau cho nước cất vào, đậy R R R R R R nắp không khuấy cá từ Chờ đường biểu diễn ổn định chọn STOP Kết thúc trình chuẩn điện cực (chọn OK) Và bắt đầu cho 1,5 ml mẫu vào đo - Đo cường độ quang hợp: đo quang hợp bổ sung 2-3 giọt KHCO R R NaHCO , lắp đèn chiếu sáng (hình 5) nhấp vào nút on/off góc phải R R hình, chỉnh cường độ cho phù hợp (thường nhập giá trị 500) Nhấn Start để bắt đầu ghi nhận đồ thị Stop để dừng Thời gian đo khoảng 3-10 phút (tùy mẫu), lúc đường biểu diễn gia tăng oxygen tuyến tính hệ số góc (rate) số mol oxy gia tăng phút Hình: lắp đèn chiếu sáng vào buồng đo đo quang hợp - Đo cường độ hô hấp: Tắt nguồn sáng thao tác tương tự đo quang hợp Thời gian đo khoảng 3-5 phút, lúc đường biểu diễn gia giảm oxygen tuyến tính hệ số góc (rate) số mol oxy giảm phút Ghi nhận kết Chọn menu Tools  Get rate để vào chế độ ghi nhận số liệu từ biểu đồ Chọn đoạn tuyến tính (di chuyển mũi tên đỏ) biểu đồ chọn nút options nhập khoảng thời gian cần lấy số liệu Nên chọn đoạn tuyến tính giá trị quang hợp hay hô hấp ổn định mẫu Click lên đoạn vừa chọn (hoặc nhấn Options, nhập khoảng thời gian chọn OK), máy tính tính toán đưa số liệu Chọn OK để ghi nhận số liệu vào bảng Đây số liệu trung bình đoạn vừa chọn Nếu cần lấy sai số máy theo thời gian chọn lấy số liệu đoạn tính trung bình Kết hệ số góc (Rate) trên bảng rate measurement với đơn vị: µmolO /10cm2/phút số mol Oxygen phóng thích (quang hợp) hay thu vào R R P P (hô hấp) mẫu phút Cách lưu mở biểu đồ Nếu xuất bảng Start Recording: Chọn Save để lưu lại đường biểu diễn thành tập tin; chọn append đường biểu diễn tiếp nối đường biểu diễn cũ; Chọn Overwrite để xóa đường biểu diễn cũ bắt đầu đường biểu diễn Chọn Files  Save để lưu biểu đồ Đánh vào ô file name tên tập tin muốn lưu chọn Save Nhập ghi tập tin chọn OK để hoàn tất trình lưu Tương tự, chọn Files  Load để lấy lại biểu đồ Có thể lấy số liệu từ biểu đồ bước ghi nhận kết Chọn tập tin cần lấy chọn Open Lưu ý sử dụng máy - Việc chuẩn bị điện cực người hiểu rõ máy làm Không tự ý chuẩn bị điện cực Nếu điện cực có vấn đề cần báo cho người quản lý máy - Sau đo xong, hôm sau tiếp tục đo rửa buồng đo cho 1,5 ml nước cất vào buồng đo để giữ điện cực - Nếu không sử dụng máy nữa, rửa buồng đo, cho cá từ vào lọ, tháo rửa điện cực lau khô, giữ túi hút ẩm Dọn vệ sinh sau đo xong, đậy nắp đựng máy Hansatech Phụ lục Phụ lục [...]... nghiệm khảo sát ảnh hưởng của cường độ ánh sáng khác nhau lên TU 3 hoạt động của vi tảo 36 T 3 U Bảng 2.2: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của ánh sáng đơn sắc ở cùng cường độ TU 3 20 µmol photon.m-2.s-1 lên sự sinh trưởng của vi tảo .38 P U P U P U P U T 3 U Bảng 2.3: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của ánh sáng đơn sắc ở cùng cường độ TU 3 50 µmol photon.m-2.s-1 lên sự tăng trưởng của vi tảo. .. lý vi tảo, chúng tôi đã chọn đề tài: Khảo sát ảnh hưởng của ánh sáng lên hoạt động quang hợp và hô hấp của vi tảo Skeletonema subsalsum (A. Cleve) Bethge Mục tiêu đề tài đặt ra là: – Định danh Skeletonema sp qua quan sát hình thái, cấu tạo tế bào và phương pháp sinh học phân tử – Tìm môi trường nước biển nhân tạo thích hợp cho sự tăng trưởng của loài vi tảo này – Khảo sát mật độ khởi đầu thích hợp. ..vii Ảnh 3.29: Dịch chiết diệp lục tố của S subsalsum (A. Cleve) Bethge trong các môi TU 3 trường có điều kiện chiếu sáng đơn sắc khác nhau 85 T 3 U Ảnh 3.30: Màu sắc dịch nuôi S subsalsum (A. Cleve) Bethge dưới ảnh hưởng của TU 3 các ánh sáng đơn sắc ở cùng cường độ 50 µmol photon.m-2.s-1 .88 P U P U P U T 3 P U Ảnh 3.31: Hình thái tế bào S subsalsum (A. Cleve) Bethge dưới ảnh hưởng của ánh. .. tại trong thời gian dài dưới điều kiện không thuận lợi (Round F E et al., 2000) 1.3 Hoạt động quang hợp – hô hấp của vi tảo 1.3.1 Quang hợp ở vi tảo Quang hợp là sự khử cacbon dioxid thành các hợp chất hữu cơ bởi các thực vật xanh và một số loài vi khuẩn, nhờ năng lượng ánh sáng mặt trời và phóng thích oxygen từ nước (Bùi Trang Vi t, 2002) Phương trình của quang hợp: 6 CO 2 + 6 H 2 O + 60λ  C 6 H 12... – Khảo sát ảnh hưởng của ánh sáng trắng và một số loại ánh sáng đơn sắc khác nhau ở các cường độ chiếu sáng khác nhau lên sự tăng trưởng cũng như hoạt động quang hợp và hô hấp của loài vi tảo trên Đề tài được thực hiện tại phòng thí nghiệm sinh lý thực vật trường Đại học Sư phạm Tp HCM Thời gian thực hiện đề tài từ tháng 01/2011 đến tháng 10/2011 3 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược về vi tảo. .. hấp thụ ánh sáng lam và đỏ Ở tảo và thực vật bậc cao, chlorophyll luôn ở dạng phức hệ với protein Các phức hệ này có phổ hấp thu khác nhau phụ thuộc vào protein và chlorophyll Tảo silic có chlorophyll a và c Diệp lục a hấp thụ mạnh nhất tại hai miền ánh sáng ứng với hai đỉnh của phổ hấp thụ: miền ánh sáng đỏ với λ max ≈ 662 nm và miền ánh sáng xanh tím với λ max ≈ 430 nm R R R R Quang phổ hấp thụ của. .. đóng vai trò của các sắc tố phụ quang hợp Ở các loài tảo phycobilin thay thế chức năng của diệp lục b, thực hiện vai trò của sắc tố phụ quang hợp trong phức hệ sác tố thu ánh sáng Khoảng 90% năng lượng ánh sáng phycobilin hấp thụ được truyền cho diệp lục a (Nguyễn Như Khanh, Cao Phi Bằng, 2008) 1.3.3 Vai trò của ánh sáng trong quang hợp 1.3.3.1 Đặc tính của ánh sáng Ánh sáng là từ phổ thông dùng để... dụng rộng rãi Tảo nói chung và vi tảo nói riêng có vị trí quan trọng trong vi c phát triển các nguồn chất hữu cơ mới từ các nguồn vô cơ như CO 2 , H 2 O và các muối khoáng R R R R là do chúng có khả năng quang hợp nhờ năng lượng ánh sáng mặt trời Trong đó, 2 cường độ của ánh sáng, thời gian chiếu sáng, thành phần quang phổ ánh sáng có ảnh hưởng mạnh mẽ đến sự sinh trưởng và hoạt động sinh lý của chúng... f/2, Aquil*, DAM, và ESAW 48 T 3 U Hình 3.2: Đường cong tăng trưởng của S subsalsum (A. Cleve) Bethge trong môi TU 3 trường Aquil* ở các mật độ xuất phát khác nhau 58 P U U P T 3 U Hình 3.3: Đường cong tăng trưởng của S subsalsum (A. Cleve) Bethge dưới ảnh TU 3 hưởng của các cường độ ánh sáng khác nhau 65 T 3 U Hình 3.4: Cường độ quang hợp của S subsalsum (A. Cleve) Bethge trong môi... kiện chiếu sáng đơn sắc khác nhau 78 T 3 U Hình 3.8: Cường độ quang hợp của S subsalsum (A. Cleve) Bethge trong các môi TU 3 trường có điều kiện chiếu sáng đơn sắc khác nhau 80 T 3 U Hình 3.9: Cường độ hô hấp của S subsalsum (A. Cleve) Bethge trong các môi TU 3 trường có điều kiện chiếu sáng đơn sắc khác nhau 82 T 3 U Hình 3.10: Hàm lượng diệp lục tố của S subsalsum (A. Cleve) Bethge ... GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH  Trần Thị Vẻ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA ÁNH SÁNG LÊN HOẠT ĐỘNG QUANG HỢP VÀ HÔ HẤP CỦA VI TẢO SKELETONEMA SUBSALSUM (A.CLEVE) BETHGE Luận... thích hợp cho tăng trưởng loài vi tảo – Khảo sát mật độ khởi đầu thích hợp – Khảo sát ảnh hưởng ánh sáng trắng số loại ánh sáng đơn sắc khác cường độ chiếu sáng khác lên tăng trưởng hoạt động quang. .. riêng biệt quang phổ 27 TU T U Bảng 2.1: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng cường độ ánh sáng khác lên TU hoạt động vi tảo 36 T U Bảng 2.2: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng ánh sáng đơn